,UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLÁS DE HIDALGO

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y BIOLÓGICAS

“DR. IGNACIO CHÁVEZ”

LICENCIATURA EN NUTRICIÓN HUMANA

Manual de Laboratorio

Módulo VIII “Bases moleculares de la energía

y los procesos metabólicos”
Ciencias Básicas

Autores:

M.N.C. Carmen Georgina Béjar Cornejo

Q.F.B. Jessica Alejandra Sánchez Hernández

 Manual del módulo VIII “Bases moleculares de la energía y los
procesos metabólicos”.

Autores

M.N.C. Carmen Georgina Béjar Cornejo

Q.F.B. Jessica Alejandra Sánchez Hernández

Primera edición 2012

Derechos reservados

Universidad Michoacana

De San Nicolás de Hidalgo

Santiago Tapia 403, Centro

58000 Morelia, Michoacán

R.F.C. 300101 KE8

Facultad de Ciencias Médicas y Biológicas “Dr. Ignacio Chávez”

Dr. Rafael Carrillo esq. Dr. Salvador González Herrejón s/n, Bosque Cuauhtémoc

C.P. 58020

Tels. 01 443 312 05 10, 312 00 14, 312 82 39

Morelia Michoacán, México.

 Universidad
Michoacana
De San Nicolás
De Hidalgo
DR. SALVADOR JARA GUERRERO
Rector
Dr. Egberto Bedolla Becerril
Secretario General
Dr. José Gerardo Tinoco Ruíz
Secretario Académico
Mtro. D. Carlos Salvador Rodríguez Camarena
Secretario Administrativo
Mtro. Teodoro Barajas Rodríguez
Secretario de Difusión Cultural
Y Extensión Universitaria
Dra. Rosa María de la Torre Torres
Secretaria Auxiliar
CP. Horacio Guillermo Díaz Mora
Tesorero
Dr. José Luis Chávez Chávez

Contenido temático del
programa de asignatura
Unidad I-Procesos moleculares
de transformación de materia
en energía.
Unidad II-Principales procesos
metabólicos del organismo
humano.
Unidad II-Principales procesos
metabólicos del organismo
humano.
Unidad II-Principales procesos
metabólicos del organismo
humano.
Unidad III-Procesos de
reproducción celular.
Unidad III-Procesos de
reproducción celular.
Unidad IV. Mecanismos de
herencia y variación de la
especie humana.
Unidad IV. Mecanismos de
herencia y variación de la
especie humana.
Vinculación teórico-práctica
Contenido temático del No. De práctica
manual de laboratorio
I. Producción de piruvato y
acetaldehído durante la 1
fermentación de glucosa por
levadura.
III. Determinación de glucosa
en suero. 2
IV. Determinación de
triglicéridos por método 3
colorimétrico enzimático
(GPO-PAP)
V. Determinación de albúmina
sérica. 4
VI. Obtención de ADN.
5
VII. Fases de la mitosis en
ápices radiculares de cebolla. 6
VIII. Diversidad Fenotípica.
7
IX. Probabilidad y asesoría
genética. 8
 PRACTICA NO. 1

PRODUCCIÓN DE PIRUVATO Y ACETALDEHÍDO DURANTE LA FERMENTACIÓN DE

GLUCOSA POR LEVADURA.

Vinculación con el programa de asignatura.

Unidad I-Procesos moleculares de transformación de materia en energía.
I-Producción de piruvato y acetaldehído durante la fermentación de glucosa por levadura.
Lugar – Laboratorio de Bioquímica

COMPETENCIA
El alumno sabrá identificar los productos obtenidos a partir de la respiración anaerobia de forma
puntual para diferenciarlos de aquellos producidos por los seres humanos, quienes tienen
respiración aerobia y generan así los productos a través de sustratos provenientes de la
alimentación. También identificará los factores que pueden llegar a alterar la actividad enzimática.

INTRODUCCIÓN
La fermentación es la primera etapa del metabolismo de glucosa; en la levadura es la producción
de piruvato. Este proceso, que se efectúa mediante una serie de reacciones que involucran un
número considerable de intermediarios, se conoce como fermentación o glicólisis.

