AUTOANTICUERPOS

ERITROCITARIOS

T.M. NATALIA BUSTAMANTE

HUENCHULLAN
UNIDAD DE HEMATOLOGÍA
 AUTOANTICUERPOS ERITROCITARIOS

“En inmunohematología, el término autoanticuerpo se aplica a cualquier

anticuerpo que reacciona frente al correspondiente antígeno presente
en los propios eritrocitos del paciente, incluso si la reacción ocurre sólo
in vitro y tanto si causa o no efectos patológicos in vivo”

Mávil-Lara, C. 2006. Autoanticuerpo positivo: ¿tiene importancia clínica?. Rev Med Inst Mex Seguro. 44 (Supl 2): 25-30
 PRODUCCION DE AUTOANTICUERPOS

Factores Factores
Genéticos Ambientales

Autoinmunidad

Alteraciones en los mecanismos reguladores normales de la RI.

Tolerancia Central y tolerancia periférica

IMPORTANCIA CLINICA DE AUTOANTICUERPOS

- Pueden causar destrucción in vivo de GR generando

cuadros anémicos: Anemia hemolítica autoinmune

- Interferencias en determinación de grupo sanguíneo,

detección e identificación de aloAc y pruebas
pretransfusionales.
 Autoanticuerpos
Eritrocitarios

Anticuerpos Anticuerpos
Calientes Fríos

Nocivos Inocuos Nocivos Inocuos

Síndrome de
AHAI
aglutininas frías

Hemoglobinuria
paroxistica a
frigore
FACTORES QUE DETERMINAN EL EFECTO
PATOLÓGICO DE LOS AUTOANTICUERPOS

Características del anticuerpo

• Clase y subclase de Ig
• Especificidad
• Rango térmico
• Activación o no activación de Complemento

Cantidad de anticuerpo y/o

complemento fijado al eritrocito
FACTORES QUE DETERMINAN EL EFECTO
PATOLÓGICO DE LOS AUTOANTICUERPOS

Características del antígeno

• Cantidad de sitios antigénicos

• Distribución del antígeno

Tipo de complemento presente en los

eritrocitos circulantes

Actividad del SFM

 ANTICUERPOS FRIOS

Por definición: son aquellos que reaccionan más intensamente a 0ºC

que a temperaturas mas altas.

Amplio rango térmico:

• Aglutininas frías inocuas: son activas hasta los 10 a 15ºC

• Autoaglutininas frías nocivas: actúan in vitro hasta 30ºC (anemia hemolítica y/o
trastornos vasculares por exposición al frío)

Distinción entre inocuos y nocivos depende de la temperatura

máxima a la que son activos.
 ANTICUERPOS FRIOS

Inocuos

Anti-I Anti-H

Presente en todos los sueros

Presente en todos los sueros
normales, ocasionalmente acompañado
normales, fija C a las cél. In vitro
por anti-i
 ANTICUERPOS FRIOS

Nocivos
Hemolisinas bifásicas
Autoaglutininas frías patológicas (Ac. De Donath-
Landsteiner)

Anti-I Anti-i Anti-P

Enfermedad crónica Hemoglobinuria

Infección por Mononucleosis
de hemaglutininas paroxística a
Mycoplasma Infecciosa
frías frigore
ENFERMEDAD DE AGLUTININAS FRÍAS

Representan aproximadamente el 15% de las AHAI.

Enfermedad crónica secundaria a: Transitoria o aguda secundaria a

• Pacientes añosos asociado a linfoma de • Cuadros infecciosos: Mycoplasma

cel. B, LLC, macroglobulinemia pneumoniae o mononucleosis infecciosa.

