DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Y MICROBIOLOGIA

MICROBIOLOGIA MÉDICA – DOCENTE: DIANA CAROLINA VALBUENA R.

GUIA DE LABORATORIO # 4
SIEMBRAS BACTERIOLOGICAS - MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS
 Conocer la clasificación de los medios de cultivo y el procedimiento para realizar siembras bacteriológicas
 Comprender la utilidad de los cultivos como herramienta para el diagnóstico clínico microbiológico.

INTRODUCCIÓN
Para establecer el diagnóstico etiológico de la enfermedad Infecciosa, se debe partir de una muestra clínica
procedente del paciente en estudio, para ser procesada en el laboratorio de microbiología, dependiendo del
diagnóstico presuntivo consignado en la orden de solicitud expedida por el médico tratante. Para realizar la
identificación bacteriana la muestra del paciente se siembra en diferentes medios de cultivo, en condiciones
ambientales específicas, dependiendo del microorganismo que se pretenda aislar.
Los medios de cultivo empleados, son un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes, que
en condiciones indicadas favorecen el crecimiento de los microorganismos. Debido a la diversidad metabólica de los
microorganismos, la variedad de los medios de cultivo también lo es. La mayoría de los medios de cultivo se
comercializan en forma de liofilizados (polvo), que es preciso rehidratar.
Para el cultivo de bacterias, además de suministrarles sus requerimientos nutricionales, se les debe proporcionar las
condiciones ambientales necesarias para permitirles su crecimiento y multiplicación. Condiciones ambientales –
Temperatura, concentración atmosférica, presencia de O2, presencia de CO2, atmósfera de nitrógeno, entre otros
según el microorganismo.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Por su consistencia
• Medio de cultivo líquido, medio de cultivo semisólido y medio de cultivo sólido
Por su función o fines especiales
• Medios nutritivos (simples): con nutrientes mínimos para que las bacterias poco exigentes desarrollen.
• Medios nutritivos enriquecidos: son medios simples a los que se añaden ciertos productos a manera de suplemento
nutritivo que permiten el aporte de factores de crecimiento.
• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que por su composición química favorecen o permiten la
multiplicación de unos microorganismos, inhibiendo parcialmente la de otros.
• Medios selectivos: permiten el crecimiento sólo de la especie que se desea aislar, para lo cual se les agrega
colorantes bacteriostáticos: Azul de metileno, Verde malaquita, Verde brillante.
• Medios diferenciales: contienen sustancias nutritivas y un indicador de pH que permite detectar las reacciones
bioquímicas específicas de los microorganismos.
• Medios de transporte

Técnicas de inoculación y siembras

Las técnicas para inocular las muestras en los diferentes medios de cultivo varían, dependiendo del objetivo. Las asas
bacteriológicas se emplean como herramienta para la siembre bacteriana. Pueden ser usados otros elementos como
hisopos o escobillones.

Esterilización del Asa Bacteriológica

Las asas bacteriológicas son alambres unidos a un mango que permite
manipularlas. El alambre puede ser de diferente material, (ferro níquel,
nicromo, platino, etc.) y la forma (recta, curva, etc.,) dependiendo de la
necesidad. Para su esterilización se utiliza calor seco (llama), y se procede
así: - Prender el mechero - Tomar el asa bacteriológica por el mango y
colocarla en posición vertical, sobre la llama del mechero, hasta que el
alambre quede al rojo vivo. - Dejar enfriar o enfriar dentro del medio de
cultivo, antes de tomar las colonias.
https://compositae.files.wordpress.com/2013/10/manualdepractica
s.pdf
 Siembra en medios de cultivo líquido- caldos
-Tubo de Ensayo
1. Siembra en Medio Líquido (Caldo): Obtener
la muestra con asa bacteriológica curva o
escobillón - Introducir en el caldo de cultivo,
haciendo movimientos de rotación.
2. Siembra en Agar Inclinado (pico de flauta):
Obtener la muestra con asa recta - Hacer
estrías en la superficie del medio
3. Siembra en Agar semisólido (taco): Obtener
la muestra con asa recta - Hacer una picadura
por el centro, hasta la mitad del medio.

Siembra en medios sólidos- Caja de Petri

1. Siembra por agotamiento:
El objetivo de esta técnica es diluir la muestra de tal
manera que al final se obtenga colonias separadas para
poder iniciar el estudio de identificación y sensibilidad a los
antimicrobianos.
1. Obtener la muestra con escobillón o asa y suspenderla
en un extremo de la placa de agar, haciendo estrías (líneas)
de un extremo a otro (primer cuadrante).
2. Flamear el asa, enfriar en el extremo e iniciar estrías
desde el cuadrante primero y extenderlas hasta el
cuadrante dos.
3. Flamear el asa, enfriar en el extremo e iniciar estrías
desde el cuadrante dos y extenderlas hasta el cuadrante
tres.
4. Flamear el asa, enfriar en el extremo e iniciar estrías
desde el cuadrante tres y extenderlas hasta el cuadrante
cuatro.
Siembra en cuadrícula: El objetivo de esta técnica es hacer
recuento de unidades formadoras de colonias (UFC)
1. Obtener la muestra con asa calibrada o pipeta
automática que dispense una cantidad exacta y distribuirla
con el asa en línea recta por todo el centro
2. Hacer estrías de extremo a extremo en sentido contrario
a la línea de inóculo
3. Girar la placa y hacer estrías de extremo a extremo, en
sentido contrario a las anteriores

