ASIGNATURA

: BASES MOLECULARES Y CELULARES DE LA MEDICINA III

CICLO
: III
SEMESTRE ACADEMICO : 2021-0
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE
CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE
MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV

PRÁCTICA N°10:
PERFIL LIPIDICO II: TRIGLICÉRIDOS

DOCENTE

Mg. COILA DE LA CRUZ, Hilda Victoria.

LOGRO A MEDIR:

Explicar las rutas metabólicas de los ácidos grasos, triacilgliceroles y sus

alteraciones.
MARCO TEÓRICO:

Los triglicéridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo
por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energía.
El movimiento de ácidos grasos entre los distintos compartimientos del organismo, se
produce con gran rapidez en respuesta a diversos estímulos (dieta, actividad física,
stress, edad, etc.).
Por este motivo es de esperar que los
triglicéridos (uno de los más importantes
vehículos para el transporte de ácidos grasos)
varíen también su concentración en respuesta
a estos factores fisiológicos. Sin embargo, el
equilibrio de estos mecanismos puede verse
alterado, conduciendo a niveles anormales de
triglicéridos circulantes.
La persistencia de esta condición, se asocia con
numerosas patologías, tales como enfermedad
hepática, renal, hiperlipidemias esenciales, etc.
Para la determinación de triglicéridos en suero se usará la determinación enzimática de
glicerol a partir de glicéridos.
Los métodos enzimáticos se basan en la determinación del glicerol contenido en las
moléculas de los triglicéridos, tras la hidrólisis (química ó enzimática) para remover los
ácidos grasos.
La determinación enzimática del glicerol ha sido
usada durante muchos años; sin embargo, en
estos métodos se empleaba la hidrólisis alcalina
de los triglicéridos.
El reciente desarrollo del uso de enzimas
(lipasa, usualmente combinada con una
proteasa) para catalizar la hidrólisis, ha
posibilitado el empleo de métodos directos,
rápidos y específicos.
Los sistemas totalmente enzimáticos eliminan el
uso de reactivos cáusticos, extracción con
solventes, baños de altas temperaturas y
mezclas de absorción para la remoción de
Fosfolípidos.
MATERIAL DIDÁCTICO:
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

EXPERIMENTO A:DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SUERO

Fundamentos del Método:
Se producen reacciones químicas basadas en la determinación química de
glicerol a partir de glicéridos. La primera etapa consiste en que los triglicéridos
son hidrolizados enzimáticamente por una lipoprotein lipasa específica,
produciendo glicerol y ácidos grasos.
Lipoprotein lipasa
Triglicéridos Glicerol + 3 ácidos grasos

En una segunda etapa el glicerol se fosforila a glicerol-1-fosfato en presencia de

glicerolkinasa.

Glicerol kinasa
Glicerol + ATP Glicerol-1-P + ADP
En una tercera etapa el derivado fosforilado se oxida mediante l glicerolfosfato
oxidasa (GPO), con producción de agua oxigenada.

GPO

Glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato

Finalmente el agua oxigenada así formada produce la unión oxidativa del fenol y
la 4-aminofenazona, en reacción catalizada por la peroxidasa (POD), con
formación de una quinonimina roja.

POD

2 H2O2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja

MUESTRA
Suero o plasma

REACTIVOS PROVISTOS:
- Standard: solución acuosa de glicerol
equivalente a 200 mg% de triglicéridos.
- Buffer: solución de buffer conteniendo
clorofenol a pH 7,5.
- Enzimas: Viales conteniendo lipoprotein
lipasa, glicerol kinasa (GK), glicerol fosfato
oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina
trifosfato (ATP) y 4 aminofenazona (4-AF).
PROCEDIMIENTO:
Homogenizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos.
En tres tubos de ensayo marcados B (Blanco), S (Standard) y M (Muestra), colocar:

1000 uL 1000 uL
Reactivo Reactivo
1000 uL
Reactivo
10 uL 10 uL
Standar Muesra

B S M

1
2 3 4
Incubar 10 minutos en baño de agua a 37ºC.
Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.

B
B M S

S
M
7
5 6
CALCULO DE RESULTADOS: Corregir las lecturas con el blanco y usar las lecturas
corregidas para los cálculos. Para hallar la concentración de triglicéridos en el suero
problema, se debe utilizar el método del factor de calibración
Recordar que la concentración del standard de colesterol es de 200 mg%

Triglicéridos (mg%) = Amp x Fc

VALORES DE REFERENCIA:
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de Triglicéridos:
Deseable: < 1,50 g/l
Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l
Elevado: 2,00 - 4,99 g/l
Muy elevado: ≥ 5,00 g/l
No obstante, se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores
de referencia.
Se tomo la muestra a dos pacientes para determinar la concentración de
triglicéridos obteniéndose las lecturas de las absorbancias de los diferentes
tubos debidamente rotulados.
Realizar los cálculos:
1. Blanco de reactivo: 0.015 Patrón: 0.243 Muestra: 0.153
2. Blanco de reactivo: 0.048 Patrón: 0.345 Muestra: 0.246

https://www.youtube.com/watch?v=uQnzeZP_ogg
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN:

1.- Describa las características principales de los lípidos y su clasificación.

2.- Explique la importancia biológica de los triglicéridos.

3.- ¿Cómo se produce la digestión y absorción de los triglicéridos?

4.- Mencione la proporción de triglicéridos dentro de las lipoproteínas y la

acción de la lipasa lipoproteìca.

5.- Enumere los diferentes métodos tanto químicos como enzimáticos para
el dosaje de triglicéridos.

Fuente: Guía de práctica de Bioquímica y Nutrición UPSJB