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VEGA
GUA DE PRCTICA
MICROBIOLOGIA
CDIGO :
CICLO : VIII
2016-I
LIMA - PER
1
MICROBIOLOGIA GENERAL
INTRODUCCION:
2 FACULTAD DE CIENCIAS
FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA
MICROBIOLOGIA GENERAL
I- PRCTICA N 1
1.2 Competencias
Maneja y equipos y materiales en el usa Laboratorio.
Estudia in Vitro a los microorganismos.
Prepara e identifica el material de vidrio y su forma de esterilizacin
1. 3 Materiales y equipos
Equipos e instrumentos tales como: Autoclave, horno, incubadora, bao Mara, refrigeradora,,
equipo para luz ultravioleta , equipo de esterilizacin por filtracin, cmara de flujo laminar,
centrifuga y microscopio compuesto,
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel para lente
Aceite de inmersin
Torundas de algodn
Gasa
Asa de Kolle
Cultivo bacteriano
Papel kraft
Tubos de prueba
Placas Petri
Balones, vaso de precipitados, pipetas y matraces de vidrio
Cinta indicadora de esterilizacin (para autoclave)
1. 4 Procedimiento
1. Examina laminar , bao mara, equipo de esterilizacin por filtracin, centrifuga y microscopio
e identifica sus componentes , su aplicacin y utilizacin en el laboratorio cada uno de los
siguientes equipos e instrumentos del laboratorio: autoclave, horno, incubadora, cmara de
flujo
2. Observa al microscopio las muestras que a continuacin se indican:
Cultivo bacteriano:
Coloca sobre la lmina portaobjeto una gota de cultivo bacteriano y deja caer la lmina
cubreobjeto.
3. .Preparacin de material de vidrio y material auxiliar
Confecciona tapones de algodn para el material de vidrio proporcionado, estos deben ser
consistentes y de un tamao apropiado que permita su manipulacin.
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Empaqueta este material con papel kraft, en igual forma tambin se procede con todo
el material auxiliar que se use en el laboratorio para someterlo a un proceso de
esterilizacin y luego conservar su esterilidad .un tiempo adecuado
Las placas Petri y los tubos de prueba (previamente taponados) se envuelven formando
paquetes de tres y seis unidades respectivamente. Debe tenerse especial cuidado en que
el papel utilizado se encuentre ntegro y sin orificios. Para las torundas e hisopos se
procede de igual forma.
En el caso de las pipetas, se cortan bandas largas (tiras) de papel kraft y se las envuelve
en forma diagonal y empezando por la punta, colocando un refuerzo de papel en esta
seccin, de esta forma la pipeta quedar ntegramente cubierta por el papel. Al final de la
envoltura se dejar una porcin en la que se escribir en nmeros la capacidad de
volumen de la pipeta.
1. 5 Resultados
Se registra detalladamente cada una de las observaciones hechas Y se realiza los esquemas y
dibujos necesarios: Equipo de laboratorio (indicando sus componentes). Procede de igual forma
con el material de laboratorio empleado
1. 6 Cuestionario.
1. 7 Fuentes de informacin
Tortora,Berdell, Funke Christine.L.Case Introduccin a la Microbiologa 9 Edicion. Editorial
Mdical Panamericana Espaa , 2007
Tortora G. J.; Funke, B. R.; Case, C. L.: Introduccin a la Microbiologa, Buenos Aires, 9 d.
Editorial Acribia. 2000
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II .- PRACTICA N 2
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y SU FORMA DE
ESTERILIZACIN MEDIOS DE CULTIVO
SLIDOS, SEMISLIDOS Y LQUIDOS
2.2 Competencias
2.3 Realiza un listado de los principales medios de cultivo y su aplicacin, as como los
indicadores mas usados
Prepara y esteriliza diversos medios de cultivo
2.4 Procedimiento
- Disuelve en agua destilada los medios comerciales proporcionados, segn la indicacin del
envase, a los que contengan agar ser necesario someterlos a la accin del calor hasta su
completa disolucin.
- Enfra este preparado hasta aproximadamente 50C.
- Mide el pH del medio, con la cinta indicadora.
- Si es necesario, ajusta el pH empleando NaOH 1N o HCL 1N.
- Envasa, rotula, sealando el tipo de medio y la fecha de preparacin.
- Esteriliza por autoclave a 15 lb de presin por 15 a 20 minutos.
- Controla la esterilidad del medio, por incubacin del mismo a 37C por 24 horas.
- Para el caso del caldo peptonado, se proceder a la disolucin de los siguientes
componentes: peptona 10 g y cloruro de sodio 10 g, luego se completa con agua destilada
hasta 1000 mL; y se llevar a pH de 8.8 +/- 0,1.
2. 5 Resultados
Se describir su composicin y el fundamento de las diferentes clases de medios de cultivo
utilizados
2.6 Cuestionario:
1. Que importancia tiene el uso de los medios slidos?
2. Qu sustancia es la encargada de solidificar los medios de cultivo slido? De dnde se
extrae?
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III.- PRACTICA N 3
3.2 Competencias
- Realizar diversas tcnicas de siembra para su cultivo y aislamiento
- Aplica las tcnicas de aislamiento hasta la obtencin de cultivos puros
- Describe sus observaciones usando la terminologa tcnica apropiada
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3.4 Procedimiento:
1. Tcnicas de Siembra en Medios Lquidos, Semislidos y Slidos:
Siguiendo la metodologa descrita segn los esquemas anexos, proceder tal como sigue:
- Con el asa en aro previamente esterilizada, tomar una asada del cultivo de
microorganismos, y sembrar por el mtodo de dispersin y agotamiento en las placas de
TSA .
- Con el asa en punta previamente esterilizada, tomar el inculo del cultivo de bacterias y
sembrar en agar SIM, por el mtodo de puntura.
- Con el asa en aro, toma el inculo del cultivo bacteriano y siembra en el tubo con agar en
pico de flauta o plano inclinado, por el mtodo de estra.
- Con el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo, y sembrar por el
mtodo de inoculacin en el tubo con TSB.
2. Desarrollo bacteriano:
- Efectuar la lectura de los cultivos proporcionados por la profesora y observa. Tener
sumo cuidado de no sacudir los cultivos en caldo ya que esto puede trastornar los
crecimientos superficiales; describir. Hacer los esquemas de todas las observaciones.
