UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE

MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

CUAUTITLÁN CAMPO-1

Química Industrial

Sección de Bioquímica y farmacología Humana

Laboratorio de Bioquímica microbiana

Grupo 1501 A, B, E

Jonathan Pablo Paredes Juarez

Moises Missael Martínez Mejía
Víctor Hugo Vázquez Valadez

Práctica 4.
Medios de Cultivo

Equipo No. 3:

Álvarez Ramírez Jocelyn Anaid

González Jiménez Nelly
Reyes Ojeda Irving Gerardo
Torres Salazar Mariane Jahel

27/09/2018
 PRÁCTICA 4.
MEDIOS DE CULTIVO
INTRODUCCIÓN

OBJETIVOS
Conocer los medios de cultivo, prepararlos de acuerdo a las especificaciones del proveedor,
así como esterilizarlos utilizando los conocimientos adquiridos en la experimentación
anterior.
Distribuir los medios de cultivo de acuerdo a las características de este, así como hacerlo de
forma correcta para ser utilizada en la siembra de los microorganismos.

REACTIVOS
Agua destilada
Agar EMB
Agar MacConkey
Agar Soya-Tripticacesina

MATERIALES
Autoclave
Cajas Petri
Balanza granataria
Espátula
Matraces ErlenMeyer de 500 mL y 1000 mL
Probetas de 100 mL y 250 mL
Mecheros Bunsen y Fisher

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL MEDIOS DE CULTIVO

Preparación de Medios de Cultivo

1. Pesada del Agar correspondiente.
2. Seleccionar un matraz del doble de capacidad del total del medio a preparar
3. Tomar la solución de agar-agar polisacárido, hervir y clarificar:
Turbio: No disuelto
Claro: Disuelto
1. Evitar quemar el agar
2. Tener las condiciones de esterilización de acuerdo al medio

Cada vez que se desea preparar un medio de cultivo para su esterilización se deben
seguir los siguientes pasos:
1.- Revisar la etiqueta del frasco de cultivo y checar la fecha de caducidad, el número de
lote, las instrucciones de su preparación (cantidad de agua en la que hay que disolverse, pH
si es que cuenta con él, ingredientes y temperatura de esterilización).
2.- Verificar que el contenido del frasco no esté grumoso o solidificado, de ser así el medio
ya no se debe utilizar porque está deshidratado.
3. Pesar únicamente la cantidad de medio correspondiente al volumen que se va a preparar,
ésto puede hacerse en un vaso de precipitados o en una hoja de papel.
4. Pesar 18 g de Agar EMB para preparar 500 mL, 25 g de Agar MacConkey para preparar
500 mL y 30 g de Agar Soya Tripticaseina para preparar 1000 mL.
5. Depositar el pesado en un matraz Erlenmeyer el cual debe ser de una capacidad por lo
menos de 100 mL mayor al volumen a preparar.
6. Una vez depositado el Agar en agua, debe calentarse hasta que se disuelva por completo
la muestra.
7. Se debe cerrar el matraz sin apretar demasiado el tapón para permitir la entrada de aire
caliente de esterilización.
8. Colocar los matraces con las soluciones de Agar en el autoclave aproximadamente por
15 minutos.
9. Ya esterilizada la muestra, depositar en cajas petri con el uso adecuado y equipo de
seguridad completo.

RESULTADOS
Preparación de Agar
Considere que 1 placa puede contener 25 mL aprox. de medio

TABLA DE ESTERILIZACIÓN

Medio de Cultivo Agar EMB Agar MacConkey Agar

Soya-Tripticacesina

Relación por litro a 36 g/L 50 g/L 40 g/L

preparar

Cantidad 500 mL 500 mL 750 mL

preparada

Cantidad pesada 18 g 25g 30g

Rango de pH 7.2 +/- 0.2 7.1 +/- 0.2 7.3 +/- 0.2

ASPECTOS DEL MEDIO DE CULTIVO

 Estado físico Sólido verdoso Sólido violeta Sólido amarillo

Tipo de medio de Agar EMB Agar MacConkey Agar

cultivo Soya-Tripticacesina

Condiciones de Autoclave a 121°C Autoclave a 121°C Autoclave a 121°C

esterilización (15 lb de presión) (15 lb de presión) (15 lb de presión)
durante 15 minutos. durante 15 minutos. durante 15 minutos.
El medio estéril El medio estéril El medio estéril
unido se enfría a unido se enfría a unido se enfría a
45°C colocándolo 45°C colocándolo 45°C colocándolo en
en placas, dejar en placas, dejar placas, dejar secar
secar las placas secar las placas las placas
destapadas destapadas destapadas
parcialmente. parcialmente. parcialmente.

