Universidad

UNIVALLE

PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO Y
ALMACENAJE

Facultad: Facultad de Ciencias Y

Tecnología
Carrera: Ingeniería en Industrias
Alimentarias
Nombre: Rut Eunice Orellana
Cayo de la Práctica: Práctica
Número
#2
Título de la Práctica: PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO Y ALMACENAJE

Materia: Microbiología
Docente: María Inés
Abecia
Fecha: 2 de octubre del 2022

CBBA-TIQUIPAYA
INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
lejos de todo microorganismo contaminante, pues el medio de cultivo es un compuesto que tiene
los nutrientes, así teniendo las condiciones adecuadas para que tengan un crecimiento. Para
preparar el medio de cultivo leímos las instrucciones donde vimos la cantidad necesaria que
necesitaríamos, luego era de hacer una regla de tres, obteniendo las cantidades obtenidas pesamos
en un vidrio de reloj, y lo ponemos en el matraz con agua destilada. Luego lo Autoclavamos, y
plaqueamos en las cajas Petri.
En esta práctica observamos su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Para que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo debe reunir una serie de condiciones como son:
temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad.

FUNDAMENTO TEORICO
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio con el objetivo de hacer crecer un
microorganismo como bacterias, virus y hongos, aunque también se utilizan para el crecimiento
de células o tejidos. Principalmente consta de una superficie sólida, semisólida o de una solución
liquida con nutrientes y condiciones favorables de pH y temperatura para el crecimiento de lo
que queramos. También es necesario controlar la presencia o no de oxígeno o el grado de
humedad. Una curiosidad es que, si queremos
“cultivar” virus, necesitaremos células vivas para
que estas puedan infectarlas y multiplicarse.

En la gran mayoría de cultivos sólidos se utiliza

el Agar como agente gelificante, ya que no es
reactivo con otros compuestos químicos y la gran
mayoría de microorganismos no son capaces de
degradarlo. Los medios se pueden clasificar de
varias formas:

 Según su consistencia: Sólido, Líquido,

Semisólido.

 Según su función: medio general, medio diferencial, selectivo, nutritivo, mínimo,

transparente.

 Según su origen: naturales, sintético, semisintético.

 Según su formulación: químicamente definidos, complejos.

OBJETIVOS
GENERAL: Preparar medios de cultivo para observar y analizar el
crecimientopçmicrobiano que se dará, con los medios de cultivo: Agar
Nutritivo, EMB, Macconkey, S-s, Potato dextrosa.
 ESPECÍFICO:  Analizar que enterobacterias se encontró en los medios:
Salmonela, Shigela, Escherichia coli
 Objetivo General de la Salchicha: Plantar el medio de cultivo, con las
condiciones necesarias, con los medios de cultivo: Agar Nutritivo, EMB,
MACCKONKEY, S-s, Potato dextrosa.
 Objetivo Específico de la Salchicha: Observar y analizar cuáles fueron las
posibles enterobacterias que se activaron y contienen.

MATERIALES
Materiales Cantidad Unidad Imagen

Papel filtro 1 Hoja

Autoclave 2 Unidades

Mechero Bunsen 5 Unidades

Hornillas 2 Unidades

Papel sábana 2 Pliegos

Papel aluminio 1 Rollo

Agar Nutritivo 1 Frasco

Agar EMB 1 Frasco

Agar Macconkey 1 Frasco

Agar Potato 1 Frasco

Dextrosa

Agar Ss 1 Frasco

Caldo Peptona 1 Frasco

Espátula 4 Unidades

Cajas Petri 60 Unidades

Tubos de vidrio 30 Unidades

con rosca
Frascos de Schott 5 Unidades

Erlenmeyer 250ml 15 Unidades

Balanza 2 Unidades

Probetas 4 Unidades

Pipetas 35 Unidades

Fósforo 1 Caja

Marcador para 3 Unidades

vidrio

Cordel 1 Rollo

Agua destilada 5 Piseta

Alcohol 5 Piseta
PROCEDIMIENTO.
1. Leemos las instrucciones para hacer las cantidades requeridas para nuestros medios de cultivo.
2. Realizaremos estos cálculos.