3.5 Resultados:
Reporta y describe
3.6 Cuestionario:
1. Con qu propsito se emplean cada una de las diferentes tcnicas de siembra?
2. Describe las caractersticas del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianos
proporcionados en la prctica.
3. Describe el mtodo de siembra por incorporacin y seala en que casos se emplea
3.7 Fuentes de informacion
Madigan, M. T.; Martinko, J. M.; Parker, J.: Brook Biologa de los Microorganismos. 10 ed,
Madrid Prentice Hall Iberia., 1999.
Prescott L/ Harley J ,/ Klein D 576/P 85 2000 Madrid
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IV .- PRACTICA N 4
MTODOS DE COLORACIN
2. Coloracin Gram:
- Prepara frotices de cultivos de E. coli y S. aureus.
- Deja secar al aire y fija con calor.
- Cubre los frotices con reactivo de cristal violeta durante un minuto.
- Lava los portaobjetos con agua corriente durante 5 segundos.
- Cubre el frotis con la solucin de lugol y deja actuar durante 2 minutos.
- Lava con agua corriente, y aplica lentamente el alcohol acetona y seguir agregando
hasta que la tintura ya no fluya del frotis.
- Lava inmediatamente con agua corriente.
- Cubrir el frotis con la solucin de safranina durante 30 segundos.
- Lava con agua corriente y deja secar la preparacin.
- Observa al microscopio utilizando el lente de inmersin.
-
3. Coloracin cido Resistente:
- Cubre el frotis proporcionado con fucsina fenicada al 5% (carbolfucsina) y dejarlo
reposar de 30 a 60 segundos antes de calentarlo.
- Calienta la preparacin con suavidad, haciendo pasar el mechero de alcohol por debajo
del portaobjeto. Seguir calentando hasta que se observe el desprendimiento de
vapores. Evitar que el colorante hierva. Repetir 2 veces ms.
- Enfra y lava con agua corriente.
- Decolora con alcohol cido hasta que no arrastre colorante.
- Lava con agua corriente.
- Cubrir el frotis con azul de metileno, durante 1 minuto.
- Lava con agua corriente.
- Deja secar al aire.
- Observa al microscopio con lente de inmersin. Las bacterias cido alcohol
resistentes se tien de rojo y los dems microorganismos de color azul.
4. Coloracin de Esporas:
- Haga un frotis fino y fije a la llama.
- Cubre con azul de metileno y calienta hasta hervir en forma intermitente por 1 minuto.
- Lava con agua destilada.
- Cubre con una mezcla de solucin saturada alcohlica de Eosina por 30 segundos.
- Lava con agua destilada y deja secar al aire.
- Examina al microscopio con lente de inmersin.
5. Coloracin negativa:
- Coloca varias asadas de cultivo en un portaobjetos limpio, cerca de uno de los bordes.
- Coloca un volumen igual de tinta china cerca del cultivo.
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- Mezcla bien con el asa y luego extiende la mezcla a lo largo del portaobjetos, utilizando
la tcnica del frotis sanguneo.
- Deja secar el frotis.
- Cubre con safranina durante 10 segundos, luego enjuaga con cuidado y deja secar al
aire.
- Observa al microscopio con lente de inmersin. Al examinar la preparacin, la cpsula
aparecer como una zona transparente que rodea a la pared celular.
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario
1. Qu importancia tiene la pared celular bacteriana en la coloracin de Gram?
2. Cules son las diferencias qumicas importantes que explican el estado cido-resistente?
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V.- PRACTICA N 5
METABOLISMO MICROBIANO
Primer da
- Con ayuda del lpiz de cera, divida por fuera la base de la placa Petri en 3 partes.
- En la seccin 1, siembra B. Subtilis, en la seccin 2 siembra E. Coli y en la seccin 3 siembra
Ps. aeruginosa
- Incuba a 37C por 24 horas.
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Segundo da
- Agrega a toda la superficie del medio la solucin de lugol.
Observa la reaccin alrededor del crecimiento microbiano.
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2. Accin sobre las protenas
Hidrlisis de la gelatina:
Primer da
- Rotula cada tubo con el nombre de la cepa correspondiente: E. Coli y B. Subtilis.
- Inocula cada cepa en un tubo con gelatina, haciendo uso de un asa en punta,
introduciendo de manera vertical hasta el fondo del tubo.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa los resultados. Observa la hidrlisis de la gelatina
Produccin de indol:
Primer da
- Rotula sus tubos con el nombre del microorganismo: E. coli y B. subtilis.
- Inocula cada cepa en su tubo correspondiente.
- Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
- Agrega 4 gotas del reactivo de Kovacs, dejando resbalar por la pared interna de cada tubo
que presenta desarrollo bacteriano, luego agite suavemente.
- La reaccin es positiva, si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zona
superior del tubo, pocos segundos despus de haber agregado el reactivo.
- Las bacterias que a pesar de desarrollar en el medio no producen indol, permanecern sin
cambio alguno (reaccin negativa).
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- La prueba es negativa, si el medio permanece del color original.
Prueba de la catalasa:
- Con el asa de siembra en punta, picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de
Staphylococcus aureus o Streptococcus viridans, y transferir el inculo a un portaobjetos
limpio.
- Aade de 1 a 2 gotas de H2O2 al 3%.
- Observa si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se aade el reactivo.
- Descarta la lmina en un recipiente con desinfectante.
Reaccin de la citocromo oxidasa:
- Con el asa de siembra en punta, picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de
E.coli o Ps. aeruginosa, y transferir el inculo a una tira del reactivo de oxidasa.
- Considera la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloracin azul violceo intensa
en la tira, en un mximo de 5 segundos.
5.5 Resultados
Reporta los resultados y explica el fundamento bioqumico de cada una de las pruebas .
realizadas en la prctica
5.6 Cuestionario.
1. Cmo podra emplear las conclusiones que derivan de esta prctica para clasificar a las
bacterias?
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VI PRACTICA N 6
6.2 Competencias
- Elabora un listado de productos farmacuticos cuya fabricacin sea resultado de procesos
biotecnolgicos
- Ensaya y observa el efecto de los agentes fsicos y qumicos sobre la viabilidad de las
bacterias.