La reacción total podría considerarse como la transferencia de dos pares de átomos de hidrogeno
de la glucosa al NAD. Puesto que la coenzima se encuentra solo en cantidades catalíticas, es
necesario reoxidarla para que el proceso no se suspenda, y así, el NADH + H formado es
reconvertido a NAD por oxigeno molecular a través de la cadena respiratoria. Esto no es posible en
condiciones anaeróbicas y en este caso la re-oxidación se efectúa cuando el piruvato se convierte
en acetaldehído y luego en alcohol.

Demostración de los intermediarios metabólicos: los metabolitos de piruvato y acetaldehído se

encuentran presentes normalmente en muy bajas concentraciones, por tanto, para demostrar su
existencia como intermediarios en el camino metabólico, es necesario impedir que sean
transformados en otros compuestos. Este procedimiento se usa mucho cuando se investigan vías
metabólicas y se hace bloqueando la enzima que cataliza la conversión del compuesto, que se está
investigando mediante inhibidores.

También se pueden cambiar las condiciones fisiológicas para que la enzima funcione a una
velocidad muy por debajo de su actividad máxima, o se pueda usar un agente que “atrape” al
intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse.

El piruvico –descarboxilasa (2-oxoácido carboxi-liasa 4.1.1.1) no es activo en soluciones

ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse
por la reacción con nitroprusiato de sodio o 2,4-dinitrofenilhidrazina.
En el segundo experimento se añade a la mezcla de incubación sulfito de sodio, que “atrapa” el
acetaldehído. La presencia de acetaldehído puede demostrarse por el color azul producido por la
reacción con nitroprusiato de sodio y piperidina.

Reactivos Material

- Fosfato de Sodio dibásico (0.5 mol/I) -Gradilla

- Fosfato de Potasio monobásico (0.5 mol/I) -10 tubos de ensaye
- Suspensión de levadura (100 g/l en Na2PO4) -4 Pipetas de 5 ml
- Suspensión de levadura (100 g/l en KH2PO4) -2 Agitadores
- Suspensión de levadura (100 g/l en agua) -Baño de agua a 37oC
- Glucosa (100 g/l)
- Nitroprusiato de Sodio (50 g/l, prepararse antes de usar)
- Hidróxido de Amonio
- Sulfato de Amonio
- Sulfito de Sodio
- Hidróxido de Sodio (100 g/l)
- Piperidina (30 g/l en solución acuosa)
- Ácido Tricloroacético (100 g/l)

PROCEDIMIENTO

a) Formación de piruvato a partir de glucosa:

1. En dos tubos de ensaye pipeteé 1.5 ml de solución de glucosa (A y B); al tubo A agregue
1.5ml de suspensión de levadura en suspensión ligeramente alcalina de Na 2HPO4 y al tubo B
añada 1.5 ml de la suspensión de levadura en solución ácida de KH 2PO4.

2. Coloque los tubos en baño de agua a 37 oC durante 1 hora.

3. Luego añada a cada tubo 1ml de la solución de ácido tricloroacético, mezcle vigorosamente
y centrifugue durante 10 minutos a 2500rpm. Separe el sobrenadante úselo para la
determinación de piruvato.

b) Determinación de piruvato mediante nitroprusiato de sodio:

1. En un tubo de ensaye agregue 2 ml del sobrenadante a 1 g de sulfato de amonio sólido.

2. Agregue cuatro gotas de solución de nitroprusiato de sodio recién preparada, mezcle
vigorosamente, y deje deslizar cuidadosamente por las paredes del tubo amoniaco
concentrado hasta que se formen dos capas. Si hay piruvato, se formara un anillo verde o azul
en la interfase de los dos líquidos. La formación de un anillo rosado transitorio en interfase
indica la presencia de grupos tioles y con frecuencia se observa antes de la coloración azul o
verdosa característica de la reacción con piruvato.
 c) Formación de acetaldehído a partir de glucosa:

1. En dos tubos de ensaye marcados C y D pipeteé 3 ml de la solución de glucosa, agregue a

ambos tubos 3 ml de la suspensión de levadura en agua.
2. Al tubo D añada 0.5 g de sulfito de sodio.
3. Mezcle vigorosamente e incube los dos tubos a 37 oC durante 1 hora.
4. Centrifugue y separe 2ml de sobrenadante de los tubos C y D en 2 tubos rotulados como
SNC y SND.

d) Determinación de acetaldehído.