Isotipo: IgM

Anti-I: 90% Anti-i: 8% Otros: 2%

AUTO ANTI-I

Puede existir de 2 formas:

• Autoanticuerpo con título bajo, ocasionalmente en sujetos normales

• Aglutinina fría que reacciona entre 0° a 4° C.
• Autoanticuerpo en títulos altos, frecuentemente asociado a EAF
• Rxn. entre 0° a 4° C
• Rxn siempre sobre 30°-32°C
 Al volver los GR a
circulación y donde
La rxn Ag-Ac
Hemaglutinación la temperatura es
ocurre frente a la
produce mayor, los Ac
exposición a frío Complejo Ag-Ac
obstrucción de la tienden a eluirse,
de zonas en las fija y activa C:
microcirculación: pero las fracciones
que la Hemolisis
entumeciemiento, de C siguen
temperatura intravascular.
dolor y coloración opsonizando las
puede llegar a
azul de la piel. células, induciendo
28°-30°C.
su remoción por el
SFM
 HALLAZGOS DE LABORATORIO

TAD:
• Positivo con SAGH poli específico o anti-complemento

Titulación:
• Gralmente sobre 1/1000 a 4°C
Habitualmente los GR
Provoca problemas en
son aglutinados en
la clasificación ABO y
EDTA a temperatura
RhD.
ambiente.

Es necesario mantener
la muestra a 37°C
 HEMOLISINAS BIFASICAS FRIAS

Hemolisinas bifásicas frías

• Ac. fijador de complemento (Ac de Donath-Landsteiner.)

Hemolisis in vitro e in vivo

Sangre enfriada Sangre calentada

Mejora condiciones de la hemolisis mediada

Facilita la fijación del Ac.
por C.

Hemolisina bifásica de clase IgG, se une a los GR después de la exposición

al frío, activa la fijación de C y cuando las cel. Sensibilizadas llegan a
zonas con mayor temperatura: HEMOLISIS INTRAVASCULAR
HEMOGLOBINURIA PAROXÍSTICA A FRIGORE

Anemia hemolítica repentina con incidencia < 2%, generalmente

transitoria.

Frecuentemente en niños y jóvenes secundaria a infecciones virales:

CMV, VEB, ADV, entre otros.

Especificidad anti-P (IgG)

 HALLAZGOS DE LABORATORIO

TAD
• Positivo con suero no gamma

Donath Landsteiner
• Positivo
 ANTICUERPOS CALIENTES

Reaccionan más intensamente a 37ºC

Gralmente IgG: IgG1 e IgG3

Los nocivos están asociados con la destrucción de los GR

Pueden producir AHAI en el 70-80% de los casos

 ANEMIA HEMOLÍTICA AUTOINMUNE POR
AC CALIENTES

Constituye la AHAI mas frecuente y es provocada por la acción de

AutoAc reactivos a 37°C

Origen idiopático: Origen secundario:

30 – 50% de los casos, afectan con En el curso evolutivo de enfermedades

mayor frecuencia a mujeres, de mas de diversas, gralmente de base inmunitaria
40 años. o asociado a neoplasias
 HALLAZGOS DE LABORATORIO

TAD

• Positivo:
• 20 a 66% detecta IgG
• 24 a 63% detecta IgG y C
• 7 a 14% detecta sólo C
TAI

• Positivo o negativo

Aprox. 60% de los pacientes con AHAIAC presentan autoAc detectados en TAI

• Si el AutoAc tiene alta tasa de fijación y fue adsorbido por los GR del
paciente in vivo el suero puede contener muy poco Ac libre.
 ESPECIFICIDAD DE LOS ANTICUERPOS

La especificidad de los anticuerpos asociados a AHAIAC es muy compleja

• En las pruebas de rutina suelen ser reactivos con todas las células

Se describe especificidad “amplia” por Sistema Rh

Otras especificidades inusuales incluyen los sistemas: LW, Kell, Kidd, Duffy y
Diego.
 TRANSFUSIÓN EN AHAI

Transfundir sólo pacientes sintomáticos.

Descartar presencia aloanticuerpos reactivos a 37°C, si el tiempo lo permite

definir la especificidad del auto-anticuerpo caliente.

Si hay alto riesgo no esperar el resultado para transfundir.

• Transfundir pequeñas cantidades, controlando síntomas y hemoglobinemia.

