“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

Tema: “Hidrolisis enzimática de los lípidos por lipasa pancreática”

Curso: Bioquímica

Docente: Mestas Valdivia, Bertha

Estudiante: Coila Medina, Jorge Juvert

Grupo: Laboratorio A4

Arequipa – Perú

2022

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 PRÁCTICA N°13
HIDROLISIS ENZIMATICA DE LOS LIPIDOS POR LIPASA
PANCREATICA
INTRODUCION
Gran parte de los alimentos que ingiere un individuo está constituido por grasas, en los
cuales los triglicéridos constituyen un 90%. Los triglicéridos a nivel del intestino proximal,
se hidrolizan en sus componentes debido a la acción de la LIPASA PANCREATICA, cuya
acción se incrementa por la presencia de sales biliares que favorecen su emulsión. La lipasa
pancreática actúa en un rango de pH de 7.8 a 8.0. Los triglicéridos se hidrolizan en ácidos
grasos, glicerol, monoglicéridos y diglicéridos. Todos estos componentes son emulsionados
hasta pequeñas micelas que se absorben fácilmente.

Los aceites son lípidos constituidos básicamente de ácidos grasos insaturados, como el
palmítico, esteárico y el ácido mirístico. La hidrólisis de los triglicéridos del aceite de oliva
usando pancreatina (extracto de enzimas pancreáticas) liberará ácidos grasos que podrán
ser titulados.
EXPERIMENTO N° 1. HIDROLISIS DEL ACEITE DE OLIVA POR LA LIPASA
PANCREATICA.
MATERIALES

 Tubos de ensayo
 Baño maría
 Pipetas
 Buffer fosfato pH 8.0: A 100.00 ml de fosfato monopotásico 0.2 M, se le agrega 93.6
ml de NaOH 0.2 M y se completa a 400.00 ml con agua destilada.
 Solución de sales biliares al 1% en buffer fostato pH 8
 Solución de pancreatina al 1% en suero fisiológico o buffer fosfato pH 8.0
 Fenolftaleína al 0.1%
 Hidróxido de sodio 0.01 N.
 Emulsión de aceite: Agregar 5 gotas de fenolftaleína a 100.00 ml de aceite de oliva
y la cantidad suficiente de hidróxido de sodio 0.01 N para neutralizar. Se detiene la
titulación cuando aparece un color rosa tenue.

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METODO DE TRABAJO

Se prepara el siguiente sistema de tubos:

Tubo N° 1 2 3 4 5 6
Emulsión de aceite 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
Buffer fosfato pH 8.0 2.0 2.0 - - - -
Sol. de sales biliares - - 2.0 2.0 - -
Sol. Pancreatina 2.0 - 2.0 - 2.0 -
Sol. pancreatina hervida - 2.0 - 2.0 - 2.0
Agua destilada - - - - 2.0 2.0

Posteriormente se mezclan y colocan en baño maría a 37 °C durante 30 min, agitando los

tubos por ciertos intervalos. Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos del baño
maría y agregar a cada uno 3 gotas de fenolftaleína y se realiza la titulación de ácidos
grasos liberados, por acción de la lipasa sobre las grasas, con NaOH 0.01 N hasta que
aparezca una coloración rosada. Se anota el volumen de álcali gastado en cada tubo.
Calcular el número de equivalentes de ácidos presentes en cada tubo. (ANEXO 1)

Tubo N° 1 2 3 4 5 6
ml de NaOH gastados 6.8 6.1 8.0 6.8 3.0 5.0
Equivalentes de ácido 0.068 0.061 0.08 0.068 0.03 0.05

RESULTADOS

Según los resultados podemos denotar que hay un mayor gasto de NaOH en el tubo N°3
esto por la pancreatina y las sales biliares, mientras que existe un menor gasto de NaOH
en el tubo N°5, en este último hay menos gasto por la acción del agua destilada.
DISCUSION

La lipasa pancreática es un enzima que actúa sobre los triglicéridos, los lípidos más
importantes de la dieta, hidrolizándolos a di glicéridos, mono glicéridos y ácidos grasos.
(Abidanuziel, 2015)

Como vimos su actividad se mide titulando con una base (NaOH 0.0N) los ácidos grasos
liberados, dando así una mayor acidez, mayor gasto de titulación y mayor actividad
enzimática. La acción de la enzima se ve potenciada por las sales biliares (como se ve en
el tubo N°3), que transforman las grasa en pequeñas micelas.