1. A cada tubo de sobrenadante (SNC y SND) agregar 0.5 ml de solución fresca de nitroprusiato
de sodio y 2 ml de piperidina acuosa al 3 % y agite. Si hay acetaldehído presente, se observa
una coloración azul.

RESULTADOS

Escriba los resultados obtenidos en forma de tabla

Condiciones de la fermentación Determinación de Piruvato.

Prueba de Nitroprusiato
Tubo A_________________

Tubo B_________________

Condiciones de la fermentación Determinación de Acetaldehído.

Prueba de Piperidina
Tubo C _________________

Tubo D _________________

Representa mediante dibujos a color los experimentos realizados y sus observaciones.

Escriba la reacción química que se lleva a cabo entre el piruvato y el nitroprusiato de sodio.

Compare sus resultados con los obtenidos por los otros grupos de trabajo, explique sus
conclusiones.
CUESTIONARIO

Usando estructuras químicas, escriba las reacciones que se llevan a cabo en la reducción del
piruvato en condiciones tanto aeróbicas como anaeróbicas.

 ¿Qué es un inhibidor enzimático?

_________________________________________________________________________

 ¿Cuántos tipos de inhibiciones enzimáticas existen y en qué consiste cada una de ellas?
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________

 Menciona los productos que se obtienen con la reducción del piruvato en condiciones
tanto aeróbicas como anaeróbicas.
__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________

 ¿Qué es un grupo tiol?

_________________________________________________________________________

 Menciona que factores pueden alterar la actividad de una enzima.

__________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
 PRACTICA NO. 2

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SUERO.

Vinculación con el programa de asignatura.

Unidad II-Principales procesos metabólicos del organismo humano.
Lugar – Laboratorio de Bioquímica

COMPETENCIA

El alumno explicará el metabolismo de disacáridos y polisacáridos y a partir de la cuantificación de

glucosa en suero correlacionará los valores obtenidos con el estado fisiológico del paciente y la
presencia de patologías metabólicas.

INTRODUCCIÓN.

Los hidratos de carbono medicamente importantes contienen seis carbonos (hexosas) y son la
glucosa, la fructosa y la galactosa, mientras que la lactosa y la sacarosa son importantes
disacáridos.1

La glucosa se forma a partir de la digestión de carbohidratos y la conversión hepática de glucógeno

en glucosa. Las hormonas que regulan de manera directa la glicemia son el glucagón y la insulina.
Para que la glucosa se introduzca en las células se necesita de la insulina y de receptores
insulínicos. La insulina se adhiere a los receptores en la superficie de las células blanco, como en la
grasa y el musculo.

El diagnóstico de uno de los trastornos del metabolismo de los carbohidratos más frecuente
(Diabetes mellitus) se apoya en parte en la medición de glucosa plasmática ya sea en ayunas o
tras estimulación o pruebas de secreción.

BLIOGRAFIA:

1.J.Bernard Henry . Diagnostico y tratamiento Clínicos por el laboratorio. 9 Edición : Masson S.A

MATERIALES Y REACTIVOS BIOLÓGICOS.

- Kit de determinación de glucosa.

- Suero sanguíneo.
- Vacutainers.
- Centrifuga.
- Pipetas Pasteur.
- Baño María.
 - Espectrofotómetro.

PROCEDIMIENTO.

1. Nombrar a un integrante de cada equipo para extraer sangre, utilizando el vacutainer.

2. Centrifugar la sangre 10 minutos a 1500 rpm, a temperatura ambiente.
3. Tomar 10l suero mediante el uso de una micropipeta y vaciar a tubo de ensaye.
4. Agregar 1ml del reactivo del kit de determinación de glucosa.
5. Mezclar e incubar 10 minutos a 37oC en baño de agua.
6. Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
7.Hacer cálculos para determinar la concentración de glucosa.

CALCULOS:
Absmuestra x Conc. Patrón = ___________ mg/dL de glucosa.
Abs patrón

RESULTADOS Y CONCLUSIONES.

¿Cuáles fueron los resultados obtenido para la muestra problema? ¿Cuál sería su interpretación
clínica?

CUESTIONARIO.

¿Qué órgano es el encargado de secretar insulina para la metabolización de la glucosa?

________________________________________________________________________

¿Cuántos gramos de glucosa se metabolizan aproximadamente por día?

