Clase 4 - Dra.

Vívian D’Afonseca da Silva Ferreira

Características de la información Genética
Todas las células del cuerpo de un
organismo tienen la misma estructura
genética.
Es crucial la replicación fiel del material
genético en cada división celular.
Por tanto, las características estructurales
del ADN deben permitir una replicación fiel.
El material genético debe tener contenido
informativo para la síntesis de proteínas.
El material genético debe ser capaz de
soportar cambios en raras ocasiones.
La estructura del ADN debe ser estable, de
modo que los organismos puedan confiar
en su información codificada.
La constitución del material genético es el
mismo en las células eucariota.
Va a diferenciarse el material genético del
núcleo y el material genético mitocondrial
Vimos que las moléculas son un polímero
en el caso de las eucariotas.
formado por varios monómeros que se
Es información genética tiene que ser
conectan por un enlace especifico, y ese
replicado de una manera fiel, porque porta
monómero es formado por 3 compuestos,
la información genética que va a dar origen
un glúcido, en el caso del ADN,
a un ARN mensajero, que va a dar origen a
desoxirribosa, las 4 bases nitrogenadas,
una proteína, si hay error en la replicación
timina, citosina (pirimidinass, 1 anillo
va a cambiar a otro ARN mensajero y a otra
aromático) adenina y guanina (purinas, 2
proteína.
anillos aromáticos) y por ultimo un grupo
El proceso de replicación tiene que
fosfato. El enlace de estos 3 compuestos
mantener la integridad de la información
forma la estructura llamada nucleótido.
genética que esa molécula porta.
El material genético tiene que portar
Enlaces principales
características para que la replicación
pueda llevarse a cabo fielmente.
La molécula de ADN puede sufrir
mutaciones, no todas las mutaciones son
malas.
El ADN, sufre ciertos cambios de manera
natural, espontanea a lo largo del tiempo,
sin afectar la información genética.
La molécula no se degrada fácilmente por
los enlaces y fuerzas de esta. Para formar un nucleótido se presentan 2
Conceptos enlaces.
Los nucleótidos del ADN son formados de: - Enlace N-glucosidico: base
nitrogenada con el glúcido en
posición 1´
 - Enlace éster fosfórico: entre el grupo
fosfato y el glúcido. Se une en la
posición 5´

Estructura primaria
El enlace más
importante es el
enlace
fosfodiester. (que
hace un nucleótido
con otro)
La unión se da en
el grupo fosfato en
la posición 5´ con Estructura secundaria
el grupo hidroxilo Doble hebra, dextrógira.
que está en Enrolladas en un eje imaginario.
posición 3´ del Tamaño de 2,34 nm de diámetro.
nucleótido de al Las bases nitrogenadas están dispuestas al
lado. interior de las cadenas como una escalera
Esta es la en caracol.
estructura primaria Los fosfatos y pentosas al exterior.
del ADN, por fuera Son cadenas antiparalelas
tengo fosfato y Fue propuesta por Watson y Crick, es una
glúcido y al interior doble hebra de forma helicoidal, donde las
la base bases nitrogenadas están posicionadas
nitrogenada. dentro de la molécula y están unidas
Esqueleto del ADN mediante enlaces de hidrogeno.
Las dos cadenas de ADN estas en sentidos
opuestos, es decir son antiparalelas, una se
encuentra en la posición 5´ 3´ y la otra se
encuentra 3´5´, y son complementarias.

Enlaces de estructura primaria

Fuerzas que estabilizan el ADN

 Puentes de hidrógeno
  Carácter hidrofóbico y apilamiento de
las bases
 Fuerzas iónicas

Complementariedad de bases específicas,

el empezó a ver que las bese se unían de
forma que una era base purina y una base
pirimidina.
El propuso que solo era posible la
complementariedad de base entre una
purina y una pirimidinas

Cromosomas
Guanina con citosina forman 3 puentes de
hidrogeno, mientras que timina y adenina
solo dos.
Un alto contenido de CG es signo de
estabilidad en la molécula de ADN.

Complementariedad de bases

Los humanos tenemos nuestro material

genético envuelto en proteínas, y
condensado en formato de cromosoma
(mayor de compactación del material
genético)
Los telomeros son las puntitas de los
cromosomas, son regiones ricas en ADN
repetitivo, que no codifica proteína o ARN.
Los centrómeros también ADN repetitivo
que no codifica nada, región súper
condensada y es tan repetitivo que hasta
hoy no se sabía la información que había
ahí.
Tienen dos porciones el brazo corto y el
brazo largo, hay algunos cromosomas en
donde estas regiones vienen bien
marcadas.
Cariotipo: diploide tipo de base por otro en una o más
posiciones.
3. El emparejamiento específico que ellos
postularon sugiere inmediatamente un
posible mecanismo de copia del material
genético.

La molécula de ADN tiene la información

Heterocromatina: se tiñe de una manera
intensa, región donde los genes están
inactivos, y se encuentra muy condensada.
Eucromatina: una región donde los genes
están más activos, esta región es menos
condensada, se tiñe de una manera menos
intensa
Nosotros tenemos un genoma diploide es
decir tiene 2 conjuntos de cada uno de los
cromosomas, son 22 pares de cromosomas
autosómicos y una pareja de cromosoma
sexual
XY: Hombre
XX: Mujer
genética necesaria para la síntesis de
proteínas, si esa información cambia,
cambia la síntesis de proteína.
Dentro del proceso de replicación existen
diversas enzimas, la principal es la ADN
polimerasa, que se encarga de sintetizar,
producir ADN a partir de un molde también
de ADN.
Necesita encontrar al ADN expuesto.
Ella solo trabaja en una hebra del ADN, en
la orientación 5´3´, porque solo puede
comenzar la replicación sí reconoce una
punta 3´con un hidroxilo.
El comienzo de la replicación parte en
encontrar una punta 3´con un hidroxilo.

