Manual de Técnicas y Procedimientos de Inmunohematología 2020

MANUAL DE TÉCNICAS Y
PROCEDIMIENTOS DE
INMUNOHEMATOLOGIA
Tecnología Médica
Universidad Austral de Chile
Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile

Manual de Técnicas y Procedimientos de Inmunohematología
ÍNDICE
LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGÍA .................................................................................................. 4
BIOSEGURIDAD EN EL BANCO DE SANGRE ................................................................................................. 5
TIPOS DE MUESTRAS UTILIZADAS EN INMUNOHEMATOLOGÍA ................................................................. 7
CALIBRACIÓN DE CENTRIFUGAS ................................................................................................................... 8
TÉCNICA EN LAMINA PARA LA CLASIFICACIÓN ABO Y RhD ..................................................................... 10
TÉCNICAS EN TUBO ....................................................................................................................................... 12
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN EN TUBO: INFORME EN CRUCES ............................................................. 13
LAVADO DE GLÓBULOS ROJOS ................................................................................................................... 15
PREPARACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS TESTIGOS A Y B ........................................................................... 16
PREPARACIÓN DE CÉLULAS CONTROL ...................................................................................................... 17
TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANA ............................................................................................................. 18
I. TEST DE ANTIGLOBULINA DIRECTO (TAD) ........................................................................................................19
II. TEST DE ANTIGLOBULINA INDIRECTO (TAI) ......................................................................................................20
PRUEBA AUTÓLOGA ...................................................................................................................................... 22
RECOMENDACIONES PREVIAS A REALIZAR UNA CLASIFICACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RhD
.......................................................................................................................................................................... 23
CLASIFICACIÓN DEL RECIÉN NACIDO ......................................................................................................... 24
CLASIFICACIÓN DE RUTINA EN EL ADULTO ............................................................................................... 25
ESTUDIO VARIANTES DÉBILES O PARCIALES DE D .................................................................................. 26
DISCREPANCIAS ENTRE LA PRUEBA SERICA Y LA PRUEBA GLOBULAR ............................................... 28
DETERMINACIÓN DEL GENOTIPO RH-Hr ..................................................................................................... 32
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD ...................................................................................................................... 36
BÚSQUEDA DE ANTICUERPOS IRREGULARES (BAI) ................................................................................. 39
IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (IAI) .......................................................................... 40
TITULACIÓN DE ANTICUERPOS .................................................................................................................... 44
DETERMINACION Y TITULACION DE CRIOAGLUTININAS........................................................................... 47
TÉCNICAS EN GEL .......................................................................................................................................... 49
INMUNOHEMATOLOGÍA EN GEL ............................................................................................................... 50
TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN EN GEL: INFORME DE RESULTADOS ......................................................... 51
CLASIFICACIÓN DE RUTINA EN EL ADULTO EN GEL ............................................................................. 52
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (TAI) EN GEL .............................................................. 53
PRUEBA AUTÓLOGA .................................................................................................................................. 53
CLASIFICACIÓN DE RUTINA RECIÉN NACIDO ........................................................................................ 55
OTROS EXÁMENES REALIZADOS EN GEL LISS-COOMBS .................................................................... 57
TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD) ........................................................................ 57
ESTUDIO DE VARIANTES DEL ANTIGENO D ....................................................................................... 58
IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (IAI) ................................................................. 59
TITULACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES ................................................................................ 59
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD ............................................................................................................. 62
BIBLIOGRAFÍA ................................................................................................................................................. 63
LECTURA Y REGISTRO DE REACCIONES.................................................................................................... 64
Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 2


LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGÍA
El laboratorio de inmunohematología se basa en reacciones antígeno-

anticuerpo, cuyas técnicas pueden parecer simples y fáciles de dominar, dado el
relativo y reducido número de accidentes fatales post transfusionales en nuestro
país.
Considerando que gran parte de la población es homogénea genéticamente

en lo que respecta a los grupos clásicos (más de un 60%), se tiende a pensar que
la transfusión será espontáneamente compatible, lo que puede confundirse con un
trabajo de laboratorio rigurosamente bien hecho, en donde nuestro énfasis debe
estar puesto en prevenir errores antes que detectarlos, dado que esta “espontánea
compatibilidad” está cambiando por el mayor uso de transfusiones, por la sobrevida
cada vez mayor de los enfermos poli transfundidos y los cambios demográficos y
genéticos producto de las inmigraciones.
Por otro lado, no debemos olvidar que cada individuo constituye una entidad
inmunológica única, debido al extremado polimorfismo humano; es entonces,
acertada la descripción de “SOLEDAD BIOLÓGICA” con la que Albert Jacquard
define al ser humano y, por extensión al ser animal.

BIOSEGURIDAD EN EL BANCO DE SANGRE
Debe usarse rutinariamente:
• Guantes desechables:
Cambiar entre donantes y cuando se rompan.
Lavar las manos al sacárselos.
• Delantal de Servicio:
Uso restringido al Banco de Sangre (delantal verde para el estudio de
infecciones transmisibles por vía transfusional).
• Pechera impermeable para el lavado de material.
• Mascarilla, anteojos protectores (sólo en procedimientos que expiren

aerosoles o salpiquen sangre).
• No fumar, no beber, no comer en laboratorios.
• No almacenar alimentos en el refrigerador y/o freezer del laboratorio.
Prevención de lesiones:
• Manipulación agujas:
Nunca recapsularlas, doblarlas o manipularlas con las manos.
La aguja y jeringa desechable se eliminan en el recipiente de material
cortopunzante. Nunca reutilizar las agujas.
• Lámina de clasificación, tubos Kahn, pipetas Pasteur, baguetas:

Colocarse en cloro 0,5% por 30 min. tan pronto se utilice, luego proceder a
lavado y secado habitual (detergente, agua corriente, agua destilada y
secado pupinel).
• Lancetas y capilares:
Una vez utilizadas se eliminan en los depósitos de material cortopunzante.
• Pinzas y tijeras:
Manejarlas en glutaraldehído al 0,13%.

OTROS:
• Al trabajar con pipetas automáticas, las puntas deben desecharse en un

contenedor resistente.
• No pipetear con la boca, sólo con propipeta.
• Usar centrifugas tapadas y limpias.
• Mantener recipiente con cloro al 0,5% exclusivo para material reutilizable,
cambiar todos los días.
• Aseo diario de superficies de trabajo, centrífugas y baño María con cloro
0,5%.
• Eliminación del material cortopunzante desechable, agujas, lancetas,
bolsas con sangre (o derivados), algodones con sangre en recipiente plástico
o de cartón y se envía a incinerar.
Colocar recipiente para depositar material cortopunzante en un lugar próximo
al lugar de trabajo en donde se requiera. El traslado de estos recipientes debe
hacerse en bolsas de basura.
• Eliminación de desechos líquidos en drenaje conectado a red de
alcantarillado. Si se realiza este procedimiento en instalación en la cual se
realizan otras funciones, se recomienda desinfectar posteriormente con cloro
0,5%.
• Lavado de material con sangre eliminando primero los coágulos en bolsa
gruesa para ser depositada en caja de material contaminado. Luego proceder
al lavado del tubo previa descontaminación en cloro 0,5% por 30 min.
• Usar guantes y pechera plástica para lavar el material reutilizable.
• Mantener en los laboratorios cloro al 0,5% para recibir material reutilizable
(tubos, baguetas, láminas) donde debe permanecer 30 min. antes de lavado
habitual.
• Eliminar descontaminado todo material de vidrio trizado, quebrado o con
riesgo de producir cortes en la piel, en caja de cartón y luego eliminar en la
basura.
• El aseo en paredes y vidrios se debe realizar en forma habitual (detergente,
enjuague, secado).

TIPOS DE MUESTRAS UTILIZADAS EN INMUNOHEMATOLOGÍA
La extracción de una muestra de sangre del receptor adecuadamente

rotulada es decisiva para una transfusión de sangre segura. La mayoría de las
reacciones hemolíticas transfusionales son consecuencia de errores en la
identificación del paciente o de la muestra.
Las pruebas realizadas en el Banco de Sangre pueden hacerse utilizando

muestras de suero o plasma, dependiendo del tipo de examen que realicemos y la
tecnología que usemos. El plasma a veces da lugar a problemas técnicos si se
producen coágulos de fibrina que atrapan eritrocitos en agregados que semejan
aglutinación y altos niveles de fibrina pueden inducir a la formación de rouleaux
dando lugar a falsos positivos.
Por otro lado, para algunas determinaciones es necesario el uso de suero

fresco, debido a que la presencia del complemento es fundamental para que la
reacción antígeno-anticuerpo ocurra. El complemento es relativamente inestable y
se deteriora con el almacenamiento. En un día a 37ºC, 2 días a T º ambiente o en 3
semanas a 4ºC se pierde más del 50% de su actividad, mientras que después de
mantenerlos 4 semanas a -20ºC persiste aún un 90% de su actividad, así como
después de 12 semanas a -55ºC.