6. 4 Procedimiento
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3. Accin de los agentes fsicos y qumicos sobre la viabilidad de las bacterias:
Accin del calor (llama directa)
- Esteriliza el asa de siembra a la llama directa del mechero.
- Toma el inculo y siembra en la mitad de la placa con agar nutritivo
- Esteriliza el asa de siembra, tomar otro inoculo, somete a la accin de la llama directa y
siembra en la otra mitad del agar.
- Rotula e incuba a 37C durante 24 horas.
-
Accin del calor hmedo
- Contamina el fondo de cada uno de cuatro tubos con una gota de cultivo de Bacillus
subtilis, evitando tocar las paredes del tubo.
- Calienta cada uno de los tubos por flameado, desde la boca del tubo hasta unos 3 cm del
fondo.
- Sumerge por 10 minutos cada uno de los tubos, en un bao de agua tal como sigue: el
primer tubo a 40C, el segundo tubo a 70C, el tercer tubo a 100C; el cuarto tubo servir
de control.
- Aade a cada uno de los tubos en condiciones aspticas 5 mL de caldo nutritivo.
- Incuba a 37C por 24 horas.
- Procede de manera similar con los otros 4 tubos, pero usando como cepa, el cultivo de
Escherichia coli.
-
Accin de la radiacin ultravioleta
- Licua el agar en bao maria a 50C.
Siembra en superficie:
- Vierte el contenido de un tubo de agar licuado en una placa estril y deja solidificar.
Hacer lo mismo en la placa restante.
- Coloca una gota del cultivo asignado en el centro de cada una de las 2 placas y siembra
con un hisopo estril en toda la superficie de la placa. Dejar secar 30 minutos
Siembra en el medio:
- Transfiere 0.1 mL de los cultivos asignados, en cada uno de los 2 tubos restantes.
- Mezcla por rotacin y vierte todo el contenido en su respectiva placa Petri. Deja
solidificar
- Exponer las placas a la lmpara ultravioleta en la forma siguiente:
-
Mtodo de siembra
Siembra en superficie Siembra en todo el medio
Placa N 1 Placa N 2 Placa N 1 Placa N 2
Tiempo de exposicin a la luz
2 minutos 5 minutos 2 minutos 5 minutos
ultravioleta
- Incuba por 24 horas y anota los resultados
Accin de los agentes qumicos
- Inocula abundantemente la superficie de una placa de agar, con 3 asadas del
microorganismo en estudio. Disemina uniformemente.
- Con una pinza previamente esterilizada, coloca los discos de papel embebidos con las
sustancias suministradas y equidistantes entre s.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Efecto de los desinfectantes qumicos:
- Inocula 0,1 mL de Escherichia coli, en un tubo conteniendo desinfectante.
- Repite lo anterior utilizando TSB en lugar del desinfectante (tubo control).
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- Toma una asada del primer tubo a los 5 minutos y siembra por el mtodo de estra en un
cuadrante de la placa de agar nutritivo.
- Repite el procedimiento en los tres cuadrantes restantes a los 10, 20 y 30 minutos.
- Procede de igual forma con el tubo control.
- Incuba a 37C por 24 horas.
6. 5 Resultados
Reporta y describe:
1. Las caractersticas del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianos ensayados.
6.6 Cuestionario
1. El cuestionario se proporcionara a medida que se desarrolle la prctica
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VII PRACTICA N 7
7. 2 Competencias
- Aplica mtodos para evaluar la actividad antimicrobiana in -vitro
- Obtiene la concentracin mnima inhibitoria de antibiticos en estudio
7. 3 Materiales y equipos
- Frasco con 100 mL de caldo Mueller Hinton
- Placas con agar Mueller Hinton
- Escala de Mc Farland 0.5
- Cultivo de E.coli
- Cultivo de S.aureus
- Cultivo de Ps.aeruginosa
- Discos de antibiticos
- Hisopos estriles
- Pinzas estriles
- Solucin de antibitico a una concentracin de 1000 mg/mL
- Tubos estriles de 16 x 150
- Pipetas estriles de 10 mL
- Pipetas estriles de 5 mL
7. 4 Procedimiento
1. Mtodo de difusin en agar
Primer da
- Prepara una dilucin de la bacteria en estudio equivalente a 0.5 de la escala de Mc Farland
(1.5 x 108 bacterias).
- Siembra una placa de agar Mueller Hinton con un hisopo embebido en la dilucin
anterior.
- Coloca los discos de los antibiticos con ayuda de las pinzas estriles a 2 cm del borde de
la placa y equidistantes entre si.
- Presiona suavemente cada disco para que se adhiera al agar.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Despus de la incubacin, observa los halos de inhibicin alrededor de los discos de
antibiticos.
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- La sensibilidad del microorganismo a los antibiticos utilizados, se establece por
comparacin en una grfica de tamaos de la zona.
2. Mtodo de dilucin en tubo
Primer da
- Con una pipeta de 10 mL tomar el cultivo proporcionado y dejar caer una gota al frasco que
contiene 100 mL de caldo Mueller Hinton.
- Mezcla y con la misma pipeta, repartir el caldo en 10 tubos estriles, inoculando el primer
tubo con 9 mL y los restantes con 5 mL del caldo.
- Prepara una fila de diluciones del antibitico de 100 mg a 4 ug; con la pipeta de 5 mL toma
1 mL de la solucin de antibitico e inocula el primer tubo.
- Mezcla y saca 5 mL para el segundo tubo y as sucesivamente hasta el noveno tubo.
- Del noveno tubo, saca 5 mL y elimina conjuntamente con la pipeta.
- El tubo N 10 no recibir antibitico y servir como control del desarrollo bacteriano.
- Incuba los tubos a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa la turbidez de los tubos comparndola con la del tubo control (N 9).
- Los tubos que no presentan turbidez se debe a que la bacteria fue inhibida en su
desarrollo.
- La menor concentracin de antibitico que inhibi el desarrollo bacteriano ser la MIC.
7.5 Resultados
1. Reporta los resultados obtenidos (dimetro de los halos) de los microorganismos empleados
frente al antibitico analizado.
7.6 Cuestionario
- Se realizar a medida del desarrollo de la prctica
7.7 Fuentes de informacin
Brooks Geo F.; Butel, Janet. S., Morse Stephen. A.: Microbiologa mdica. 17a. Edicin.