Datos Watson y Crick Replicación

El ADN es una doble hebra, compuesta de dos Arthur Kornberg (1959) aisló la ADN
cadenas de nucleótidos, polimerasa de E. coli y demostró su
mantenidas juntas por el actividad enzimática in vitro.
emparejamiento complementario Sustrato: dATP, dGTP, dCTP y dTIP. Ella
de A con T y G con C. hace la adición de cada base al polímero
Cuánto mayor el contenido en crecimiento.
G+C más estable es la Esta enzima agrega
molécula de ADN. desoxirribonucleótidos al
1. La estructura de la doble extremo 3 'de una cadena de nucleótidos
hélice sugiere que la en crecimiento.
secuencia de pares de Utiliza como molde una sola hebra de
nucleótidos en el ADN ADN que
determina la secuencia ha sido expuesta por deselicoidización
de aminoácidos en la localizada de doble hélice.
proteína especificada por
ese gen. Son 6 familias de ADN polimerasas, la
2. Si la secuencia de bases primera
de ADN especifica la descrita fue la ADN polimerasa I.
secuencia de Presenta tres actividades fundamentales, que
aminoácidos, entonces parecen estar ubicadas en diferentes partes
es posible que una de la molécula:
mutación reemplace un
 1. Actividad polimerasa, que cataliza el
crecimiento de la cadena en la dirección
5‘a 3’.
2. Actividad exonucleasa 3‘a 5', que
elimina las bases mal emparejadas.
3. Actividad exonucleasa 5‘a 3', que
degrada las hebras simples de ADN o
ARN.

Básicamente ellas tienen 3 funciones

fundamentales, la actividad polimerasa,
sintetizar material genético en el sentido
5´ 3´. Otras dos actividades que se
llaman exonucleasa que cumple con la
revisión, cada vez que ocurre la
replicación viene la polimerasa
revisando y donde hay un mal
emparejamiento, la exonucleasa se
detiene ahí y rompe el enlace La replicación tiene una tasa de error muy
fosfodiester en la punta 5´, ella va en la baja
dirección opuesta de la replicación. Existen virus que no presentan la ADN
La actividad exonucleasa 5´a 3´ también polimerasa de revisión, entonces la tasa de
es una actividad de revolver un cebador mutación de estos virus es muy alta.
de ARN, que una enzima primasa pone El proceso de replicación es súper preciso,
ahí la molécula para señalar para la ADN suele suceder que algunas bases son
polimerasa que necesita comenzar la agregadas erróneamente, algunas bases
síntesis de una nueva molécula. suelen repetir, pueden perder la afinidad
con su pareja especifica o por el contrario
Actividad de revisión de las ADN polimerasas: aumentar la afinidad con una pareja que no
Una característica de la replicación del es la especifica.
ADN es su precisión, también llamada Esto duele suceder de forma natural, pero
fidelidad. también puede ocurrir por el uso de
En general, se inserta menos de un error algunos fármacos.
por 1010 nucleótidos. La ADN polimerasas En este tipo de errores vienen la revisión y
ejercen actividad exonucleasa 3 'a 5', cuando se reconoce se
teniendo una función de "revisión”. quita la base mal
La polimerasa puede insertar, por ejemplo, emparejada y continua la
una A en lugar de una G para emparejarse base de revisión.
con una C.
La adición de una base incorrecta Este error suele
generalmente ocurre mediante un proceso detectarse y eliminarse
llamado tautomerización. mediante la actividad
En casos raros una base puede desviarse a exonucleasa 3 'a 5'.
la forma normal y se pueden combinar con Una vez que se quita la
otra base, formando un par incorrecto. base incorrecta, la
polimerasa tiene otra
 oportunidad de agregar la base G
complementaria correcta.
Las cepas mutantes de bacterias por
ejemplo sin exonucleasa funcional 3 'a 5'
tienen una tasa de mutación más alta.