CALIBRACIÓN DE CENTRIFUGAS
Cada centrífuga debe ser calibrada al recibirla o después de un ajuste o

reparación. La calibración de una centrifuga evalúa el comportamiento de las células
en soluciones de diferente viscosidad.
PARA LECTURA:
1. Utilice un suero que contenga un anticuerpo que produzca una aglutinación

macroscópica de 1+.
2. Seleccione glóbulos rojos positivos y negativos para el antígeno apropiado y

prepare suspensiones frescas en las concentraciones utilizadas
rutinariamente en el laboratorio (por ejemplo 2-5%).
a) Para anticuerpos activos en salino: suero de una persona A (anti B)

y diluido con albúmina al 6% hasta dar una aglutinación macroscópica
de 1+ (3 ml de albúmina de bovino al 22% + 1 ml salino = albúmina al
6%).
b) Para anticuerpos con alto contenido proteico: 1 parte de anti D

diluido con 25-30 partes de albúmina al 22% o 30% hasta dar una
aglutinación macroscópica de 1+.
3. Para cada set de prueba, salino y albúmina prepare 5 tubos Kahn (10 x 75
mm) para reacciones positivas y un set duplicado de tubos para las 5
reacciones negativas. Agregue el suero y las células justo antes de
centrifugar.
4. En parejas, un positivo y un negativo, centrifugue los tubos tiempos diferentes

(ej. 10, 20, 30 seg.), observe cada tubo en busca de aglutinación y anote los
resultados de acuerdo con los siguientes parámetros:
Criterio Tiempo en segundos

10 15 20 30 35
Sobrenadante claro NO NO SI SI SI
Botón celular claramente delineado NO NO SI SI SI
Las células se resuspenden fácilmente SI SI SI SI NO
Aglutinaciones +/- +/- 1+ 1+ 1+
Control negativo es negativo SI SI SI SI SI
5. El tiempo óptimo de centrifugación es el tiempo mínimo requerido para

cumplir con todos los criterios (en el ejemplo sería 20 seg.).

PARA LAVADO Y TEST DE ANTIGLOBULINA (SAGH):
Las condiciones de centrifugación para esta técnica son diferentes, por lo que
cada centrifuga debe, además, ser calibrada para estos fines. Puede determinarse
en un solo procedimiento las condiciones óptimas de lavado y lectura para el test
AGH.
Materiales:
1. Suero antiglobulina humana (SAGH).

2. Control Positivo: una suspensión al 2-4% en salino de eritrocitos D positivos
incubados por 15 min. a 37ºC con anti-D para dar una aglutinación
macroscópica de 1+ después de agregarse el SAGH.
3. Control negativo: una suspensión al 2-4% en salino de los mismos eritrocitos
D positivo, incubado por 15 min. a 37ºC con 6% de albúmina.
4. Suero fisiológico.
Método:
1. Prepare 5 pares de tubos controles positivos y 5 negativos.
2. Llene los tubos con suero salino y centrifugue los pares por diferente tiempo
(ej.: 30, 45, 60, 90 y 120 seg.). Los GR deben formar un botón claro y bien
delimitado sin células depositadas a lo largo del tubo después que se haya
eliminado el salino; este botón debe re suspenderse fácilmente en el líquido
residual. El tiempo ideal será el menor que cumpla con estos requisitos.
3. Repita el proceso de lavado por dos veces más, usando el tiempo establecido
como óptimo.
4. Elimine el salino sobrenadante vigorosamente y el botón debe quedar seco.
5. Agregue SAGH a cada par de tubos y centrifugue por diferentes tiempos (ej.:
10, 15, 20, 30, 45 seg.).
6. Seleccione el tiempo óptimo de lectura de acuerdo con lo descrito en el punto

4 del procedimiento anterior.

TÉCNICA EN LAMINA PARA LA CLASIFICACIÓN ABO Y RhD
Son técnicas de uso rápido, basadas en una reacción antígeno-anticuerpo,

cuyo resultado es una aglutinación macroscópica, perfectamente visible sobre una
fuente de luz. No necesitan de sedimentación o centrifugación. La suspensión
celular “concentrada” produce un contacto cercano entre los GR y se desarrolla
rápidamente la aglutinación.
Los anticuerpos que actúan débilmente NO aglutinarán GR directamente por

este método.
Los sueros clasificadores utilizados, otorgan los anticuerpos (IgM para

Sistema ABO y mezcla de IgG/IgM para RH) que detectarán los antígenos presentes
en la membrana de los GR del individuo.
Esta técnica es utilizada para clasificación del donante de sangre al momento

de la selección de este, reclasificación de concentrado de glóbulos rojos previo a
una transfusión sanguínea y clasificación de grupo sanguíneo al pie del paciente.
Materiales:
• Fuente de luz
• Lámina de vidrio
• Baguetas y/o mezcladores desechables
• Pipetas Pasteur plásticas
Reactivos:
Sueros clasificadores ABO y RH
Suero anti-A: contiene anticuerpos anti-A (azul)

Suero anti-B: contiene anticuerpos anti-B (amarillo)
Suero anti-AB: contiene anticuerpos anti-A y anti-B (transparente o ligeramente
rosado)
Suero anti-D: contiene anticuerpos anti-D (transparente)
Muestra:
Sangre fresca con o sin anticoagulante, punción venosa o dactilar.
Método:
1. Colocar en forma vertical en una lámina de vidrio, 1 gota de suero anti-A,

anti-B, anti-AB y anti-D (siempre en ese orden).
2. Añadir a cada suero clasificador una gota de GR de la muestra a clasificar.

3. Mezclar con una bagueta o mezclador desechable, distribuyendo la mezcla

en un círculo de ± 1,5 cm de diámetro.
4. Suavemente realizar movimientos circulares a la lámina sobre la fuente de

luz. La aglutinación se producirá a los pocos segundos, exceptuando aquella
en la que participa un antígeno débil, la que requerirá un tiempo de
observación más prolongado. El tiempo máximo de lectura no debe
exceder los 2 minutos, dada la exposición al calor, la cual secará los bordes
de la muestra.
5. Lectura:
Reacción +: Aglutinación.
Reacción (-): No hay signos de aglutinación, la reacción se ve totalmente

homogénea.

TÉCNICAS EN TUBO

TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN EN TUBO: INFORME EN CRUCES
Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden evidenciarse de diferentes

formas. En el Banco de Sangre visualizamos éstas por medio de la aglutinación de
GR, preferentemente.
FUERZA SCORE O ASPECTO

DE VALOR
REACCIÓN
4+ (++++) 12 Aglutinado único. Ausencia de células libres.
3+ (+++) 10 Reacción fuerte. Presencia de aglutinados grandes.

Sin células libres.
2+ (++) 8 Aglutinados grandes en un mar de aglutinados

pequeños. Sin células libres.
1+ (+) 5 Muchos aglutinados pequeños en un mar de células

libres.
½+ (+/-) 3 Granularidad débil en la suspensión celular. Pocos

aglutinados macroscópicos, pero numerosos
aglutinados microscópicos.
Trazas 2 Negativo macroscópicamente. Pocos aglutinados de

6 a 8 células en muchos campos.
0 (-) 0 Ausencia de aglutinación.

VISUALIZACIÓN DE LA AGLUTINACIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO EN TUBO
Lectura macroscópica
Botón de GR resuspendidos suavemente

LAVADO DE GLÓBULOS ROJOS
El lavado de GR se realiza para:
• Eliminar antígenos solubles y globulinas séricas que pudieran interferir en la

realización de la(s) técnica(s).
• Eliminar macromoléculas que puedan ocasionar algún tipo de aglutinación
falsa y/o formación de Rouleaux (ej.: Dextran).
• Eliminar la gelatina de Wharton que pudiera contener una muestra de cordón
umbilical para la clasificación de un recién nacido.
Muestra
Glóbulos rojos, tomados a partir de una muestra de sangre total con o sin
anticoagulante
Método:
1. Coloque 2 o 3 gotas de sangre en un tubo Kahn (en general, se evalúa la

cantidad de sangre necesaria para lavar según el procedimiento que se
realice y la cantidad de glóbulos rojos que se necesite).
2. Llene el tubo hasta 1 cm del borde con PBS o SF, según corresponda.
3. Centrifugue a 3000 rpm durante 1min 30segs.
4. Elimine el sobrenadante hacia el lado contrario donde se encuentra el botón

de GR.
5. Agite el tubo para resuspender los GR en el líquido residual. Esto constituye

un lavado.
6. Repetir el procedimiento 2 veces más (Total: 3, corresponde al mínimo de

lavados que debe realizar).
7. El último lavado siempre debe tener un sobrenadante claro, sin signos de

hemólisis.
8. Para una suspensión al 4% (rojo tomate) agregue una parte de GR lavados

más 1 o 2 ml de PBS (o EDTA 1,5% según corresponda).
Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile

PREPARACIÓN DE GLÓBULOS ROJOS TESTIGOS A Y B
El sistema ABO, es el único sistema sanguíneo en el cual el suero de la

mayoría de las personas NO expuestas a eritrocitos humanos posee anticuerpos
recíprocos constantes y previsibles. Esto permite realizar una clasificación
serológica del paciente con glóbulos rojos testigo, es decir, determinar la presencia
de anticuerpos naturales del sistema ABO (anti A y anti B) en el suero o plasma del
individuo. Esta clasificación serológica es llamada CONTRAPRUEBA o PRUEBA
INVERSA y está incluida en la clasificación ABO y Rh(D) de rutina en adultos.
Recuerde que los antígenos y anticuerpos del sistema ABO son
EXCLUYENTES, por lo tanto:
Grupo Sanguíneo Antígeno en membrana de Anticuerpo en suero o

GR plasma
A A Anti B
B B Anti A
AB AYB Ninguno
O O Anti A Anti B
Materiales:
• GR A y B clasificados previamente
• SF, PBS, EDTA 1,5%.
Muestra:
Sangre fresca con o sin anticoagulante, punción venosa.
Método:
1. Rotular 2 tubos, uno GR A y otro GR B. Lavar 3 veces GR clasificados A y B

en cada tubo, según corresponda.
2. Rotular 2 envases con su respectivo nombre y agregar los GR lavados.

Proceder de la siguiente forma:
• ALMACENAMIENTO: Suspender los GR lavados en un volumen equivalente

de PRESERV – 21 (solución concentrada de GR), el cual permite mantener
viable los GR por 21 días aprox. a 4 º C.
• SOLUCIÓN DE TRABAJO DIARIO: A partir de los GR A y B suspendidos

con PRESERV– 21, agregar en un tubo previamente rotulado, un volumen
necesario de estos GR los cuales para resuspender al 4% en EDTA 1,5% o
PBS.

