UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Escuela Profesional de Ciencias Biológicas

ASIGNATURA
BIOQUÍMICA

SEMESTRE ACADÉMICO
2023-I

TÍTULO
ENZIMAS DE ÓXIDO REDUCCIÓN DETERMINACIÓN DE LA RESPIRACIÓN CELULAR MEDIANTE EL MÉTODO
MANOMÉTRICO

DOCENTE
Woll Tosso, Patricia Gloria

INTEGRANTES
Gonzales Cañahuire, Ailin Fiorela - 22100028
Junco Flores, Alonso - 22100098
Morosini Inga, Paola - 22100099
Roca Melgarejo, Ana Bethsabe - 20100048
Salinas Inga, Abel Arturo - 22100077
Valencia Saavedra, Zinnia Mayrut - 22100111
FECHA DE ENTREGA
04/06/2023

LIMA-PERÚ
 III. INFORME

El informe deberá contener una carátula y el desarrollo de los siguientes puntos:

1. Elabore un mapa conceptual de los fundamentos teóricos

2. Desarrolle los siguientes temas, relacionados a las experiencias realizadas:

Experiencia 1. El azul de metileno como aceptor de electrones

En el video https://youtu.be/zfUDsxD4ZhY :

a. ¿Qué reactivos contiene la botella y por qué se decolora?

La botella contiene hidróxido de sodio, azul de metileno → permite ver a manera del cambio de

color cuando se ocxida o reduce, , glucosa (pertenece a los azúcares reductores).

 El azul de metileno se reduce al tener contacto con la glucosa, este no tiene presencia de oxígeno

por eso es incoloro, por teoría sabemos que cuando es incoloro se ha reducido el azul de metileno, a pesar

que mezcle y tenga presencia de oxígeno no es suficiente.

b. ¿Por qué cuando se sacude la botella vuelve a tener el color azul?

El azul de metileno cuando se adhiere a un agente reductor en este caso la glucosa, el agente

reductor se oxida. El azul de metileno es un compuesto reversible así como se oxida se reduce.

Se pone azul cuando se oxida en presencia de oxígeno, en el experimento al mover tiene contacto

el oxígeno con el metileno por lo tanto este se oxida. Siempre y cuando el el azul de metileno este en

contacto con el oxígeno será azul, así como paso que la parte baja del experimento cambió de color

(transparente) la parte de ariiba, la superficie estuvo azul.

En el video https://www.youtube.com/watch?v=xEgDFrf-Pho

a. ¿Qué reactivos contiene el frasco y por qué no se decolora?

Contiene hidróxido de sodio, sacarosa y azul de metileno, no se decolora debido a que la sacarosa

es un disacárido y este tiene que ser hidrolizado para que el azul de metileno se reduzca y así podamos

tener una solución incolora.

b. ¿Qué se forma en la primera etapa?

En la primera etapa observamos que el azul de metileno no se reduce por lo que la solución esta

de color azul. Cuando en la solución se le agrega la glucosa esta sí reacciona con el azul de metileno,

hasta el punto de reducirlo y llegar a decolorar la solución.

c. ¿Cómo se llega hasta la reducción del azul de metileno?

En el video, a diferencia de la anterior solución a la sacarosa se le agrega unas gotas de limón, a

esta solución en un vaso precipitado se la lleva a calentar, así con calor y en un medio ácido, así

conseguiremos hidrolizarla en glucosa y fructosa. Al agregar el azul de metileno en esta ocasión sí se

llevará a cabo la oxidación dando un aspecto incoloro a la solución.

Experiencia 2. Actividad de la enzima succinato deshidrogenasa.

a. ¿Qué papel tiene el tubo B?

El tubo es para comparar con los otros tubos 1,2 y 3 donde se puede apreciar la enzima succinato

deshidrogenasa, tanto el inhibidor que se usó como el malonato y las 3 gotas de aceite mineral que se

utilizó y el homogeneizado de hígado. Por el cual sirve para comparar la interacción, reacción de estos en

cada uno de los tubos.

b. ¿Por qué toma color nuevamente el tubo 1?

