FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE

ENFERMERIA
GUIA DE PROCEDIMIENTO DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

DOCENTE:
DR. YAIPEN GONZALES HECTOR FILAMIR

SECCIÓN:
E
INTEGRANTES:
HUANGAY LUCERO NELSON
JORDY AIMAR TORRES MONTEZA
JHARITZA OCHOA GALLARDO
PIMENTEL-PERU
2023
 INTRODUCCIÓN

En el campo de la microbiología clínica, los medios de cultivo y las técnicas de siembra

desempeñan un papel fundamental en el aislamiento y la identificación precisa de una amplia
gama de microorganismos patógenos. En particular, la identificación de microorganismos como
Staphylococcus y Streptococcus ha adquirido una importancia destacada debido a su implicación
en una variedad de infecciones bacterianas en seres humanos. Estas bacterias grampositivas
son reconocidas por su capacidad de causar desde infecciones cutáneas y respiratorias hasta
infecciones más graves como la sepsis y la endocarditis. (1)

Por lo tanto, comprender a fondo los medios de cultivo óptimos y las técnicas de siembra
eficientes para el aislamiento e identificación precisa de estas bacterias se convierte en un pilar
fundamental para la práctica clínica y la salud pública.
El proceso de aislamiento e identificación de Staphylococcus y Streptococcus implica la
utilización de una variedad de medios de cultivo selectivos y técnicas de siembra específicas que
permiten la observación de características distintivas de crecimiento y metabolismo bacteriano.
Además, la identificación precisa de estas bacterias requiere la aplicación de pruebas
bioquímicas y moleculares especializadas que permiten diferenciar entre las distintas especies y
determinar su perfil de resistencia a los antimicrobianos. (2)

A pesar de los avances tecnológicos en el campo de la microbiología, la elección adecuada de

los medios de cultivo y las técnicas de siembra sigue siendo crucial para garantizar resultados
fiables y la implementación de medidas terapéuticas efectivas en el contexto clínico. En esta
monografía, se examinarán detalladamente los fundamentos teóricos y prácticos de los medios
de cultivo y las técnicas de siembra en relación con el aislamiento e identificación de
Staphylococcus y Streptococcus, así como su relevancia en el diagnóstico y tratamiento de
infecciones bacterianas en humanos. (3)
Objetivos:

Objetivo general:

Analizar en profundidad los medios de cultivo y las técnicas de siembra adecuadas para el
aislamiento y la identificación precisa de Staphylococcus y Streptococcus, con el propósito de
mejorar la comprensión de su patogenicidad y contribuir al desarrollo de estrategias efectivas de
diagnóstico y tratamiento.

Objetivos específicos:

 Investigar los medios de cultivo selectivos más efectivos para el aislamiento de

Staphylococcus y Streptococcus en muestras clínicas, considerando factores como la
especificidad y la sensibilidad.
 Analizar críticamente las técnicas de siembra más apropiadas para el cultivo eficiente de
Staphylococcus y Streptococcus, incluyendo la técnica de siembra en superficie y en
profundidad, y su impacto en la identificación precisa.
 Evaluar las pruebas bioquímicas más relevantes para la identificación diferencial de
especies de Staphylococcus y Streptococcus, incluyendo pruebas de coagulasa, pruebas
de catalasa y pruebas de sensibilidad a los antibióticos.
 Explorar las técnicas de identificación molecular más recientes, como la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR), y su aplicación en la diferenciación precisa de cepas de
Staphylococcus y Streptococcus.
 Examinar los desafíos y las consideraciones clave en el aislamiento e identificación de
Staphylococcus y Streptococcus en entornos clínicos, así como proponer
recomendaciones para la optimización de los procedimientos de laboratorio en el contexto
del diagnóstico microbiológico. (2)
MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE SIEMBRA
Aislamiento e Identificación de Staphylococcus y Streptococcus
Competencias:
Identifica el uso de los medios de cultivo en Microbiología
Aísla microorganismos mediantes los medios cultivos
Materiales:
Agar Müller-Hinton
Agar Manitol Salado
Agar SS
Agar Mc Conckey
Agar Sangre
Caldo Peptonado
Placas petri
Asas Bacteriológicas
Matraces
Balones
Mechero Bunsen
Autoclave
Horno
Estufa

TÉCNICAS DE SIEMBRA
Se siembra en medios de cultivo para hacer que las bacterias se reproduzcan con el objetivo de
aumentar el número de individuos de una población.
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los requerimientos del
microorganismo a estudiar.
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se
vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos
aerobios.

Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado
el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior
(generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios
facultativos y microaerofílicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja
solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se
extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja
solidificar.
Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo
fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.
En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce
mediante punción en el medio contenido en la parte inferior del tubo.

En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el
mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.
PRODECIMIENTO

Preparación del inoculo

Sembrar la cepa problema en tubos con caldo nutriente e incubar durante 16 a 18 horas a 37°
C. ajustar la concentración del inoculo al tubo N°3 de la escala de Mac Farland. Diluyendo en
solución salina

inoculación en placa
Introducir un hisopo estéril en el tubo con el cultivo bacteriano, humedeciendo completamente.
de eliminar el exceso del cultivo.
-Restregar el hisopo por las paredes del tubo con la finalidad
-Sembrar la cepa cubriendo toda la superficie de la placa de agar Müller hintón.