Replisoma
La replicación ocurre de manera veloz. El
tiempo requerido para que E. coli replique
su cromosoma puede ser tan corto como
La enzima ADN polimerasa es una
40 minutos.
holoenzima, con varias subunidades, es
Un genoma alrededor de 5 millones de
una enzima súper grande.
pares de bases debe copiarse a una
Tiene la capacidad de sintetizar solo
velocidad de 2000 nucleótidos por
cuando todas las subunidades están unidas
segundo.
formando la holoenzima polimerasa.
El núcleo catalítico del ADN pol es parte de
En el caso de la replicación en células
un complejo mucho más grande, llamado
procariotas la ADN polimerasa que sintetiza
holoenzima polimerasa.
es la ADN polimerasa de tipo III. En el caso
Son dos núcleos catalíticos y muchas
de las eucariotas la ADN polimerasa delta.
proteínas accesorias. Uno de los núcleos
En el proceso de replicación dos
catalíticos se ocupa de la síntesis del
holoenzimas polimerasas van juntas,
filamento
porque mientras una va sintetizando una
continuo, mientras que el otro se ocupa de
hebra de ADN, la otra va sintetizando la otra
la síntesis del filamento discontinuo.
hebra.
El proceso de replicación es conocido
La replicación es un proceso súper rápido.
como un proceso semiconservativo, esto
2000 nucleótidos por segundo.
quiere decir que la molécula madre de ADN
Un genoma tiene alrededor de 5 millones de
da origen a dos moléculas de ADN
pares de bases.
idénticas a ella. Pero una de las hebras es
Hay bacterias que demoran más de 48
de la hebra antigua y la otra es recién
horas en replicar su material genético.
sintetizada. Se conserva una hebra antigua
de la molécula antigua y la otra es recién
ADN polimerasa
sintetizadas
El ADN se abre en un proceso que da
origen a la horquilla de replicación.
Horquilla
Esa horquilla tiene un sentido 5’ 3’
En la cadena que va en el sentido de la
siempre y es hacia dentro de la molécula.
horquilla se da el nombre de cadena
El ADN polimerasa (III o δ) actúa sobre la
continua (líder o leading).
horquilla de replicación.
Cadena molde: 3’ 5’ sentido continuo
La ADN polimerasa siempre agrega
porque hace la nueva cadena en el sentido
nucleótidos a la punta 3‘en crecimiento. Ella
5’ 3’
reconoce el grupo hidroxil libre 3’ OH.
La síntesis de la otra cadena ocurre en el
Solo una de las dos hebras de polaridad
extremo de crecimiento 3‘o sea sentido 3´
inversa puede servir como molde para la
5’, pero esta síntesis está en la dirección
replicación hacia la horquilla de replicación.
"incorrecta “.
 Esta cadena, la dirección 5‘3 'de la dirección del movimiento de la horquilla de
síntesis está lejos de la horquilla de replicación.
replicación. Otro problema en la replicación del ADN
En ese caso la cadena llama discontinua surge porque la ADN polimerasa puede
(lagging). extender una cadena, pero no puede iniciar
una cadena.
Por lo tanto, la síntesis tanto del filamento
principal como de cada fragmento de
Okazaki debe iniciarse mediante un
cebador (8-12 nt) de ARN.
Los cebadores son sintetizados por un
conjunto de proteínas llamado primosoma,
cuyo componente central es una enzima
llamada primasa, un tipo de ARN
polimerasa.
En el filamento principal, solo se necesita
un cebador inicial, porque después de la
acción del cebador inicial, la cadena de
Primer paso para que ocurra la replicación, ADN en crecimiento sirve como cebador
se necesita disociar la molécula de ADN, para la adición continua de nucleótidos.
para exponer las bases nitrogenadas del
interior, cunado esto pasa se forma la
horquilla de replicación que corresponde a
la abertura de la molécula.
La horquilla de replicación tiene un sentido
de la derecha a la izquierda. La replicación
tiene que seguir el caminar de la horquilla.
Cuando se abre la molécula la horquilla va
Además de no poder trabajar en los dos
hacia delante, trabaja generando un
sentidos la horquilla no puede comenzar el
fragmento en la dirección 5´3´.
proceso de síntesis de ADN, sin un grupo
La hebra que sigue el sentido de la
hidroxilo libre.
horquilla de replicación puede ser seguida
Hay una enzima que se llama primasa que
de manera directa en la hebra 3´5´porque
va a generar en todas las moléculas
ADN polimerasa va a generar una hebra en
cebadores de ARN, es decir pequeños
el sentido 5´ 3´.
caminitos de material genético en forma de
La cadena de arriba se llama cadena
ARN, que va a dejar la punta 3´libre.
discontinua, porque ella es leída en
En la hebra continua se necesita un solo
fragmentos. Mientras una es leída de
partidor en el comienzo de la hebra.
manera continua la otra es leída de en
En la hebra discontinua la primasa va
fragmentos de 1000 a 2000 pares de bases
haciendo varios fragmentos de cebadores
llamados fragmentos de Okasaki.
de ARN y va señalando que necesita
extensión y va formando los fragmentos de
Cadena continua y discontinua
Okasaki y de esta manera esta molécula va
La síntesis de la cadena discontinua debe
siendo sintetizada.
ocurrir en segmentos cortos (1000-2000)
Después la ADN polimerasa con actividad
llamados fragmentos de Okazaki.
exonucleasa de 5´ 3´ remueve estos
La síntesis del filamento continuo (leading)
cebadores de ARN y ahí mismo sintetiza el
puede continuar sin interrupción en la
material genético complementario a esa
hebra.
Y la ADN ligasa forma los enlaces
fosfodieter entre los fragmentos
¿Por qué en la replicación hay dos tipos de
cadena: uno continua y otro discontinua?
Porque las cadenas son antiparalelas.
Mientras una está en dirección 3’5’, la
otra está en la dirección 5’ 3’.
La horquilla de replicación sigue solamente
un sentido: el sentido 5’3’ de síntesis de
la nueva cadena y ese es el sentido del
proceso continuo.
Por ello la cadena 3’5’ es leída de
manera continua y la otra 5´3’ de manera
discontinua.
Replisoma: conjunto de proteínas de una
horquilla de replicación.
Una importante proteína accesoria llamada
pinza beta rodea el ADN como una
rosquilla.
Esa estructura mantiene la holoenzima pol
unida a la molécula de ADN.
La holoenzima pol se transforma de una
enzima que puede agregar solo 10
nucleótidos antes de salir del molde
(llamada enzima distributiva) a una enzima
que permanece en la horquilla móvil y
agrega decenas de miles de nucleótidos
(una enzima de proceso).
El replisoma contiene dos clases de
proteínas que abren la hélice y evitan una
