UNIVERSIDAD DEL QUINDIO FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y TECNOLOGIAS PROGRAMA DE QUMICA

PRODUCCIN DE CIDO PURVICO DURANTE LA FERMENTACIN DE LA GLUCOSA POR LA LEVADURA (Sacharomyces Cereviceae) PRODUCTION OF PYRUVIC ACID DURING FERMENTATION OF GLUCOSE BY YEAST (Sacharomyces Cereviceae) Juan D. Rivera D. y Laura M. Arroyave M.
Universidad del Quindo. Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas. Programa de Qumica. Laboratorio De Bioqumica

Resumen Se conoce como Piruvato al anin Carboxilato del cido Pirvico; ste es un compuesto orgnico clave en el metabolismo. Es el producto final de la gluclisis, una ruta metablica universal en la que la glucosa se escinde en dos molculas de piruvato y se origina energa (2 molculas de ATP)1. El objetivo de la prctica fue determinar la presencia de Piruvato en soluciones de Levadura con Fosfato de Sodio (Levadura A) y con Fosfato de Potasio (Levadura B) adicionndoles posteriormente soluciones de Glucosa y Maltosa al 2% y 5%. Luego de hacer el debido procedimiento se procede a identificar el Piruvato haciendo las pruebas de Nitroprusiato de Sodio y 2,4 Dinitrofenilhidrazina. Palabras Clave Piruvato, Anin Carboxilato, cido Pirvico, Metabolismo, Gluclisis. Abstract It is known like Piruvato the Carboxilato anion of the Pirvico Acid; this one is an organic compound key in the metabolism. It is the end item of the gluclisis, a universal metabolic route in which the glucose is split in two molecules of piruvato and energy (2 molecules of ATP) is originated. The objective of the practical one was to later determine the presence of Piruvato in Leavening solutions with Sodium Phosphate (Leavening A) and with Potassium Phosphate (Leavening B) adding solutions to them of Glucose and Maltose to 2% and 5%. After to make the due procedure it is come to identify the Piruvato doing the tests of Nitroprusiato de Sodio and 2.4 Dinitrofenilhidrazina. Keywords Pyruvate, Carboxylate Ions, Pyruvic Acid, Metabolism, Glycolysis.

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Introduccin La gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se transforma en piruvato con formacin de ATP. En ausencia de oxgeno, luego de la gluclisis se lleva a cabo la fermentacin, donde se produce etanol y CO2 y/o cido lctico, dependiendo del organismo que lo efecte; en el primer caso las levaduras son las responsables. Ambas rutas de fermentacin (produccin de etanol y cido lctico) son similares hasta la formacin de piruvato, manteniendo similares las etapas de conservacin de energa que conducen a la formacin de ATP. La gluclisis no solo es la va principal para el metabolismo de la glucosa que conlleva a la produccin de acetil-CoA y a su subsiguiente oxidacin en el ciclo del cido ctrico, sino que tambin proporciona una va importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada de los alimentos.2 La descarboxilacin oxidativa del piruvato es la etapa previa al ciclo de Krebs y posterior a la gluclisis en el proceso de respiracin celular. El cido pirvico (que posee tres tomos de carbono) generado en la etapa de gluclisis sale del citoplasma y atraviesa la membrana externa mitocondrial de forma pasiva debido a la alta permeabilidad de la misma. El cido pirvico ingresa a la matriz mitocondrial mediante un mecanismo de simporte con protones que le permite atravesar la membrana interna de la mitocondria. Dentro de la matriz mitocondrial, el cido pirvico sufre una descarboxilacin oxidativa en la que

interviene el complejo de tres enzimas que forman la piruvato deshidrogenasa. Este complejo enzimtico posee varios cofactores, entre ellos la coenzima A y es el encargado de catalizar la conversin del cido pirvico a acetil-CoA. Durante el proceso se modifica el cido pirvico, el cual pierde un tomo de carbono y genera un acetilo, el acetil-CoA (que posee dos tomos de carbono). El carbono liberado se desprende como una molcula de dixido de carbono (CO2) y se reduce una molcula de NAD+ generando NADH y H+. Cuando concluye esta etapa, el acetil-CoA ingresa al ciclo de Krebs.3 Metodologa Formacin De Piruvato Marcar dos series de tubos, de 4 cada una y adicionar 3 mL de las soluciones de glucosa y maltosa a las diferentes concentraciones 2.0% y 5% a ambas series. A una de las series de tubos adicionarles 3 mL de suspensin de levadura con fosfatos de sodio (0.5M) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 mL de la suspensin de levadura con fosfatos de potasio (0.5M) y marcarlos como B. Colocar todos los tubos en bao mara a 37C por 30 minutos y aadir posteriormente a cada tubo 1 mL de TCA al 10% mezclado vigorosamente y centrifugar a 2500 rpm por 10 minutos. Separar el sobrenadante y desechar el precipitado.

UNIVERSIDAD DEL QUINDIO FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y TECNOLOGIAS PROGRAMA DE QUMICA Identificacin De Piruvato Reaccin Con Nitroprusiato De Sodio: En un tubo de ensayo colocar 1 mL del sobrenadante obtenido y hervirlo. Adicionar 0.5 g de sulfato de amonio slido y agitar. Agregar dos gotas de nitroprusiato de sodio y mezclar vigorosamente. Adicionar por las paredes del tubo unas gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin de dos capas. La formacin de un anillo verde o azul en la interfase indica afirmativo para la prueba. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Reaccin Con 2,4 Dinitrofenil-Hidracina: En un tubo de ensayo colocar 1 mL del sobrenadante obtenido y adicionar 1 mL de 2,4-DNFH, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y adicionar 1 mL de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloracin e intensidad de la misma en cada caso. Blanco + Levadura B Prueba Nitroprusiato de Sodio DNFH Resulatado Negativo Negativo

Levadura A Nitroprusiat o de Sodio 2,4 Dinitrofenilhidr azina (+) (-)

Prueba Sustancia

Maltosa Tubo 1 (2%) Tubo 2 (5%) Glucosa Tubo 1 (2%) Tubo 2 (5%)

(+) (-)

(+) (-)

(+) (-)

Levadura B Nitroprusiat o de Sodio 2,4 Dinitrofenilhidra zina (-) (-)

Prueba Sustancia

Resultados y Anlisis Blanco + Levadura A Prueba Nitroprusiato de Sodio DNFH

Resulatado Negativo Negativo

Maltosa Tubo 1 (2%) Tubo 2 (5%) Glucosa Tubo 1 (2%) Tubo 2 (5%)

(-) (-)

(-) (-)

(-) (-)

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Bibliografa y 1. George D. Cody, Nabil Z. Boctor, Timothy R. Filley, Robert M. Hazen, James H. Scott, Anurag Sharma, Hatten S. Yoder Jr., David Master, "Primordial Carbonylated Iron-Sulfur Compounds and the Synthesis of Pyruvate", Science, 289 (5483) (25 de agosto de 2000) pp. 1337 - 1340. 2. Giraldo G.; Loango N.; Meja C.; Manual de Prcticas de Bioqumica; Armenia, Quindo. 3. David L. Nelson y Michael M. Cox (2001). Lehninger Principios de Bioqumica (3era ed.). Editorial Omega