3. Lo `pondremos en nuestro Erlenmeyer nuestras cantidades con agua destilada.

4. Para esterilizar lo llevamos en la autoclave donde debe alcanzar 121ªC a una atmosfera de presión
por 15.
5. Una vez completado la esterilización, el agar se deja enfriar a cerca de 50ºC antes de distribuirse
en las placas Petri individuales (por lo común 25 ml de agar fundido por placa).
ESTERILIZACIÓN EN EL AUTOCLAVE.
1. Las cajas Petri llevaremos a esterilizar: tomamos 5 cajas y filaremos una encima de otra, después
tomamos el papel sabana y lo envolvemos con ello como si fuera un regalito, donde lo
amarraremos con el cordel. Esto lo llevamos a la autoclave para esterilizarlo
2. Las pipetas separaremos por color: amarillo, naranja, rojo. Donde tomando el papel sábana lo
envolveremos muy bien cómo se envuelve un brazo gitano y amarraremos con el cordel ambos
extremos sin que tenga orificios, y con un marcador indicaremos la dirección de la boquilla. Y esto
estará listo para para ser autoclavado.
CULTIVACIÓN DE NUESTROS AGARES.
1. Una vez ya esterilizado todo, comenzamos en el cultivo, primeramente, encendiendo el
mechero con alta intensidad para crear un campo de calor, y tomando nuestra solución del
Erlenmeyer y lo vertemos en las 60 cajas Petri. Dejamos reposar por al menos 3 días para que
se gelifique, pasado este tiempo en nuestra solución madre (caldo peptonada) agregamos
nuestra carne de res, pesando aproximadamente 10 gramos en la balanza. Hacemos lo mismo
con cada muestra. Y dejamos reposar nuestra solución por 15 min.
2. Pasado ello sembramos con las asas: calibrada o aguja o la Digralsky, en nuestras cajas Petri de
EMB, MACCONKEY, SS, AGAR NUTRITIVO y en los frutos secos potato dextrosa.
3. Una vez obtenido nuestras siembras, dejamos actuar a los posibles microorganismos durante 4
a 7 días.

ELABORACIÓN DE LA SALCHICHA
 Fuimos a pesar la carne de res, cerdo, y tocino, donde de dimos unos cortes pequeños. En la
picadora se muelen por separado las carnes y grasas.
 En la cutter donde sucede la emulsificación primero pusimos las carnes molidas, con los
fosfatos, sal donde la velocidad de la máquina tiene que ser a baja velocidad para la
liberación de proteína, luego se agregó la PTS, condimentos, sales de cura, y la mitad de
hielo, esta vez se pone a velocidad rápida, agregamos el resto de hielo, y almidón. Siempre
hacer el procedimiento a bajo de 10ªC
 Nuestra pasta lo llevamos a embutir, se utilizó todas las fundas, las tripas de salame, de
colágeno, celulosa, y tripa de cordero, donde esta tripa estaba previamente en remojo dentro
de un recipiente, las tripas estén bien limpias (que no contenga grasa ya que ésta impide que
se realice el secado correctamente).

 Se hizo un atado manual, con hilo de algodón y un trenzado en las salchichas. Previamente
las salchichas se colgaron en los tubos que tiene el carro de horno, posterior a ello llevamos
al ahumador a 70ªC y lo dejamos por 30 min, pasado el tiempo se llevó a la tina de cocción
por 1 hora con 30 min, donde luego se enfrió a las salchichas, y se puso en el mesón para
realizar el pelado de las salchichas, el envasado al vacío fue 6 unidades cada sachet donde se
extraía todo el oxígeno.
 Después de ello realizamos el paso del PROCEDIMIENTO: Cultivación de nuestros
agares en el anterior subtitulo.

RESULTADO
Muestras EMS MACONK Agar
Nutritivo
S-S Potato
Dextrosa
Prueba
EY

Lechuga SI SI SI SI NO
10.2 g

Quesillo NO SI SI SI NO
10 g
Refresco
2 ml SI SI SI SI NO
Salchicha SI SI SI SI NO
10.2 g

2.5 g Si en
Almendra NO NO poca NO NO
cantidad

Huevo
Crudo
NO SI SI NO NO
2 ml

Pollo NO NO SI-poco NO
7.0 g
Carne de
res
NO NO SI-poco NO NO
7.0 g

Sándwich NO NO SI-poco NO NO
10.5 g

M
RESULTADOS DE LA SALCHICHA.

Muestra EMB Macconkey Agar Nutritivo S-S

SI SI SI SI

CONCLUSIONES

En conclusión los
medios de cultivo son
esenciales para
determinar el
crecimiento bacteriano
en
los diferentes medios de cultivo ya que
las bacterias se reproducen
En conclusión los medios de cultivo son
esenciales para determinar el crecimiento
bacteriano en
los diferentes medios de cultivo ya que
las bacterias se reproducen
La razón porque se halló E.Coli en la lechuga, refresco tostada, salchicha fue porque indica
las condiciones que ha sido elaborado, pues quizás hubo contaminación cruzada, o mala
higiene en cuanto al envasado de estos productos.
Si bien no se halló enterobacterias en la carne de res, pollo, y sándwich de pavita si se halló
en poca cantidad en el agar nutritivo, pues en este agar se puede observar la carga
microbiana. El potato dextrosa solo se usa para hongos, y el agua peptonada es para
activar las posibles bacterias.

En conclusión, los medios de cultivo son esenciales para determinar el crecimiento

bacteriano en los diferentes medios de cultivo, donde se reproducen por bipartición, donde
se multiplican, y se forman colonias.