mayor helicoidización: son helicasas y
topoisomerasas.
Las helicasas son enzimas que rompen los
enlaces de hidrógeno que mantienen
unidas las dos hebras de la doble hélice.
La helicasa encaja como un hilo alrededor
del ADN; desde esta posición, desenrolla
rápidamente la doble hélice frente a la
síntesis de ADN.
El ADN desenrollado se estabiliza mediante
proteínas de unión monocatenarias (SSB),
que se unen al ADN monocatenario y
evitan que el dúplex se reestructura.
Van a ingresar por la abertura de la
molécula, lo primero es la disociación de la
molécula, quien lleva a cabo esta
disociación va a depender de la célula.
Quien mantiene esta disociación se
denomina enzima helicasa, esta va a
destruir las raíces del material genético,
como que abraza a la molécula de ADN, va
rompiendo los puentes de hidrogeno
abriendo la molécula a medida que la
horquilla de replicación va avanzando.
Cuando la horquilla va avanzando con el
material genético y va adelante, necesita
una topoisomerasa rompiendo enlaces
fosfodiester para evitar que el material
genético se pierda.
Ahora se tienen que formar los cebadores
de ARN para señalar en polimerasas que
ahí tienen que sintetizar. Un cebador en la
hebra continua y varios cebadores en la
hebra discontinua.
La ligasa está ahí en amarillo, hizo su
trabajo la primasa, deja una punta 3’
dejando un hidroxilo libre señalando que
necesita hacer la replicación a la ADN
polimerasa, la ADN polimerasa también
abraza la molécula de ADN y otra proteína
viene y se pega a ella que se llama pinza
beta.
Esa pinza beta va a hacer como una presión
para que la ADN polimerasa sea más
procesiva, que procese rápidamente y que
esté conectada al ADN y no se disocia de la
molécula de ADN
Entonces estas dos moléculas se unen y
empiezan el procesamiento de la síntesis
de material genético.
Otras proteínas que hacen parte del
proceso son las proteínas de unión al ADN
monocatenario (color blanco), estas
proteínas se conectan ahí para quitar las
vueltas del material genético y dejar el ADN
más recto para facilitar el paso de la ADN
polimerasa y la pinza beta sintetizando la
molécula de ADN.
Los fragmentos de Okazaki para que sean
correctamente sintetizados el ADN da una
vuelta y cuando el ADN da la vuelta las dos
ADN polimerasas empiezan a sintetizar, es
por eso que esa hebra es leída en
fragmentos a cada hora se da una vuelta y Tanto procariotas como eucariotas parten
hace un poco de fragmentos sueltos, hace de un punto, las bacterias tienen el punto
otra vuelta síntesis de otro fragmento y así de origen de replicación llamado OriC,
va a ser el movimiento de la horquilla. tienen el ADN circular y la replicación
Después de toda la replicación viene la puede ser dada en las dos direcciones, es
ADN polimerasa haciendo la revisión, decir es bidireccional, hasta que todo el
quitando los elevadores de ARN, llenando material genético circular es replicado, a
los huecos con ADN y por último la ligasa medida que esa horquilla de replicación
viene ligando los fragmentos de Okazaki bidireccional avanza ocurre lo mismo que
en la célula eucariota, nuevamente las
ADN girasa en el ADN circular topoisomerasas y las girasas vienen, hacen
Tanto los giros como las superhélices una doble rotura para liberar la tensión y
deben eliminarse para que continúe la evitar una rotura del material genético.
replicación.
Esta súper-helicoidización puede ser Sitio de iniciación de procariotas
relajada por enzimas llamadas El ensamblaje del
topoisomerasas, de las cuales la ADN replisoma es un
girasa es un ejemplo. proceso ordenado
Las topoisomerasas relajan el ADN súper que comienza en
helicoidal al romper una sola hebra de ADN lugares precisos del
o ambas hebras, lo que permite que el ADN cromosoma
gire y se convierta en una molécula (llamados orígenes).
relajada. Ocurre solo en
Las topoisomerasas terminan uniéndose a ciertos momentos de
las hebras de la molécula de ADN ahora la vida de la célula.
relajada. La replicación de E.
coli comienza en un
origen fijo (llamado
oriC) y luego
continúa en ambas
 direcciones (con las horquillas moviéndose
en ambos extremos.
El primer paso es la unión de una proteína
llamada DnaA a una secuencia específica
de 13 pares de bases (bp) (denominada
"caja o sitio de DnaA"), que se repite cinco
veces en oriC.
En respuesta a la unión de DnaA, el origen
se deselicoidiza en un grupo de nucleótidos
AyT
Es más fácil separar (disociar) la doble
hélice en sitios de ADN ricos en bases A y
T.
Después del inicio de la deselicoidización,
las proteínas DnaA se unen a regiones de
hebra única recién deselicoidizada.
Con DnaA cubriendo el origen, dos
helicasas (proteína DnaB) ahora se unen y
se deslizan en la dirección de 5 'a 3' para
comenzar a abrir la hélice en la horquilla de
replicación.
La primasa y la holoenzima de ADN pol
ahora se reclutan en la horquilla de
replicación mediante interacciones
proteína-proteína, y comienza la síntesis de
ADN.
Una diferencia entre la replicación en
eucariota y procariota es el sitio de
iniciación, existen dos regiones en el
genoma procariota que se llaman sitio de
ligación del ADNA que es una enzima que
reconoce la región que está repetida 5
veces de 13 pares de bases y antecede una
región llamada TATA BOX, esa región está
llena de timina y adenina, porque es más
fácil romper los puentes de hidrógeno,
entonces las ADNA se unen a esa región de
unión del material genético y toma un punto
de TATA BOX y comienza a disociar la
molécula en ese punto, se reclutan las
helicasas que van a abrazar la molécula de
ADN y hace el movimiento de la horquilla
rompiendo los demás puente de hidrógeno.
Eucariotas
La replicación es mucho más compleja en
eucariotas, debido a sus genomas que son
grandes, compactados en ADN con
histonas
A diferencia del cromosoma bacteriano, los
cromosomas eucariotas existen en el
núcleo como cromatina.
La unidad básica de la cromatina es el
nucleosoma, que consiste en ADN envuelto
alrededor de proteínas histonas.
El replisoma no solo necesita copiar los
filamentos parentales, pero también
desmontar los nucleosomas en los
filamentos parentales y montarlos en las
moléculas hijas.
Se distribuye al azar histonas nuevas y
antiguas con la ayuda de una proteína
llamada factor de ensamblaje de cromatina
1 (CAF-1).