Colocación de los discos de sensibilidad:

-Una vez secado la superficie de la placa colocar los discos de sensibilidad con ayuda de una
pinza, manteniendo una distancia de 2 cm entre cada disco presionar ligeramente.
-incubar las placas a 37°C durante 24 horasMedir los halos de inhibición y comparar con el
holómetro
RESULTADO
Antes de empezar con el procedimiento debemos tener todos los materiales a la mano
Primero se debe tener sembrado la cepa problema en tubos con caldo de nutrientes

Segundo introducir un hisopo estéril al tubo, humedecerlo muy bien para que luego con el mismo
hisopo húmedo empieza a frotar suavemente sobre la superficie de la placa de agar Müller
hintón de esa manera se estaría Sembrar la cepa

Tercero paso, una vez seco la superficie donde fue sembrada la cepa, con la ayuda de una
pinza, aplicamos los discos a 2 cm de distancia entre sí, debemos colocarlo cuidadosamente y
presionar levemente
 .cuarto paso, luego de color los discos

debemos llevar a incubar a 37°C por 24 horas.

Cuestionario:

¿Cuáles son los usos de los medios de cultivo en microbiología?

Medios de cultivo según su consistencia: Existen dos tipos principales de medios de cultivo
según su consistencia. Los medios de cultivo sólidos son aquellos en los que los nutrientes se
encuentran en forma sólida, generalmente utilizando agar como sustancia gelatinosa para
solidificar el medio. Estos medios se utilizan para observar características macroscópicas de los
microorganismos, como la forma y el color de las colonias.

Por otro lado, los medios de cultivo líquidos contienen nutrientes en forma líquida y se utilizan
para la producción de grandes cantidades de microorganismos o para la observación de
características microscópicas de los mismos.

Medios de cultivo según su función: Los medios de cultivo selectivos contienen componentes
que permiten el crecimiento de una especie de bacterias específicas, mientras inhiben el
crecimiento de otras especies. Estos medios se utilizan para aislar y cultivar microorganismos
específicos.

Por otro lado, los medios de cultivo diferenciales permiten distinguir entre diferentes especies de
microorganismos. Estos medios se utilizan para identificar especies de microorganismos y
detectar cambios en su comportamiento.

Medios de cultivo según su origen: Los medios de cultivo naturales se preparan a partir de
sustancias naturales, como extractos de tejidos e levadura.

En contraste, los medios de cultivo sintéticos tienen una composición química definida cualitativa
y cuantitativamente.

Es importante destacar que existen muchos otros tipos y subtipos de medios de cultivo, pero
estos son los más comunes y generales.

¿Cómo se clasifican los cultivos según su estado físico, uso y finalidad?

Se clasifican en:
Solidos: Este está compuesto por AGAR (solidificante). Se usa para observar características de
los microorganismos, sus colonias y formas, con el fin de aislar diferentes microorganismos entre
sí, y cultivos puros.
Semisólidos: Presenta un AGAR en su composición en menor concentración, se usa para
estudiar la motilidad de las bacterias.
Líquidos: Estos no tiene solidificantes, estos se utilizan para producciones en cantidades
grandes donde los microorganismos o también para observar sus características microscópicas.
¿Explicar, a que se debe el cambio de color de los medios de cultivo por determinadas
bacterias?
El cambio de color en los medios de cultivo puede deberse a una serie de factores, como la
producción de ácidos, alcalinidad, descomposición de proteínas, entre otros, por parte de las
bacterias en crecimiento. Por ejemplo, ciertas bacterias pueden fermentar los azúcares
presentes en el medio, lo que produce ácidos orgánicos que pueden cambiar el pH y, por ende,
el color del indicador presente en el medio. Además, la liberación de enzimas específicas puede
descomponer ciertos componentes del medio, también provocando cambios de color.

¿A qué se le denomina medio de transporte y para qué sirve?

Un medio de transporte es un medio especializado que se utiliza para transportar muestras

microbiológicas desde el lugar de recolección hasta el laboratorio. Estos medios están diseñados
para mantener la viabilidad de los microorganismos presentes en la muestra durante
el tiempo que transcurre entre la recolección y el procesamiento en el laboratorio. Ayudan a
preservar la integridad de los microorganismos y minimizar los cambios en su número y
composición durante el transporte, lo que resulta crucial para un aislamiento e identificación
precisos de bacterias como Staphylococcus y Streptococcus.

¿Cómo puede incubarse microorganismos anaerobios estrictos?