_______________________________________________________________________

¿Cuáles son las cifras normales más actuales de glicemia en ayunas de acuerdo a la NOM?

_______________________________________________________________________

¿Qué indican valores por arriba y por debajo de la normoglicemia?

________________________________________________________________________
¿Es posible que monosacáridos distintos a la glucosa alteren los niveles de glucosa en sangre y por
qué?

La condición denominada “Estrés metabólico debido al trauma” altera los niveles de glucosa,
explica por qué.

Explica en qué consiste el daño endotelial ocasionado por el aumento de glucosa en sangre
constante.

Indica cuál es la diferencia entre los estudios de laboratorio que a continuación se te mencionan
como indicadores de correlación de los valores de glucosa y el desbalance metabólico: medición
de glucosa en ayunas, glucosa en orina, glucosa pospandrial , curva de tolerancia oral de la glucosa
y Hemoglobina glucosilada.

PRACTICA NO. 3
 DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS POR MÉTODO COLORIMÉTRICO ENZIMÁTICO (GPO-PAP).

Vinculación con el programa de asignatura.

Unidad III-Principales procesos metabólicos del organismo humano.
Lugar – Laboratorio de Bioquímica

COMPETENCIA

El alumno sabrá cómo cuantificar triglicéridos en suero y a correlacionar con el estado fisiológico
del paciente y la presencia de patologías metabólicas .

INTRODUCCIÓN

Las dislipidemias son unos de los principales factores modificables de riesgo cardiovascular. El
escrutinio y el tratamiento de las dislipidemias es costo-efectivo en toda la población mayor de 20
años. Además, las dislipidemias y la hipertensión arterial se encuentran asociadas frecuentemente
y presentan un efecto sinérgico sobre el riesgo cardiovascular. 1
Los triglicéridos se producen en el hígado a partir del glicerol y los ácidos grasos y de los triésteres
de estos dos componentes. Los triglicéridos son lípidos que existen normalmente en la sangre y se
emplean en producir energía para el organismo. El exceso de triglicéridos se almacena en el tejido
adiposo.

Los triglicéridos se determinan a partir de la hidrólisis enzimática con lipasas. El indicador es una
quinoneimina formada por hidrógeno-peróxido, 4-aminofenazona y 4-clorofeno, bajo la influencia
catalítica de la peroxidasa. La cantidad de esta Quinona formada es proporcional a la
concentración de triglicéridos.

Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos Grasos

Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP

Glicerol-3-fosfato + O2 Dihidroxiacetona-P + H2O2

H2O2 + 4-AF + p-clorofenol Quinona + H2O

BIBLIOGRAFÍA.

1.NORMA Oficial Mexicana NOM-037-SSA2-2012, Para la prevención, tratamiento y control de las dislipidemias.

MATERIALES Y REACTIVOS BIOLÓGICOS

 - Baño María a 37oC
- Bolsa para R.P.B.I
- Centrifuga
- Contenedor de punzocortantes
- Equipo para extracción de sanguínea venosa
- Espectrofotómetro
- Etanol al 70%
- Gradilla
- Micropipeta de 0.010 ml
- Pipeta de 1 ml
- Reactivo para determinación de triglicéridos
- Tubos al vacío sin aditivos
- Tubos de ensaye

PROCEDIMIENTO
Determinación de triglicéridos:

1. Nombrar a un integrante de cada equipo para extraer sangre, utilizando el vacutainer.

2. Centrifugar la sangre 10 minutos a 1500 rpm, a temperatura ambiente.
3. Tomar 10l de suero mediante el uso de una micropipeta y vaciar a tubo de ensaye.
4. Agregar 1ml del reactivo del kit de determinación de triglicéridos.
5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37oC en baño de agua.
6. Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
7. Hacer cálculos para determinar la concentración de triglicéridos.

CÁLCULOS:
Absmuestra x Conc. Patrón =______________ mg/dL de triglicéridos.
Abs patrón

RESULTADOS.

¿Cuáles fueron los resultados obtenido para las muestras problema? ¿Cuál sería su interpretación
clínica?

¿Qué factores pueden modificar la determinación de triglicéridos?

CUESTIONARIO.

¿Cuáles son los valores normales para los triglicéridos?

_______________________________________________________________________________

Explica la relación que guardan los triglicéridos respecto al género, edad y la dieta.