Mxico, Editorial El Manual Moderno, S.A. de C.V. 2002.
Madigan, M. T.; Martinko, J. M.; Parker, J. Brook. Biologa de los Microorganismos 10 ed.
Madrid,. Prentice Hall Iberia. 1999
Ramos Gorbea Juan Carlos Sena Chumbes, Fernando Agurto Saenz Torres . Microbiologia
bsica Colora ciones de bacterias y la bioqumica en los medios de cultivo 2004.
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VIII PRACTICA N 8
8. 1 Marco terico
8. 3 Material y mtodos
Placas con agar sangre
Placas con agar manitol salado
- Placas con agar DNA
- Cultivo de: Staphylococcus aureus y S. epidermidis; Streptococcus viridans, S. pyogenes,
S. pneumoniae y S. agalactiae
- Set de colorantes Gram
- Reactivo de coagulasa
- Solucin HCl 1N
- Solucin de perxido de hidrgeno al 3%
- Discos de Bacitracina
- Discos de Optochin
8.4 Procedimiento
1. Estudio de los estafilococos
Coloracin y morfologa
- Efecta frotices en lminas portaobjetos con cada una de las cepas.
- Despus de fijarlas al calor, realiza coloraciones de Gram.
- Observa al microscopio con lente de inmersin y anota las caractersticas morfolgicas.
Inoculacin en agar sangre
Primer da
- Toma una placa de agar sangre y lo di vide en dos sectores.
- Inocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estafilococos: S. aureus
y S. epidermidis.
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- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa el crecimiento en agar sangre.
Crecimiento en agar manitol salado
Primer da
- Toma una placa de agar manitol salado y dividelo en dos sectores.
- Inocula cada sector correspondiente con las mismas cepas del ejercicio anterior.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa el crecimiento en agar manitol salado y describe la morfologa de las colonias.
- Observa el viraje del color del indicador rojo de fenol, debido a la acidez
Prueba de la coagulasa
Primer da
- Toma dos tubos que contienen 0.5 mL de plasma de conejo (reactivo de coagulasa).
- Inocula cada uno de ellos con 0.1 mL de cada una de las dos cepas de estafilococos.
- Incuba a 37C.
- Observa cada hora la aparicin de cogulos, por espacio de 4 horas.
- De ser negativo el resultado, se deja incubando y se hace una lectura final a las 24 horas.
- Si aparece un cogulo, la bacteria posee la enzima coagulasa.
Accin de la DNAsa
Primer da
- Toma una placa de agar DNA y la divide en dos sectores.
- Inocula en una mitad con el cultivo de S. aureus y la otra mitad con S. epidermidis.
- En ambos casos, la siembra la realiza con un solo trazo lineal perpendicular a la lnea
divisoria.
- Incuba a 37C por 24 horas
Segundo da
- Agrega a la superficie del agar 1 ml de HCl 1N y espera unos minutos.
- El HCl 1N precipita el DNA contenido en el medio de cultivo, enturbindolo.
- Observa la presencia de la enzima DNAsa, por la aparicin de un halo transparente
alrededor de la siembra, que indica la ausencia de DNA.
Prueba de la catalasa
- Toma una asada de cada cultivo de S. aureus y S. epidermidis y lo coloca sobre un
portaobjetos limpio.
- Aade 1 a 2 gotas de H2O2 al 3%.
- Observa si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se aade el reactivo.
- Descarta la lmina en un recipiente con desinfectante.
2. Estudio de los estreptococos
Coloracin y morfologa
- Efecta frotis en laminas portaobjetos con cada una de las cepas.
- Despus de fijarlas al calor, realice coloraciones de Gram.
- Observa al microscopio con lente de inmersin y anota las caractersticas morfolgicas.
Inoculacin en agar sangre
Primer da
- Toma una placa de agar sangre y la divide en dos sectores.
- Inocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos: S.
viridans (alfa hemoltico) y S. pyogenes (beta hemoltico).
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa las diferencias de hemlisis en agar sangre.
Prueba de la bacitracina
Se usa para la diferenciacin de un estreptococo Beta hemoltico del Grupo A, de los Beta
hemolticos del Grupo No A.
22 FACULTAD DE CIENCIAS
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MICROBIOLOGIA GENERAL
Primer da
- Toma una placa de agar sangre y divde en dos sectores.
- Inocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos:
S.agalactiae y S.pyogenes y coloca cuidadosamente y en forma estril con ayuda de una
pinza, un disco de Bacitracina en cada mitad.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa el halo de inhibicin, indicando la susceptibilidad a la Bacitracina del S.
pyogenes.
Prueba de CAMP
Se usa para la diferenciacin de un estreptococo beta hemoltico Grupo A, del estreptococo
beta hemoltico grupo B.
Primer da
- Inocula con trazo lineal en una placa de agar sangre, una colonia de S. aureus.
- Luego perpendicular al trazo anterior, inocula las cepas de estreptococos: S. agalactiae y
S. pyogenes en cada mitad de la placa sin tocar la cepa de estafilococo.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Observa los resultados obtenidos.
- El estreptococo beta hemoltico Grupo B (S.agalactiae), produce una sustancia (factor
CAMP), que agranda la zona de hemlisis producida por el estafilococo, factor que no
posee el estreptococo beta hemoltico Grupo A (S. pyogenes).
Prueba de la catalasa
- Toma una asada del cultivo de Streptococcus pyogenes y coloca sobre un portaobjetos
limpio.
- Aada 1 a 2 gotas de H2O2 al 3%.
- Observa si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se aade el reactivo.
- Descarta la lmina en un recipiente con desinfectante.
Prueba de Optochin
Primer da
- Toma una placa de agar sangre y la divde en dos mitades.
- Inocula una mitad de la placa con S. viridans y la otra mitad con S. Pneumoniae y coloca
cuidadosamente y en forma estril con ayuda de una pinza, un disco de Optochin en cada
mitad.
- Incuba a 37C por 24 horas.
8. 5 Resultados
Observa y reporta los resultados
8.6 Cuestionario
Qu factores condicionan la patogenicidad del S. aureus en comparacin con otras
especies de estafilococos?