Materiales
 Asas Bacteriológicas curva y recta  Medios de cultivo -Sólido en caja: Agar Nutritivo,
 Mechero de gas Agar MacConkey. Agar EMB, Agar Hektoen, Agar
 Cepas Bacterianas en cultivo puro TSA, Agra sangre, agar chocolate, etc.
 Sólido en tubo: Recto e inclinado
 Medios líquidos (caldos)
PROCEDIMIENTO
1. Siguiendo las instrucciones dadas por la Docente al iniciar la correspondiente práctica y con el material asignado,
realice el procedimiento de siembra en medios sólidos y líquidos. La lectura previa de la guía, también le permitirá
comprender el procedimiento a desarrollar.
2. Luego de la siembra en los medios entregados, deberá incubar las cajas y tubos a 37°C por un tiempo de 24 a 48h
(máximo 72). Pasado ese tiempo, deberá asistir al laboratorio a registrar las evidencias y proceder hacer el
correspondiente análisis de resultados (deberá ser de acuerdo al microorganismo asignado y el medio de cultivo
empleado en cada siembra)
 Consulta pre Laboratorio
1. ¿Qué son los medios de transporte? Mencione ejemplos de situaciones en donde son usados. Relacione
una imagen.
2. ¿Cuál es la finalidad de emplear medios de cultivo como herramienta para el diagnóstico microbiológico?
3. ¿Cuánto tiempo tarda el laboratorio de Microbiología en entregar un resultado definitivo de un cultivo?
Mencione ejemplos de tiempos diferentes
4. Consulte los medios de cultivos específicos y condiciones adicionales para el aislamiento de los siguientes
microorganismos
Agente Etiológico Medio de Cultivo Condiciones adicionales
Haemophilus influenzae
Streptococcus pneumoniae
Vibrio cholerae
Mycobacterium tuberculosis
Bordetella pertussis
Neisseria gonorrhoeae

Consulta post laboratorio

1. ¿Qué es el Hemocultivo y cómo se realiza el proceso de siembra? ¿Tiempo de entrega de resultados?
2. ¿Qué tipo de siembra se emplea para urocultivo? ¿Tiempo de entrega de resultados?
3. Diseñe el reporte de un cultivo microbiológico de una muestra clínica cualquiera Ej. Cultivo se secreción
ótica, cultivo de líquido peritoneal, etc). Si es posible incluya un reporte de un familiar o un reporte
suministrado por un profesional de la salud (no es necesario que tenga los datos personales del paciente,
la institución ni del profesional que procesó la muestra)

 Actividad durante y después de la práctica – Resultados y discusión

Nombre de la especie sembrada:

Medio de cultivo empleado: Tipo de Siembra:

Características del medio Componentes, usos Cambios observados y justificación

original (Imagen/ n/foto)
Nombre de la especie sembrada:
Medio de cultivo empleado: Tipo de Siembra:

Características del medio Componentes, usos Cambios observados y justificación

original (Imagen/foto)

Nombre de la especie sembrada:

Medio de cultivo empleado: Tipo de Siembra:

Características del medio Componentes, usos Cambios observados y justificación

original (Imagen/foto)
 Nombre de la especie sembrada:
Medio de cultivo empleado: Tipo de Siembra:

Características del medio original Cambios observados y justificación

Componentes, usos

Nombre de la especie sembrada:

Medio de cultivo empleado: Tipo de Siembra:

Características del medio original Cambios observados y justificación

Componentes, usos

BIBLIOGRAFIA
 FREEMAN. Bob; Microbiología de Burrows. Editorial Interamericana. México. / MADIGAN, Martinko and PARKER, J. Biología
de los microorganismos. Editorial Prentice Hall.2000.
 DELGADO, Alberto. Manual de Laboratorio Clínico Básico. Editorial Mc Graw Hill. Santafé de Bogotá. 1999
 López-Jácome, L. E., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G., & Franco-Cendejas, R.
(2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Laboratorio de Infectología, Centro Nacional de Investigación
y Atención a Quemados (CENIAQ), Instituto Nacional de Rehabilitación, 3, 10-18.
 Vázquez, C., Martín, A., de Silóniz, M., & Serrano, S. (2011). Técnicas básicas de Microbiología. Observación de
bacterias. REDUCA (Biología), 3(5).