"AÑO DEL FORTALECIMIENTO DE LA SOBERANÍA NACIONAL"

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

BIOQUÍMICA
PRÁCTICA DE LABORATORIO Nº 12

TEMA: “GLICOLISIS”

DOCENTES: Dra. BERTHA ROXANA MESTAS VALDIVIA

Dr. RONALD NAVARRO OVIEDO

INTEGRANTE:
❖ COAQUIRA CHEJE JOSE ANGEL
❖ COILA MEDINA JORGE JUVERT
❖ CCARHUAS MONTEAGUDO BRUNELLA XIOMARA
❖ HUARCA QUISPE PATRICIA
❖ PAMO COAQUIRA KAREN
❖ UMPIRE INCA GLENNY

GRUPO: A
HORARIO: VIERNES DE 10:40 AM - 14:00 PM
FECHA: 08/12/2022

AREQUIPA-PERÚ
2022
Glicolisis Laboratorio de Bioquímica
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ÍNDICE

INTRODUCCIÓN 3
OBJETIVOS 3
GENERAL 3
ESPECÍFICO 3
MATERIALES Y MÉTODOS 3
EXPERIMENTO 1: FORMACIÓN DEL PIRUVATO 4
RESULTADOS 4
DISCUSIÓN 4
EXPERIMENTO 2: IDENTIFICACIÓN DEL PIRUVATO 4
RESULTADOS 4
DISCUSIÓN 5
CONCLUSIONES 5
CUESTIONARIO 5
REFERENCIAS 5

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INTRODUCCIÓN

La etapa final de la glucólisis anaeróbica muscular tiene como producto final característico
un compuesto orgánico de tres átomos de carbono, el lactato, el cual se produce en un
proceso de reducción donde los electrones del NADH son transferidos de forma directa al
grupo carbonilo del piruvato, con el concurso de la enzima lactato deshidrogenasa, que
cataliza la reacción (GLU-11). En los mamíferos, lactato deshidrogenasa es una enzima
tetramérica, con varias isoenzimas; las subunidades que la forman son de dos tipos: M
(presente en músculo estriado) y H (presente en músculo cardiaco). La secuencia de
reacciones glucolíticas, a partir de una molécula de glucosa, da lugar a dos moléculas de
NADH (reacción GLU-6) y dos moléculas de piruvato (reacción GLU-10), cuya reacción en
presencia de la deshidrogenasa láctica es la siguiente:
2 piruvato + 2 NADH + 2H+ 2 lactato + 2 NAD+
La suma de las dos últimas reacciones muestra el resumen de las reacciones que comprenden
desde la glucólisis hasta la fermentación láctica:
Glucosa + 2 ADP + Pi 2 lactato + 2 ATP + 2 H2O
Este proceso fermentativo es la principal vía metabólica para la producción de ATP en
numerosas bacterias y en algunas células animales que funcionan en condiciones anaeróbicas
o parcialmente anaeróbicas. Por otro lado, la fermentación láctica es muy importante desde el
punto de vista comercial, ya que algunas de las bacterias que realizan este proceso metabólico
se utilizan en la producción de quesos, yogurts y otros alimentos obtenidos de la
fermentación de la lactosa de la leche. En el caso del tejido muscular, el lactato producido es
acarreado por el sistema circulatorio al hígado, donde interviene en el proceso de
gluconeogénesis, que es la síntesis de glucosa a partir de precursores que no son
carbohidratos, por ejemplo, el lactato. La glucosa producida a partir del lactato puede salir del
hepatocito hacia la circulación sanguínea como fuente de material oxidable para otros tejidos,
con lo que se establece el llamado ciclo de Cori.
La fermentación alcohólica es una vía alterna al proceso de fermentación láctica, se observa
en las levaduras y algunas bacterias. En este caso, el piruvato es descarboxilado para producir
un compuesto de dos átomos de carbono, el acetaldehído, que se convierte en el aceptor de
electrones. La reducción del acetaldehído produce etanol, alcohol del cual deriva el nombre
del proceso. Las reacciones que involucran la producción de etanol son dos: la
descarboxilación del piruvato y la reducción posterior del acetaldehído; estas reacciones son
catalizadas por dos enzimas diferentes, la piruvato descarboxilasa y la alcohol
deshidrogenasa. Añadiendo este proceso reductivo a la conversión de glucosa en dos
moléculas de piruvato y dos moléculas de NADH se resume:
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi 2 etanol + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O
La fermentación alcohólica tiene importancia económica, ya que es fundamental en los
procesos de panificación, en la industria cervecera y en la vinícola.