PREPARACIÓN DE CÉLULAS CONTROL
Las células control son GR O+ recubiertos in vitro con un anticuerpo IgG de

especificidad anti – D, con el objetivo de obtener una reacción de aglutinación de
2+ a 3+ al ser enfrentados con SAGH. De este modo al ser agregadas a un test de
antiglobulina negativo se producirá una reacción de aglutinación visible (2+ a 3+).
Estás células control (CC) se agregan para demostrar que el SAGH está
activo, y de esta forma, confirmar que una reacción negativa en SAGH realmente lo
es, para ello, estás células DEBEN AGLUTINARSE, de lo contrario, toda prueba
queda invalidado y el procedimiento debe ser repetido.
Materiales:
• GR O+.
• Suero anti-D tipo IgG diluido 1/32
Métodos:
1. Lavar 3 veces los GR O+ con PBS.
2. Preparación suero anti – D diluido 1/32: Colocar en un envase con gotario

previamente rotulado 1 gota suero anti-D con 31 gotas de PBS y
homogenizar.
3. Adicionar en un tubo los GR previamente lavados con una cantidad suficiente

de anti D diluido. Ejemplo: 10 gotas de GR O+ más 5 gotas de suero anti D
diluido.
4. Mezclar e incubar a 37ºC por 30 min.
5. Lavar los GR 3 veces en PBS.
ALMACENAMIENTO
Estas células control pueden suspenderse en PBS al 4% y guardarse a 4ºC durante
48 horas. Si se suspenden en PRESERV-21 durarán 21 días a 4ºC.
CHEQUEO CÉLULAS CONTROL

• Enfrentar una gota de esta suspensión a 2 gotas de SAGH poli específico.
Centrifugar 20 seg y leer.
• Para su lectura se debe agitar muy suavemente el tubo, ya que la unión es
muy débil.
• La reacción debe ser de 2+ a 3+.

TEST o PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA

(Antiguamente llamado Test de Coombs)
En solución salina normal la fijación de anticuerpos del tipo IgM a los

eritrocitos, generalmente produce aglutinación; por el contrario, los anticuerpos del
tipo IgG se fijan a los GR, sensibilizándolos, sin producir aglutinación.
Esta sensibilización de los eritrocitos, ya sea por los anticuerpos tipo IgG o
por fracciones del complemento, puede detectarse o evidenciarse mediante la
técnica de antiglobulina humana.
El principal reactivo es denominado SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA

(SAGH), que como su nombre lo indica, es un suero que contiene inmunoglobulinas
contra los anticuerpos humanos de tipo IgG y/o contra fracciones del complemento.
Este SAGH se prepara inmunizando animales de experimentación como

conejo, cabra u oveja con IgG (SAGH con especificidad anti gamma) o con
fracciones C3 y C4 del complemento (SAGH con especificidad anti no gamma) o
con ambos (suero poli específico). Este último es de uso preferencial en la mayoría
de los Bancos de Sangre y es coloreado verde para diferenciarlo de los SAGH
monoespecíficos que son transparentes.
Existen dos tipos de Test de Antiglobulina Humana, ambos están basados en

el mismo fundamento; detectar anticuerpos o fracciones del complemento unidos a
las células utilizadas en la prueba:
• TEST DE ANTIGLOBULINA DIRECTO (TAD): pesquisa anticuerpos y/o

fracciones del complemento adheridos al GR “in vivo”.
• TEST DE ANTIGLOBULINA INDIRECTO (TAI): detecta anticuerpos libres

existentes en el suero del paciente (anticuerpos contra algunos antígenos de
GR), previa incubación del suero con reactivos eritrocitarios de antigenicidad
conocida (Panel celular).
INDICACIONES DEL TAD:
En el diagnóstico de:
• Enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN).

• Anemia hemolítica autoinmune (AHAI).
• Anemia hemolítica inducida por fármacos.
• Reacciones transfusionales.

INDICACIONES DEL TAI:
• Detección e identificación de anticuerpos irregulares.

• Determinación de fenotipos.
• Prueba de compatibilidad.
• Cualquier sospecha de anticuerpos libres (no adheridos) en sueros.
I. TEST DE ANTIGLOBULINA DIRECTO (TAD)
Muestra:
Sangre fresca con EDTA
Material:
• Pipetas plásticas.
• Tubos Kahn.
• Fuente de luz.
• Gradillas.
• Suero fisiológico o PBS.
• SAGH
• Células control
Método:
1. Coloque 2 o 3 gotas de sangre en un tubo.
2. Lavar 3 veces estos GR con PBS. Después del último lavado preparar una
suspensión GR al 4% en PBS.
3. En un tubo aparte rotulado según corresponda coloque 2 gotas de SAGH y

agregue 1 gota de la suspensión de GR al 4%.
4. Mezclar bien y centrifugar inmediatamente a 3000 rpm durante 20 seg.
5. Leer sobre una fuente de luz, removiendo suavemente los GR sedimentados

y observando si existe o no aglutinación.
6. Si la prueba es negativa, agregar 1 gota de células control para verificar los

resultados.
Interpretación: La reacción positiva de aglutinación de los GR indica que estos han

sido recubiertos por anticuerpos “in vivo” (GR sensibilizados).

II. TEST DE ANTIGLOBULINA INDIRECTO (TAI)
Muestra:
Sangre fresca sin anticoagulante (centrifugar el tubo 5 min a 3000 rpm)
Material:
• Pipetas plásticas.
• Tubos Kahn.
• Fuente de luz.
• Gradillas.
• SAGH
• Reactivos eritrocitarios comerciales: panel I y II.
• Células control
Método:
1. Marcar dos tubos: uno para el panel I y otro para el panel II.
2. Depositar una gota de los paneles al tubo que corresponda.
3. Agregar 2 gotas de suero del paciente. Centrifugar y leer.
4. Incubar durante 30-60 min a 37ºC. Cuando se está investigando un

anticuerpo sérico de potencia desconocida se recomienda un periodo de
incubación no inferior a 60 min. Si se utiliza un potenciador de reacción el
tiempo de incubación puede disminuir a 15 min.
5. Mezclar bien y centrifugar a 3000 rpm durante 20 seg.

6. Agitar suavemente y observar si existe o no aglutinación macroscópica, si
está débil o negativo procédase en la forma siguiente:
a) Lavar los GR 3 veces en solución salina, después del último lavado

eliminar tanta solución salina como sea posible. Para esto escurra hasta
la última gota de sobrenadante sobre papel absorbente.
b) Agregar 2 gotas de SAGH.
c) Mezclar bien y centrifugar a 3000 rpm durante 20 seg.
d) Remover suavemente los GR sedimentados y observar sobre la fuente
de luz si existe o no aglutinación macroscópica.

Interpretación:
• Si existe aglutinación en el punto 3, significa que hay en el suero del individuo

un anticuerpo frío del tipo IgM.
• Si existe aglutinación en el punto 5, significa que hay un anticuerpo del tipo

IgM o uno del tipo IgG en título alto.
• Si existe aglutinación en el punto 6, significa que existe en el suero del

individuo un anticuerpo del tipo IgG.
• Si la prueba es negativa, agregar 1 gota de CC para verificar los resultados.
TUBOS CONTROL: Al realizar la prueba de antiglobulina deben controlarse los

reactivos y todos los pasos de la técnica trabajando, paralelamente a la muestra,
los controles negativos y positivos. Nosotros en práctico utilizaremos las células
testigo.
a) Control negativo:
Opciones: GR A o B más PBS
GR O Rh D positivo (panel) más PBS
b) Control positivo:
Opciones: GR A o B más suero anti A o B según corresponda
GR O Rh D positivo (panel) más suero anti D
Células control más SAGH

PRUEBA AUTÓLOGA
El trabajo rutinario de Banco de Sangre exige la práctica de ciertos controles

que aseguran la veracidad de los resultados, uno de ellos es la prueba autóloga
(PA), que consiste en poner en contacto GR y suero de una misma persona en
diferentes condiciones de temperatura y medio de reacción, a fin de detectar
aglutinación.
Junto con el TAD constituyen técnicas fundamentales en la investigación de

las AHAI y junto al TAI son parte de la clasificación de rutina de adulto.
Método:
1. En un tubo colocar 2 gotas de suero del paciente más 1 gota de suspensión

de GR al 4% del mismo paciente.
2. Centrifugar a 3000 rpm durante 20 seg y leer frente a una fuente de luz. Si
los resultados son negativos, incubar 30 min a 37ºC, centrifugar y leer.
3. Si el resultado sigue siendo negativo, lavar 3 veces con abundante solución

salina, después del último lavado eliminar tanta solución salina como sea
posible.
4. Agregar 2 gotas de SAGH.
5. Centrifugar y leer frente a una fuente de luz.
6. Si el resultado es negativo, agregar 1 gota de Células Control.
Interpretación:
• Resultados positivos indican que el paciente tiene autoanticuerpos o

anticuerpos poliaglutinantes que pueden interferir en otras determinaciones
inmunohematológicas.
• Resultados negativos indican ausencia de autoanticuerpos fríos, calientes y

panaglutininas.