_______________________________________________________________________________

¿Qué requisitos debe cumplir el paciente antes de presentarse a la prueba?

______________________________________________________________________________

Define que es ateroesclerosis:

¿Cuáles son las indicaciones nutricionales recomendadas para un paciente que presente
triglicéridos altos?

PRACTICA No. 4
 DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

Vinculación con el programa de asignatura.

Unidad III-Principales procesos metabólicos del organismo humano.
Lugar – Laboratorio de Bioquímica

Competencia

Determinar la concentración de albúmina para asociarla a los criterios de desnutrición como índice
de pronóstico nutricional.

Introducción

Las proteínas son biomoléculas, componentes estructurales de una célula, sirven como
biocatalizadores (enzimas), reguladores del metabolismo (hormonas) y conservadores de la
estructura genética (cromosomas). Los aminoácidos son las unidades componentes de las
proteínas. Gran parte de la información clínica se ha obtenido examinando y midiendo las
proteínas pues participan en demasiadas funciones. Las tres categorías principales de proteínas
son: proteínas de tejidos y órganos, proteínas plasmáticas y hemoglobina. A causa de su gran
tamaño, la masa muscular proporciona la mayor cantidad de proteínas en situaciones de
privación. Las proteínas tisulares de la masa muscular tienen la mayor capacidad amortiguadora
de los sitios proteicos. Las proteínas plasmáticas sirven como una fuente nutritiva para los tejidos
orgánicos y funcionamiento en el organismo por su capacidad amortiguadora por combinación con
la hemoglobina para ejercer un efecto comparable al del bicarbonato y otros sistemas
amortiguadores inorgánicos de la sangre.

La albumina es una proteína que se forma en el hígado y ayuda a conservar la distribución normal
del agua en el organismo (presión oncótica). También contribuye en el transporte de los
componentes de la sangre como son los iones, pigmentos, bilirrubina, hormonas, ácidos grasos,
enzimas y algunos fármacos. Aproximadamente 52 a 60% de las proteínas totales es albúmina, el
resto es globulina, cuyas funciones son la formación de anticuerpos y otras proteínas plasmáticas
(fibrinógeno y protombina) que funcionan en la coagulación.

Normalmente, las paredes de los capilares son impermeables a las proteínas plasmáticas, pero en
ciertas enfermedades la albúmina puede filtrarse a través. Las globulinas más grandes
permanecen dentro de la corriente sanguínea y asumen la función principal en la conservación de
la presión oncótica. Debido a la incapacidad de las globulinas para funcionar tan eficazmente como
las albúminas, la presión osmótica puede ser inferior a la normal, aun cuando se conservan los
valores normales de proteínas totales.

MATERIALES Y REACTIVOS

- Baño de agua a 37°C

 - Bolsa para R.P.B.I
- Centrifuga
- Contenedor de punzocortantes
- Equipo para extracción sanguínea venosa
- Espectrofotómetro
- Etanol al 70%
- Gradilla
- Micro pipeta de 5 l
- Pipeta graduada de 5 ml
- Reactivo para determinación de albúmina.
- Tubos al vacío sin aditivos
- Tubos de ensaye

PROCEDIMIENTO

Determinación de albúmina:

1.Nombrar a un integrante de cada equipo para extraer sangre, utilizando el vacutainer.

2. Centrifugar la sangre 10 minutos a 1500 rpm, a temperatura ambiente.
3. Tomar 5l de suero mediante el uso de una micropipeta y vaciar a tubo de ensaye.
4. Agregar 1ml del reactivo del kit de determinación de albúmina.
5. Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
6. Leer en el espectrofotómetro a 630 nm.
7. Hacer cálculos para determinar la concentración de albúmina.

CÁLCULOS:
Abs muestra x 5.0 = __________ g/dl de albúmina en suero
Abs patrón

RESULTADOS

¿Cuáles fueron los resultados obtenidos para la muestras problema? ¿Cuál sería su interpretación
clínica?

¿Qué condiciones patológicas pueden disminuir las concentraciones de albúmina?

CUESTIONARIO

¿Cuáles son los valores normales para albúmina sérica?

_______________________________________________________________________________

¿A qué patologías se pueden deber cifras disminuidas de albúmina?