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OBJETIVOS

GENERAL

- Producir e identificar la formación de ácido pirúvico

ESPECÍFICO

- Demostrar la formación de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por

levadura
- Identificar ácido pirúvico producido a partir de glucosa

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:

- Tubos de ensayo - Suspensión de levadura al 5 % en

- Tubos de centrífuga Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de
- Mechero fermentación antes de su
- Baño maría utilización).
- Pipetas - Ácido tricloroacético al 10%
- Centrífuga - Nitroprusiato de sodio.
- Vasos de precipitados de 250 y 600 - 2,4 dinitrofenil−hidracina.
ml. - Hidróxido de amonio concentrado.
- Pinzas para tubos de ensayo. - Hidróxido de sodio 0.1N
- Solución de glucosa a diversas - Sulfato de amonio sólido.
concentraciones 0.5, 1.0 y 2.0%

EXPERIMENTO 1
Método: Se marcó dos series de 3 tubos y se adicionó 3 ml de las soluciones de glucosa a
diferentes concentraciones (0.5, 1.0, 2.0%) a ambas series. A una de las series de tubos se
adicionó 3 ml de suspensión de levadura con fosfatos de sodio (0.213 g/100 ml) que se marcó
como A; y a la otra serie se adicionó 3 ml de suspensión de levadura con fosfatos de potasio
(0.09 g/100 ml) y se marcó como B. Colocamos todos los tubos en baño maría a 37ºC por 30
minutos y añadimos a cada tubo 1 ml de TCA al 10%. Mezclamos vigorosamente y
centrifugamos a 2500 r.p.m. por 10 minutos. Separamos el sobrenadante y desechamos el
precipitado.
EXPERIMENTO 2

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Método:
- Reacción con nitroprusiato de sodio. En un tubo de ensayo colocamos 1 ml del
sobrenadante obtenido y lo hervimos.

Adicionamos 0.5 g de sulfato de amonio sólido y agitamos. Se agregaron dos gotas

del reactivo (nitro piruvato de sodio) y se mezcló vigorosamente para luego deslizar
por las paredes del tubo unas gotas de hidróxido de amonio concentrado, hasta la
formación de dos capas. La formación de un anillo verde, azul o rojo en la interfase
nos indica que la reacción es positiva. Repetimos lo anterior para cada uno de los
tubos de ambas series.
- Reacción con 2,4 dinitrofenil−hidracina. En un tubo de ensayo colocamos 0.5 ml
del sobrenadante obtenido y adicionamos 1 ml del reactivo, agitamos con fuerza y
pasamos a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y adicionamos 1 ml de NaOH
0.6N. La aparición de un color rojo indica una reacción positiva. Repetimos lo
anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observamos la coloración e
intensidad de la misma en cada caso.

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EXPERIMENTO 1: FORMACIÓN DEL PIRUVATO

RESULTADOS

Fig. 1. formación de piruvato en Na2HPO4 (serie A) y KH2PO4 (serie B)

DISCUSIÓN

Se observa que los tubos que contenían solución de fosfato de sodio (Serie A) al encontrase
con el Nitroprusiato de sodio dan positivo a la prueba para piruvato. En esta prueba la
formación del piruvato se debe a que el tubo A contenía una
solución básica (Na2HPO4). En cambio, la serie de tubos B contenía una solución ácida
(KH2PO4), por esto la serie b no dara positivo ya que la enzima piruvato descarboxilasa fue
inactivada en un pH básico impidiendo que el piruvato se transformara en otros compuestos
En este proceso es realizado para precipitar macromoléculas y obtener un sobrenadantes
que poseen solo moléculas simples como el piruvato (McMurry 2012).
Por otra parte, se debe recalcar que mientras la concentración de glucosa iba aumentando
también aumentaba la coloración.

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EXPERIMENTO 2: IDENTIFICACIÓN DEL PIRUVATO

RESULTADOS

Tabla 01. Resultados de cada prueba en cada tubo a cada concentración de glucosa en
solución de fosfato de sodio.

Fosfato de sodio Tubo A1 Tubo A2 Tubo A3

(Serie A)

Nitroprusiato de Negativo Negativo Positivo

sodio (C5N6OFe)

2,4 Negativo Negativo Positivo

dinitrofenil−hidracina
(C6H6N4O4)

Tabla 02. Resultados de cada prueba en cada tubo a cada concentración de glucosa en
solución de fosfato de potasio.