RECOMENDACIONES PREVIAS A REALIZAR UNA CLASIFICACIÓN DE

GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RhD
1. Si la muestra proviene de un donante, cerciórese que sean coincidentes el

número correlativo con las iniciales de dicho donante. Si la muestra proviene
de un paciente o receptor, cerciórese que la muestra corresponda con la
solicitud de examen recibida, comprobando los nombres, apellidos, servicio
de procedencia y número de la ficha clínica.
2. No olvide que la proporción antígeno-anticuerpo debe ser 1:1 para las

pruebas en lámina y 1:2 para las pruebas en tubo.
3. La aglutinación de sistema ABO se produce aproximadamente a los 30 seg.
4. La aglutinación del sistema RH requiere algo de temperatura, por lo tanto,

demorará algunos segundos más (máximo 2 min).
5. En caso de aglutinación dudosa, agregar una o dos gotas de suero

fisiológico, el cual disolverá la pseudoaglutinación, quedando sólo si los hay,
los aglutinados producidos por una reacción débil.
6. Controle sus sueros clasificadores.
7. Se recomienda usar como control negativo una gota de sangre sola o

mezclada con una gota de suero fisiológico.
8. Las técnicas usadas en lámina son MENOS precisas que las realizadas en
tubo y son utilizadas sólo como screening o reclasificación. Para realizar una
clasificación se debe usar SIEMPRE la técnica de GRADILLA COMPLETA.
9. Si las reacciones observadas no concuerdan con el cuadro expuesto, debe

realizar otros estudios para completar y afirmar esa clasificación; y podría
tratarse de:
• Un subgrupo ABO y/o RH
• Interferencia ocasionada por macromoléculas extrañas y/o propias.
• Baja potencia del o los sueros clasificadores.
• Baja antigenicidad de los GR, etc.
10. Cuidados con las variantes de antígenos y/o antígenos débiles, pues pueden
informar un FALSO negativo.
11. Marque visiblemente el resultado de la clasificación con lápiz de cera en la

etiqueta del frasco y en la orden del examen.
12. NO firme clasificaciones que usted NO realizó y/o NO leyó.

CLASIFICACIÓN DEL RECIÉN NACIDO
Los aglutinógenos A y B de los RN son generalmente poco antigénicos, por

lo que se recomienda el uso de sueros clasificadores muy potentes y el uso
OBLIGATORIO del suero anti-AB como control (las aglutinaciones son más débiles).
Los RN no presentan aglutininas anti-A y/o anti-B en plasma, ya que estás

sólo empiezan a formarse al tercer mes de vida extrauterina. Por este motivo no son
clasificadas con GR testigos.
En ocasiones es posible detectar aglutininas anti-A y/o anti-B en el suero del

RN transferidas pasivamente por la madre, no correspondiendo a anticuerpos
propios del RN.
Los RN deben ser reclasificados al año de vida, especialmente si fueron

clasificados como AB.
Muestra:
Sangre con EDTA
Método:
1. Como la muestra sanguínea es de cordón umbilical, los GR deben ser

lavados al menos 3 veces en abundante solución salina para eliminar la
gelatina de Wharton que interfiere en la reacción. (si fuese necesario
continuar con los lavados)
2. Numerar 5 tubos correlativos.
3. Colocar en los 4 primeros tubos ordenadamente, 2 gotas de los sueros
clasificadores para la clasificación ABO y RH(D): anti-A, anti-B, anti-AB y anti-
D.
4. Al tubo N.º 5 agregar 2 gotas de SAGH. El TAD es el examen obligatorio
en la clasificación de un RN.
5. Agregar a todos los tubos (cinco) una gota de los GR lavados y suspendidos
al 4% en PBS.
6. Centrifugar todos los tubos a 3000 rpm por 20 seg.
7. Si el tubo Nº 4 da un resultado negativo, proceder igual que con el tubo Nº 4
de la clasificación de rutina de un adulto.

CLASIFICACIÓN DE RUTINA EN EL ADULTO
Nos permite identificar la clasificación ABO y RH(D) del paciente, incluyendo

un autocontrol o PRUEBA AUTOLOGA (PA) y la detección de anticuerpos
irregulares por medio de un TAI, el cual es realizado para detectar anticuerpos
clínicamente significativos, diferentes al A o B, que son los anticuerpos naturales
del sistema ABO. Estos anticuerpos clínicamente significativos reaccionan a 37ºC y
casi siempre son capaces de destruir los GR transfundidos que tengan el antígeno
en particular. Al detectarlo, debemos definir su especificidad, estudiando el suero
del paciente con técnicas más específicas que detallaremos más adelante.
Muestra:
Ideal: Sangre total obtenida por punción venosa sin anticoagulante.
(Sin embargo, actualmente en muchos lugares se utiliza sangre venosa con EDTA).
Método:
1. Enumerar las muestras y centrifugar durante 5 min a 3000 rpm para obtener
suero o plasma del paciente.
2. Enumerar correlativamente ocho tubos por cada muestra y ordenarlos en
forma vertical de adelante hacia atrás en la gradilla.
3. A los tubos N.º 4, 5, 6, 7 y 8 agregar 2 gotas del suero/plasma del paciente.
4. Prepare en otro tubo una suspensión al 4% de los GR en PBS o en su propio
suero.
5. Colocar a cada tubo rotulado los siguientes reactivos:
Clasificación ABO
Tubo Nº 1: 2 gotas de suero anti-A+1 gota GR paciente suspendidos al 4%
Tubo Nº 2: 2 gotas de suero anti-B+1 gota GR paciente suspendidos al 4%
Clasificación RH(D)
Tubo Nº 3: 2 gotas de suero anti-D+1 gota GR paciente suspendidos al 4%
Contraprueba ABO (Células testigos)

Tubo Nº 4: 1 gota de GR testigo A +2 gotas de suero/plasma paciente
Tubo Nº 5: 1 gota de GR testigo B +2 gotas de suero/plasma paciente
TAI (Reactivos eritrocitarios)

Tubo Nº 6: 1 gota de GR O+ (panel I) +2 gotas de suero/plasma paciente
Tubo Nº 7: 1 gota de GRO+ (panel II) +2 gotas de suero/plasma paciente
Prueba Autóloga
Tubo Nº8: 2 gotas de suero/plasma paciente+1 gota GR paciente suspendidos

al 4%

6. Centrifugar todos los tubos a 3000 rpm por 20 segundos y leer.

7. Independiente del resultado los tubos Nº 6, 7 y 8 se incuban 30-60 min a
37ºC. Pasado el tiempo de incubación centrifugar y leer.
a) Si su lectura es negativa, los tres tubos se lavan 3 veces en salino. Dejar
escurrir el sobrenadante en el último lavado sobre papel absorbente.
b) Se agregan 2 gotas de SAGH. Centrifugar y leer.
c) Si el resultado de la lectura con SAGH es negativo, controle la técnica
agregando a los tubos 1 gota de células control. Centrifugar y leer.
ESTUDIO VARIANTES DÉBILES O PARCIALES DE D

Procedimiento en adultos y recién nacidos técnica en tubo
Si en el tubo 3 la aglutinación es igual o menor a 2+, debe continuarse el

estudio molecular en laboratorios que dispongan de las metodologías, como el
Laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública de Chile para identificar el
tipo de variante del antígeno Rh D.
Si en el tubo 3 se obtiene una reacción negativa, se debe continuar el estudio
en busca de variantes débiles o parciales del antígeno D. Para esto debe hacer lo
detallado a continuación:
1. En un tubo lavar 3 veces GR del paciente según el potenciador de reacción
empleado.
Opciones:
• PBS: Realizar 3 lavados y suspender GR 4%.
• LISS: Realizar 2 lavados con PBS. Tercer lavado y suspensión GR 4% con
LISS. (La mayoría de los laboratorios utilizan LISS como potenciador de la
reacción, por ende, será el empleado en práctico).
2. Se debe preparar las muestras como se indica a continuación:
D1: En un tubo colocar 2 gotas de suero anti-D* tipo IgG/IgM + 1 gota de GR lavados 4%.
Control +(C+): En un tubo agregar 2 gotas de suero anti D IgG + 1 gota de GR R1r al 4%
Control – (C-): En un tubo agregar 2 gotas de suero anti D IgG + 1 gota de GR rr al 4%.
TAD: En un tubo agregar 2 gotas de SAGH + 1 gota de GR lavados 4%. Centrifugar 20
seg y leer.
3. Incubar los tubos D1, C+ y C- según el procedimiento de lavado. Opciones:

• PBS: 30 min a 37ºC, luego, centrifugar 20 seg y leer.
• LISS: 15 min a 37ºC, luego, centrifugar 20 seg y leer.
*: Al menos uno de los sueros comerciales anti D debe detectar la variante DVI

4. Si luego de la incubación sigue dando negativo, lavar 3 veces con PBS, dejar
escurrir completamente en el último lavado sobre un papel absorbente y agregar 2
gotas de SAGH. Centrifugar 20 seg y leer.
5. Si la reacción sigue negativa, agregar 1 gota de CC para confirmar la lectura

realizada. Centrifugar 20 seg y leer.
6. Registre sus resultados
Interpretación
Tubo 3 Tubo D1 Controles TAD Interpretación
Positivo - - - Rh D Positivo
Negativo Negativo OK Negativo Rh D Negativo
Presencia de variante débil o

parcial del antígeno D. Se
Negativo Positivo OK Negativo
recomienda derivar para estudio
de identificación.
Indeterminado. Se debe realizar

Negativo Positivo OK Positivo estudios adicionales (Ej: Elusión y
adsorción)
Informe de resultados:
Si se obtiene un resultado positivo en el tubo 3, debe informarse como: Rh D positivo
Si obtenemos un resultado positivo al realizar el estudio de variantes, se debe

informar como: Rh D positivo (variante)
Si el resultado del tubo 3 y del estudio de variantes es negativo, se debe informar

como: Rh D negativo.