CAF-1 se une a las histonas y las dirige a la
horquilla de replicación, donde pueden
conjugarse con el ADN recién sintetizado.
CAF-1 y su carga de histonas alcanzan la
horquilla de replicación al unirse a la
versión eucariota de pinza beta, llamada
antígeno de proliferación de células
nucleares (PCNA)
En las eucariotas el ADN se encuentra todo
compactado, las estructuras de las vueltas
del ADN dan en las histonas y quien hace
eso se llama factor de ensamblaje de
cromatina de tipo 1 (CAF-1), ella se conecta
a las histonas activas de la molécula de
ADN y después la vuelve a la misma
molécula de ADN, y tiene también apoyo del
reensamblaje de histonas a los
nucleosomas en una proteína llamada
antígeno de proliferación de células
nucleares
Ensamblaje del nucleosoma – eucariotas
Hace el mismo rol que la Pinza beta, se
conecta a esta enzima de ensamblaje de
cromatina que está cargando las histonas
que va a empezar a tratar de ensamblar el
material genético después de la replicación.
Además de hacer el ensamblaje del
núcleosoma es decir formado complejo de
histonas que da las 2 vueltas de ADN y
después de eso se va uniendo para formar
los solenoides.
Ella también promueve la síntesis de
histonas.
Las procariotas no necesitan hacer el
ensamblaje de cromatina porque tienen el
ADN desnudo, ya que tengo que sacar el
nucleosoma y después tengo que sintetizar
histonas y volver a reensamblar ese
nucelosoma
Eucariotas: inicio
Bacterias como E. coli suelen completar el
ciclo de replicación-división en 20 a 40 min.
En eucariotas este ciclo puede variar de
1,4h en levadura a 24h en células animales
cultivadas.
Los eucariotas deben resolver el problema
de coordinar la replicación de más de un
cromosoma.
Los orígenes de 100 a 200 pb tienen una
secuencia de ADN conservada, que incluye
una región rica en AT que se disocia
cuando una proteína específica se une.
El inicio en eucariotas se lleva a cabo en
una región mucho mayor, en lugar de
llamarse OriC se llama ORC.
Otro cambio que ocurre entre procariota y
eucariota tiene que ver con el material
genético.
A diferencia de los cromosomas
procariotas, cada cromosoma eucariota
tiene muchos orígenes de replicación para
replicar rápidamente genomas eucariotas
más grandes.
Aproximadamente 400 orígenes de
replicación están dispersos en los 16
cromosomas de levadura, y se estiman
alrededor de miles de horquillas de
replicación en los 23 cromosomas
humanos.
Así, en eucariotas, la replicación evoluciona
en ambas direcciones desde múltiples
puntos de origen.
Cuando se completa la replicación de las
dos cadenas, resultan dos moléculas hijas
de ADN idénticas.
Iniciase en la fase S del ciclo celular
Región en el ADN (de 100 a 200 pb de
longitud) llamado de sitio de origen son
reconocidos por las subunidades ORC.
El ORC en el origen sirve para reclutar
otras dos proteínas, Cdc6 y Cdt1. Estas
proteínas más ORC luego reclutan
helicasa, llamada complejo MCM, y otros
componentes del replisoma.
La replicación está vinculada al ciclo celular
por la disponibilidad de Cdc6 y Cdt1.
En la levadura, estas proteínas se
sintetizan durante el final de la mitosis y el
intervalo 1 (G1) y se destruyen mediante
proteólisis una vez que ha comenzado la
síntesis.
De esta manera, el replisoma se puede
ensamblar justo antes de la fase S. Cuando
 comienza la replicación, no se pueden
formar nuevos replisomas en los orígenes,
ya que Cdc6 y Cdt1 se degradan durante la
fase S y ya no están disponibles.
Las procariotas necesitan de una sola
horquilla de replicación para replicar toda la
molécula, mientras que las eucariotas
necesitan miles de horquillas de replicación
para los 23 cromosomas.
La síntesis de nuestro material genético
ocurre dentro del proceso de división
celular en una fase que se llama fase S
(fase de síntesis del material genético), la
fase que precede es la fase G, aquí se
sintetizan dos proteínas importantes en el
proceso de síntesis del material genético
(Cdc6 y Cdt1).
Enzima llamada ORC reconoce el sitio de
unión al ADN y presenta una región TATA
BOX, llena de timina y adenina. A esta
enzima se asocian las helicasas y CDC6 y
CDT1, al partir del momento que se asocian
se activa una helicasa que disocie la
molécula de ADN. Una vez que esto ocurre
en el sitio TATA la Cdc6 y Cdt1 son
degradadas para que disocien la molécula y
comienza el proceso de replicación con el
reclutamiento de las proteínas necesarias.
La primasa hace primer, su nombre viene
del inglés y es la encargada de los
cebadores.
Eucariotas: problemas al final
Existe un problema inherente en la
replicación de los dos extremos de las
moléculas de ADN lineales, las regiones
llamadas telómeros.
Puede producirse una síntesis continua del
filamento principal hasta la punta del molde.
Sin embargo, la síntesis de filamento
discontinuo exige cebadores antes del
proceso; por lo tanto, cuando se elimina el
último cebador, se pierden las secuencias
al final del filamento.
Como resultado, queda una punta
monocatenaria en una de las moléculas
hijas de ADN.
Otro problema que hay en la replicación de
las eucariotas, al ADN está envuelto en
proteínas. Hay una parte de la porción
primaria de los cromosomas que se llaman
telomeros
Los telómeros en cada ciclo de replicación
se van acortando, es una región que tiene
un ADN repetitivo, tiene una secuencia
TTAGGG repetida en miles de veces.
Las puntas de los cromosomas tienen este
ADN repetitivo. Porque en cada ciclo de
replicación esta región se va a acortando y
es como un marcador de tiempo de los
cromosomas hasta que se llega a la región
de ADN codificante, la idea es que nunca
llegue y si se llega y antes de que llegue
esta célula entra en apoptosis para que no
dañar el material genético.
Las puntas de los cromosomas donde se
encuentra el material genético repetitivo es
una manera de proteger la información
codificante.
 AAUCCC-5‘ actúa como molde para la
unidad de repetición 5'-TTAGGG-3‘.
La telomerasa se une primero a la
extensión 3‘ del ADN y lo amplifica
utilizando dos componentes de la
telomerasa: el ARN pequeño (como molde)
y la proteína (como actividad polimerasa).
Después de la adición de algunos
nucleótidos a la extensión 3', la telomerasa
de ARN se mueve a lo largo del ADN, de
modo que la punta 3' puede extenderse
aún más por su actividad polimerasa.