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EXPERIMENTO N° 2. HIDROLISIS DE LOS LIPIDOS DE LA LECHE POR LA LIPASA
PANCREATICA.
MATERIALES

 Tubos de ensayo
 Baño maría
 Erlenmeyer
 Pipetas
 Buffer fosfato pH 8.0: A 100.00 ml de fosfato monopotásico 0.2 M, se le agrega 93.6
ml de NaOH 0.2 M y se completa a 400.00 ml con agua destilada.
 Solución de sales biliares al 1% en buffer fostato pH 8
 Solución de pancreatina al 1% en suero fisiológico o buffer fosfato pH 8.0
 Fenolftaleína al 0.1%
 Hidróxido de sodio 0.01 N. Leche hervida y diluida dos veces
METODO DE TRABAJO
En dos erlenmeyer de 50.0 ml se colocan 10.0 ml de leche y 1.0 ml de lipasa en cada uno.
A continuación, a uno de ellos se le añadió 1.0 ml de agua destilada y al otro 1.0 ml de
solución de sales biliares y se mezcló rápidamente aspirando con la pipeta. De cada matraz
se tomaron 2.0 ml de mezcla y se colocaron en tubos de ensayo, se le añadio 2 gotas de
fenolftaleína y se valora con NaOH 0.01 N hasta la aparición de un color rosado tenue.
La mezcla que quedó en los matraces se incuban a 37 °C y a intervalos de 15 min se
tomaron alícuotas de 2.0 ml y se valora con NaOH 0.01 N. La cantidad de álcali consumido
para la neutralización de los ácidos grasos libres formados en el curso del hidrólisis de la
grasa se determina por la diferencia entre los resultados de la primera y las siguientes
valoraciones. En base a los datos obtenidos realice un gráfico de la acción de la lipasa
frente al tiempo, con y sin sales biliares
Gasto de NaOH (ml)
Tiempo (min)
Con sales biliares Sin sales biliares
0 1.5 1.0
15 4.0 3.0
30 5.0 4.0
45 6.0 5.0
60 8.5 6.5

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 Gasto de NaOH por el tiempo
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 10 20 30 40 50 60 70

Con sales biliares Sin sales biliares

RESULTADOS
En la gráfica podemos observar que hay un mayor gasto de ml de NaOH cuando hay
presencia de sales biliares a comparación de cuando no hay presencia de estas.
DISCUSION
Una característica peculiar de las lipasas es que son enzimas solubles en agua que actúan
sobre sustratos insolubles y agregados, por lo que operan unidas a interfaces lípido-agua.
Bajo estas condiciones, se produce un incremento de la actividad catalítica respecto a las
soluciones con concentraciones por debajo de la concentración micelar crítica, fenómeno
conocido como activación interfacial. (Salazar et al.,2020)

En función al gasto de ml de NaOH se puede observar que existe variaciones con respecto
a la cantidad, esto en diferentes intervalos de tiempo notándose en el minuto 60 hay una
mayor diferencia.
CONCLUSIONES (EXP. 1 Y 2)

 La actividad de la lipasa pancreática hidroliza al aceite de oliva, teniendo un mayor

gasto de NaOH cuando se combina con las sales biliares y menor por acción del
agua destilada.
 La acción de la lipasa pancreática en lípidos incrementa el gasto en NaOH según
baya incrementado el tiempo, y es aún más impulsada con las sales biliares

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ANEXO 1

Para hallar el equivalente de ácido se multiplica la concentración de NaOH (0.01N) con la

cantidad de ml NaOH gastados en la solución.
1) 0.01 N x 6.8= 0.068
2) 0.01 N x 6.1= 0.061
3) 0.01 N x 8.0= 0.080
4) 0.01 N x 6.8= 0.068
5) 0.01 N x 3.0= 0.030
6) 0.01 N x 5.0= 0.050
BIBLIOGRAFIA
Abidanuziel (2015). HIDRÓLISIS DE LAS GRASAS POR LA LIPASA PANCREATICA.
Recuperado de: https://www.clubensayos.com/Ciencia/HIDR%C3%93LISIS-DE-LAS-
GRASAS-POR-LA-LIPASA-PANCREATICA/2554110.html
Salazar Carranza, L. A., Hinojoza Guerrero, M. M., Acosta Gaibor, M. P., Escobar
Torres, A. F., & Scrich Vázquez, A. J. (2020). Caracterización, clasificación y usos de
las enzimas lipasas en la producción industrial. Revista Cubana de Investigaciones
Biomédicas, 39(4). http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-
03002020000400017