DISCREPANCIAS ENTRE LA PRUEBA SERICA Y LA PRUEBA GLOBULAR
Cuando los resultados entre ambas pruebas no concuerdan, existe una

discrepancia y ésta debe ser investigada. Si se trata de una unidad de sangre
donada, ésta debe conservarse separada y no debe transfundirse hasta que se haya
resuelto la discrepancia. Cuando la muestra de sangre es de un paciente que
requiere una transfusión, puede transfundírsele con GR O, tomando previamente
una muestra en cantidad suficiente para el estudio de la discrepancia.
La discrepancia en la determinación del grupo ABO es el resultado de:

• Error técnico.
• Problemas inherentes a las células.
• Problemas inherentes al suero.
ERRORES TÉCNICOS
1. Material sucio causa falsos positivos.
2. Contaminación bacteriana de la(s) muestra(s).
3. Contaminación de los reactivos: sueros y/o células.
4. Proporción incorrecta de la relación células/suero.
5. Exceso o falta de centrifugación.
6. Falta de adición de reactivo(s) o suero(s).
7. Uso incorrecto de la temperatura de incubación.
8. Pérdida de actividad de los reactivos.
9. Empleo inadecuado de reactivo(s) y células.
10. Presencia de hemólisis no identificada a tiempo, conducente a lecturas

falsamente negativas para aglutinación.
11. Incorrecta identificación de las muestras o de los tubos.
12. Falla en la anotación de los resultados y errónea interpretación de estos.

PROBLEMAS INHERENTES A LAS CÉLULAS
1. Cuando las células están suspendidas en su propio suero puede haber

formación de rouleaux (simulando aglutinación) debido al exceso de
proteínas y/o presencia de proteínas anormales. La presencia de gelatina de
Wharton (en sangre de cordón umbilical) o de otras macromoléculas (ej.
Dextran) puede producir pseudoaglutinación, lo que puede provocar falsos
positivos o interferencias en la lectura de la reacción. El lavado previo de los
glóbulos rojos que van a ser utilizados en las pruebas celulares evita estos
problemas.
2. Si el paciente es del grupo A o B y ha sido transfundido recientemente con
GR O, la muestra es una mezcla de sangre y los resultados pueden ser
diferentes, obteniéndose una reacción de campo mixto.
3. El paciente puede presentar problemas de autosensibilización marcada y al
estar los GR fuertemente sensibilizados pueden aglutinar aún en medios de
baja concentración proteica.
4. Puede presentarse el fenómeno de poliaglutinación debido a defectos
genéticos o adquiridos de la membrana del eritrocito.
5. Existencia de subgrupos débiles de los antígenos A o B.
6. El paciente con infecciones por gérmenes gran negativos (ej.: E. coli O 86),
con carcinomas de colon, recto, cuello uterino, próstata y peritoneo,
clasificados como grupo sanguíneo A pueden, transitoriamente, alterar su
antígeno a especificidad B.
7. Altas concentraciones de sustancias de grupo sanguíneo en el suero pueden
neutralizar los reactivos anti-A y/o anti-B, inhibiendo su reacción con los
antígenos celulares.
PROBLEMAS INHERENTES AL SUERO
1. Presencia de anticuerpos irregulares, fríos, que reaccionan con otro antígeno

presente en los eritrocitos A o B usados en la contraprueba, entre los que se
encuentran:
• Auto anti-I, es el de mayor incidencia.
• Anti-A en el suero de personas A2 y A2B.
• Anti-H en personas A o A1B, generalmente causan pocos problemas por
su baja frecuencia, la cual se ha calculado en 0,5% para A y 3% para AB.
• Otros anticuerpos como anti-P1, anti-Lea, anti-Leb, anti-M, etc.
• Presencia de anticuerpos contra elementos preservantes (antibióticos),
colorantes u otros compuestos adicionados a los reactivos.
2. Se puede observar formación de rouleaux debido a la presencia de altas

concentraciones de fibrinógeno, proteínas anormales e
hipergamaglobulinemias.

3. La agregación puede confundirse con aglutinación cuando el paciente ha

recibido por vía endovenosa expansores plasmáticos de alto peso molecular,
inyección de medios de contraste o drogas.
4. Ausencia de anticuerpos o títulos muy bajos de anti-A y anti-B en:

• RN y lactantes menores de 3 meses.
• Pacientes con hipo o agamaglobulinemias.
• Ancianos y pacientes desnutridos.
RESOLUCIÓN DE LAS DISCREPANCIAS
Antes de iniciar un estudio del problema presentado, es recomendable ejecutar

cuatro puntos importantes:
• Verificar que no exista error en el protocolo de trabajo al realizar las

anotaciones de los resultados obtenidos.
• Verificar la ausencia de error en la identificación de las muestras estudiadas
en los tubos de prueba, etc., es decir, revisar cabalmente el procedimiento
empleado.
• Controlar la actividad de los reactivos y las condiciones de las células
utilizadas en las pruebas.
• Si los tres puntos anteriores se encuentran en orden, repita todo el
procedimiento siguiendo una técnica impecable.
Si aún persiste la discrepancia, se deberá proceder de la siguiente forma:
1. Obtenga una nueva muestra; corregirá así discrepancias causadas por

contaminación o errores en la identificación de la muestra.
2. Lave las células-paciente 4 veces y prepare una suspensión al 4% en salino

y enfréntelas a los sueros anti-A, anti-B, anti-AB y lectinas anti-A y anti-H.
3. Estudie el suero paciente cruzándolo con GR A1, A2, B, células de panel y

células O de cordón umbilical (fetales), procesando al mismo tiempo un
autocontrol.
4. Incube las pruebas celulares y séricas durante 30 minutos a temperatura

ambiente (20-24ºC), centrifugue, observe si hay presencia de hemólisis
contra un fondo blanco, leyendo por separado cada tubo para evidenciar y
cuantificar la posible aglutinación, anotar cada reacción en cruces.
5. Practique un TAD, si aún persiste el inadecuado problema de aglutinación

(poliaglutinación).

Reacciones serológicas esperadas para subgrupos de A y B
Antígeno
Reacción del
Fenotipo Reacción de los GR con sueros en saliva
suero con GR
de los GR o lectinas conocidas de
conocidos
secretor
Anti- Anti-
Anti-B Anti-H A1 A2 B O
A AB
A1 4+ 0 4+ 0 0 0 4+ 0 AyH
AINT 4+ 0 4+ 3+ 0 0 4+ 0 AyH
A2 4+ 0 4+ 2+ + 0 4+ 0 AyH
A3 2+ 0 2+ 3+ + 0 4+ 0 AyH
Am 0/± 0 0/± 4+ 0 0 4+ 0 AyH
Ax 0/± 0 +/2+ 4+ 2+ 0/+ 4+ 0 H
Acl 0 0 0 4+ 2+ 0/+ 4+ 0 H
B 0 4+ 4+ 0 4+ 4+ 0 0 ByH
B3 0 + + 4+ 4+ 4+ 0 0 ByH
Bm 0 0 0/+ 4+ 4+ 4+ 0 0 ByH
Bx 0 0/2+ 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 H
Nota: La presencia de anti-A1 no es constante en todos los fenotipos. Las personas

A2 tienen frecuentemente anti-A1. Las personas A3 generalmente no tienen, pero se
ha encontrado en el suero de algunas.

DETERMINACIÓN DEL GENOTIPO RH-Hr

(Genotipo más probable)
(Cigocidad RH-Hr)
Fisher y Race descubrieron que el Sistema RH estaba compuesto por varios

factores sanguíneos que se heredan en block, ya que sus alelos ocupan locus muy
cercanos en el cromosoma 1. De estos antígenos, los tres sistemas alélicos más
importantes son:
D–d
C–c
E–e
Debido a que el alelo “d” no ha podido ser demostrado, ya que no se ha

encontrado un anticuerpo “anti-d” que evidencie el antígeno en los GR, al anotar “d”
se está señalando la ausencia de “D” solamente, y es por este motivo que no se
puede afirmar un genotipo, sino la probabilidad del él. Con los sueros clasificadores
específicos se determina la presencia o ausencia de los antígenos D, C, E, c y e en
los GR (fenotipo) y se calculan las probabilidades genotípicas de acuerdo a la
frecuencia con que se asocian los alelos en el cromosoma (genotipo).
Este examen tiene gran importancia en el estudio de paternidad, de EHRN,

en reacciones postransfusionales, en antropología, en genética poblacional, etc.
Reactivos:
• Sueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c y anti-e.
• SAGH.
• PBS o Suero fisiológico.
Muestra:
Sangre venosa con o sin anticoagulante.
Método:
1. Marcar 5 tubos: D, C, E, c, e.
2. A cada tubo agregar dos gotas del suero correspondiente.
3. Hacer una suspensión 4% de los GR en estudio en su propio suero y añadir

una gota a cada tubo. Si utiliza muestra con anticoagulante, lavar los GR y
suspender en salino.
4. Incubar 15 minutos a 37ºC.
5. Mezclar, centrifugar y leer.

6. Los resultados positivos indican que el antígeno correspondiente está

presente en los GR. Registrar los resultados.
7. Los resultados negativos deben seguir un estudio posterior:

a) Incubar 30 min más a 37ºC.
b) Lavar 3 veces en salino.
c) Agregar 2 gotas de SAGH.
d) Mezclar y centrifugar.
e) Remover suavemente y leer.
f) Si se obtienen resultados negativos, agregar una gota de CC, centrifugar
y leer.
8. Una vez obtenidos todos los resultados (fenotipo), calcular el genotipo más
probable según la tabla de frecuencia poblacional.