• Muestras de sangre antes y después, anticoaguladas y centrifugadas para
comparar aspecto del plasma.
• En ausencia de hemólisis aplicar toda la unidad.
PROBLEMAS SEROLÓGICOS QUE PLANTEAN
LOS AUTOANTICUERPOS

Pueden causar autoaglutinación y alterar la determinación de la clasificación ABO

y RhD

Glóbulos rojos recubiertos con gran cantidad de globulinas podría inducir

aglutinación espontanea

Autoanticuerpos libres en suero puede dificultar la interpretación de las pruebas

de detección de anticuerpos irregulares y de compatibilidad, enmascarando
aloanticuerpos
PROBLEMAS SEROLÓGICOS QUE PLANTEAN
LOS AUTOANTICUERPOS

OJO: es importante resolver el

problema serológico, pero postergar la
transfusión hasta encontrar sangre
compatible puede causar mayor daño al
paciente…

Aplicar criterio y evaluar junto a

clínico
DETECCIÓN Y
ESTUDIO DE
AUTOANTICUERPOS
 PRUEBA AUTÓLOGA

GR paciente + Suero del Paciente

Lectura a Ta ambiente Lectura a 37°C Lectura con SAGH

Lectura ta amb: positivo Lectura ta amb: negativo

Lectura 37°C: negativo Lectura 37°C: negativo
Lectura SAGH: negativo Lectura SAGH: positivo
Células control: positivo Células control: nd

Lectura ta amb: negativo Lectura ta amb: negativo

Lectura 37°C: positivo Lectura 37°C: negativo
Lectura SAGH: nd Lectura SAGH: negativo
Células control: nd Células control: positivo
TAD
 GEL DE COOMBS
MONOESPECIFICO

Tomado de: “Significado clínico de prueba directa de antiglobulina positiva”. Ana Claudia Perón.
Presentado en: “3era Jornadas de Medicina Transfusional, CSA, Puerto Montt 2018
 ADSORCIÓN

Se utiliza para extraer anticuerpos del suero a través de GR

portadores de los antígenos correspondientes.

Principal utilidad:

• Eliminar actividad de autoAc para permitir el estudio de aloAc

• Separación de mezcla de Ac
 TÉCNICA DE ADSORCIÓN

Reactivos:
Muestra:
GR portadores de los
Suero o plasma a
Ag específicos (cél
adsorber
autológas o alogénicas)

GR alicuotados Suero adsorbido

Tomado y modificado de: “Significado clínico de prueba directa de antiglobulina positiva”. Ana
Claudia Perón. Presentado en: “3era Jornadas de Medicina Transfusional, CSA, Puerto Montt 2018
La eliminación completa de los Ac puede requerir de adsorciones múltiples: todas
con alícuotas células nuevas!

Para corroborar la adsorción

• Enfrentar un alícuota del suero adsorbido con una alícuota de las células usadas
• Si la reactividad persiste: NO se eliminaron todos los Ac

Esta técnica cumple con diversos objetivos en distintas circunstancias: NO existe

un procedimiento único ideal.

• Adsorción en frío
• Adsorción en caliente
• Autoadsorción
 DETECCIÓN DE ALOAC EN PRESENCIA DE
AUTOAC EN CALIENTE

Adsorción autóloga Adsorción alogénica

En pacientes no transfundidos En pacientes con Tx recientes

Se evalúa suero adsorbido para la Se utilizan células de distintos

detección de eventuales aloanticuerpos fenotipos
 Tomado y modificado de: “Significado clínico de prueba directa de antiglobulina positiva”. Ana
Claudia Perón. Presentado en: “3era Jornadas de Medicina Transfusional, CSA, Puerto Montt 2018
 DETECCIÓN DE ALOAC EN PRESENCIA DE
AUTOAC REACTIVOS EN FRIO