El tubo 1 después de cierto tiempo, se observa la forma reducida del azul de metileno, o sea

incoloro, pero en la parte de la superficie se observa un tono azul y esto es debido al oxígeno que es del

ambiente. A parte se observo que si se mueve el tubo se torna de color azul debido al oxigeno que se

genero por el movimiento.

c. ¿Por qué se coloca aceite mineral en los tubos 2 y 3?

El aceite al ser un líquido denso puede dificultar la entrada del oxígeno. Es por ello que cuando

los tubos que contienen azul de metileno reducido (incoloro), el aceite va a ayudar a manifestar esta forma

reducida. Ademas se sabe que el azul de metileno interacciona rapidamente cuando esta en contacto con

el oxigeno y tornarse de color azul, por ello el aceite impide eso y manifestar lo contrario, la forma

reducida.

d. ¿Qué tipo de inhibición produce el malonato?

El malonato tiene una inhibición competitiva, ya que el malonato y el succinato compiten por la

enzima, ya que tienen una estructura similar.

e. ¿Cuál sería el resultado de la experiencia si en lugar del azul de metileno se emplea el 2, 6

diclorofenol indofenol?.
 Primero se sabe que el 2,6 diclorofenol indofenol es un indicador tipo redox. Por lo tanto se

reduce y será incolora si se manifiesta así y cuando se oxida se vuelve azul.

f. ¿Cuál sería el resultado de la experiencia si se hubiera utilizado tejido cardiaco? Explique

el porqué.

No se podría apreciar las reacciones, ya que es músculo y hay mayor gasto energético.

g. Analice el siguiente vídeo:

https://www.youtube.com/watch?v=1GQel6aTZ9k y luego responda:

- Explique las reacciones que ocurren en cada tubo.

Tubo b: Este no tendrá ninguna reacción, ya que no se utilizó sustrato y se mantendrá el color

azul que se usó.

Tubo 1: Presencia de una mayor cantidad de buffer de sodio, por lo cual se mantendrá constante

el pH.

Tubo 2: Tiene un tono claro al igual que el tubo 1 y 3, pero menor cantidad de buffer de sodio

(intensidad diferente)

Tubo 3: Tono claro al igual que el 1 y 2 y menor cantidad tanto del tubo 1 y 2 de buffer de sodio.

Tubo 4: En este tubo a diferencia de los demás se añadió malonato de sodio que funciona como

inhibidor de la reacción y por eso se ve un tono más oscuro.ç

Tubo 5:Se ve un tono medio, y nos damos cuenta que no tiene malonato de sodio al igual que el

tubo 1, 2 y 3, pero si tiene oxalato de sodio a diferencia del tubo 4, por lo tanto se le ve un color medio

incoloro.

- ¿Qué papel cumple el oxalato de sodio?

El oxalato de sodio es un agente reductor (Redox)

 Experiencia 3. Actividad de la enzima citocromo c oxidasa

a. ¿Qué papel tiene el tubo B1 y B2?

Estos tubos son muestras de control, se usarán para comparar con los resultados obtenidos de la

otra muestra en este caso el tubo 1.

b. ¿Por qué no hubo reacción en los tubos B1 y B2?

En estos tubos no se da la reacción porque en B1 no hay sustrato y en la B2 no hay enzima.

c. Explique el fundamento de la reacción ocurrida.

En el tubo 1 sí ocurre la coloración marrón debido a que aquí sí se encuentran el sustrato y la

enzima.

Experiencia 4. Determinación de la respiración celular mediante el método manométrico.

a. ¿Qué es un manómetro?