EJEMPLO DE FORMATO DEL INFORME
Nombre:
Nº Ficha:
Servicio: Fecha:
GENOTIPO PROBABLE RH-Hr
Antígeno D: Rho:
Antígeno C: rh’:
Antígeno E: rh’’:
Antígeno c: hr’:
Antígeno e: hr’’:
GENOTIPO PROBABLE PRIMERA POSIBILIDAD:
FRECUENCIA:
GENOTIPO PROBABLE SEGUNDA POSIBILIDAD:
FRECUENCIA:
__________________________
FIRMA

FRECUENCIA GENOTIPO PROBABLE
1. Rho POSITIVO: antígeno D presente, frecuencia 85%
Reacción con
suero anti
Frecuencia
D C E C E Genotipo Símbolo
%
Genotipo Símbolo Frecuencia
+ + + + + DCe/DcE R1R2 11,86 DCe/dcE R1r’’ 0,99

+ 0 + + + DcE/dce R2r 10,96 DcE/Dce R2R0 0,72
+ 0 0 + + Dce/dce R0r 1,99 Dce/Dce R0R0 0,06
+ + 0 + + DCe/dce R1r 32,68 DCe/Dce R1R0 1,25
+ + 0 0 + DCe/DCe R1R1 17,68 DCe/dCe R1r’ 0,827
+ + + 0 + DCE/DCe RzR1 0,2 DCE/dCe Rzr’ 0,004
+ + + 0 0 DCE/DCE RzRz 0,0006 DCE/dCE Rzry 0,000
+ + + + 0 DCE/DcE RzR2 0,068 DCE/dcE Rzr’’ 0,0058
+ 0 + + 0 DcE/DcE R2R2 1,99 DcE/dcE R2r’’ 0,335
2. Rho NEGATIVO: antígeno D ausente, frecuencia 15%
Reacción con
suero anti
Frecuencia
D C E C E Genotipo Símbolo
%
Genotipo Símbolo Frecuencia
0 0 0 + + dce/dce Rr 15,10 - - -
0 + + + + dCe/dcE r’r’’ 0,023 dCE ryr 0,0039
0 0 + + + dcE/dce r’’r 0,923 - - -
0 + 0 + + dCe/dce r’r 0,764 - - -
0 + 0 0 + dCe/dCe r’r’ 0,0097 - - -
0 + + 0 + dCE/dCe ryr’ 0,0001 - - -
0 + + 0 0 dCE/dCE ryry 0,0 - - -
0 + + + 0 dCE/dcE ryr’’ 0,0001 - - -
0 0 + + 0 dcE/dcE r’’r’’ 0,0141 - - -

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
También se les conoce como “Pruebas cruzadas” y se les considera como

uno de los procedimientos rutinarios más importantes dentro de un Banco de
Sangre, las que deben efectuarse siempre antes de una transfusión sanguínea.
Ellas nos permiten comprobar con anticipación si hay compatibilidad serológica
entre el paciente y su probable donante. Estas técnicas deben repetirse cada vez
que el paciente va a ser transfundido, pues la información que proporcionan es en
relación sólo al donante que se somete al estudio.
Con este procedimiento se detectan también:
• Anticuerpos irregulares que destruirían los GR del receptor o del posible

donante.
• Errores humanos que se hayan podido producir en: la clasificación ABO, en
la identificación de las muestras sanguíneas o en el etiquetado de la unidad
de sangre.
Con este procedimiento no se detectan:
• Errores en la clasificación RH(D) cuando el receptor no está sensibilizado.

• Sensibilizaciones que pueda desarrollar el receptor al recibir esa transfusión.
Muestra:
Sangre total sin anticoagulante con no más de 72 hrs de extraída.
Materiales:
• Pipetas Pasteur
• Tubos Kahn
• Centrífuga
• Baño termo regulable
• Gradilla
• Fuente de luz
Reactivos:
• Suero fisiológico tamponado pH 7.0 o PBS.

• LISS.
• SAGH poli específico.

Su objetivo es investigar si el suero del receptor posee anticuerpos que

reaccionen contra los antígenos de membrana eritrocitaria del donante elegido.
(Cuando hablamos del donante, nos referimos a una alícuota del concentrado de
GR).
Método:
1. Prepare una suspensión de GR lavados al 4% del donante (último lavado y

suspensión con LISS).
2. En un tubo previamente marcado con el número correlativo del donante y las

iniciales del receptor, colocar 2 gotas del suero del receptor y 1 gota de los
GR del donante previamente preparado. Centrifugar 20 seg y leer.
3. Incubar ambos tubos mínimo 30 min (15 min si usa LISS) a 37ºC. Luego
centrifugar 20 seg y leer.
4. Si en los tubos no hay presencia de aglutinación, es decir, si se obtiene un

resultado negativo lavar 3 veces con PBS y eliminar todo el sobrenadante
después del último lavado.
5. Agregar 2 gotas de SAGH. Centrifugar 20 seg y leer.
6. Confirmar sus lecturas negativas con CC.
NOTA: No olvide preparar sus controles POSITIVO y NEGATIVO.
Interpretación:
Ausencia de aglutinación: Durante la ejecución de la técnica indica que no

existen anticuerpos en el suero del receptor contra los GR del donante elegido,
existiendo compatibilidad sanguínea entre ellos.
Presencia de aglutinación: En alguna de sus etapas, significa que existe un

anticuerpo contra los GR del donante, por lo tanto, son incompatibles, debiéndose
buscar otro donante para transfundir al paciente.


BÚSQUEDA DE ANTICUERPOS IRREGULARES (BAI)
Es una técnica simple de aglutinación destinada a pesquisar anticuerpos

irregulares, tanto IgM como IgG, existente en el suero de una muestra en estudio,
mediante el uso de GR de antigenicidad conocida.
Las características físico-químicas de los anticuerpos en estudio hacen
necesaria la utilización de temperaturas y medios de reacción diferentes para su
óptima detección.
Esta técnica debe ser un procedimiento de rutina en todo Banco de Sangre,
a fin de detectar inmunizaciones que puedan ocasionar problemas en la terapia
transfusional.
Reactivos:

• Medio(s) enzimático(s).
• Albúmina
• GR O+ de antigenicidad conocida (Paneles I y II).
• LISS
• SAGH
Muestra:
Sangre SIN ANTICOAGULANTE, libre de hemólisis.
Método:
1. Marcar tubos para salino, LISS, y enzima.
2. Colocar en cada tubo una gota de suspensión de GR que corresponda (ver

nota al final de la técnica).
3. Agregar a cada tubo 2 gotas de suero del paciente.
4. Incubar a temperatura ambiente durante 1 hora, excepto el tubo de LISS, que

se incuba a 37ºC durante 15 min.
5. Centrifugar y leer el tubo LISS. Si el resultado es negativo, lavar 3 veces en

salino, agregar 2 gotas de SAGH, centrifugar y leer.
6. Centrifugar y leer los tubos en salino y enzima(s).
7. Si los resultados son negativos, incubar a 37ºC durante 30 min, centrifugar y

leer.
8. Si los resultados continúan negativos, seguir trabajando sólo el tubo salino,
lavándolo 3 veces en salino.

9. Agregar 2 gotas de SAGH, centrifugar y leer.
10. Confirmar todo resultado negativo en SAGH con las CC.
11. Informar cada medio de reacción utilizado en la prueba.
12. Si se desea realizar un screening en medio albuminoso, iniciar en el punto 8,

antes de lavar en salino, agregar 2 gotas de albúmina bovina al 6%, incubar
30 min a 37ºC, centrifugar y leer. Si el resultado es negativo, proseguir con
los lavados y con el punto 9.
Nota: Al trabajar con un medio potenciador de reacción, como LISS o

enzimas, siempre se deben “PRETRATAR” los GR testigos. Para LISS, basta con
agregar una gota del reactivo directamente a los GR testigos y luego agregar el
suero del paciente.
Para ENZIMAS, colocar un volumen de la enzima y tres volúmenes de salino,
mezclar y agregar GR testigos c.s.p. solución al 4%. Incubar 10 minutos a 37ºC,
lavar 2 veces y resuspender en salino al 4%. Si se usa panel celular comercial como
GR testigos (panel I y II), cada medio deberá, entonces, realizarse en duplicado o
en triplicado, según el kit utilizado.
Interpretación:
La presencia de aglutinación en el tubo salino y en el tubo LISS, previo al
tratamiento con SAGH, indica la presencia de anticuerpos IgM. La presencia
de aglutinación en los medios enzimáticos y en SAGH indica la presencia de
anticuerpos IgG. La no aparición de aglutinación indica la ausencia de
anticuerpos irregulares, teniendo siempre en cuenta que este resultado
también puede indicar que el antígeno correspondiente no estaba presente
en el pool celular utilizado.
Si el BAI es positivo en cualquiera de los medios utilizados, debe

completarse el estudio con la identificación del o los anticuerpos.
IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (IAI)
Esta técnica se realizará en el medio en que el BAI haya dado resultados

positivos y se procederá de igual forma, cambiando sólo los reactivos eritrocitarios
comerciales fenotípicamente (antigénicamente) identificados para estos efectos, el
cual contiene 11 soluciones diferentes de GR testigos y algunos cuentan con panel
extendidos de hasta 15 células.
La interpretación se realiza en base a tablas de identificación, como la

incluida a continuación) con patrones de reacción definidos para cada especificidad.




TITULACIÓN DE ANTICUERPOS
La titulación es una forma semicuantitativa de medir la cantidad de

anticuerpos presentes en una muestra en estudio, en las óptimas condiciones de
medio, tiempo y temperatura de reacción. Se expresa como el recíproco de la
máxima dilución en que se observa aglutinación macroscópica de 1+.
Los títulos también pueden ayudar a determinar la fuerza relativa de un

antígeno presente en diferentes tipos de células. Por ejemplo, el título de un
anticuerpo con especificidad anti-M, será más alto si usamos células MM que si
utilizamos células MN, ya que en las primeras el antígeno tiene mayor fuerza
relativa.
Una de las aplicaciones útiles de la titulación es el seguimiento de

anticuerpos de mujeres embarazadas sensibilizadas (generalmente al antígeno
D) que pueden causar EHRN.
La titulación también puede ser útil en la identificación de la especificidad

de un anticuerpo en una mezcla, cuando el suero en estudio se titula contra
células de fenotipos diferentes, pero conocidos por nosotros.
Las titulaciones pueden revelar la presencia de anticuerpos de “alto

título-baja avidez” (BATA), que reaccionan débilmente sin diluir, pero hasta
títulos altos.
Recomendaciones:
1. El tiempo, temperatura, medio de reacción y centrifugación óptimos deben

ser determinados en evaluaciones preliminares del anticuerpo.
2. Si el anticuerpo se diluye en medio salino, los GR testigos elegidos para

el anticuerpo en cuestión también deben ser suspendidos en salino.
Si se usa para diluir un medio de alta concentración proteica, como
albúmina bovina al 6% o suero inerte AB, los GR también deberán ser
suspendidos en ella.
3. En estudios comparativos de títulos debe considerarse evaluar en

paralelo las muestras tomadas en distintos tiempos, sobre todo si son
muestra de una embarazada sensibilizada en sospecha de una futura
EHRN. Sólo así el fenotipo de los eritrocitos testigos será el mismo para
todas las muestras y se obviará el problema de diferencias en valor del
título por alteración de la afinidad con el anticuerpo en estudio.
4. En toda titulación es recomendable comenzar la lectura desde las

mayores diluciones a fin de evitar errores debidos al fenómeno de zona,
el que se da a conocer con mayor frecuencia en los medios en salino.
5. Sólo cambios de títulos de dos o más diluciones son significativos.

