CLASE TEÓRICA N° 2

PROTEÍNAS Y ENZIMAS

Cátedra de Biología Celular

 RESULTADO DE APRENDIZAJE Y CONTENIDOS
RESULTADO DE APRENDIZAJE
Explica la estructura y funciones de las proteínas, de manera particular el rol de las enzimas
para la homeostasis celular y aplicaciones en el campo médico, a través de prácticas de
laboratorio y organizadores gráficos .

• PROTEÍNAS.
• Estructura
• Clasificación
• Funciones

• ENZIMAS.
• Cinética enzimática
• Regulación
• Importancia biomédica
AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

Ig G
Hay más de 300 aminoácidos en la naturaleza. En las
proteínas del ser humano sólo se encuentran 20.
Cada aminoácido tiene propiedades químicas
distintivas.
La sustitución de un solo aminoácido en la cadena
polipeptídica puede alterar las propiedades de la
proteína.
Ejemplo: Anemia falciforme (sustitución de glutamato
por valina).
Aminoácidos alifáticos apolares Aminoácidos polares no cargados Aminoácidos cargados positivamente

Las
Aminoácidos aromáticos Aminoácidos cargados negativamente propiedades
químicas de
un aa
definen su
ubicación y
función.
AMINOÁCIDOS
Esenciales No esenciales

Todos Niños Fenilce- Alanina

en crecimiento prematuros tonúricos Asparragina
Valina Arginina Cisteína Tirosina Aspartato
Leucina Histidina Tirosina Cisteína
Treonina Glicina
Triptófano Glutamato
Metionina Glutamina
Isoleucina Prolina
Fenilalanina Serina
Lisina Tirosina
ESTRUCTURAS PROTEICAS

Secundaria

Primaria

Cuaternaria
Terciaria
 DESNATURALIZACIÓN

Agente
Regiones afectadas
desnaturalizante
Calor Enlaces de hidrógeno
Detergentes Regiones hidrofóbicas
Ácidos Enlaces de hidrógeno,
Bases Puentes salinos
Sales Puentes salinos
Agentes reductores Puentes disulfuro
Metales pesados Puentes disulfuro
Urea 6 M Enlaces de hidrógeno

https://livingwellinthe21stcentury.wordpress.com/2018/04/25/protein-cooking-and-eggs/
MODIFICACIONES
POSTRADUCCIONALES
Fosforilación P
Hidroxilación Agrega un fosfato a serina,
Se une un grupo hidroxilo (-OH) a treonina o tirosina
una cadena lateral de una proteína

Glucosilación G
Metilación PROTEÍNA Agrega azúcar, usualmente
Agrega un grupo metilo, usualmente a un N u O en una cadena
a residuos de lisina o arginina lateral de aminoácido

Ubiquitinación
Lipidación Agrega ubiquitina a residuo
Se une un lípido, tal como un ácido de lisina de una proteína
Ub
graso, a una cadena peptídica para su degradación
https://brilliant.org/practice/protein-origami/

Acetilación Puente disulfuro

Agrega un grupo acetilo a un Une covalentemente átomos de
extremo N de una proteína o a azufre de dos diferentes residuos de
residuos de lisina Proteólisis cisteína
 PROTEÍNAS

Según contenido Número de Forma o Solubilidad Composición

de aminoácidos Cadenas Conformación
Simples u
Completas Monoméricas Fibrosas Solubles Holoproteínas
Ej. Ej. Ej. Ej.
Incompletas Mioglobina Queratina Albúmina Albúminas
Globulinas
Oligoméricas o Globulares Insolubles Histonas
Multiméricas Escleroproteínas
Ej. Ej.
Ej.
Catalasa Colágeno
Hemoglobina Conjugadas o
Heteroproteinas
Intermedias Ej.

Ej. Fosfoproteínas
Glucoproteínas
Fibrinógeno Metaloproteínas
Nucleoproteínas
Lipoproteínas
PRINCIPALES FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS
• Proteínas Enzimas metabólicas
• Proteínas Estructurales
- Proteínas del citoesqueleto
- Colágeno
• Proteínas de Transporte
- Proteínas de transporte pasivo: porinas,
canales iónicos
- Proteínas de transporte activo: bombas
• Proteínas de Señalización Celular
- Prot. receptoras de membrana: proteínas G,
proteínas receptoras tirosina kinasa
- Proteínas receptores nucleares
- Prot. de señalización intracelular: proteína
kinasa activada por mitógenos (MAP kinasa,
proteína kinasa A (PKA)
• Proteínas Cuidadoras del Genoma http://ecoursesonline.iasri.res.in/pluginfile.php/41043/mod_res
ource/content/1/13.12-Functions_of_proteins-Jul-01-2011.jpg
• Proteínas Hormonas: Insulina
ENZIMAS
ENZIMAS Y TIPOS ESPECIALES
Estructura Holoenzima
básica

