Laboratorio de Microbiología de Alimentos.

LABORATORIO N°1.
CUANTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
POR EL MÉTODO DE RECUENTO EN PLACA

Integrantes:
Deicy Liliana Barrios Coronado, José Carlos Naranjo Monterroza, Carlos
Daniel Ortega Vera, Elizabeth Ortega Vidal, Eiris Patricia Sierra Pestana.

Doc. Alba Manuela Durango Villadiego

Facultad de Ingeniería
Ingeniería de Alimentos – Sede Berástegui
Universidad de Córdoba, Montería

1. INTRODUCCIÓN. producción de productos lácteos

El recuento en placa es una técnica utilizada fermentados, como el yogurt, el queso, la
en microbiología para cuantificar la cantidad manteca, la crema de leche, el kéfir y el
de microorganismos presentes en una kumis. Las bacterias Ácido lácticas han sido
muestra. La muestra se diluye y se siembra importantes en los alimentos durante muchos
en medios de cultivo en placas de Petri, luego siglos por su contribución al valor del
se incuban y las colonias que crecen en las producto, ya que, juegan un papel notable en
placas se cuentan. La cantidad de colonias la industria alimentaria debido
que se desarrollan en las placas está a su significado de sabor, olor,
directamente relacionada con la cantidad de textura, propiedades sensoriales, propiedade
microorganismos presentes en la muestra s de valor terapéutico y nutricional de
original. El recuento en placa es útil para los alimentos.
medir la presencia de bacterias, levaduras, La siembra en profundidad se utiliza como
hongos y otros microorganismos presentes en técnica de recuento directo de
alimentos, agua, productos farmacéuticos y microorganismos desde muestras como
otros tipos de muestras. La función de este alimentos, ya que se necesita conocer su
método es cuantificar la cantidad de número para evaluar la calidad
microorganismos presentes en una muestra microbiológica de la muestra o su higiene
en particular. Esta técnica es esencial en
microbiología para el monitoreo y la
2. OBJETIVOS.
evaluación de la calidad microbiológica de
diversos tipos de muestras. Además, este
 Determinar el número de
recuento se puede realizar en una siembra en
microorganismos viables en un
profundidad (pour plate). medio solido.
Por otro lado, Las bacterias ácido
lácticas se vienen empleando para fabricar  Determinar poblaciones de
alimentos desde hace al menos 4 mil años. Su microorganismos usando el método
uso más corriente se relaciona con la de recuento en placa a través de una
siembra en profundidad
1
3. MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales:
✓ 5 cajas de Petri estériles
✓ Pipeta
✓ Agua Peptonada 0.1%
✓ Agar MRS fundido a 45°
✓ Tubos de ensayo
✓ Mechero
✓ Alcohol
Métodos:
Procedimiento para recuento de
poblaciones microbianas por el
método del recuento en placa en
profundidad.
• El procedimiento consta de los
siguientes pasos se debe tomar cajas
de Petri estériles y etiquetarla según
la dilución 10−1 , 10−2 , 10−3 , el
control de diluyente y el control del
medio. En lo siguiente se mezcla la
dilución 10 -1, 10 veces con una
pipeta y se toma 1 ml de la dilución
para sembrar en la caja marcada como
10 -1 y se debe hacer esto por
duplicado. Se repite el proceso con la
dilución 10 -2 y con la dilución 10 -3
asegurándose de qué el tiempo entre
la realización de las diluciones y la
siembra no sean mayores a 20
minutos
• En el siguiente paso se agrega 1 ml de
agua peptonada al 0.1% a la caja de
control de diluyente y 15 a 20 ml de
agar fundido 45 °C a todas las cajas
incluyendo el control de diluyente y
el del medio. Se mezcla la muestra de
forma homogénea con el medio de
cultivo realizando movimientos en
dirección de las manecillas del reloj y
viceversa de arriba hacia abajo y
viceversa y en forma de ochos
• Finalmente se deja solidificar el agar
se invierte las placas y se encuba a la
temperatura y tiempo indicado para el
microorganismo o grupo en cuestión.
En el caso de las bacterias ácido
láctica después de la solidificación
del Agar se agregar otra capa de agar
MRS y luego incubará 30 °C por 72
horas
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En el presente informe se exponen los
resultados obtenidos en la práctica de
laboratorio referente a la guía N°1
cuantificación de microorganismos por el
método de recuento en placa.
4.1 RESULTADOS
Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟏 =
imposible de contar
Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟐 = 121
colonias
Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟑 = 8
colonias
Caja de Petri control del diluyente =
115 colonias
Caja de Petri control del medio = no
presentó crecimiento
4.1.1RECUENTO DE
MICROORGANISMOS
o Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟏 = 5600 ×
101 = 56.000 UFC/ g o ml
o Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟐 = 121 ×
102 = 12.000 UFC/ g o ml
o Caja de Petri dilución 𝟏𝟎−𝟑 = 8 ×
103 = 8.000 UFC/ g o ml
o Caja de Petri control del diluyente =
115 colonias
o Caja de Petri control del medio = no
presentó crecimiento
2
 4.2 DISCUSIÓN
Caja con dilución 𝟏𝟎−𝟏 : se le agregó 1ml de
agua peptonada al 0.1% con 10 ml de suero
costeño artesanal a la caja de Petri 10−1 ;
posterior a esto se le adicionó 5ml de agar
MRS, al mezclarse y solidificar se incubó a
37°C por 48h, se observó crecimiento de
Bacterias Acido lácticas debido a que la
concentración del diluyente (agua peptonada
y suero costeño artesanal) estaba en mayor
cantidad lo que generó un alto crecimiento de
colonias, además, se le ofrecieron al
microorganismo condiciones óptimas para su
desarrollo.
Caja con dilución 𝟏𝟎−𝟐 : se le agregó 1ml de
agua peptonada al 0.1% con 10 ml de suero
costeño artesanal a la caja de Petri 10−2 ;
posterior a esto se le adicionó 5ml de agar
MRS, al mezclarse y dejar solidificar se
incubó a 37°C por 48h, se observó que el
crecimiento de las Bacterias Acido lácticas
fue promedio en comparación con la dilución
10−1, debido a que, la concentración va
disminuyendo lo cual es directamente
proporcional, ya que, si la concentración
disminuye la producción de
microorganismos también lo hace.
−𝟑
Caja con dilución 𝟏𝟎 : se le agregó 1ml de
agua peptonada al 0.1% con 10 ml de suero
costeño artesanal a la caja de Petri 10−3 ;
luego, a esto se le adicionó 5ml de agar MRS,
al mezclarse y dejar solidificar se incubó a
37°C por 48h, se determinó que el
crecimiento de Bacterias Acido Lácticas fue
bajo, ya que, la concentración del diluyente
aquí se encuentra en menor proporción si se
compara con 10−1 y 10−2.
Caja control de diluyente: se le adicionó
1ml de agua peptonada al 0.1% y 15 ml de
agar MRS para bacterias acido lácticas
después de incubarse a 37°C por 72h se
observó crecimiento de colonias de bacterias
debido a que se le ofrecieron a estos
microorganismos las condiciones óptimas
para su desarrollo, el agar MRS ofrece
minerales y vitaminas y el agua peptonada es
un diluyente que permite el crecimiento de
microbios.
Caja control del medio: se le adicionó 15ml
de agar MRS y luego de 72h a 37°C se
observó que el medio no presentó
crecimiento de microorganismos porque se
estaba evaluando la calidad del agar, lo cual
fue favorable.
5. CONCLUSIÓN
En este laboratorio se realizó el
procedimiento en varias cajas de Petri
esterilizadas a las cuales se les agregó 10 ml
de la muestra y se vertió en una bolsa plástica
junto con agua peptonada al 0.1%; esto se
realizó con el fin de dividirlo en las diferentes
cajas de Petri para así ejecutar dicho
procedimiento y de esta manera hacer el
conteo de poblaciones microbianas usando el
método de recuento en placa en profundidad,
para determinar este número de
microorganismos con respecto al suero que
fue la muestra que se utilizó, realizando su
respectivo recuento llevando a cabo cada
norma y seguimiento de lo ya estudiado.
6. REFERENCIAS
[1] NúñezJ. (2017, enero 20). ¿Qué son las
bacterias acidolácticas? Org.ar;
Infoalimentos.
https://infoalimentos.org.ar/temas/salud-
y-alimentos/98-las-bacterias-acidolacticas
[2] INVIMA. INSTITUTO NACIONAL DE
VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y
ALIMENTOS. Manual de técnicas de
análisis para control de calidad
microbiológico de alimentos para consumo
humano. División Laboratorio de Alimentos
y Bebidas. Santafé de Bogotá. 1998. 111p.
[3] ARRIBAS My POLO C, "Ocurrence of
lactic acid bacteria and biogenic amines in
biologically aged
wines," Food Microbiology,2008. vol.25, p.
875-881.
3
 7. ANEXOS

Imagen 4. Caja de Petri con muestra de

dilución 10−2

Imagen 1. Caja de Petri con muestra

control del medio

Imagen 5. Caja de Petri con muestra de

dilución 10−3

Imagen 2. Caja de Petri con muestra control

del diluyente

Imagen 3. Caja de Petri con muestra de

dilución 10−1