Fosfato de potasio Tubo B1 Tubo B2 Tubo B3

(Serie B)

Nitroprusiato de Positivo Positivo Positivo

sodio (C5N6OFe)

2,4 Negativo Negativo Negativo

dinitrofenil−hidracina
(C6H6N4O4)

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Fig. 2. Reacción con nitroprusiato de sodio en series A y B

Fig. 3. Reacción con 2,4 dinitrofenil−hidracina en series A y B

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DISCUSIÓN

1. Reacción con nitroprusiato de sodio: Podemos observar que en los tubos de ambas
series (Serie A y Serie B) presentan una ligera coloración de color rojo y esto se debe
a la reacción con nitroprusiato de sodio; lo cual nos quiere decir que la prueba es
positiva. Esto se debe a que el piruvato es un cetoácido. Además, mientras la
concentración de glucosa iba aumentando también aumentaba su coloración

2. Reacción con 2,4 dinitrofenil−hidracina: Se observa en la serie B, se forma un color

amarilla (recalcar que mientras más concentración glucosa aumenta su coloración),
mientras que en la serie A se forma un coloración roja. La 2,4-dinitrofenilhidrazina
puede usarse para detectar cualitativamente los grupos carbonilo de cetonas y
aldehídos. El resultado es positivo cuando hay un precipitado rojo o amarillo
(dinitrofenilhidrazona): RR'C + C6H3(NO2)2NHNH2 → C6H3(NO2)2NHNCRR' +
H2O. La prueba es positiva ya que aparece un color rojo porque el grupo aldehído del
piruvato reacciona con el 2,4-dinitrofenil-hidracina.

CONCLUSIONES

- Se demostró la formación de ácido pirúvico durante la fermentación de la glucosa por

levadura con nitroprusiato de sodio (Na2HPO4) mientras mayor sea la concentración,
más visible era la coloración para los resultados. Sin embargo con potasio
dihidrógeno fosfato (KH2PO4) no hubo resultados positivos aunque la concentración
aumentase.

- Se demostró la presencia de piruvato en las series de tubos A (fosfato de sodio) y

series de tubos B (fosfato de potasio) con el nitroprusiato de sodio, donde se observa
en las dos series que a más concentración de glucosa habia una tonalidad mas fuerte
de color rojo, y con 2,4 dinitrofenil−hidracina donde se noto la presencia de piruvato
en la seria A por su coloracion mas rojo - pardo.

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CUESTIONARIO

1. Señala cinco características que usted considere más importa con respecto a la
vía glicolítica
-La generación de energía, que se da en forma de ATP y NADH.
-Formación de piruvato para el ciclo de Krebs en la respiración aeróbica.
-Se realiza en el citoplasma.
-Posee puntos de control que regulan a la vía glucolítica.
- Se sintetiza ATP por fosforilación a nivel del sustrato.

2. De qué manera la glicólisis influye en el transporte de electrones?

Porque proporciona las principales fuentes de electrones que ingresan a la cadena de

transportes mitocondrial. En la cadena transportadora de electrones cada molécula de
NADH se convierte en 3 de ATP (2 NADH x 3 = 6 ATP).

3. ¿Cuántos enlaces fosfato de alta energía surgen en el catabolismo de la glucosa?

Tanto Aeróbica como anaeróbicamente.

La UDP glucosa, contiene dos enlaces de alta energía, (el fosfato anhidrido y el enlace
difosfato glucosídico).

4. Calcular la constante de equilibrio para la fosforilación de la glucosa si el G°´

para la hidrólisis de glucosa-6-fosfato es de -3 Kcal/mol. Indicar si la formación
de la glucosa-6- fosfato a partir de la glucosa es un proceso exergónico o
endergónico.

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Es un proceso exergónico

5. Describa los principales centros de control de la vía glicolítica.

La glucólisis se regula enzimáticamente en los tres puntos irreversibles de esta ruta,
esto es, en la primera reacción (G -- >G-6P), por medio de la Hexoquinasa; En la
siguiente reacción (F-6P --> F-1,6-BP) por medio de la PFK1 y en el último paso
(PEP --> Piruvato) por la Piruvatoquinasa.

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REFERENCIAS

Cox, M., & Lehninger, A. L. (2006). Principios de Bioquimica. Omega.

McMurry, J. (2012). Química Orgánica, 8ª Edición, Cengage Learning.

Miranda G.V. (2018) PRODUCCIÓN DE PIRUVATO Y ACETALDEHÍDO DURANTE LA

FERMENTACIÓN. Recuperado de:
http://biologiaexp.blogspot.com/2018/03/produccion-de-piruvato-y-acetaldehido.html

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