Lo que pasa es que la hebra continua de

esa molécula va a tener un solo partidor y
Si el cromosoma hijo con esta molécula de va a ser leído de manera continua. Pero la
ADN se replicara nuevamente, la hebra con hebra discontinua tiene fragmentos de
secuencias faltantes en la punta se Okasaki, por lo tanto, tiene la presencia de
convertiría en una molécula acortada. varios cebadores de ARN, cuando se quitan
Con cada ciclo de replicación subsiguiente, estos cebadores, viene la ADN polimerasa y
el telómero continuaría acortándose, hasta llena los espacios guiada por una punta 3
que se perdiera la información de ´con un hidroxilo libre. Pero cuando llega al
codificación esencial. último cebador no hay punta con hidroxilo
Las células desarrollaron un sistema libre lo que pasa es que esta molécula
especializado para prevenir esta pérdida. siempre va perdiendo fragmentos de ADN
La solución implica agregar múltiples acortándose.
copias de una secuencia simple no
codificante al ADN en los extremos de los
cromosomas.
Por lo tanto, cada vez que se duplica un
cromosoma, se acorta y solo se pierden las
secuencias repetidas, que no contienen
información. Las repeticiones perdidas
luego se vuelven a agregar a las puntas de
los cromosomas.
Los cromosomas humanos, por ejemplo,
terminan en aproximadamente 10 a 15 kb
de repeticiones en tándem de la secuencia
TTAGGG.
Fue identificada una enzima, la telomerasa,
que agrega repeticiones cortas a los
La punta 3 'continúa siendo amplificada por
extremos 3’ de las moléculas de ADN.
el movimiento repetido de la telomerasa de
Esa proteína contiene una molécula de
ARN.
ARN, y parte del cual actúa como molde
La primasa y la ADN polimerasa luego usan
para la síntesis de la unidad telomérica
el fragmento muy largo de 3 'como plantilla
repetida.
para llenar el extremo de la otra hebra de
En todos los vertebrados, incluidos los
ADN.
humanos, la secuencia de ARN 3'-
 Así se resguarda la información codificante
del ADN a cada ciclo de replicación.
La punta 3’ sigue siendo una región de
hebra monocatenaria pequeña.
La telomerasa no está presente en todas
las células somáticas.
Existe una enzima que se llama telomerasa
y dentro de esta enzima va un molde de
ARN que es complementario con esta
repetición presente en la punta de los
cromosomas, entonces cada vez que esta
enzima encuentra una punta 3´ de ADN
monocatenario promueve la síntesis de
más y más ADN repetitivo, comienza a
alargar esta región para que la ADN
polimerasa pueda reconocer esta punta
como una punta de telomero.
Enfermedades asociadas al telomero
Lo que pasa es que la primasa va actuar
como cebador de ARN y lo que pasa con él
es que va a dejar nuevamente una punta de
ADN monocatenario.
La telomerasa no está activa en nuestras
células, solo en el proceso de formación
…?
Los telómeros conservan la integridad
cromosómica al asociarse con proteínas,
formando revestimientos protectores que se
conectan a la extensión monocatenaria 3’.
Sin esta capa protectora, los filamentos
bicatenarios de los cromosomas serían
confundidos por roturas de doble de
filamentos por la célula y se tratarían como
tales.
Las roturas dobles de ADN son muy
peligrosas porque pueden resultar en
inestabilidad cromosómica, lo que puede
conducir a cáncer y varios fenotipos
asociados con el envejecimiento.
Cuando se detecta una doble rotura, la
célula responde de varias formas,
dependiendo, del tipo de célula y la
magnitud del daño.
La ruptura del bifilamento puede hacer con
que la célula detenga la división celular (lo
que se conoce como senescencia) o
comience una vía de muerte celular
(llamada apoptosis).
Aunque la mayoría de las células
germinales tienen suficiente telomerasa, las
células somáticas producen muy poca o
ninguna telomerasa.
Por esta razón, los cromosomas de las
células somáticas en proliferación se
acortan progresivamente con cada división
celular, hasta que la célula cesa todas las
divisiones y entra en la fase de
senescencia.
Las personas con síndrome de Werner
experimentan la manifestación temprana de
muchos eventos relacionados con el
envejecimiento, que incluyen arrugas en la
piel, cataratas, osteoporosis, canas y
enfermedades cardiovasculares.
Las personas afectadas tienen telómeros
más cortos que las personas normales,
debido a una mutación en un gen llamado
WRN, que codifica una proteína (una
helicasa) que forma parte de la estructura
del revestimiento de los telómeros.
Existen algunas patologías que se
relacionan a los telomeros, una de ellas es
el cáncer y otra es la enfermedad de
Werner, las personas que portan esta
última enfermedad presentan un
envejecimiento súper temprano, personas
muy jóvenes comienzan a presentar
arrugas, cataratas, problemas
cardiovasculares, osteoporosis porque
presenta una mutación en una de las Lo opuesto ocurre en las células
proteínas que hacen la protección de la cancerosas, porque las células cancerosas
punta de los telomeros. pierden la habilidad de dividirse de forma
Las células de estas personas tienen ordenada. Y la enzima de la telomersa está
evidente acortamiento de la punta de los muy presente evitando que los
cromosomas. cromosomas se acorten a cada ciclo
celular.
La telomerasa es un blanco genético para
tratar el cáncer.