_______________________________________________________________________________

Desde el punto de vista nutricional ¿qué representa una albúmina menor a 3g/dl?

_______________________________________________________________________________

¿Por qué la albúmina es utilizada como un indicador bioquímico para riesgo nutricional?

Explica qué sucede con los niveles séricos de albúmina durante el embarazo:

Explica por qué la administración de albúmina exógena a pesar de que aumenta los valores séricos
de la misma no mejora el pronóstico nutricional.

Práctica No.5
Obtención de DNA
 Vinculación con el programa de asignatura.
Unidad III-Fundamentos de biología molecular.
Obtención de DNA.
Lugar-Laboratorio de bioquímica

Competencia
El alumno sabrá extraer el DNA a partir de la lisis y separación de las estructuras subcelulares de
células vegetales, de esta forma identificará el ácido desoxirribonucleico diferenciándolo
puntualmente del extracto celular.

Introducción
La genética es la ciencia que estudia los procesos hereditarios de los seres vivos y se puede
abordar de distintos niveles: molecular, celular o individual. La molécula de la herencia es el ADN,
cuya estructura fue descubierta después de un largo proceso en el que muchos investigadores
hicieron aportes muy valiosos.
El DNA es un polímero de desoxirribonucleótidos unidos por enlace fosfodiéster entre el C3’ de un
desoxirribonucleótido con el grupo fosfato en el C5’ del siguiente. En 1953 J.D. Watson y F.H.C
Crick reportaron la estructura del DNA. De acuerdo con el modelo de Watson y Crick la estructura
del DNA es una doble hélice plectonémica, con hebras antiparalelas y bases nitrogenadas
complementarias. Los nucleótidos contienen bases nitrogenadas que se aparean selectivamente;
la adenina con la timina y la guanina con la citosina.

Material y procedimiento

Reactivos y material biológico Equipo y Material

- Media taza de chícharos (Pisum sativum) - Licuadora

o fresas(Fragaria × ananassa) - Papel filtro para café
- Detergente líquido. - Vaso de precipitados de 250 mL
- Ablandador de carne con papaína. - Probeta
- Alcohol etílico o isopropílico a 70-95% - Pipeta de 10 mL
- Azul de metileno - Varilla de vidrio.
- Cloruro de sodio, (NaCl). - Tubo de ensaye
- Portaobjetos
- Palillos de madera.

1. Colocar en el vaso de la licuadora aproximadamente media taza de chícharos verdes secos,

10 g de cloruro de sodio y 100 mL de agua fría.
2. Licuar a alta velocidad por 15 segundos.
3. Pasar la solución a través del papel filtro y recuperar el filtrado en un recipiente limpio.
4. Agregar 10 ml de detergente y agitra suavemente para que se mezclen el licuado y el
detergente líquido.
5. Pasar 5 ml del filtrado a un tubo de ensaye.
6. Dejar la mezcla reposar de 7 a 10 minutos.
7. Después vacíala en tubos de ensaye llenando sólo un tercio del tubo.
8. Agregar al tubo 0.5 g de ablandador de carne disuelto en 2ml de agua y agita suavemente.
Es importante que agites muy suavemente, ya que de lo contrario se romperá el DNA y será
difícil de observar.
9. Tomar el tubo de ensayo y poco a poco agregar alcohol etílico (o alcohol isopropílico 70-
95%) procurando que se deslice por las paredes, de manera que no se mezcle con el
contenido del tubo y forme una capa en la parte de arriba de la mezcla de chícharo. Agrega
el alcohol hasta que tengas la misma cantidad de alcohol que de la mezcla de chícharo.
10. Observar, el DNA subirá poco a poco hacia la capa de alcohol. Usar un palillo para tomar
con mucho cuidado el DNA.

Resultados

1. Elabora un esquema de lo que hayas obtenido en el tubo.

2. Elabora un esquema de lo que hayas observado al microscopio.

CUESTIONARIO

1. Elabora un diagrama con la estructura del DNA.

2. Investiga cuáles son las proteínas que se encuentran generalmente asociadas al DNA
3.¿Cuáles son las funciónes del DNA en las células?
4.¿Cuál es la función del ablandador de carnes? Explica a qué tipo de moléculas pertenece.
5.¿Qué función tiene el detergente para la extracción del ADN?
6.¿A qué sustancia es más afín el ADN, al agua o al alcohol? Explica por qué.
 PRÁCTICA No. 6

FASES DE LA MITOSIS EN ÁPICES RADICULARES DE CEBOLLA

Vinculación con el programa de asignatura.

