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MÉTODOS DE SIEMBRA
DOCENTE:
GRUPO 3
INGENIERÍA AMBIENTAL
2017
Tabla de contenido
Introducción. ................................................................................................................................... 3
Objetivos ......................................................................................................................................... 4
Materiales. ..................................................................................................................................... 15
Procedimiento. .............................................................................................................................. 16
CUESTIONARIO. ........................................................................................................................ 25
Los microorganismos, son seres vivos dotados de individualidad para desarrollar las
funciones vitales como crecimiento, reproducción, alimentación y excreción; pero para ello
microbiología, es importante darle a éstos seres vivos las condiciones necesarias para ello.
Métodos de siembra
Métodos de siembra
microbianos
Fundamento teórico
Preparación medios de cultivo.
Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes
incluso plantas.
Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.
Una vez que el medio haya sido preparado, puede ser inoculado (es decir se le añaden
microbiano.
COMPOSICIÓN
Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores
para detecta, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de
PROPIEDADES
Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes básicos
y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades vari según el tipo de
uso de medios de cultivos artificiales, los cuales se encuentran disponibles en una gran
4. Elementos metálicos (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe) llamados también
adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas concentraciones por los
microorganismos.
limitado de ellas a partir de componentes del medio. Otros las requieren como
suministros.
6. Agua
quimiotrofos, los fototrofos emplean la energía radiante (luz solar), como única
crecimiento bacteriano.
a. Consistencia:
colonias. Las colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo. Las
placas que contengan más de un tipo de colonia no se consideran cultivo puro. Las
placas también se utilizan para la determinación de células viables (recuento de
placas).
b. Composición:
c. Función:
Medios selectivos: son aquellos que poseen uno o más componentes añadidos, los
en el medio de cultivo.
Medios de enriquecimiento: contiene algún componente que permite el crecimiento
biológicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res,
1. Disolución del medio de cultivo deshidratado se debe emplear agua limpia, recién
recipientes a usar debe ser lo suficientemente grandes para que el medio sea agitado
repartir el medio en los recipientes definitivos o en los que se lleve a cabo el trabajo
Recuerde que el proceso de servido de las cajas debe realizarse en un cuarto estéril o
4. Tubos de agar inclinado (bisel o pico de flauta), y sin inclinación los tubos llenos de
inclinada de iguales dimensiones (Agar inclinado, pico de flauta o bisel). En los casos
en los cuales se requiere el medio sin inclinar, estos deben dejarse solidificar en
Métodos de siembra.
mediante esta técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inoculo. Para su
realización:
inoculo.
2. El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada en un lateral del agar (procurando
superficie del agar. Se debe procurar que en cada sección de la caja las estrías
3. Repita el paso 2, por tres veces , recordado flamear y enfriar el asa cada vez que
culmine una estría y solo tocar con el asa la estría inmediatamente anterior, con el
objetivo de ir reduciéndola carga microbiana arrastrada por la argolla finalmente
Esta siembra se utiliza para recuento de colonias. Se hace una sola estría que cruce el
centro del agar. Luego se hacen estrías en ángulo recto con respecto a la estría inicial; se
voltea el agar en un ángulo de 90° y se hacen estrías hasta cubrir todo el agar.
superficie del agar, para realizar la siembra, la caja se divide en cuatro cuadrantes, se
Siembra en tubo:
La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, puesto que un solo
Siembra en tubos por estría simple: Se realiza en un tubo con medio solido inclinado y
deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se marque
surcos o estrías.
Siembra en tubos por picadura: Se designa con este nombre la siembra que se realiza con
asa recta en tubos con medios sólidos y semisólidos generalmente sin inclinar. Se realiza
liquido o solido a otro líquido, puede usarse el asa de punta redonda, o e algunos
Materiales.
Preparación medios de cultivo.
Cajas de Petri
Erlenmeyer
Autoclave
Agua destilada
Medios de cultivo
Tubos de ensayo
Balanza
Espátula
Figura 5. Materiales usados en la práctica
Métodos de siembra.
Procedimiento.
a. Para la preparación de medios de cultivo, siga las instrucciones dadas por la etiqueta
32 g 1000 mL
X 96 mL
32 × 96
= 3,072𝑔
1000
correspondientes.
Figura 6. Agar lisina- hierro
Figura 7. Cantidad de agar calculada.