1. Qu enfermedades produce el S. epidermidis y el S. saprophyticus?
2. Es recomendable en un paciente que presenta un cuadro de faringoamigdalistis, hacerse un
examen de secrecin farngea a fin de descartar la presencia de Streptococcus pyogenes
8. 7 Fuentes de informacin
Brooks, G. F.; Butel, J. S., Morse, S. A.: Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg.
,23a ed. Mxico. Editorial El Manual Moderno, S.A. de C.V. 2005 616.01/B84/ 2005.
23 FACULTAD DE CIENCIAS
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IX.- PRCTICA N 9
9.2 Competencias
- Ensaya los mtodos de identificacin diagnstica in Vitro en el laboratorio de especies
representativas: Escherichia coli, Salmonella, Shigella , Vibrio.y Pseudomonas aeruginosa
25 FACULTAD DE CIENCIAS
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MICROBIOLOGIA GENERAL
a) Caldo Lactosado: despus del perodo de incubacin, observe el resultado obtenido
(cambio de coloracin, presencia de gas) y compare con los resultados de los dems alumnos
de la clase.
b) Agar Urea: la prueba es positiva si el medio presenta un color rosado en la superficie o en
todo el tubo y es negativa, si el medio permanece del color original. Observe el resultado
obtenido y compare con los resultados de los dems alumnos de la clase.
c) Agar TSI: es indispensable que la lectura en el plazo establecido y observe:
- Produccin de H2S: ennegrecimiento en el fondo del tubo.
- Fermentacin de la glucosa nicamente (rojo/amarillo).
- Fermentacin doble o triple de carbohidratos (amarillo/amarillo).
- No fermentacin de carbohidratos (rojo/anaranjado).
- Produccin de gas: formacin de burbujas, grietas o desplazamiento del medio.
d) Agar SIM (Azufre Indol Movilidad):
- Detecta la produccin de hidrgeno sulfurado por medio de la observacin de un
precipitado negro en el medio.
- Realiza la prueba de produccin de indol como en (e)
- Observa la movilidad del microorganismo, y realiza un examen macroscpico del medio
por una zona de desarrollo difuso que parte de la lnea de inoculacin.
e) Caldo peptonado: despus del perodo de incubacin:
- Agrega en zona 4 gotas del reactivo de Kovacs, en cada tubo que presenta desarrollo
bacteriano, luego agitar suavemente.
- La reaccin es positiva, si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zona
superior del tubo, pocos segundos despus de haber agregado el reactivo y es negativa si
no hay cambio alguno.
f) Caldo MR VP (reaccin de Rojo de Metilo):
- Agrega 4 5 gotas del indicador rojo de metilo a cada tubo, cuyo rango de viraje esta
entre pH 4.4 (ROJO) y 6.0 (AMARILLO).
- La prueba es positiva si se mantiene un color rojo estable y negativa si da una coloracin
amarillo naranja.
g) Caldo MR VP (reaccin de Voges Proskauer): agregar a cada tubo:
- 10 a 12 gotas de la solucin de alfa-naftol y 4 gotas de la solucin de KOH creatina.
- Agita despus de agregar las soluciones por 1 minuto y deja en reposo durante 15
minutos.
- La reaccin es positiva, si aparece una coloracin rosada localizada en la mitad superior o
en todo el tubo dentro de los primeros 15 minutos (presencia de acetil-metil-carbinol) y
negativa, si el color inicial del medio de cultivo no cambia.
h) Agar Citrato:
- La prueba es positiva si observa crecimiento bacteriano y un color azul intenso del agar en
24 a 48 horas y negativa si no hay crecimiento ni cambio de color.
Nota: para la lectura se recomienda hacer uso de las tablas de identificacin bioqumica que describen
las reacciones de diagnstico clave para identificar los gneros de las bacterias entricas
.
Reaccin de la Citocromo Oxidasa
- Con el asa de siembra en punta, picar el crecimiento del tubo con la cepa proporcionada, y
transferir el inculo a una tira del reactivo de oxidasa.
- Considerara la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloracin azul violceo
intensa en la tira, en un mximo de 5 segundos.
2. Grupo Pseudomonas
Coloracin y morfologa
- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por la tincin de Gram.
- Observa al microscopio con lente de inmersin.
Inoculacin en TSA
Primer da
- Siembra la cepa de Pseudomonas aeruginosa en TSA por el mtodo de dispersin
agotamiento.
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MICROBIOLOGIA GENERAL
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da Observa las caractersticas de la colonia y presencia de pigmentacin
Inoculacin en agar TSI
Primer da
- Con el asa de siembra, inocula en el centro del tubo y estra la superficie del pico de
flauta.
- Rotula e incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
Realiza la lectura tal como se indica para las enterobacterias
Reaccin de la Citocromo Oxidasa, proceder tal como se indica para las enterobacterias
Cultivo a 42C
Primer da
- Siembra la cepa de P. aeruginosa en los tubos de TSB por la tcnica de inoculacin.
- Incuba a 42C por 24 horas
Segundo da
- Observa la presencia o no de crecimientomicrobiano a 42 C, en los tubos
3. Grupo Vibrio
Coloracin y morfologa
- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por tincin de Gram.
- Observa al microscopio con lente de inmersin.
Inoculacin en agar TCBS (Tiosulfato Citrato Sales biliares Sacarosa)
Primer da
- Divide la placa de TCBS por la mitad y sembrar en cada mitad las cepas de Vibrio por el
mtodo de dispersin agotamiento.
- Incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
- Las colonias de Vibrio cholerae que desarrollan en TCBS son circulares, con el borde
ligeramente opaco, con un halo claro alrededor y son amarillas por que metabolizan la
sacarosa.
- Las colonias de Vibrio parahaemolyticus que desarrollan en TCBS son circulares,
pegajosas, con halo claro alrededor, y son de color verde porque no degradan la sacarosa
Inoculacin en agar TSI
Primer da
- Con el asa de siembra, inocula en el centro del tubo y estra la superficie del pico de
flauta.
- Rotula e incuba a 37C por 24 horas.
Segundo da
Realiza la lectura tal como se indica para las enterobacterias.
Reaccin de la Citocromo Oxidasa, proceder tal como se indica para las enterobacterias.
