Universidad Politécnica del Estado de

Morelos
Ingeniería en Biotecnología
Materia: Bioseparaciones
Reporte de practica de precipitación de
proteínas
Grupo: 8º B.
Alumnos:
• Emmanuel Torres Fernández
• Jesús Antonio Ruiz Romero
• Rodolfo Alfredo Montes de Oca
Contenido
Introducción ........................................................................................................................................ 2
Objetivos ............................................................................................................................................. 3
Materiales ........................................................................................................................................... 4
Metodología ........................................................................................................................................ 4
Resultados y Discusión ........................................................................................................................ 6
Conclusiones y recomendaciones ....................................................................................................... 8

Introducción
PROTEÍNAS
Las proteínas están constituidas por largas cadenas polipeptídicas, en donde los
aminoácidos están ubicados en una secuencia determinada y esto corresponde a una
estructura primaria de una proteína.
La estructura secundaria se refiere a la extensión en que un polipéptido o cadena posee
una estructura helicoidal. Una espiral diestra o ά-hélice se estabiliza mediante la
presencia de enlaces hidrógeno entre los grupos carbonilo e imido de los enlaces
peptídicos.
La estructura terciaria se refiere al modo como la cadena polipeptídica se curva para
formar la estructura estrechamente plegada y compacta de las proteínas globulares, la
estabilización de esta estructura se atribuye a las diferentes reactividades asociadas a
los grupos R de los residuos aminoacídicos tales como: interacciones electrostáticas
enlaces hidrógenos, interacciones hidrofóbicas, unión disúlfuro.
La estructura cuaternaria pone de manifiesto cómo se disponen en el espacio las
cadenas, por ejemplo: la enzima fosforilasa contiene dos subunidades idénticas que por
separado son catalíticamente inactivas, pero cuando se unen para formar un dímero,
constituyen la enzima activa. 2
PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS
Las propiedades biológicas de una proteína, así como parte de sus propiedades
físicoquímicas,
dependen de su estructura. Cuando estas estructuras se alteran o se
destruyen, aunque no haya ruptura de las cadenas polipeptídicas, la proteína pierde sus
características funcionales y se alteran sus propiedades físico-químicas; este proceso
se denomina desnaturalización.
El término desnaturalización tiene una variedad de significados, según: la proteína sea
o no oligomérica, la pérdida de la conformación sea parcial o completa y la actividad
biológica se pierda o no. En algunos casos el proceso es irreversible, en otros, se puede
restaurar la conformación nativa y la actividad biológica.
PRECIPITACIÓN POR SOLVENTES ORGÁNICOS
La adición de solventes orgánicos neutros miscibles con el agua, tales como: metanol,
etanol o acetona, disminuye la solubilidad en agua de la mayor parte de las proteínas
globulares de tal manera que precipitan de la solución. La solubilidad de una proteína a
un pH y fuerza iónica determinados está en función de la constante dieléctrica del medio.
El agua tiene constante dieléctrica relativamente alta (ε=80 a 20º C) por lo cual en
solución acuosa disminuye la interacción entre las moléculas proteicas (debido a sus
grupos cargados) mientras aumenta la interacción entre las proteínas y el agua, esto
favorece la solubilidad de las proteínas.
Elaboró: Luis Hernández Alvarez Revisó:
Los solventes orgánicos tales como el metanol, etanol, acetona, tienen constantes
dieléctricos bajas (32, 25 y 19 respectivamente a 20º C) de modo que al agregarlos a
una solución acuosa de proteínas baja la constante dieléctrica del medio, lo que
favorece la interacción de los grupos con carga eléctrica de la proteínas y por lo tanto
de su precipitación.
PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS POR FOMACION DE SALES INSOLUBLE
Las proteínas son deshidratadas por el exceso de sal, sulfato de amonio, una vez
deshidratada la proteína las regiones hidrofóbicas tiene oportunidad de interaccionar
entre ellas y formar el precipitado.
También precipitan por la acción de ciertos ácidos como el ácido Tricloroacético, ácido
túnqstico, ácido molíbdico y otros; también las proteínas pueden precipitar por la acción
de ciertos iones metales pesados como Hg, Zn, Cd, Cu, y Pb. Todos estos agentes
hacen precipitar las proteínas por que forman con ellas sales insolubles.
EFECTO DE LA TEMPERATURA
Dentro de un intervalo de temperatura entre 0ºC y 40ºC aumenta la solubilidad de las
proteínas con el aumento de temperatura. Por sobre 40ºC a 50ºC la mayor parte de las
proteínas son cada vez más inestables y comienzan a desnaturalizarse, por lo común
con pérdida de solubilidad.
La desnaturalización puede conducir a la coagulación de la proteína, es decir, a su
agregación y precipitación irreversible. La coagulación es un criterio para reconocer la
desnaturalización de una proteína. La formación de un coagulo blanco, insoluble,
cuando se hierve la clara de huevo es un ejemplo común de desnaturalización térmica.
Los fraccionamientos de proteínas por lo general se realizan a 0°C, ya que la mayor
parte de las proteínas son estables a bajas temperaturas.
REACCIONES PARA EL RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
Las reacciones de coloración para el reconocimiento de proteínas se basan en muchos
casos en la identificación de grupos estructurales de algunos de sus aminoácidos.
1. Reacción de Biuret
La prueba de Biuret (sulfato cúprico en medio alcalino) es positiva para todos los
compuestos que tengan dos o más uniones peptídicas. La coloración púrpura de una
reacción positiva se debe a un complejo de coordinación entre el Cu+2 y cuatro átomos
de nitrógeno proveniente de enlaces peptídicos.
2. Reacción Xantoproteíca o reacción del ácido nítrico.
En esta reacción se obtiene una coloración amarilla (griego XANTHOS=amarillo). El
ensayo es positivo para las proteínas que llevan el anillo bencénico (aromático) como la
tirosina, triptófano y fenilalanina. El color amarillo se debe a la formación de un
compuesto aromático nitrado. Esta reacción explica la aparición de una coloración
amarilla al caer gotas de ácido nítrico sobre la piel.