Los microorganismos anaerobios estrictos, que no pueden sobrevivir en presencia de oxígeno,

se incuban en condiciones anaeróbicas. Esto se logra utilizando técnicas y equipos
especializados, como sistemas de cultivo anaeróbico que eliminan el oxígeno del ambiente de
incubación. Estos sistemas pueden incluir recipientes sellados o bolsas especiales que
contienen agentes químicos reactivos al oxígeno, así como cámaras de incubación con
atmósferas controladas y bajos niveles de oxígeno. Mediante estas técnicas, se proporciona un
entorno libre de oxígeno para el crecimiento y la identificación de microorganismos anaerobios
estrictos como parte del proceso de aislamiento e identificación de bacterias como
Staphylococcus y Streptococcus.
 Discusión

Para obtener los microorganismos, es necesario seguir ciertos pasos. En primer lugar, se debe mencionar
a Robert Koch, considerado el padre de la bacteriología. Koch explicó cómo los microorganismos están
presentes en animales enfermos y cómo se pueden obtener los agentes causantes de enfermedades.
Estableció una serie de postulados que son fundamentales en microbiología. Estos postulados son los
siguientes:

El organismo debe estar siempre presente en animales que sufren la enfermedad y no en individuos
sanos.El agente debe ser aislado del cuerpo en un cultivo puro a partir de las lesiones de la enfermedad.

El agente debe provocar la enfermedad en un animal susceptible al ser inoculado. El agente debe ser
aislado nuevamente de las lesiones producidas en los animales de experimentación y mostrar las mismas
características que el agente original. Una vez que se han explicado los postulados, se puede obtener el
microorganismo y posteriormente elaborar un medio de cultivo. El medio de cultivo es un material nutritivo
que permite el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de los microorganismos pueden crecer en
cualquier tipo de cultivo, pero algunos requieren medios especiales o no crecen en ninguno de los medios
existentes.

Cuando se realiza el cultivo en medio sólido, se agrega un agente solidificante conocido como agar. El
agar es un polisacárido complejo que se obtiene de un alga marina y se utiliza como espesante en
alimentos como jaleas y helados. El agar se mantiene en baños de agua a 50°C en los laboratorios, ya
que no altera la mayoría de las bacterias cuando se vierte sobre él.Una vez que el agar se solidifica,
puede incubarse a temperaturas cercanas a los 100°C antes de que se licue. Esto es especialmente útil
cuando se desea cultivar bacterias termófilas.

Los medios de cultivo con agar se utilizan en tubos de ensayo o en placas Petri. Cuando el agar se
solidifica en un tubo de posición vertical, se denomina cultivo profundo. Por otro lado, las placas Petri se
utilizan para cultivos poco profundos, y se cubren con una tapa para evitar la contaminación de otros
microorganismos.

En los laboratorios, se utiliza el método de cultivo puro, que implica el uso de placas Petri y el método de
siembra por estría en placa. En este método, se introduce una asa de inoculación estéril en un cultivo
mixto que contiene un microorganismo y se distribuye en la superficie del medio nutritivo. Esto permite el
crecimiento y la observación de la bacteria que se aisló.

Existen varios tipos de medios de cultivo para aislar bacterias, y se utilizan métodos como la
ultracongelación y la liofilización para conservar los cultivos de microorganismos durante largos períodos
de tiempo.
 Conclusión:
En conclusión, los medios de cultivo de simbra son esenciales en el área de la microbiología y
biotecnología, puesto que permiten el crecimiento, estudio y análisis de microorganismo, los
medio y técnicas son fundamentales para obtener resultados confiables y reproducibles en
cultivo de microorganismo.
Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de microorganismos
con varios fines, como el de multiplicación, identificación, antibiograma, entre algunos otros, y
puede ofrecer información valiosa sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e
higiénica para evitar la contaminación del medio y la alteración de los resultados.
Podemos ver en nuestra muestra de cultivos después de dejarlo reposar por 24 horas,
observamos los antibióticos que no resistentes al caldo de nutrientes, como también que
antibióticos son resistentes a ellos; cabe recalcar que los antibióticos son gram positivos y sin
dejar de mencionar que cada instrumentos utilizados deben ser desinfectados a altas
temperaturas con el flameo del mechero para la esterilización.

Mediante el desarrollo de esta práctica, definimos y aplicamos los procedimientos que se deben
realizar para la elaboración de un medio de cultivo y a su vez aprendimos la importancia de
preparar medios de cultivo que nos van a servir para identificar diferentes microorganismos.
Referencias

 TIPOS DE HEMÓLISIS, EduLabC (intertnet), 2021 (citado el 21 de mayo del 2023).

Disponible en: https://edulabc.com.mx/wintercms/blog/post/tipos- de-
hemolisis#:~:text=Podemos%20diferenciar%20tres%20tipos%20de,las%2 0colonias
%20es%20totalmente%20transparente.
 Hemólisis [Internet]. Medlineplus.gov. [citado el 18 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002372.htm

 Bacteriana I [Internet]. Edu.ar. [citado el 18 de octubre de 2023]. Disponible en:

https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/183670/mod_resource/
content/1/2019%20TP3%20

.  de Biotecnologia C. FACULTAD REGIONAL ROSARIO [Internet]. Edu.ar. [citado el 18 de

octubre de 2023]. Disponible en:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/
practicoIII.pdf
 . Inteligente K. Cultivo de microorganismos [Internet]. Kapital Inteligente. 2020 [citado el
18 de octubre de 2023]. Disponible en: https://www.kapitalinteligente.es/cultivo-de-
microorganismos/