Figura 9. Agar LIA en previo calentamiento Figura 10. Agar CITRATO en previo calentamiento
Figura 11. Medio LIA servido Figura 12. Medio CITRATO servido.
Métodos de siembra
Primero esterilizamos el asa hasta que esté totalmente roja, y abrimos el microorganismo
cerca al mechero tomamos una muestra cerramos, e igualmente abrimos el agar cerca al
mechero y usamos la técnica de estría y cerramos, igualmente lo hicimos con 5 placas más,
usando el mismo método de estría, y esterilizando cada vez el asa. Y una placa diferente de
EMB (e.coli)
Figura 17. Lectura de EMB Figura 18. Lectura de EMB Figura 19. Lectura de EMB
Figura 29. Lectura de manitol Figura 30. Lectura de manitol Figura 31. Lectura de manitol
Figura 34. Lectura de agar Figura 35. Lectura de agar Figura 36. Lectura de agar
nutritivo nutritivo nutritivo
CUESTIONARIO.
1. Elabore un cuadro que comprenda las siguientes característica para cada uno de los
Medio
Aporte nutricional
R//:
Nombre Mac Conkey Agar nutritivo Agar Sangre EMB TSI IMViC Urea
Es un medio selectivo Es un medio de Medio para Medio de Medio de cultivo. Es una prueba Medio utilizado para
diferencial utilizado cultivo usado propósitos cultivo usado para Gracias a su utilizada en biología diferenciar
para el aislamiento y normalmente como generales, para el el aislamiento y composición es uno de para la identificación microorganismos en base
diferenciación de rutina para aislamiento y diferenciación los medios de bacterias. Se compone a la actividad ureásica.
bacilos Gram todo tipo de bacteri cultivo de de E.coli, tiene un cultivo más empleados de cuatro Se utiliza para identificar
negativo a. Es muy útil numerosos aspecto purpúreo, para la diferenciación pruebas, Rojo de bacterias que hidrolizan
fermentadores y no porque permanece microorganismos. aunque naranja de entero-bacterias metilo, Citrato. El urea, tales como Proteus
fermentado- sólido incluso a tras su resultado de este test spp., otras
Res de lactosa. Se relativamente altas esterilización, es se expresa mediante enterobacterias y
Medio utiliza con frecuencia temperaturas. semisólido, y está símbolos de positivo o estafilococos.
para el aislamiento Además, el destinado al negativo (+ o -) según
de coli-formes crecimiento cultivo en placa el resultado de cada
bacteriano en prueba, siguiendo
este agar lo hace en siempre el orden
la superficie, establecido por las
porque se iniciales del método.
distinguen mejor
las colonias pequeñ
as
Digerido pancreático 0,5% de peptona; 5% Peptona 10g Peptona 159 g Polipeptona Tripteina
de gelatina 17,0 g de sangre ovina, Lactosa 10g Extracto 7,0 g 1.0 g
Digerido pancreático 0,3% de extracto también puede 3 Glucosa
Fosfato de
9.9g Glucosa
de caseína 1,5 g de carne/extracto usarse sangre 2g levadura 1.0 g
Digerido péptico de de levadura; humana, para dipotásico 5,0 g Cloruro de sodio
tejido animal 1,5 g cultivos en Eosina 0,40g Extracto Fosfato dipotásico 5.0 g
3g
Lactosa 10,0 g una placa de Agar de carne 5,0 g Fosfato monopotasico
1,5% de agar; Azul de
0,065g Sacarosa 10 g
Mezcla de sales metileno 2.0 g
Composición biliares 1,5 g 0,5% de cloruro de Agar 15g Sulfato de 0,20 Rojo de fenol
Cloruro de sodio sodio; hierro g 0.012 g
5,0 g Cloruro Agar
Agar 13,5 g agua destilada; 5g 15.0 g
sódico
Rojo neutro 30,0 mg
Tiosulfato 0,30
Cristal violeta pH casi neutro (6,8) de sodio g
1,0 mg a 25 °C.