Un manómetro es un instrumento utilizado para medir y mostrar la presión de un fluido en un

sistema cerrado, como un gas o un líquido. Consiste en un tubo conectado al sistema de interés, que

contiene un fluido (generalmente mercurio o aceite) y una escala graduada para indicar la presión en una

unidad de medida, como psi (libra por pulgada cuadrada) o bar.

Cuando se aplica presión al sistema, el fluido dentro del manómetro se desplaza, lo que se refleja

en la escala graduada. Esto permite al usuario conocer el valor de la presión presente en el sistema. Los
manómetros pueden tener diferentes diseños y rangos de medición, dependiendo de su aplicación

específica.

Los manómetros se utilizan en una amplia variedad de industrias y aplicaciones, desde la

industria automotriz y la fabricación hasta la ingeniería y la monitorización de sistemas de fluidos. Son

especialmente útiles para garantizar la seguridad y el rendimiento de los equipos y sistemas que operan

bajo presión, ya que proporcionan una indicación visual de la presión interna.

b. ¿Cómo es un manómetro de tubo en U?

Un manómetro de tubo U es un tipo de manómetro que utiliza la forma de un tubo en forma de U

lleno de un líquido, generalmente mercurio o agua, para medir la diferencia de presión entre dos puntos.

El manómetro de tubo U consta de un tubo en forma de U, generalmente de vidrio o plástico

transparente, que está abierto en ambos extremos y tiene una forma similar a la letra "U" mayúscula. El

tubo se llena parcialmente con el líquido de medición, dejando espacio para que el líquido se mueva en

respuesta a las diferencias de presión.

Para utilizar el manómetro de tubo U, se conecta uno de los extremos del tubo a la fuente de

presión que se desea medir, mientras que el otro extremo se deja abierto o se conecta a la referencia de

presión. El líquido en el tubo se desplazará hacia arriba o hacia abajo en respuesta a las diferencias de

presión entre los dos puntos, creando desequilibrio de altura en los brazos del tubo en forma de U.

La diferencia de altura entre los brazos del tubo se puede medir utilizando una escala graduada

adjunta al tubo o mediante la lectura de la posición del líquido en relación con una marca de referencia.

La diferencia de altura proporciona una indicación de la diferencia de presión entre los puntos de
medición.

El manómetro de tubo U es un dispositivo simple pero efectivo para medir la diferencia de

presión en aplicaciones como sistemas de plomería, HVAC (calefacción, ventilación y aire

acondicionado), sistemas hidráulicos, entre otros. Sin embargo, cabe destacar que en muchos casos, se

utilizan dispositivos electrónicos más precisos y digitales para medir la presión en aplicaciones modernas.

c. Fundamente el rol que tiene cada uno de los reactivos empleados en el experimento.

El hidróxido de potasio (KOH) cumple con la función de atrapar el dióxido de carbono (CO2)con

el cual reacciona y se convierte en carbonato de potasio (K2CO3) KOH + CO2 → K2CO3 + H2O ,

entonces así libera agua (H2O), sin embargo no existe ninguna reacción química en el tubo con las perlas

de plástico.

d. Calcule el consumo de oxígeno en mm3, en cada respirómetro, considerando que el

diámetro interno del tubo del manómetro mide 1 mm, en el respirómetro 1, el líquido en el interior

del manómetro avanzó 30 mm y en el respirómetro 2 avanzó 0,5 mm. ¿Por qué en uno de los

respirómetros hubo más consumo de oxígeno que en el otro?

3
Consumo de O2 (𝑚𝑚 ) = volumen desplazado del líquido

3
- Respirómetro 1: ((0,5 mm)2 * 3,14 * 30 mm = 23.55 𝑚𝑚

3
El consumo de O2 en el respirómetro 1 fue de 23.55 𝑚𝑚
 3
- Respirómetro 2: ((0,5 mm)2 * 3.14) * 0,5mm = 0.3925 𝑚𝑚

3
El consumo de O2 en el respirómetro 2 fue de 0.3925 𝑚𝑚

La distinción entre los dos tubos de ensayo radica en que uno contiene materia viva que requiere

oxígeno para su supervivencia, lo cual ocasiona cambios en el tiempo dentro del tubo U. Este fenómeno

es conocido como respiración celular. Por otro lado, el otro tubo contiene materia inerte, como perlas de

plástico, que no necesita oxígeno.

e. Analice el vídeo https://www.youtube.com/watch?v=RRRzC1yohHY Señale las diferencias

con la experiencia desarrollada durante la práctica.

