Bases moleculares de la herencia I

Estructura
de los
ácidos
nucleicos

Replicación
del ADN

1
 Bases moleculares de la herencia
i. ¿Qué moléculas son las
portadoras de la
información hereditaria?

ii. ¿Cómo se preserva y trasmite la

información hereditaria?

iii. ¿Cómo se expresa esta

información? Dogma central de
la biología molecular

iv. ¿Cómo se genera la variación?

2
 Propiedades de las moléculas
informativas

1. Formada por un número limitado de

subunidades.
2. Contener información biológica útil y
legible.
3. Debe ser estable y reproducible
(conservación).
4. Capacidad de transmitir de un modo
preciso la información (expresión).
5. Capacidad de cambiar (variación).

3
4
 Flujo de información en la célula

5
 Nucleótidos

6
 ✓Pentosas: azúcar de cinco átomos de carbono.
Pueden ser: En ADN - Desoxirribosa
En ARN - Ribosa

2-desoxirribosa Ribosa
ADN ARN

7
 ✓Bases Nitrogenadas Derivan de compuestos cíclicos
aromáticos - Purina y Pirimidina

uracilo

Pentosa +
Se unen por enlace N-glicosídico
base nitrogenada
Unión de:
C1 de la pentosa - con N1 de pirimidina
o N9 de purina
Nucleósido

8
 ✓- Grupo fosfato Pentosa + base nitrogenada + fosfatos

Fosfato - C5 de pentosa Nucleótido

Hay 4 nucleótidos trifosfato del ARN: ATP,CTP,GTP y UTP

Hay 4 nucleótidos trifosfato precursores del ADN:

dATP, dCTP, dGTP y dTTP
9
 Diferencias estructurales del ADN y el ARN

▪ Por qué Timina en el ADN y Uracilo

H20
en el ARN?
• La Citosina se deamina espontánea-
mente formando Uracilo.
• Las enzimas reparadoras reconocen NH3
estas "mutaciones" y reemplazan Us por
Cs.
• Si no hubiera Timina (5-metil-U): Cómo
distinguir las U normales de las
resultantes de deaminación?
Por qué 2-dideoxi en el ADN ?

Dos grupos OH en el ARN lo hacen más

susceptible a hidrólisis.

El ADN sin OH en 2´ es más estable a

hidrólisis.

10
 Estructura primaria de los ácidos nucleicos

✓ Formación de cadenas lineales de

nucleótidos:

Enlace fosfo-diéster con C3

✓ Orientación y sentido de la hebra:

Extremos 5´y 3´

Crecimiento direccional 5´→3´

11
 Estructura secundaria del ADN

1953 James Watson y Francis Crick

El ADN es una estructura

helical con regularidades 1. Doble hélice
características de 0.34 nm y de
3.4 nm.
2. cadenas
antiparalelas
unidas por
3. apareamiento
de bases

Ley de Chargaff: Las cantidades de

A=T
G=C
12
 Estructura secundaria del ADN
Características Principales
Dos cadenas polinucleotídicas enrolladas
en una doble hélice dextrógira.
Las hebras son antiparalelas.
Los esqueletos azúcar-fosfato en el
exterior de la doble hélice.

Pares de base nitrogenadas planares

unidos por puentes de hidrógeno, en el
centro de la estructura.
A = T (2 puentes de hidrógeno)
G = C (3 puentes de hidrógeno)
Pares de base separados 0.34 nm. Una
vuelta de hebra (3.4 nm) tiene aprox. 10
pares de base.
La posición de los esqueletos azúcar-
fosfato definen surco mayor y menor.

13
 Pares de base unidos por puentes de hidrógeno

14
 Propiedades
del ADN como
molécula
informativa

1. Estable
2. Tiene contenido
informativo
3. Transmisible
4. Variable
15
16
 ... y se asocia a proteínas para formar la cromatina

17
 Bases moleculares de la herencia
i. ¿Qué moléculas son las
portadoras de la información
hereditaria?

ii. ¿Cómo se preserva y

trasmite la información
hereditaria?

iii. ¿Cómo se expresa esta

información? Dogma central de
la biología molecular

iv. ¿Cómo se genera la variación?

18
 ¿Cómo se preserva y se trasmite la
información hereditaria?

Replicación del ADN

Todas las células de un organismo tienen

la misma información genética.