Agua destilada 0,024
Rojo fenol
1.000 mL g
Su uso está El agregado de Es nutritivo por la Fermentación de En el medio de cultivo, la
descripto en sangre al medio de presencia de glucosa, lactosa, tripteína y la glucosa,
muchos cultivo, en peptona que sacarosa y a la aportan los nutrientes
procedimientos concentración final favorece el producción de ácido para el desarrollo de
para el análisis de de 5-10 %, aporta desarrollo sulfhídrico. microorganismos
alimentos, aguas y nutrientes para el microbiano. La
Aporte otros materiales de crecimiento diferenciación
nutricional importancia bacteriano, y entre organismos
sanitaria permite detectar capaces de utilizar
hemólisis la lactosa y/o
sacarosa, y
aquellos que son
incapaces de
hacerlo,
se utiliza para el Medio usado para Permite el Bacilos Gram Proteus spp.,
aislamiento de el cultivo de crecimiento de negativos de Otras enterobacterias y
bacilos Gram microorganismos microorganismos rápido desarrollo estafilococos.
negativos de fácil poco exigentes en nutricionalmente y escasas
desarrollo, aerobios sus requerimientos exigentes y la clara exigencias
y anaerobios nutricionales. No visualización de nutricionales.
Microorganismo facultativos contiene reacciones de Permite el
que comúnmente inhibidores del hemolisis. desarrollo de
se siembra desarrollo todas las especies
bacteriano. La de la familia
pluripeptona es la Enterobacteriacea
fuente de carbono y e.
nitrógeno para el
desarrollo
bacteriano.
2. ¿Qué medios de cultivo utilizan normalmente para el cultivo de las bacterias de interés?.
de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
otros ingredientes.
Líquidos
Semisólidos
Sólidos
como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios
Vancomicina)
Métodos de siembra.
1. ¿Qué es un cultivo puro y que es un cultivo mixto?
R//: Cultivos puros: son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de
2. ¿Qué ocurrió con el agar antes de hacer la inoculación y como se tornó éste después de
R//: Antes del proceso de incubación en el agar, una vez sembrado el microorganismo solo
se observaba el color del agar utilizado y una ligera línea donde se había pasado el asa con
la técnica usada para la siembra del microorganismo, después de la incubación esa línea
volvió más gruesa, dependiendo del microorganismo cambio su textura, forma y color, en
unas se observaba verdoso brillante, en otras rosado, en otros un color blanco, en algunas
Lectura: En nuestro caso el comportamiento para las siembras en los tubos de ensayo fue
negativo, se podria decir que fue por un mal procedimiento en el momento de hacer la
de las muestras.
Figura 36. Tubos en donde se
realizó nuestras muestras
TSI
Por fermentación de azúcares, se
producen ácidos, que se detectan
por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color
amarillo en medio ácido. El
tiosulfato de sodio se reduce a
sulfuro de hidrógeno el que
reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el típico
sulfuro de hierro de color negro.
LIA
Es un medio que sirve para demostrar
la producción de dos enzimas: la lisina
descarboxilasa y la lisina desaminasa,
además la presencia de sales de hierro
sirve para detectar la producción de
H2S por algunos microorganismos
CITRATO
El desarrollo de un color
azul intenso en 24-48
horas indica una prueba
positiva y revela que el
microorganismo en estudio
ha sido capaz de utilizar el
citrato en el medio con la
formación de productos
alcalinos. La prueba
también es positiva en
ausencia de color azul si
existe crecimiento del
microorganismo a lo largo
de la estría de inoculación.
SIM
Luego de la incubación,
se le agrego 3-5 gotas de
reactivo de Kovac´s o de
Erlich.
4. ¿Qué errores siente Ud. que cometió su grupo o usted en el momento de hacer los
procedimientos?
R//: El error que creo haber cometido en el momento de la siembra fue en la manera en
como use el método de siembra de estría ya que no me quedo muy bien en el agar, aunque
el microorganismo si creció.
R//: Para corregir estos errores se debe tener mayor precaución con los agentes que pueden
cuidado y hacer los procedimiento conforme están estipulados para así poder tener unos
R//:
del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función
bacterias que deben utilizar oxígeno se denominan aerobias, y las que pueden utilizar
compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este reactivo tiñe las
intenso.
CONCLUSIONES:
En la partes de método de siembra por tubos, podemos concluir que se debe tener
Es necesario tener en cuenta todas las indicaciones de manejo y empleo del método
https://www.academia.edu/11620994/T%C3%A9cnicas_de_siembra
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com.co/2014/10/tecnicas-y-
metodos-de-estriado-en-caja.html
https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-
microorganismos
http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0preclini--00-0--
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