Eucariotas: eventos post-replicación,

metilación del ADN.
La metilación del ADN es un proceso por el
cual se añaden grupos metilo al ADN.
Generalmente ocurre en la quinta posición
del anillo de la citosina (5-metilcitosina).
La metilación modifica la función del ADN
cuando se encuentra en el gen promotor.
La metilación del ADN generalmente actúa
A diferencia de las células somáticas
para reprimir la transcripción génica.
normales, la mayoría de las células
cancerosas tienen actividad telomerasa.
La capacidad de mantener los telómeros
funcionales puede ser una de las razones
por las que las células cancerosas pueden
crecer en cultivos celulares durante
décadas y se consideran inmortales.
Algunos laboratorios de la industria
farmacéutica están tratando de estudiar
esta diferencia entre las células normales y
las cancerosas mediante el desarrollo de
fármacos.
Esos fármacos que se dirigen
selectivamente a las células cancerosas,
inhibiendo la actividad de la telomerasa.
En las eucariotas existen eventos post
replicación y estos tienen que ver
principalmente con la metilación de la
molécula de ADN con metilación de las
histonas.
Es un proceso epigenetico, sin alterar el
contenido genético de una molécula de
ADN.
Metilación de la molécula de ADN es añadir
grupos metilos a la cadena de ADN, ocurre
siempre en las citosinas, y no en
cualquiera, en las citosinas que al lado esta
una guanina.
La metilación sirve básicamente para hacer
inactivación del gen. Participa en la
regulación de la expresión génica de dos
maneras, directamente al impedir la unión
de factores de transcripción, e Los individuos no producirían la misma
indirectamente propiciando la estructura
"cerrada" de la cromatina.
Puede pasar de generación en generación,
Eucariotas: metilación de histonas
El patrón de metilación se llama metilación
simétrica porque los grupos metilo se
encuentran en ambos filamentos en el
mismo contexto:
C*G
GC*
Un número notable de residuos C están
metilados en mamíferos: del 70 al 80% de
todos los dinucleótidos CG están metilados
en el genoma en su conjunto.
Curiosamente, la mayoría de los
dinucleótidos CG no metilados se
encuentran en grupos cercanos a los
promotores de genes.
Estas regiones se denominan islas CpG,
donde la "p" representa el enlace
fosfodiéster.
La metilación de C estaría asociada con
regiones inactivas del genoma.
La metilación del ADN se asocia con una
serie de procesos como la impronta
genómica, la inactivación del cromosoma X,
el envejecimiento y la carcinogénesis.
Inactivación del cromosoma X
Los mamíferos son diploides y tienen dos
copias de cada gen ubicado en sus
autosomas. Para la gran mayoría de genes,
ellos se expresan en ambos alelos.
cantidad de transcripciones que genes
ubicados en los cromosomas sexuales si
ambos cromosomas X se expresan en
mujeres.
Se cree que el cromosoma X de los
mamíferos contiene unos 1.000 genes. Las
hembras tienen el doble de copias de
genes ligados al cromosoma X que los
machos.
Eses genes expresarían el doble de
transcripciones que los machos si no
hubiera un mecanismo para corregir este
equilibrio (compensación de dosis).
El cromosoma inactivado, llamado
corpúsculo de Barr.
La inactivación de X hace que la cantidad
de la mayoría de los productos genéticos
de las dos copias del cromosoma X en las
mujeres sea equivalente a la dosis única
del cromosoma X en los hombres.
En los mamíferos, esta equivalencia se
logra inactivando aleatoriamente uno de los
dos cromosomas X en cada célula, en una
etapa temprana del desarrollo.
 La mayoría de los
genes del
cromosoma X gen heredado por el padre o madre.
inactivado están
silenciados y el
cromosoma tiene
marcas epigenéticas
asociadas con la
heterocromatina,
incluida la metilación
y hipoacetilación de
histonas y la
hipermetilación de su
ADN.
Ambos tienen un locus en el cromosoma X,
llamado centro de inactivación X (abreviado
Xic), que produce un ARN de 17 kb que no
codifica proteínas (Xist).
Ese ncRNA (Xist) se conecta a la proteína
que cubre el Xi. La RNA pol se conecta a
ese complejo proteína-RNA y conecta la
proteína que cobre Xi dentro de la
cromatina, silenciando el cromosoma X.
La RNA pol se disocia e el ncRNA Xist es
degradado.
Las mujeres liberamos dos cromosomas X,
los hombres tienen una dosis de todos los
genes que están en el cromosoma X, las
mujeres tenemos el doble de dosis que un
hombre, a las mujeres no le hacen falta los
genes que están presente en el cromosoma
Y porque gran totalidad de ese cromosoma
están vinculados con características
femeninas.
Al tener el cromosoma X dos veces nuestro
organismo toma una actitud evolutiva de
inactivar uno de los cromosomas de
manera aleatoria. Ningún gen de este
cromosoma se logra expresar
Y este proceso hace compensación de
dosis de los productos génicos que
nosotros portamos.
Eucariotas: impronta genómica
Básicamente la activación e inactivación de
genes basado en presencia de grupos
metilos asociados a la molécula de ADN
Inactivación mediante alteraciones
bioquímicas de un alelo de un determinado
Generalmente los dos alelos autosómicos
heredados uno de cada genitor es
expresado. En la impronta genómica no, es
como si dentro de los pares de alelos