Si las pruebas se realizan a 37°C y en la fase AGH se utilizan

reactivos IgG específicos las crioaglutininas no debieran interferir

En algunos casos puede requerirse autoadsorción a 4°C o

utilización de reactivos.
• ELUCIÓN

Se utiliza para liberar moléculas de Ac de los GR

sensibilizados.
OTRAS
• Principal objetivo es recuperar anticuerpos fijados
TÉCNICAS
Se hacen modificaciones fisicoquímicas al medio de
reacciónseparación de los anticuerpos con sus
correspondientes antígenos

Existen varias técnicas de elución, pero ninguna

es ideal como método UNICO
 TÉCNICAS DE ELUCIÓN:
ESTUDIO DE ANTICUERPOS
Disolventes orgánicos.
Utilizada para el estudio de autoanticuerpos
calientes o aloanticuerpos calientes (IgG).
Actúan alterando la estructura terciaria de
las moléculas de anticuerpos y disrupción de
la membrana eritrocitaria
Ej: Eter, cloruro de metileno.
Elución ácida o elución EDTA-glicina
ácida.
Disociación de uniones electrostáticas en las
proteínas y cambios en la estructura
terciaria.
Al igual que con los disolventes orgánicos,
éste es un buen método para la recuperación
de autoanticuerpos y aloanticuerpos de tipo
IgG.
Elución por calor.
Este tipo de elución se recomienda cuando el
anticuerpo involucrado es de tipo IgM o
cuando se trata de anticuerpos del sistema
AB0 causantes de enfermedad hemolítica
perinatal.
NO utilizar para eluir Ac IgG (auto o alo)
ESQUEMA ELUCIÓN
Eluato/Eluido

GR “libres”
• CRIOAGLUTININAS

Suero mantenido GR de fenotipos

a 37°C OI y Oi
OTRAS
GR lavados del Diluciones
TÉCNICAS
paciente a 37°C seriadas
• PRUEBA DE DONATH-
LANDSTEINER

Se enfrenta suero del paciente

(mantenido a 37°C) con GR fenotipo
OP positivos OTRAS
TÉCNICAS
RXN en frío: incubación en hielo por
60’

RXN en caliente: incubación a 37°C

por 90’

Resultado positivo: Hemólisis en las rxn a ambas

temperaturas
 • Protocolo utilizado para
predecir riesgo hemolítico en
PROTOCOLO
AHAI
DE
SUBCLASES
DE IgG
(Biorad)

Tomado de: “Significado clínico de prueba

directa de antiglobulina positiva”. Ana
Claudia Perón. Presentado en: “3era
Resultados ≥ 2+ Coombs monoespecifico Jornadas de Medicina Transfusional, CSA,
Puerto Montt 2018
 ≤1:30 = positivo débil
(IgG)
Bajo riesgo de
hemólisis
≥ 2+ IgG

> 1:30 = positivo

Titulación fuerte (IgG)
Alto riesgo de
IgG
hemólisis
 Estudiar Subclases

Positivo 1:1
(IgG1) -Moderado riesgo de
hemólisis
(IgG3) -Alto riesgo de hemólisis

Positivo 1:100
Alto riesgo de hemólisis
(IgG1 y/o IgG3)
 MUCHAS
GRACIAS
POR SU
ATENCIÓN!
 BIBLIOGRAFÍA.

• American Association of Blood Banks (AABB). 2007. Manual Técnico. 15ta

Edición.
• Cortés, A. y col. 2014. Inmunohematología básica y aplicada. 1era Edición,
Grupo Cooperativo Iberoamericano de Medicina Transfusional.
• Klein, H.G. y D.J. Anstee. 2005. Mollison’s Blood Transfusion in Clinical
Medicine 11th edition. Ed. Blackwell Publishing.
• Mávil-Lara, C. 2006. Autoanticuerpo positivo: ¿tiene importancia clínica?. Rev
Med Inst Mex Seguro. 44 (Supl 2): 25-30.
• Perón, A.C. 2018. Significado clínico de prueba directa de antiglobulina positiva.
Presentado en: “3era Jornadas de Medicina Transfusional, CSA, Puerto Montt