CUESTIONARIO
1. ¿En la solución de pancreatina además de la lipasa, existen otras enzimas que
actúan sobre lípidos? Explique cómo actúa cada una de ellas.
Las enzimas son las proteasas y amilasas.
Las proteasas o peptidasas son enzimas proteolíticas, es decir, actúan rompiendo
los enlaces que unen los aminoácidos de las proteínas facilitando su digestión
(P,Wiki, 2009)
Las amilasas son enzimas que catalizan al azar la hidrólisis de enlaces glicosídicos
de polisacáridos como el almidón y el glicógeno, para producir maltosa,
oligosacáridos de diferentes tamaños y cadenas más o menos ramificadas llamadas
dextrinas. (Espinel et al., 2009)
2. Explique qué papel desempeñan las sales biliares en la hidrólisis de los
lípidos.
La función de las sales biliares en el duodeno es solubilizar los lípidos y las vitaminas
liposolubles ingeridos y, de esta manera, facilitar su digestión y su absorción
(Lindenmeyer, 2021)

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3. Realice un esquema donde se aprecie la absorción y digestión de los
triacilglicéridos.

DIGESTION DE LIPIDOS

ABSORCION DE LIPIDOS

https://www.youtube.com/watch?v=ara2Cmm8ITM

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 4. Investigue que enfermedades se producen por deficiencia de enzimas y
cofactores de la oxidación de los ácidos grasos.
Los trastornos de la oxidación de ácidos grasos son errores congénitos del metabolismo
que interrumpen la beta-oxidación mitocondrial o el transporte de ácidos grasos a través de
la vía de transporte de carnitina. (Lecturio, 2022):
Tipos y clasificación
Trastornos de la beta oxidación (Lecturio, 2022):

 Deficiencia de acil-coenzima A (CoA) deshidrogenasa de cadena corta

 Deficiencia de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media
 Deficiencia de acil-CoA deshidrogenasa de cadena muy larga
 Deficiencia de 3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa de cadena larga
 Deficiencia múltiple de acil-CoA deshidrogenasa
 Deficiencia de 3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa
Trastornos del transporte de carnitina (Lecturio, 2022):

 Deficiencia del transportador de carnitina

 Deficiencia de carnitina palmitoiltransferasa tipo 1
 Deficiencia de carnitina-acilcarnitina translocasa
 Deficiencia de carnitina palmitoiltransferasa tipo 2
La fisiopatología exacta varía según la deficiencia, pero hay varias consecuencias
generales al interrumpir el proceso de oxidación de ácidos grasos (Lecturio, 2022):
Reducción del suministro de energía (Lecturio, 2022) :

 Los ácidos grasos se metabolizan para obtener energía en múltiples tejidos,

particularmente en estados de ayuno
 Incapacidad para usar los ácidos grasos → el cuerpo usa reservas de glucosa
reservadas normalmente para tejidos vitales (e.g., cerebro) → hipoglucemia
 Algunos tejidos (e.g., músculo esquelético, corazón) usan ácidos grasos en el
estado de alimentación → pérdida de esta fuente de energía → manifestaciones
clínicas
Acumulación de metabolitos de ácidos grasos (Lecturio, 2022) :

 Al no poder progresar a través del proceso de oxidación beta, los metabolitos de

ácidos grasos pueden acumularse (particularmente dentro de las mitocondrias)
 Algunos metabolitos pueden ser tóxicos → disfunción mitocondrial → disfunción
de tejidos y órganos

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BIBLIOGRAFIA

Espinel, E., & López, E. (2009). PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE a-

AMILASA DE PENICILLIUM COMMUNE PRODUCIDA MEDIANTE FERMENTACIÓN
EN FASE SÓLIDA. Revista colombiana de química, 38(2), 191-208.
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-
28042009000200001http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120
-28042009000200001
Lecturio (2022).Trastornos del Metabolismo de los Ácidos Grasos. Recuperado de:
https://app.lecturio.com/#/article/3880?return=%23%2Fwelcome%3Ffv%3D1
Lindenmeye C. (2021). Generalidades sobre la función biliar. Recuperado de:
https://www.msdmanuals.com/es-pe/professional/trastornos-hep%C3%A1ticos-y-
biliares/trastornos-de-la-ves%C3%ADcula-biliar-y-los-conductos-
biliares/generalidades-sobre-la-funci%C3%B3n-
biliar#:~:text=La%20funci%C3%B3n%20de%20las%20sales,su%20digesti%C3%B3n
%20y%20su%20absorci%C3%B3n.
P, WIKI (2009). ¿Pará que sirve la Proteasa? Beneficios y propiedades. Recuperado
de: https://blog.nutritienda.com/proteasa/