6. Debe calcularse también el “Score de la reacción”, ya que da una mejor

idea de la fuerza de un anticuerpo. Es la suma de cada uno de los scores
individuales obtenidos, para ello se ha asignado valores en cifras a cada
grado de aglutinación.
Grado de 4+ 3+ 2+ 1+ +/-
aglutinación
Score 12 10 8 5 2
Ejemplo:
Al realizar una titulación es útil conocer el grado de aglutinación y el score
obtenido.
S/d ½ ¼ 1/8 1/16 1/32 Resultado

Título 4+ 3+ 2+ 1+ +/- 0 8
Score 12 10 8 5 2 0 37
El reactivo o suero que presente mayor score en una titulación posee

mayor potencia.
7. Si se titulan anticuerpos naturales del sistema ABO, debe tenerse en

cuenta que el hecho de poseer anticuerpos dentro del rango aceptado
como normal NO excluye la posibilidad de reacciones postransfusionales.
Anti A naturales: 1/64 – 1/128

Anti B naturales: 1/32 – 1/64
8. No debe olvidarse que como el título es el recíproco de la última dilución

positiva, el valor real del título puede estar sobre el último valor positivo y
bajo el primer negativo.
Método:
1. Prepara diluciones madres dobles en tubos de Kahn, numerándolas del 1
al 10: coloque a cada uno un volumen constante de PBS o SF (Ej. 0,5 ml),
excepto al tubo N.º 1.
2. A los tubos 1 y 2 coloque un volumen igual al del diluyente (0,5 ml) de
suero en estudio.
Mezclar varias veces:
• Tubo N.º 1 es la muestra sin diluir.
• Tubo N.º 2 es la muestra diluida 1:2
3. Saque el volumen elegido (0,5 ml) del tubo Nº 2 y agréguelo al Nº 3, así
obtiene la titulación 1: 4.
4. Repita el proceso hasta terminar con la corrida de tubos.
5. Luego se usa una alícuota de cada solución y se prueba contra las células
apropiadas (al 4%) en una proporción 2:1.
Interpretación: El título corresponderá al último tubo positivo en 1+ (score 5).


DETERMINACION Y TITULACION DE CRIOAGLUTININAS
Las crioaglutininas corresponden a anticuerpos de clase IgM,

aglutinantes, que reaccionan de manera óptima en frío, están presentes en
sueros de personas normales, sin embargo, algunas pueden tener una gama
térmica de reactividad hasta los 37°C y estar asociadas a cuadros clínicos.
La presencia de crioaglutininas en un paciente indica la presencia de

autoanticuerpos (IgM) los que pueden producir hemólisis cuando están en alto
título, como es en infecciones por Mycoplasma pneumoniae, mononucleosis
infecciosa, en la Enfermedad de aglutininas frías, siendo más frecuente en
pacientes de edad avanzada con predominio en mujeres.
MUESTRA:
Suero del paciente mantenido a 37°C desde el momento de la extracción.
Eritrocitos del paciente lavados, suspendidos al 4% y mantenidos a 37°C desde

el momento de extracción.
REACTIVOS:
• PBS mantenido a 37°C

• Eritrocitos fenotipo OI (puede ser panel celular I y II)
• Eritrocitos Oi (sangre de cordón umbilical o RN)
MATERIALES:
• Tubos Kahn
• Gradilla
• Pipetas
• PBS mantenido a 37°C
• Baño termorregulado a 37°C.
METODO:
1. Efectuar diluciones seriadas del suero del paciente con PBS a 37°.
2. Rotular una batería de tubos C (idealmente 12) para cada glóbulo rojo (OI, Oi
y autólogo).
3. Dispensar 2 gotas de cada dilución a los tubos que corresponda, luego agregar
1 gota de glóbulos rojos suspendidos al 4% a cada juego de tubos.
4. Mezcle y refrigere la batería de tubos entre 4-6 º C durante 1 hora.
5. Leer agitando suavemente los tubos sobre una fuente de luz, sin centrifugar.
6. Registre sus resultados.

7. Incubar por 24 horas y realizar una nueva lectura.
8. Registrar los resultados.
Lectura e Interpretación:
Se considera un resultado positivo con un título superior a 64, pero la anemia

hemolítica por crioaglutininas es excepcional con títulos debajo de 1000.
NOTA:
Los tiempos de lectura e incubación pueden variar según el protocolo del

laboratorio.

TÉCNICAS EN GEL

INMUNOHEMATOLOGÍA EN GEL
Existen múltiples tipos de tarjetas de aglutinación en gel en el mercado,

que varían según la cantidad de pocillos, los reactivos contenidos en cada
columna y su utilidad. Además, estas técnicas pueden ser empleadas
manualmente o automatizadas mediante el uso de diversos equipos.
Incubador a 37°C Centrifuga
No se deben utilizar las tarjetas que presenten deshidratación o

variaciones en su presentación al examen ocular. No utilizar muestras
hemolizadas o contaminadas.
Limitaciones:
• Material contaminado puede causar falsos positivos o negativos.
• Los residuos de fibrina pueden atrapar GR no aglutinados en la parte

superior de los microtubos.
• La presencia de algunos medicamentos, soluciones de dextrano pueden

inducir un resultado falso positivo.
• Algunos estados patológicos pueden dar reacciones positivas.
• Suspensiones de GR demasiado concentradas o diluidas pueden dar

resultados erróneos.

TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN EN GEL: INFORME DE RESULTADOS
RESULTADOS
4+ 3+ 2+ 1+ +/- Hemólisis S.D (-)
Las muestras positivas se presentan con una línea roja en la superficie del
reactivo (4+) o dispersas a través del pocillo (3+ a 1+).
Las muestras negativas forman un botón compacto en el fondo del pocillo.

CLASIFICACIÓN DE RUTINA EN EL ADULTO EN GEL
Muestra: Sangre venosa con EDTA. No utilizar muestras de más de 48 hrs.
Centrifugación de la muestra: 5 minutos a 3000 rpm. Una vez centrifugado

colocar en un tubo limpio la mayor parte del suero o plasma y reservar.
Preparar suspensión de GR al 1%: En un tubo limpio colocar 2 ml de PBS y

20 µl GR de la muestra.
Procedimiento
1. Rotular la tarjeta a utilizar, retirar el sello que recubre los pocillos y

mantenerla en posición vertical.
2. Añadir 50 µl de GR testigo A y B suspendidos al 1% al pocillo 5 y 6

respectivamente.
3. Añadir 25 µl de suero o plasma del paciente a los pocillos 5 y 6.
4. Añadir 50 µl de la suspensión de GR 1% del paciente desde el pocillo 1

al 4.
5. Centrifugar por 9 minutos a 1000 rpm.
6. Leer y anotar resultados.
Microtubos:
A - B: Contiene sueros clasificadores para la

determinación ABO.
D IgM: Contiene suero clasificador para la determinación

RH.
D´ IgM/IgG: Suero clasificador para RH Coombs.
N/A1 - N/B: Contiene una base neutra para realizar la

1 2 3 4 5 6
contraprueba serológica.

DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (TAI) EN GEL
1. Rotular la tarjeta a utilizar con SAGH, retirar el sello que recubre los
pocillos y mantenerla en posición vertical.
2. Obtener el suero o plasma del paciente.
3. Añadir 50 µl (1 gota) del panel I en el pocillo 7 y del panel II en el

pocillo 8.
4. Añadir 25 µl de suero o plasma del paciente a ambos pocillos.
5. Incubar la tarjeta 15 minutos a 37ºC.
6. Centrifugar la tarjeta por 9 minutos a 1000 rpm. Leer y registrar resultados.
7. Cuando realice el examen de forma aislada, proceda a realizar controles

positivos y negativos para validar la técnica.
PRUEBA AUTÓLOGA
1. Preparar suspensión de GR al 1%: En un tubo limpio colocar 2 ml de PBS

y 20 µl GR de la muestra.
2. Rotular la tarjeta a utilizar con SAGH, retirar el sello que recubre los
pocillos y mantenerla en posición vertical.
3. Añadir 50 µl de la suspensión de GR del paciente al 1% al pocillo 9.
4. Añadir 25 µl de suero o plasma del paciente al pocillo 9.
6. Centrifugar la tarjeta por 9 minutos a 1000 rpm. Leer y registrar resultados.
7. Cuando realice el examen de forma aislada, proceda a realizar controles

positivos y negativos para validar la técnica.
7 8 9
TAI I TAI II PA


CLASIFICACIÓN DE RUTINA RECIÉN NACIDO
Muestra: Sangre de cordón umbilical con EDTA.
Lavados: Proceda a realizar al menos 3 lavados de GR con PBS para eliminar

la gelatina de Wharton.
Preparar suspensión de GR al 1%: En un tubo limpio colocar 2 ml de PBS y

20 µl GR de la muestra.
Procedimiento
1. Rotular la tarjeta y retirar el sello que recubre los pocillos a emplear.
2. Añadir 50 µl de GR suspendidos al 1% desde el pocillo 1 al 6.
4. Leer y registrar resultados.
5. La reacción en el tubo control debe ser negativa.
Microtubos:
A, B, AB: Sueros clasificadores para la

determinación ABO.
D: Suero clasificador para la determinación RH.
Ctl: Contiene una base neutra para realizar el control

de la reacción.
123456 AHG: Contiene SAGH poli específico que detecta

anticuerpos tipo IgG y fracciones del complemento
adheridos al GR in vivo.