heredados, una sola copia es activa.
Los genes son idénticos, no hay cambio en
la secuencia de ADN.
Los grupos metilo se agregan al ADN en
las regiones reguladoras de genes
impresos en un solo sexo en la formación
de los gametos.
Un caso muy conocido de impronta
genómica es la inactivación del cromosoma
X.
Nosotros portamos alelos en nuestro
cromosoma que vienen de nuestra madre y
padre.
Se puede silenciar el gen de la madre o el
gen del padre
En el cromosoma materno el segmento ICR
es donde se conecta la proteína, cuando
esto sucede ella activa el gen H19, la otra
proteína llamada acentuador no puede
activar el gen Igf2, porque forma como una
barrera.
En el cromosoma paterno no se conecta la
proteína en el segmento ICR, por lo tanto,
no regula la expresión del gen.
Entonces el hijo va a tener el gen H19 de la
madre, pero no expresara el gen Igf2 de la
madre, y en el caso del padre va a tener el
gen Igf2 del padre, pero sin la expresión del
gen H19.
 En la impronta parental el Hay 44 residuos de lisina en la histona
alelo heredado de uno de disponibles para aceptar grupos acetilo,
los padres está inactivo, por lo que la presencia o ausencia de
una mutación en el alelo estos grupos puede llevar mucha
heredado del otro información.
progenitor parecerá ser La modificación covalente de las colas de
dominante. histonas se denomina código de histonas.
El alelo se expresa porque
solo una de las dos
contrapartes está activa
para ese gen.
Una mutación en un gen
impreso puede tener
diferentes resultados en el
fenotipo del organismo si se hereda del
progenitor masculino o femenino.
Las histonas poseen colas de aminoácidos
La primera imagen es lo que ya se
que pueden ser lisina o arginina, y estas
mencionó un gen de la madre es expresado
colas pueden sufrir cambios como
y el otro silenciado, y el gen del padre
inserción de grupos acetilos y grupos
expresa el gen silenciado de la madre y
metilo o la retirada de estos.
silencia en gen expresado por ella. (sin
La modificación en la cola de las histonas
mutaciones)
se llama código de histonas. Es un patrón
En el segundo caso, la impronta se
que cada uno porta y es dependiente de
mantiene a pesar de que la madre presenta
varios factores, va pasando de generación
un gen mutado ya que la madre no lo
en generación
expresa y lo silencia, y el padre es quien
expresa el gen correctamente.
Eucariotas: acetilación de histonas
Por último, en este caso el resultado si de
Los genes activos son ricos en grupos
ver afectado, ya que la mutación se
acetilo (llamados hiperacetilatos), mientras
presenta en el gen A del padre, y la madre
que los genes inactivos están subacetilados
expresa el gen B, por lo que, en el padre, la
(hipoacetilados).
proteína se une a ICR silenciando este gen
La histona acetiltransferasa (HAT), es quien
B y expresando el gen mutado, por lo que el
transfiere los grupos acetil.
hijo va a heredar esta mutación.
La adición de grupos acetilo altera la
interacción entre nucleosomas adyacentes,
Eucariotas: modificaciones de histonas
lo que da como resultado una cromatina
Las histonas son las proteínas más
más abierta.
conservadas de la naturaleza.
La acetilación de histonas, influye en la
Las histonas son casi idénticas en todos los
unión de proteínas reguladoras al ADN. La
organismos eucariotas, desde levaduras
proteína reguladora unida participaría en
hasta plantas y animales.
varias funciones que, directa o
Se sabe que los residuos de aminoácidos
indirectamente, aumentan la frecuencia de
básicos específicos (lisina y arginina) en las
inicio de la transcripción.
colas de histonas pueden modificarse
La acetilación es reversible y también se
covalentemente mediante la unión de
han identificado histonas desacetilasas
grupos acetilo y metilo.
(HDAC).
 La adición de grupos acetilo a histonas
específicas altera la interacción del
nucleosoma entre el ADN y un octámero de
histona, de modo que es más probable que
el octámero se deslice a lo largo del ADN a
una nueva posición.
ser inherentemente estables de una
generación celular a la siguiente.
Dependiendo del sitio de la metilación, la
metilación de la lisina en H3 y H4 se implica
en la activación y la represión de la
transcripción.
La metilación de la arginina se implica
solamente en la activación de la
transcripción.
El patrón de metilación de las histonas en
cáncer está bien afectado.

Activo o desactivo genes insertando o

quitando grupos acetil a la histona

Eucariota: metilación de histonas

Las histonas viejas de los nucleosomas
existentes se distribuyen aleatoriamente a
los filamentos secundarios y se liberan
nuevas histonas al replisoma.
De esta manera, las histonas viejas, con
sus colas modificadas, y las histonas
nuevas, con colas sin modificar, se
ensamblan en los nucleosomas que están
asociados con ambos filamentos
secundarios.
Los cambios realizados por las histonas
antiguas son responsables, en parte, de la
herencia epigenética. Como tal, estas
viejas modificaciones se denominan
marcas epigenéticas, porque guían la
modificación de nuevas histonas.

Quien metila las histonas son las histonas

metiltransferasas (o HMT)
Al igual que los cambios en las histonas,
las marcas de metilación del ADN pueden