Tipos especiales Proteína Cofactor

Apoenzima
Apoproteína Coenzima
- Nucleotidos
Grupo Prostético - Comp. Vit. B
Ribozimas
RNA Enzimas de
Abzimas restricción
Anticuerpos Granzimas
Actividad citotóxica
(apoptosis)
 Enzimas y reacción enzimática básica
• Definición E+S [ES] [EP] P+E
• Catalizadores
biológicos Estado de transición
• Función
• Viabilizar la Energia de activación sin enzima
actividad celular por
su participación en
todas las reacciones Energia de activación con
biológicas S enzima
• Naturaleza química P
• Proteinas globulares Formular ahora un concepto de enzima
basado en la figura
• RNA con propiedades Las enzimas
catalíticas: Ribozimas Reacción disminuyen la energía
de activación para
superar el estado de
Y si no hubiera alguna enzima, la reacción continuaría?. Justifique transición
 Modelo llave - cerradura
G + ATP G, 6P + ADP
Hexocinasa/Glucocinasa
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS (IUB)
1. Oxidorreductasas transfieren electrones (e-, H+)
2. Transferasas transfieren grupos funcionales, tal como glicosilo,
metilo, fosforilo (no agua)
3. Hidrolasas catalizan reacciones hidrolíticas (con adición de agua),
separa C-O, C-S, C-N, y otros
4. Liasas al lisar sustratos generan dobles enlaces, o catalizan la
adición de un sustrato a un doble enlace de un segundo sustrato.
5. Isomerasas transfieren grupos dentro de las moléculas para
generar diversos isómeros.
6. Ligasas catalizan formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N
acopladas a hidrólisis de energía, por ejemplo ATP
REVISIÓN Sitio
catalítico
Glucosa Fructosa Sustrato
4 Enzima (sacarosa)
1
(sacarasa)
Productos son
liberados

Enzima disponible
con sitio catalítico
libre

E+S [ES] [EP] P+E

[EP}
Sustrato es
convertido a
productos
3
2

[ES]
Sustrato se une a
Además de incrementar la velocidad de las la enzima
reacciones, las enzimas proveen un medio
para regular las velocidades de las vías
metabólicas en el cuerpo.
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
1. Temperatura 5. Moduladores
• Positivos
2. pH • Activadores
3. Concentraciones de: • Inductores
• Enzima • Negativos
• Sustrato • Inhibidores
Regulación
• Producto • Represores de
(retroalimentación actividades

negativa) • Especiales
• Alostérica
4. Localización • Covalente
• Zimógenos
 FACTORES BÁSICOS

SUSTRATO

ENZIMA

TEMPERATURA

pH
RESUMEN DE FACTORES
• Su aumento, también incrementa la actividad enzimática, alcanzan su
velocidad máxima cuando la enzima se satura, luego disminuye por
Concentración
de S sobresaturación

• Al aumentar, inicialmente incrementa la reacción, se estabiliza y luego

Concentración disminuye por agotamiento de sustrato e inhibición por producto
de E

• Su aumento, incrementa la reacción mientras no supera la temperatura

Temperatura
fisiológica, que ocasiona desnaturalización

• Al salir de sus rangos óptimos, disminuyen la reacción, debido a la

pH
desnaturalización que ocasionan
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Ecuación de Michaelis-Menten Transformación de Lineweaver - Burk

v = Vmax [S]
v Km
v = Vmax

Vmax
2

Km [S]
Constante de Michaelis y Menten

¿Cuando se alcanza la velocidad máxima?