Prueba del filamento o String Test
- Deposita una gota de la solucin de desoxicolato de sodio al 0.5% sobre una lamina
portaobjeto.
- Emulsiona en ella una colonia de V.cholerae o V. Parahaemolyticus con el asa de siembra.
- Detecta la presencia de filamento al levantar el asa.
9.5 Resultados
1. Esquematiza, registra y reporta los resultados obtenidos, identificando en cada caso la
especie.
9.6 Cuestionario.
Describa el fundamento de las pruebas realizadas
9.7 Fuentes de informacion
Koneman, E. W.; Allen, S. D.; Dowell Jr., V. R.; Janda, W. M.; Sommers, H. M.; Winn Jr, W. C.:
Color, Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. J. B. Lippincott Company. Third Edition.
Philadelphia, 1997.
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MICROBIOLOGIA GENERAL
X. PRACTICA N 10
MICOLOGIA
10.5 Resultados
Observa esquematiza e informa los resultados. Elabora esquemas en cada etapa de
desarrollo
10.6 Cuestionario
1. Cul es la ventaja del empleo de la cmara hmeda en el estudio de los hongos?
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MICROBIOLOGIA GENERAL
2. Existe diferencias entre hongos a nivel del crecimiento y diferenciacin del micelio?. Explique.
10 .7 Fuentes de informacin
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MICROBIOLOGIA GENERAL
XI. PRCTICA N 11
CONTAMINACION MICROBIANA DE LOS ALIMENTOS
11.1.- Marco terico:
11.2.- Competencias:
Determina la higiene de los productos crnicos durante su proceso de preparacin y
manipulacin.
Mtodo: Determinacin de la calidad de los alimentos crnicos por mtodos analticos
adaptados de los recomendados por la AOAC Norteamericana.
NOTA: Las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados se entregaran por
separado (Incubacin a 25C y 37C).
11.4.- Procedimiento
A.- Preparacin y conservacin de la muestra:
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Pesar 30 g de la muestra libre de la piel, o envoltorio de acuerdo al tipo de
producto, reducirlo a trozos pequeos.
La muestra debe guardarse en bolsas hermticas con cierre (cerrarlos por
completo, para evitar la prdida de humedad).
Efectuar los anlisis antes de las 24h de muestreado y conservar en refrigeracin
antes de su anlisis. Las muestras de alimentos naturales y procesados, se deben
seleccionar y conservar en recipientes apropiados, bolsa bien cerrada o sellada y
siguiendo las indicaciones del profesor.
B.- Preparacin de las diluciones de la muestra:
De la muestra inicial (carne molida, embutido o hamburguesa) pesar 10 g y
pasarla a un matraz que contiene 90 ml de agua peptonada al 0.1% con Tween 20
al 5% y disolver hasta obtener una suspensin.
Considerar la concentracin de sta como 0.1 10-1.
Luego tomamos del matraz (dilucin 10 -1 ) con pipeta estril 1ml de la dilucin y
vertemos en el Tubo 1 que contiene 9 ml de diluyente estril y mezclar. Esta
sera dilucin de concentracin 10 -2.
Seguidamente tomamos 1ml del Tubo 1 con otra pipeta estril y vertemos al
Tubo 2 y mezclar. Esta sera dilucin 10 -3.
Seleccionar las tres diluciones convenientes para la siembra.
C.- Recuento de microorganismos mesfilos aerobios viables.
De cada dilucin: 10-1,10-2, y 10-3 Tomar 1 ml y sembrar por el mtodo de
incorporacin en correspondientes placas vacas estriles, luego agregar 15 a 20
ml de medio de cultivo Agar Plate Count o Agar nutritivo fundido, mezclar y dejar
enfriar hasta solidificacin completa.
Llevar a incubacin a 37C por 24 a 48 horas.
D.- Recuento de hongos
De las mismas diluciones: 10-1,10-2, y 10-3 tomar 1 ml (Utilizando la misma pipeta
del mtodo anterior) sembrar por mtodo de incorporacin en correspondientes
placas vacas estriles, luego agregar 15 a 20 ml de medio de cultivo Agar
Sabouraud o Agar OGY fundido, mezclar y dejar enfriar hasta solidificacin
completa.
Llevar a incubacin a 25C por 5 a 7 das.
E.- Lectura e interpretacin
Leer las placas anotando la cantidad de UFC y las caractersticas de las colonias
formadas para identificar la presencia de microorganismos contaminantes:
Bacterias y Hongos, respectivamente.
11.5.- Resultados
Realizar la determinacin de la calidad de los alimentos crnicos, anotando la presencia o
no de Bacterias y Hongos en las muestras procesadas por Ud. Observar y registrar los
resultados, esquematizar y establecer sus conclusiones.
11.6.- Cuestionario
Cules son los mtodos microbiolgicos aplicados en esta prctica, para determinar la
calidad de los alimentos crnicos?.
Qu medios de cultivo se han empleado para realizar las determinaciones de control
de la calidad de alimentos crnicos que Ud. ha muestreado?
11.7.- Fuentes de informacin
Martnez Hernndez A. Fundamentos de Nutricin y Diettica; 1ra.Edicin; Ao
2011; Editorial Mdica Panamericana, Buenos Aires Argentina.
Vidal Garca, E. Manual Prctico de Nutricin; 1ra. Edicin; Ao 2009,
Madrid Vicente, A. Nuevo Manual de Industrias Alimentarias; 4ta.Edicin; Ao 2010.
Editorial MVA Editores: Madrid Vicente, Antonio Editor. Madrid - Espaa.
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XII PRCTICA N 12
DETERMINACION DE PATOGENOS EN ALIMENTOS
12.2.- Competencia:
Investiga la contaminacin patgena de los alimentos.
Mtodo:
Determinacin de la presencia de patgenos en alimentos crnicos por mtodos analticos
adaptados de los recomendados por la AOAC Norteamericana.
12.4.- Procedimiento
A.- Preparacin y conservacin de la muestra:
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MICROBIOLOGIA GENERAL
Pesar 30 g de la muestra libre de la piel, o envoltorio de acuerdo al tipo de
producto, reducirlo a trozos pequeos.
La muestra debe guardarse en bolsas hermticas con cierre (cerrarlos por
completo, para evitar la prdida de humedad).