Objetivos
Observar la acción de los solventes orgánicos sobre las proteínas.
Observar la precipitación de las proteínas por formación de sales.
Observar la acción del calor sobre las proteínas
Materiales
Tabla 1 Materiales a ocupar

Tabla 2 Reactivos a ocupar

Metodología
Reacciones de identificación

A) La reacción se desarrolla de acuerdo a la tabla 3

Tabla 3

B) La reacción se desarrolla de acuerdo a la tabla 4

Tabla 4
Adición de Solventes

Disponga de tres tubos de ensayo de acuerdo a la tabla 5

Tabla 5

Precipitación por salado con sulfato de amonio.

a) Vierta 2.5 ml de solución de clara de huevo en un tubo de ensayo.

b) Agregue 2.5 ml de solución saturado de sulfato de amonio. Observe

c) Filtre

d) Vierta 3 ml del filtrado en otro tubo de ensayo.

e) Añada sulfato de amonio hasta saturar la solución. Observe

f) Indique sus observaciones

Acción del calor sobre las proteínas

a) En un tubo coloque 8 ml de solución de albúmina y caliente en baño

termo regulado a 37 ºC.

b) En un tubo de ensayo, coloque 10 ml de solución de albúmina y caliente en un

mechero con cuidado la parte superior hasta que hierva, compare con la parte

inferior
Resultados y Discusión

Figura 1 Reacciones de identificación parte A

En la figura 1 podemos observar la reacción de la albumina y la leche al reactivo de Biuret, en el tubo

2 se observa que la albumina y el reactivo de Biuret ni siquiera se alcanzar a mezclar claramente se
observan 2 fases de distintos colores amarillo y morado. Sin embargo, en el tubo 3 se mezcla la leche
y el reactivo resultando en un reactivo con un color morado muy tenue. El reactivo, cambia a violeta
en presencia de proteínas debido a los enlaces peptídicos entre el Cu y Nitrógeno, y vira a rosa
cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. Reconociendo que en el tubo 2 si hay
presencia de proteína en este caso albumina y en el tubo 3 igual dio positivo a proteínas, en este
caso caseína que es la proteína que se encuentra en mayor concentración en la leche.
Figura 2 Reacciones de identificación parte B

Al adicionar ácido nítrico a las muestras, los tubos 2 y 3 muestran una separación de fases, se forma
un precipitado con respecto al control negativo que es el tubo 1. Esta precipitación se debe porque
el pH cambio debido al ácido nítrico. La albumina del tubo 2 reacciona al acido formando un color
amarillo y nos indica que la albumina contiene aminoácidos aromáticos como la tirosina, triptófano
y fenilalanina.

Figura 3 Adición de solventes tubos 1,2 y 3 de izquierda a derecha(metanol, etanol, acetona)

En los tubos 1 y 2 se observa opalescencia mientras que en el 3 se forma un precipitado que es el

que tiene acetona ver figura 3. De acuerdo a la literatura los solventes orgánicos tales como el
metanol, etanol, acetona, tienen constantes dieléctricos bajas (32, 25 y 19 respectivamente a 20º
C), estas favorecen la interacción de los grupos con carga eléctrica de la proteínas y hace precipitar
a la albumina figura 3.

Figura 4 Acción de calor sobre las proteínas

En la figura 4 se muestra la acción de calor sobre las proteínas en la figura izquierda, la solución de
albumina se calentó a 37°C, pero no se observó ningún cambio en el tubo, por otro lado el tubo de
la derecha se calentó en la parte superior con la ayuda del mechero y en este se observa una cocción
en el lugar donde se calentó.

Las proteínas son inestables a temperaturas altas y se desnaturalizan a causa de esta, en la figura 4
se muestra como se forma un coagulo de color blanco y es la albumina precipitada y
desnaturalizada. Y en la figura del caso izquierdo no precipita la albumina porque las proteínas son
estables en un rango de temperaturas de 0-40 °C

Conclusiones y recomendaciones
Gracias a la prueba de Biuret se confirmó la presencia de albumina en el huevo y que las leches
tienen proteína y por la prueba del ácido cítrico se demostró que la albumina presenta aminoácidos
con anillos aromáticos.

Se demostró que el aumento de temperatura puede desnaturalizar a las proteínas al igual que
ciertos solventes orgánicos.