TIPOS DE INHIBICIÓN
 CINÉTICA DE INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

I Competitiva I No-competitiva I Acompetitiva

Vmax Vmax Vmax
Ploteo directo

vo vo
Vmax’ Vmax’
I I I

Km Km’ [S], mM Km = Km’ [S], mM Km’ Km [S], mM

Vmax no se altera Vmax disminuye
Km se incrementa Km no se altera Vmax & Km disminuye
Doble Reciproco

1/vo I 1/vo I 1/vo

I

1/ Vmax 1/ Vmax 1/ Vmax

1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S]

 INHIBIDORES POR SU MECANISMO
Irreversibles Inhibidores suicidas

Forman enlaces covalentes o Sufren una reacción parcial y forman

extremadamente fuertes con inhibición irreversible en el sitio
grupos funcionales en el sitio
Inhibidores son compuestos catalítico
catalítico
que disminuyen la tasa de
reacción enzimática
Ejem. Diisopropilfosfofluoridato Ejem. Penicilina, forma un compuesto
(organofosforado) es el prototipo que no puede disociarse de
del sarin, forma enlaces con Serina glucopeptidil transpeptidasa
bacteriana  inhiben síntesis de pared
bacteriana

Ejem. El Acido acetilsalicílico

(aspirina) forma enlaces por
acetilación de Serina en el sitio Ejem. Alopurinol, inhibe a la xantina
catalítico de prostagañlndin oxidasa
endoperoxido sintasa (Ciclo
oxigenasa, COX)
 USOS FUNDAMENTALES
Marcadores enzimáticos
Uso en • Enzimopatías Ejm anemia
hemolítica (G, 6PDH, Pyr cinasa)
diagnóstico • Marcadores tumorales Ejm
enolase neuroespecífica

Otras enzimas son

Algunas enzimas se
Agentes usan como fármacos
blanco de fármacos
• Cox, Xantina oxidasa,
terapeúticos • Factores de
coagulación, lactasa
la
ECA, transcriptasa
inversa

Herramientas Glucosa oxidasa

(Reactivos) de (glicemia), ELISA, LDH,
CK
diagnóstico
CARACTERÍSTICAS DE LOS MARCADORES ENZIMÁTICOS

Secretorias Intracelulares

Actúan
Producido por Ejem. Hígado
intracelularmente y
tejidos/órganos, Lipoprotein lipasa
carecen de acción en
actuan en plasma (LPL)
plasma

Se localizan en: membrana

(ALP, γGT), citosol (ALT,
AST, LDH, MDH),
Mitocondrias (AST),
lisosomas (ACP)

Otros son producidos por

tejidos/organos específicos
Hígado (G, 6Pasa),
Pancreas (amilasa),
Corazón (LDH1)
ISOENZIMAS: LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)
Estudiar más
ejemplos de HHHH NAD+
NADH+
interés médico LDH
Piruvato Lactato
HMMM

HHMM

MMMM
HHHM
ISOENZIMAS: CREATIN KINASA (CK)

MM
MB
BB
INFARTO AL MIOCARDIO HEPATITIS
LDH ALT(GPT)
AST(GOT) AST (GOT)
CK γ GT
 MARCADORES ENZIMATICOS DE DAÑO O DISFUNCIÓN DE TEJIDO
ESPECÍFICOS U ÓRGANOS
ENZIMAS Y TEJIDOS
Las enzimas intracelulares
aparecen en el plasma
como consecuencia de un
intercambio normal
Las enzimas intracelulares
se incrementan a nivel
plasmático debido a daño
o proliferación celular
Adaptado de:
https://www.clinicalkey.es/#!/content/book/3-s2.0-B9780702072987000259
• Alanina aminotransferasa
(ALT), o Glutamato piruvato
transaminasa (GPT).
• Amilasa y lipasa.
• Aspartato aminotransferasa
(AST), o Glutamato
oxalacetato transaminasa
(GOT)
• Creatina kinasa (CK).
• Fosfatasa alcalina (ALK).
• Gamma-glutamil
transpeptidasa (GGT)
• Lactato deshidrogenasa
(LDH)
ENZIMAS-FÁRMACOS CON APLICACIÓN MÉDICA
COMPETITIVA NO COMPETITIVA
FÁRMACOS FÁRMACOS

• AINEs Ejem: Aspirina • Tipranavir

• Inhiben a la ciclooxigenasa • inhibidor de la
• Β lactámicos Ejem. Penicilina proteasa del VIH)
• Inhiben síntesis de pared bacteriana uniéndose a
la PBP • Nevirapina
• inhibidor de
• Revisar su mecanismo transcriptasa inversa
• Sulfas (~PABA)  VIH
• IECAs (Captopril, enalapril)
• Alopurinol
• Fluorouracilo
• Estatinas BUSCAR OTROS EJEMPLOS USANDO LA LITERATURA ADECUADA
Preguntas Deben revisar los materiales, realizar
las tareas y subirlas en la plataforma.

Gracias por su atención………..