Efectuar los anlisis antes de las 24 h de muestreado y conservar en refrigeracin
antes de su anlisis. Las muestras de alimentos naturales y procesados, se deben
seleccionar y conservar en recipientes apropiados, bolsa bien cerrada o sellada y
siguiendo las indicaciones del profesor.
B.- Preparacin de las diluciones de la muestra:
De la muestra inicial (carne molida, embutido o hamburguesa) pesar 10 g y
pasarla a un matraz que contiene 90 ml de caldo peptonado y disolver hasta
obtener una suspensin.
Considerar la concentracin de sta como 0.1 10 -1.
Luego tomamos del matraz (dilucin 10 -1) con pipeta estril 1ml de la dilucin y
vertemos en el Tubo 1 que contiene 9 ml de diluyente estril y mezclar. Esta sera
dilucin de concentracin 10 - 2.
Seguidamente tomamos 1ml del Tubo 1 con otra pipeta estril y vertemos al
Tubo 2 y mezclar. Esta sera dilucin 10 -3.
Finalmente, tomamos 1ml del Tubo 2 con otra pipeta estril y vertemos al Tubo
3 y mezclar. Esta sera dilucin 10 -4.
Seleccionar las tres ltimas diluciones para la siembra.
C.- Determinacin de la Presencia - Ausencia de Coliformes totales.
De cada dilucin: 10-2, 10-3 y 10-4 tomar 1 ml con pipetas individuales y verter al
tubo con caldo Brilla (triplicado) que contiene tubo de Durham correspondientes,
empezando por la dilucin de mayor concentracin, tapar y marcar cada tubo.
Llevar a incubacin a 37C por 24 a 48 horas.
D.- Determinacin de la Presencia de Staphylococcus aureus.
De las diluciones: 10-2,10-3 y 10-4, tomar 1 ml y sembrar por mtodo de
incorporacin en correspondientes placas vacas estriles, luego agregar 15 a 20
ml de medio de cultivo Agar Manitol salado fundido, mezclar por rotacin y dejar
enfriar hasta solidificacin completa.
Llevar a incubacin a 37C por 24 a 48 horas.
E.- Lectura e interpretacin
Leer los tubos y determinar la presencia de coliformes totales.
Leer las placas anotando la cantidad de UFC y las caractersticas de las colonias
formadas para determinar la presencia y cantidad total de UFC de Staphylococcus
aureus.
12.5.- Resultados
Realizar la determinacin de patgenos en los alimentos crnicos, anotando la presencia
de coliformes totales y la cantidad total de UFC de Staphylococcus aureus en las muestras
procesadas por Ud.. Observar y registrar los resultados, esquematizar y establecer sus
conclusiones.
12.6.- Cuestionario
Cules son los mtodos microbiolgicos aplicados en esta prctica, para determinar la
presencia y cantidad de patgenos en los alimentos crnicos?.
Qu medios de cultivo se han empleado para realizar las determinaciones de control
de la calidad de alimentos crnicos que Ud. ha muestreado?
12.7.- Referencia Bibliogrfica
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XIII. PRCTICA N 13
En la industria alimentaria se debe controlar la calidad del alimento de manera integral y con
ello garantizar la higiene tanto del propio alimento, como del personal, los equipos,
utensilios, el rea y superficies de trabajo. Esto permite reducir los factores de riesgo de
contaminacin microbiana y de otra naturaleza.
13.2.- Competencias:
Ensaya los mtodos de control de limpieza en los manipuladores de alimentos y en las
superficies de trabajo.
Mtodo:
Control microbiolgico de manipuladores de alimentos y de la higiene de superficies
aplicando mtodos adaptados de los recomendados por la AOAC.
(*) El material y los medios indicados se entregar en forma proporcional al nmero de mesa de trabajo,
calculados tomando en cuenta el total de alumnos agrupados de la siguiente forma: 5 alumnos por mesa
de trabajo y teniendo como mximo 10.
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13.4.- Procedimiento
A.- Control higinico de los manipuladores de alimentos:
El personal debe estar correctamente aseado y con la indumentaria apropiada.
Seleccionar la zona a muestrear: manos, puos, gorros, mandil. etc.
B.- Procedimientos de toma de muestra:
Tomar un hisopo estril y humedecerlo en agua peptonada con tween 20 al 5%
eliminar el exceso de medio diluyente
Hisopar la superficie seleccionada con los sentidos que indican los esquemas A, B,
C.:
A B C
Colocar el hisopo en el tubo con agua peptonada estril, dejar en reposo por 20
minutos.
Sembrar en Agar Mac Conkey, Agar Nutritivo y Agar Ogy, respectivamente: Tomar
el hisopo del tubo con agua peptonada y eliminar el exceso de agua en las paredes
del tubo.
Sembrar en uno de los medios por el mtodo de extensin, y eliminar el hisopo
(previa incineracin).
Repetir el procedimiento de siembra para cada medio con hisopo nuevo estril.
Incubar las placas con Agar Nutritivo y Agar Mac Conkey a 37C por 24 a 48 horas
y las placas con Agar Ogy a 25C por 5 - 7 das
C.- Control higinico de superficies de trabajo:
El rea de trabajo debe estar correctamente aseada y de acuerdo al procedimiento
establecido.
Seleccionar las zonas a muestrear en la superficie de la mesa de trabajo.
Aplicar el mismo procedimiento anterior para la toma de muestra, siembra e
incubacin,
D.- Lectura e interpretacin
Leer las placas anotando la cantidad de UFC y las caractersticas de las colonias
formadas para determinar la presencia de grmenes contaminantes (bacterias y/o
hongos).
13.5.- Resultados
Realizar la determinacin de patgenos durante el control de la indumentaria de los
manipuladores de alimentos y de la higiene de superficies de trabajo, anotando la cantidad
total de UFC segn el mtodo de recuento directo y las caractersticas de las mismas.
Observar y registrar los resultados, esquematizar y establecer sus conclusiones.
13.6.- Cuestionario
Cules son los mtodos microbiolgicos aplicados en esta prctica, para determinar
la presencia y cantidad de patgenos en la indumentaria de los manipuladores de
alimentos y en las superficies de trabajo?.
Qu medios de cultivo se han empleado para realizar las determinaciones de control
de los manipuladores de alimentos y en las superficies de trabajo que Ud. ha
muestreado?.