MacConkey S-S EMB

Salmonela Blanco Rosadas o negras es para
E.COLIS
Shiguela Incoloro Rojo naranja
totales donde
E.Coli Rosado --------------------------- obtendremos
--------------------------- un color verde
---- metálico

CONCLUSION: SALCHICHA
Una de las razones por la que obtuvimos las E.Coli totales fue en el tratado que hubo
ya que la E.coli no es patógenos sino es un indicador que indica que mi alimento en
algún momento ha sido contaminado y que se realizó bien mi tratamiento térmico.
  El agua que fue usada fue de pozo
 Un mal tratamiento térmico en la tina de cocción
 No hubo una buena temperatura al momento de envasarlo
 La esponja es reutilizada por mucho tiempo y con ello se hace el aseo de todo.
 No hubo un buen aseo de los canastillos al momento de enfriar las salchichas.
 Los envases no fueron esterilizados y están conservados a temperatura
ambiente.

Concluimos que la amilasa en un

medio con temperatura cálida (37°C)
y con pH casi neutro (5 - 7 aprox.),
realiza
adecuadamente su actividad
enzimática. La explicación es
concreta: Las enzimas dependen de
dos factores importantes
para su actividad enzimática, siendo
estas la temperatura y el pH del
medio en que reaccionan. la
temperatura baja
disminuye o influye en la actividad de
la amilasa. La explicación es
concreta: La amilasa requiere de una
temperatura
cálida (37 °C) para realizar una
óptima actividad enzimática
Concluimos que la amilasa en un
medio con temperatura cálida (37°C)
y con pH casi neutro (5 - 7 aprox.),
realiza
adecuadamente su actividad
enzimática. La explicación es
concreta: Las enzimas dependen de
dos factores importantes
para su actividad enzimática, siendo
estas la temperatura y el pH del
medio en que reaccionan. la
temperatura baja
disminuye o influye en la actividad de
la amilasa. La explicación es
concreta: La amilasa requiere de una
temperatura
cálida (37 °C) para realizar una
óptima actividad enzimática
Concluimos que la amilasa en un
medio con temperatura cálida (37°C)
y con pH casi neutro (5 - 7 aprox.),
realiza
adecuadamente su actividad
enzimática. La explicación es
concreta: Las enzimas dependen de
dos factores importantes
para su actividad enzimática, siendo
estas la temperatura y el pH del
medio en que reaccionan. la
temperatura baja
disminuye o influye en la actividad de
la amilasa. La explicación es
concreta: La amilasa requiere de una
temperatura
cálida (37 °C) para realizar una
óptima actividad enzimática
DISCUSIÓN
El macConkey es para organismos coliformes, este medio sufrió múltiples variaciones en el
transcurso del tiempo, ya sea por la adición de otros ingredientes o por la modificación de las
proporciones. En un experimento hecho salió estos resultados:

Donde sí obtuvimos los mismos resultados, por ejemplo, en la salchicha si observamos un

desarrollo en los E.COLI donde el color fue rojo oscuro, si hubo desarrollo en la salmonela-
shiguela pero el color fue incoloro

CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las características de los medios de cultivo diferenciales
 Medios diferenciales: Se utilizan para poner de manifiesto características distintivas de las
colonias. Son medios que distinguen entre distintos grupos bacterianos en función casi
siempre del color de sus colonias. Por ejemplo, el agar Macconkey es un medio sólido que
permite el crecimiento de bacilos gramnegativos fermentadores y no fermentadores de
lactosa. Los primeros adoptan una coloración rosada que la diferencia de los segundos. Los
medios diferenciales, además, pueden poner de manifiesto mezclas y contaminaciones en los
cultivos.

2. ¿Cuáles son las características nutricionales que todo medio de cultivo debe tener?
Un medio de cultivo adecuado ha de contener, carbono, nitrógeno,
azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias
ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
Actualmente, la forma más extendida es utilizar peptona que además,
representa una fuente fácilmente de nitrógeno y carbón ya que la
mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente
las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y
otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que

se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido
ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y
sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o
potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

3. Por qué se coloca solamente hasta 2/3 partes de los envases en los cuales se esterilizará
los medios de cultivo?
Los tubos que contengan estas soluciones que serán esterilizadas en autoclave deben
contener sólo dos terceras partes de su volumen total ocupado por el líquido para evitar
desbordes. Así preparadas las soluciones deben esterilizarse en autoclave (15 minutos a 121
ºC).
4. ¿Cómo verificamos que hemos realizado una adecuada esterilización del medio de
cultivo?
La utilización de indicadores biológicos es una parte importante de los programas de mejora de
la calidad en las organizaciones sanitarias, que garantiza que los dispositivos sanitarios estén
correctamente esterilizados y debe ser implementado para la liberación del producto de la
central de esterilización, en los casos que así lo requiera.

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