La replicación del ADN es un requisito

imprescindible para el desarrollo y
diferenciación celular.

La estructura del ADN da una

pista del posible proceso de replicación.

19
 La importancia de la replicación del ADN
en medicina
La replicación fiel del material genético es
escencial a la vida.

mitosis Errores en la replicación son el origen de

las enfermedades hereditarias.

meiosis
Errores en la replicación son causa primaria
de cánceres.

Existen patologías por incapacidad de

reparar errores cometidos en la replicación.

mitosis
Los patógenos también replican. Entender
estos procesos permite establecer terapias
específicas.

Muchos antibióticos inhiben la replicación

de microorganismos.

20
 Características de la replicación del ADN

1. La replicación es
semiconservativa

En la replicación semiconservativa, se
originan dos moléculas de ADN, cada
una de ellas compuesta de una hebra
del ADN original y de una hebra
complementaria nueva.

21
 Características de la replicación del ADN
2. Es bidireccional
• La replicación se inicia en sitios particulares (orígenes de
replicación).
• A partir de cada origen la replicación avanza bidireccionalmente
• Se forma una burbuja de replicación formada por dos horquillas
que avanzan en direcciones opuestas.

horquilla 1 horquilla 2

22
 Características de la replicación del ADN
3. La replicación es semidiscontinua
- Una cadena nueva se va generando en forma continua y la
otra en forma discontinua (fragmentos de Okasaki).
- Pero ambas en dirección 5´- 3´.

Horquilla de replicación

23
 Características de la replicación del ADN
4. La replicación es en
dirección 5´- 3´

La duplicación es un
proceso complejo que:
se basa en la
complementariedad
de bases
Depende de
interacciones entre
el ADN y proteínas
está finamente
regulado
tiene gran fidelidad

24
 La replicación es un proceso complejo

• Señales:
– Ori C
– Ter

• Enzimas principales:
– ADN polimerasas
– Primasas
– Ligasas
– Helicasas
– Topoisomerasas

25
 El mecanismo de la replicación

INICIACION
– Reconocimiento de orígenes de replicación.
– Separación de hebras.
– Posicionamiento de maquinaria enzimática de replicación.

ELONGACION
– Crecimiento bidireccional de las horquillas de replicación.
– Replicación semiconservativa, semidiscontinua, coordinada.

TERMINACION
– Reconocimiento de señales de terminación.
– Desensamble de replisomas.

26
 ADN Polimerasa I
Kornbnberg, 1957

ACTIVIDAD POLIMERASA

• Necesita Mg++ como cofactor.

• La energía es provista por la liberación de PPi.
• El ADN actúa como molde.
• Necesita un cebador que ofrezca un extremo
3´OH libre para agregar nucleótidos.
• La elongación ocurre en dirección 5´→ 3´ .

27
 ADN Polimerasa I
ACTIVIDAD EXONUCLEASA

•3´→ 5´ “Proofreading” corrección

de síntesis

•5´→3´ “Nick Translation”

reemplazo de cebadores

28
 ADN Polimerasa III
La DNA Pol III es la enzima principal en la replicación.
Multimérica, con varias subunidades.

29
 Helicasa: Primasa:
Separación de las hebras de ADN síntesis del cebador

30
 Avance de la horquilla
de replicación La DNA Pol III funciona como
dímero.

Las hebras crecen de modo

coordinado, avanzando en la
dirección de la horquilla.

31
 Resolución de la replicación en la hebra retardada

32
 FIDELIDAD DE LA REPLICACIÓN DEL ADN
• Esta dada por la actividad exonucleasa 3´-´5´.
• Requerimiento de cebadores.
•Imposibilidad de la polimerasa de agregar nucleótidos si no hay apareamiento
exacto en los nucleótidos previos.
• Implica la imposibilidad de replicación en dirección 3´-5´.

33
 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Técnica que imita la replicación del ADN.

Se realiza una replicación in vitro.
Se realizan 30 a 40 ciclos de replicación.
Amplifica solo una región específica de
todo el genoma.
Al final del ciclo, esa molécula está 230
veces representada en la muestra.

34
 Continuará…

35
Dra. Mónica Cappetta
Coordinadora por Genética

ESFUNO
EUTM y Escuela de Parteras
Facultad de Medicina
UDELAR
37