Unidad III-Procesos de producción celular.
Lugar – Laboratorio de Bioquímica

COMPETENCIA

El alumno sabrá distinguir las etapas de la mitosis por medio de la observación de células
meristématicas de la cebolla para relacionarlo con los procesos de división celular que ocurre en
las células humanas.

INTRODUCCIÓN

La división celular es el proceso por el cual la célula se puede multiplicar, esta división celular es de
dos tipos, una de ellas se llama mitosis y la otra se llama meiosis, este tipo de divisiones se
diferencia básicamente por el tipo de células en las que se lleva a cabo, por sus etapas, el número
de cromosomas que hay en el inicio y al final de la división, entre otras. Para poder observar las
etapas de la división celular en la mitosis en necesaria la tinción de los cromosomas. En la presente
práctica la técnica aplicada es la basada en Acetocarmín (Carmín ácido).

REACTIVOS Y MATERIAL BIOLÓGICO MATERIAL

1 cebolla con raíces Tijeras

Ácido Clorhídrico 1N Navaja de afeitar
Carmín acético Porta objetos
Agua Cubreobjetos
Microscopio óptico.
 PROCEDIMIENTO

1. Cinco o seis días antes de comenzar el experimento, escoja un bulbo de cebolla fresca y
elimine mediante un raspado con una cuchilla las raíces secas que se hallan en la base del
bulbo.
2. Colocar la cebolla en un frasco de boca ancha.
3. Verter agua en el frasco, hasta tapar la base de la cebolla.
4. Mantener la base de la cebolla húmeda y cambie agua diariamente por 8 días.
5. Cortar raíces jóvenes de cebolla, aproximadamente unos 20 mm, comprobando que
conservan el ápice radicular, que se distinguirá por el cambio de color.
6. Realizar cortes transversales lo más delgado posible en los ápices.
7. Deposite las raíces en un vidrio de reloj y cubrir con HCl 1N y deje reposar durante 15
minutos
8. Quite el exceso de ácido.
9. Agregar Acetocarmin sobre las raíces hasta cubrir y calentar con ayuda del mechero sin
ebullir ( cuidar que no se seque la muestra) durante aproximadamente 1 minuto.
10. Deje reposar 15 minutos.
11.Colocar las raíces en un portaobjetos.
12. Colocar un cubreobjetos, cubra lentamente sobre ellas hasta que se pose sobre el
preparado, cuidando que no queden burbujas de aire retenidas.
13 Colocar un papel absorbente sobre el cubreobjetos y ejerza sobre él presión vertical.
14.Observar los preparados bajo el microscopio óptico, con el mayor aumento. Identifique las
diferentes fases de la mitosis
15. Dibujar lo observado.

RESULTADOS
Nota: Se observa al microscopio empezando con el objeto de menor aumento (150x, 600x). No
es necesario utilizar el objetivo de inmersión. Se deben distinguir y dibujar, tal y como se ven,
todas las fases de la mitosis.
CUESTIONARIO

¿Por qué se utiliza las raíces jóvenes de la cebolla para este experimento?

___________________________________________________________________________

¿Qué otro material biológico podríamos utilizar para observar los cromosomas en diferentes
etapas?

______________________________________________________________________________

¿En qué se basa el método de coloración de Acetocarmin para colorear los cromosomas?

______________________________________________________________________________

Dibuja en orden las etapas de la mitosis.

________________________________________________________________________________

¿Por qué crees que no podemos observar la meiosis en este experimento?

________________________________________________________________________________

¿Cuál es el número de cromosomas al inicio y al final de la mitosis en las células humanas?

________________________________________________________________________________

¿En qué tipo de células se lleva a cabo la Mitosis y en qué tipo de células la Meiosis?

________________________________________________________________________________

¿Qué fase es la que podemos observar en un mayor número de células?

Calcule el índice mitótico según:

lm = No. De células en división x 100 / No. Total de células.

Calcule la duración relativa de cada estado de la mitosis (índice de fases) utilizando la siguiente
fórmula:

L fase = No. De células en esa fase x 100 / No. Total de células en mitosis.