13.7.- Fuentes de Informacin.
Madrid Vicente, A. Nuevo Manual de Industrias Alimentarias; 4ta.Edicin; Ao 2010. Editorial MVA
Editores: Madrid Vicente, Antonio Editor. Madrid - Espaa.
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XIV. PRCTICA N 14
CONTROL MICROBIOLOGICO DE MEDICAMENTOS
RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS.
B. Materiales y Equipos:
C. Reactivos
Para la entrega de los medios de cultivo y materiales se considerar un aproximado
de 5 alumnos por mesa de trabajo y mximo 10 mesas de trabajo.
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14.4. Procedimiento
Obtencin de la muestra
Desinfectar el envase del producto a analizar, usar alcohol etlico de 70 y algodn. Abrir el
recipiente en forma asptica con ayuda del mechero, en caso de usar otros materiales
estos deben estar esterilizados.
Preparacin de la muestra
Diluir 10 ml de la muestra en 90 ml del agua tamponada (Para muestras con alto contenido
de lpidos cuenta con Tween 20 al 5%). Preparar diluciones seriadas 10-1; 10-2, 10-3.
Preparacin de las diluciones:
La solucin preparada anteriormente ser considerada como la dilucin 10 -1 y seguir
de acuerdo al esquema siguiente:
Dilucin
Cada tubo de 16 x 150 mm debe contener 9 ml
10-1
del diluyente con tween 20 al 5%
Matraz con la muestra
1ml
1ml
102 10-3
Tubo Tubo
1 2
1m 1m 1m
LL LL
LL
LL
LL LL
LL
L
Las placas deben estar vacas y estriles. El mtodo de siembra debe ser por incorporacin. Tomar
1 ml del tubo que contiene la mayor dilucin ( 10-3 ) y proceder a verterlo en la placa. Aadir 15 -
20 ml de AGAR TRIPTICASA SOYA a aproximadamente 46C - 48C. Mezclar por rotacin.
Realizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones (10-2 y 10-1 respectivamente)
empleando la misma pipeta y empezando por la de mayor dilucin (10-3; 10-2 y 10-1
respectivamente) Incubar a 37C por 24 - 48 h.
37 FACULTAD DE CIENCIAS
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Recuento de mohos y levadura
1m 1m 1m
LL LL
LL LL
LL LL
LL
L
Las placas deben estar vacas y estriles. El mtodo de siembra debe ser por incorporacin
Tomar 1 ml del tubo que contiene la mayor dilucin (10-3) y proceder a verterlo en la placa
.Aadir 15 - 20 ml de AGAR SABOURAUD a aproximadamente 46C - 48C. Mezclar por
rotacin. Realizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones (10-2 y 10-1
respectivamente) empleando la misma pipeta y empezando por la de mayor dilucin (10-3;
10-2 y 10-1 respectivamente) Incubar a 25C por 5 -7 das.
14.6.- Cuestionario
Cules son los microorganismos aerobios mesfilos viables?
Cul es la composicin y fundamento del agar tripticasa soya?
Cul es la composicin y fundamento del agar Sabouraud?
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XV. PRCTICA N 15
CONTROL MICROBIOLGICO DE MEDICAMENTOS II.
INVESTIGACIN DE PATGENOS
b. Materiales y Equipos:
Material Cant (*) Detalle Observacin
Esptulas chicas y planas (10) 1 x mesa Estriles Un da antes
Probeta x 10 ml (10) 1 x mesa Estriles (Los alumnos debern venir
Matraz de 125 ml (20) 2 x mesa 1 conteniendo caldo tripticasa soya un da antes de su prctica
1 conteniendo caldo lactosado para el enriquecimiento de
sus muestras)
Placas petri estriles (30) 3 x mesa 1 placa de cada medio Da de la prctica
(Se entregaran los
matraces del da anterior)
Gradillas p / tubos 16 x 150 mm 5
Mango de siembra 5
Mecheros de vidrio 5
Mango de siembra 5
Piceta con desinfectante 1
Equipos
Incubadora 1
Balanzas mecnicas 5 Uso en la primera parte
C. Reactivos
Para la entrega de los medios de cultivo y materiales se considerar un aproximado
de 5 alumnos por mesa de trabajo y mximo 10 mesas de trabajo.
( Denominacin Cant. (*) Observacin
*
Alcohol etlico 70 50 ml
) Tripticasa Soya
Caldo Volumen 90 ml x matraz. 1 matraz x mesa Un dia antes de la prtica
Caldo Lactosado Volumen 90 ml x matraz. 1 matraz x mesa
P Manitol Salado
Agar 20 ml x placa ( 1 placa x mesa ) - Plaqueado Da de la prctica
a Mac Conkey
Agar 20 ml x placa (1 placa x mesa ) - Plaqueado (Se entregaran los matraces
Agar Cetrimide 20 ml x placa ( 1 placa x mesa ) - Plaqueado del da anterior)
r
Importante.- Al finalizar la prctica, las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados, se
entregarn al Laboratorio. Los alumnos asistirn a verificar las placas y tubos, solo en los horarios
establecidos por el Laboratorio. La presentacin es obligatoria con: mandil, guantes y mascarilla.
15.4. Procedimiento
15.4.1. Acondicionamiento del rea de trabajo y del personal
Efectuar la limpieza y desinfeccin de la zona de trabajo con desinfectante. El personal
debe contar con guardapolvo, guantes, mascarillas y gorro.
39 FACULTAD DE CIENCIAS
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El procedimiento incluye nicamente la fase de aislamiento e identificacin de colonias en
medios de cultivo selectivos, no se realizan procedimientos de diferenciacin bioqumica
(medios diferenciales).
Se entregaran los matraces del da anterior para que se realice la siembra en las
placas.
Caldo Tripticasa Soya
15.5. Resultados
Observar si hay crecimiento de colonias y sus caractersticas.
Anotar los resultados.
15.6. Cuestionario
Cul es la composicin y fundamento del caldo tripticasa soya?
Cul es la composicin y fundamento del caldo lactosado?
Cul es la composicin y fundamento del agar manitol salado?
Cul es la composicin y fundamento del agar cetrimide?
Cul es la composicin y fundamento del agar Mac Conkey?