OTROS EXÁMENES REALIZADOS EN GEL LISS-COOMBS
Las tarjetas con suero antiglobulina humana poli específico son utilizados de
rutina en pruebas autólogas, pruebas de compatibilidad y pruebas Coombs.
TEST DE ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD)

2. Realizar 3 lavados de los GR con PBS.
3. Preparar la suspensión de GR al 1%: 2 ml de PBS más 20 µl de GR.
4. Añadir 50 µl de GR suspendidos al 1% en el pocillo rotulado.
7. Realizar paralelamente controles positivos y negativos para validar la

técnica.
RESULTADOS: Una reacción de hemólisis debe ser interpretada como positiva,

ya que, se debe a la acción del complemento.

ESTUDIO DE VARIANTES DEL ANTIGENO D
Dependiendo del distribuidor de la tarjeta de gel, algunas de ellas nos

permiten realizar esta técnica en paralelo a la clasificación de rutina del adulto o
recién nacido. Cuando la tarjeta no posee esta determinación, se debe realizar
en tarjetas de gel con SAGH con sus respectivos controles.

2. En un tubo de Kahn realizar 3 lavados de los GR del paciente según el

potenciador:
PBS: realizar 3 lavados.
LISS: realizar 2 lavados con PBS, 1 lavado con LISS. La mayoría de los
laboratorios utilizan el LISS (DG Sol ®) como potenciador de la reacción,
por ende, será el empleado en práctico).
3. Preparar la suspensión de GR al 1%: 2 ml de LISS o PBS más 20 µl de
GR.
4. Preparar los siguientes pocillos:
D1: Añadir 50 µl de suspensión de GR del paciente al 1% + 25 µl del suero
anti-D* tipo IgG/IgM
C+: Añadir 50 µl de suspensión de GR R1r al 1% + 25 µl de anti D IgG
C(-): Añadir 50 µl de suspensión de GR rr al 1% + 25 µl de anti D IgG
TAD: Añadir 50 µl de suspensión de GR del paciente al 1%
6. Centrifugar la tarjeta por 9 minutos a 1000 rpm.
*No olvide de realizar controles positivos y negativos para validar la técnica.

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES (IAI)
1. Muestra: suero del paciente o en su defecto plasma (revisar inserto y

seguir instrucciones del proveedor)

3. Añadir 50 µl (1 gota) de cada panel a los respectivos pocillos rotulados.
4. Añadir 25 µl de suero o plasma del paciente a todos los pocillos.
TITULACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

2. Realizar las primeras diluciones del suero paciente en tubos tal como se
describe en la técnica en tubo.
3. Utilizar los paneles de la identificación con aglutinación positiva para

realiza la titulación.
4. Añadir 50 µl (1 gota) de cada panel a los pocillos rotulados

respectivamente.
5. Añadir 25 µl de suero o plasma diluido del paciente a todos los pocillos

según la dilución.



PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
1. Muestras: suero o plasma del receptor y GR del donante.

3. Obtener una alícuota de los GR del donante y preparar la suspensión de

GR al 1%: 2 ml de LISS o PBS más 20 µl de GR
4. Añadir 50 µl de los GR al 1% del DONANTE al pocillo rotulado
5. Añadir 25 µl de suero o plasma del RECEPTOR al pocillo rotulado.
9. Proceda a realizar controles positivos y negativos para validar la técnica.
*Leer siempre las instrucciones del fabricante de las tarjetas de gel,

ya que dependiendo del proveedor se puede requerir de lavados
previos de los GR de la unidad.

BIBLIOGRAFÍA
ABURTO, A. 2013. Recomendaciones para la clasificación sanguínea ABO.

Documentos técnicos para laboratorio. Departamento Laboratorio Biomédico
Nacional y de Referencia. Instituto de Salud Pública Santiago, Chile.
ABURTO, A. 2014. Recomendaciones para la detección e identificación de

anticuerpos irregulares eritrocitarios. Documentos técnicos para laboratorio.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de
Salud Pública Santiago, Chile.
ABURTO, A. 2016. “Recomendaciones para la realización de pruebas cruzadas

en Medicina Transfusional”. Documentos técnicos para laboratorio.
Departamento Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia. Instituto de
Salud Pública Santiago, Chile.
ABURTO, A. 2018. Recomendaciones para la clasificación sanguínea RhD.

ABURTO, A. 2019. Recomendaciones para la prueba de antiglobulina directa.

AMERICAN ASOCIATION OF BLOOD BANKS. “Manual Técnico” USA. 2001
AMERICAN ASOCIATION OF BLOOD BANKS. “Manual Técnico” USA., 2008
IBARRA Y RYBERTT.2001/2002. “Manual de Técnicas y procedimientos para

Banco de Sangre” UACh.
Vives J.L, Aguila J.l. 2006. Técnicas de laboratorio en hematología. 3ª edición.

Editorial Masson

LECTURA Y REGISTRO DE REACCIONES
PA TAI
Amb 37º SAGH CC
Nº Nombre y Apellidos Servicio ABO/ A B AB D Estudio Gr Gr Amb 37º SA CC I II I II I II I II T
RhD variantes A B GH A
D D

PA TAI
Amb 37º SAGH CC
Nº Nombre y Apellidos Servicio ABO/ A B AB D Estudio Gr Gr Amb 37º SA CC I II I II I II I II T
Rh variantes A B GH A
D D

Manual de Técnicas y Procedimientos de Inmunohematología 2020

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MANUAL DE TÉCNICAS Y

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 2

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 3

El laboratorio de inmunohematología se basa en reacciones antígeno-

Considerando que gran parte de la población es homogénea genéticamente

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 4

BIOSEGURIDAD EN EL BANCO DE SANGRE

Debe usarse rutinariamente:

• Pechera impermeable para el lavado de material.

• Mascarilla, anteojos protectores (sólo en procedimientos que expiren

• No fumar, no beber, no comer en laboratorios.

• No almacenar alimentos en el refrigerador y/o freezer del laboratorio.

• Lámina de clasificación, tubos Kahn, pipetas Pasteur, baguetas:

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 5

• Al trabajar con pipetas automáticas, las puntas deben desecharse en un

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 6

TIPOS DE MUESTRAS UTILIZADAS EN INMUNOHEMATOLOGÍA

La extracción de una muestra de sangre del receptor adecuadamente

Las pruebas realizadas en el Banco de Sangre pueden hacerse utilizando

Por otro lado, para algunas determinaciones es necesario el uso de suero

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 7

Cada centrífuga debe ser calibrada al recibirla o después de un ajuste o

1. Utilice un suero que contenga un anticuerpo que produzca una aglutinación

2. Seleccione glóbulos rojos positivos y negativos para el antígeno apropiado y

a) Para anticuerpos activos en salino: suero de una persona A (anti B)

b) Para anticuerpos con alto contenido proteico: 1 parte de anti D

4. En parejas, un positivo y un negativo, centrifugue los tubos tiempos diferentes

Criterio Tiempo en segundos

5. El tiempo óptimo de centrifugación es el tiempo mínimo requerido para

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 8

PARA LAVADO Y TEST DE ANTIGLOBULINA (SAGH):

1. Suero antiglobulina humana (SAGH).

1. Prepare 5 pares de tubos controles positivos y 5 negativos.

4. Elimine el salino sobrenadante vigorosamente y el botón debe quedar seco.

6. Seleccione el tiempo óptimo de lectura de acuerdo con lo descrito en el punto

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 9

TÉCNICA EN LAMINA PARA LA CLASIFICACIÓN ABO Y RhD

Son técnicas de uso rápido, basadas en una reacción antígeno-anticuerpo,

Los anticuerpos que actúan débilmente NO aglutinarán GR directamente por

Los sueros clasificadores utilizados, otorgan los anticuerpos (IgM para

Esta técnica es utilizada para clasificación del donante de sangre al momento

Sueros clasificadores ABO y RH

Suero anti-A: contiene anticuerpos anti-A (azul)

Sangre fresca con o sin anticoagulante, punción venosa o dactilar.

1. Colocar en forma vertical en una lámina de vidrio, 1 gota de suero anti-A,

2. Añadir a cada suero clasificador una gota de GR de la muestra a clasificar.

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 10

3. Mezclar con una bagueta o mezclador desechable, distribuyendo la mezcla

4. Suavemente realizar movimientos circulares a la lámina sobre la fuente de

Reacción (-): No hay signos de aglutinación, la reacción se ve totalmente

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 11

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 12

TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN EN TUBO: INFORME EN CRUCES

Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden evidenciarse de diferentes

FUERZA SCORE O ASPECTO

3+ (+++) 10 Reacción fuerte. Presencia de aglutinados grandes.

2+ (++) 8 Aglutinados grandes en un mar de aglutinados

1+ (+) 5 Muchos aglutinados pequeños en un mar de células

½+ (+/-) 3 Granularidad débil en la suspensión celular. Pocos

Trazas 2 Negativo macroscópicamente. Pocos aglutinados de

0 (-) 0 Ausencia de aglutinación.

Unidad de Hematología. Universidad Austral de Chile 13