Una de las diferencias notables se encuentra en los tubos de los manómetros, donde se emplea un

plástico transparente con líneas visibles para observar los cambios en su interior. Además, poseen un tubo

adicional que facilita la colocación de la tapa sin alterar la presión, y por ende, los niveles del líquido.

Otro contraste se evidencia en los materiales vivos utilizados en el experimento. Mientras que en

nuestro caso empleamos trigo, en el vídeo se utilizan arvejas germinadas.

En el experimento del vídeo, se inicia colocando un algodón en ambos tubos para impedir la

absorción de gases. Luego se añade KOH y se cubre con otro algodón. A partir de ahí, el procedimiento

para insertar los materiales en los tubos es similar. Finalmente, se asegura el tubo extra para evitar la fuga

de gases y se procede a la absorción del experimento.

 IV. CUESTIONARIO

1) Si en la experiencia 2 colocara el doble de homogeneizado de hígado de pollo, ¿Qué

resultados hubiera obtenido? ¿Por qué?

Habría un aumento de la cantidad enzimática, lo que haría variar el factor del tiempo de

coloración de los tubos y la actividad inhibidora del malonato y del succinato.

2) ¿Qué mecanismo de acción se ha propuesto para el efecto de las atpeninas,

inhibidoras de la succinato deshidrogenasa, sobre el complejo II? (consultar:

https://www.pnas.org/content/pnas/100/2/473.full.pdf

Las atpeninas pueden bloquear la transferencia de electrones entre la enzima y la ubiquinona

(UQ) al unirse a una región que se superpone parcialmente con el sitio de unión fisiológico de UQ pero no

son capaces de bloquear por completo la transferencia de electrones desde los centros de hierro-azufre en

la subunidad Ip a los tintes solubles en agua.

V. REFERENCIAS

- Chance, B. (1957) Techniques for the assay of respiratory enzymes. En “Methods in

Enzymology” Volumen 4 (Editado por S.P. Collowick y N.O. Kaplan). Academic Press; pp. 273-329 New

York.

- Harper (2012) Bioquímica ilustrada. Editor: Murray R. y colaboradores. Edit. McGraw Hill. 29a
Edic.

- Holloszy, J. (1987) Biochemical adaptations in muscle. Effects in Mitochondrial Oxygen Uptake

and Respiratory Enzyme Activity in Skeletal Muscle. JBC, Vol. 242, Nº 9, pp. 2278- 2282, 1987.

- Vincent, P. (1981) El cuerpo humano. Editorial Reverté, pp. 243-245..

Material complementario:

- Reacciones de oxido reducción (5.02 min) https://youtu.be/xdupto7ZyFY - Reacciones de oxido

reducción (13.36, ver los primeros 4 min)

https://youtu.be/5haeqvGx7_M

- Reacción redox “botella azul” (1.40 min) https://youtu.be/zfUDsxD4ZhY - Extración de

enzimas mitocondriales (6 min)

https://www.youtube.com/watch?v=x5PDqW41GeA

- Respirómetros y respiración (14 min)

https://www.youtube.com/watch?v=RRRzC1yohHY

- Repaso de respiración celular (14.18 min)

- https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/cellular-respirati

on-ap/a/intro-to- cellular-respiration-and-redox

- Pantigoso Flores, C. Nota de clase. El respirómetro de O. Warburg (Lectura sobre Otto Warburg

y la creación de su manómetro).

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