Condiciones de Conservar bien Conservar bien Conservar bien

almacenamiento cerrado en lugar cerrado en lugar cerrado en lugar
fresco y seco. fresco y seco. fresco y seco.

ANÁLISIS DE RESULTADOS
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. No existe un medio de cultivo universal que abarque las necesidades de
todos los microorganismo, pues la diversidad metabólica que existe en muy grande.
En esta práctica preparamos medios de cultivos sólidos, los cuales llevaron una preparación
similar, pues se pesó el Agar correspondiente, mismo que se diluyó en agua destilada,
posteriormente se hirvió y clarificó y se esterilizó en autoclave.
Los medios sólidos llevan un agente solidificante siendo el más utilizado el agar, el cual es
un polisacárido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas.
Los medios deshidratados nos proporcionan información sobre su composición, se debe
tener en cuenta la cantidad que se recomienda para obtener un litro de medio. La
composición de cada uno de los medios preparados la podemos enlistar de la siguiente
manera:
Agar Soya-Tripticacesina​ (g/L agua destilada)
● Agar- Agar 15.0
● Cloruro de sodio 5.0
● Peptona de caseína 15.0
 ● Peptona de soya 5.0
Agar MacConkey​ (g/L agua destilada)
● Peptona de gelatina 17.0
● Mezcla de peptonas 3.0
● Lactosa 10.0
● Mezcla de sales biliares 1.5
● Cloruro de sodio 5.0
● Agar 13.5
● Rojo neutro 0.030
● Cristal violeta 0.001
Agar con Eosina y Azul de Metileno ​(g/L agua destilada)
● Agar 13.5
● Azul de metileno 0.065
● Eosina Y 0.4
● Fosfato dipotásico 2.0
● Lactosa 5.0
● Peptona especial 10.0
● Sacarosa 5.0

Estos medios de cultivo cumplen con requerimientos dependiendo el tipo de organismos

que se deseen cultivar, a continuación se menciona el fundamento y uso de cada uno de
ellos.
Agar Soya-Tripticacesina
Es un medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una
gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos.
Al ser suplementado con sangre permite el crecimiento de microorganismos exigentes y la
clara visualización de reacciones de hemólisis.
En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en péptidos,
aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya
es fuente de hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de diversos
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente
solidificante.
Agar MacConkey
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el
cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora
Gram positiva.
Agar con Eosina y Azul de Metileno
Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido
desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de
la familia Enterobacteriaceae.
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que
son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos
ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas.
Cada medio de cultivo en el Laboratorio de Bioquímica Microbiana es fundamental pues
gracias a estos podremos llevar a cabo el crecimiento de los microorganismos, así como su
control para obtener resultados reproductibles.

CONCLUSIÓN
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a su forma, ya sea líquida, sólida o
semisólida; cada una de ellas lleva condiciones específicas en su preparación, realizada
esta práctica obtuvimos los conocimientos teóricos de las mismas y llevamos a cabo la
preparación de medios sólidos a través del usos de diferentes tipos de agar, los cuales nos
ayudan al crecimiento de los microorganismos. Otra clasificación de los medios es de
acuerdo a la naturaleza de sus ingredientes, los cuales nos permiten desarrollar condiciones
óptimas para la siembra de microorganismos.
Se deben tener cuidados a considerar en la preparación de cada uno de los medios, como
son, indicaciones del proveedor en relación del agar por litro de medio a preparar, pH,
temperatura y tiempo de esterilización, así como la conservación de los medios.

BIBLIOGRAFÍA
G. J. Tortora. INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA. 9na Edición. Editorial Médica
Panamericana.
Britania lab:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2ed674cf661.pdf
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a297bfd85301.pdf
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28240e1c004.pdf