Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Bioquímica General
PRÁCTICA No 11. Reacciones enzimáticas de óxido
reducción.

Hurtado Cervantes Obed

Jorge Emiliano Miranda Aldana
4QM1 Sección 3

Objetivos:

 Obtener el lactato deshidrogenasa a Tabla 1. Actividad de la enzima

partir de músculo esquelético de la deshidrogenasa medida con la intensidad de
pata trasera de una rata y bistec de la decoloración y coloraciónes obtenidas. Se
corazón. tomó hasta el tiempo 10 ya que a este
 Identificar la coloración dada con el tiempo se observó la decoloración al tubo 1
azul de metileno al bloquear la Dec
cadena respiratoria olor 0 2 4 6 8 10
ació min min min min min min
Resultados: n
Tub +++ +++ +++
0 ++ +++
o1 ++ +++ +++
Tub +++
0 + + + ++
o3 +
Tub
0 0 0 0 0 0
o4

Figura 1. Tonalidades de color de la

determinación de la actividad de
Figura 2. La cantidad de decoloración
deshidrogenasa succínica obtenidos de bistec
obtenida en los tubos con la muestra de
de corazón
bistec de corazón.

Discusión:
La lactato deshidrogenasa, es una proteína
de aproximadamente 140.000 Daltons, que
se encuentra en el citoplasma de todas las
células de los organismos, en múltiples
formas moleculares (Wilkinson, 1970). Se
encuentra constituida por dos tipos de
subunidades polipeptídicas diferentes por lo
que las cinco isoenzimas principales tienen la
siguiente composición: H4 (LDH1), H3M
(LDH2), H2M2 (LDH3), HM3 (LDH4) y M4
(LDH5). La isoenzima LDH-5 reduce el
piruvato a lactato, en tejido anaerobios
(Músculo esquelético); mientras que la
isoenzima LDH-1, oxida el lactato a piruvato,
en tejidos aerobios (músculo cardiaco).
A cada tubo se le adiciona los reactivos
requeridos para determinar la actividad del
lactato deshidrogenasa requerida, a cada
tubo se le debe adicionar aceite (apolar) con
el objetivo de generar un tapón al oxígeno ya
que bloquean la cadena respiratoria y pasa
hacia el azul de metileno presente en los
tubos. El tapón tiene la finalidad de crear un
medio anóxico, puesto que, como se sabe el
aceptor de electrones es el oxígeno (Botham
KM y colaboradores, junio 10, 2023.) y se
quiere poner de manifiesto la actividad de la
enzima LDH con ayuda del azul de metileno
donde este va a funcionar como un indicador
oxido-reducción. La transferencia de
electrones es gracias al potencial de
reducción que es una medida de la afinidad
de un transportador de electrones por los
electrones. Se expresa en mV (milivoltios).
Los compuestos con un potencial redox más
negativo tienen menor afinidad por los
electrones y tienen una gran tendencia a
donarlos, mientras que los compuestos con
potencial redox más positivo tienen mayor
afinidad por los electrones y su tendencia es
a aceptarlos, siendo el oxigeno más negativo
y teniendo una gran afinidad, por eso es
imprescindible evitar la presencia de oxigeno
en el tubo o inhibiendo el paso de electrones
a este. (José Luis Valls, octubre 2019)
El tubo uno presentó una reducción del azul
de metileno por lo que podemos decir que
hubo una actividad de la enzima LDH. A este
se le adicionó el lactato que este actúa como
donador de electrones que va a ser
transformado a piruvato como producto
final, gracias a la LDH. En esta reacción
también esta presente el NAD+ como
coenzima, transportando el el protón al FMN
que va a recibir el electrón reduciéndose a
FMNH2, esta pasará a la ubiquinol donde este
otra vez pasará al complejo III pero al añadir
el azul de metileno y teniendo un potencial
redox de -0.1 va a recibir este protón
reduciéndose y virando de color.
(Botham KM y colaboradores, junio 10,
2023.)
Al agregar el compuesto KCN, que es un
compuesto altamente venenoso que es un
inhibidor de algunos procesos metabólicos,
que ha demostrado ser un inhibidor
especialmente potente de las enzimas heme
(Facultad de Química UNAM 2016) y en la
reacción de la deshidrogenasa para la
formación del piruvato, el cianuro rompe el
equilibrio de la reacción reversible dando
equilibrio a la reacción únicamente a los
productos, asi aseguramos que los
electrones 1 no lleguen a al oxigeno y que el
equilibrio permanezca en los productos.
Un resultado curioso es sobre el tubo 3 dado
que este no tenia que presenta un cambio de
color, ya que este no se le agregó lactato y
como se habia descrito antes el lactato es el
donador de electrones y por ende parte
esencial para que se lleve la reacción.
Una posible explicación es que la muestra
proviene de una carnicería y no sabemos
cuanto tiempo llevaba la muestra ya que
varios estudios aseguran que hay actividad
enzimática post muerte, por lo que es casi
seguro que se hubiera producido lactato
durante ese tiempo.
(Serrano Valenciano M. Octubre-Diciembre,
2018)
Por eso la importancia de la muestra sea
extraída en ese instante y sea fresca.
En el tubo 4 no se le adicionó la enzima
Lactato deshidrogenasa LDH por lo que en
ningún momento se observó la decoloración
del azul de metileno. Como el lactato es el
producto final de la glucólisis y presente en
la cadena respiratoria independientemente
de la concentración de oxígeno en el medio
en el que se encuentren las células; se
encarga de alimentar con lactato a ciertos
tipos celulares, como las neuronas o el
músculo cardiaco y en el hígado, el lactato
participa en la oxidación del etanol a través
de la generación de peróxido de hidrógeno
(Matus, G. 2020), sin su presencia en el tubo
no actúa y no se nota la presencia por medio
de la decoloración tanto en el tubo con
hígado e hígado.
En el tubo 5 no tiene el compuesto de KCN,
que es un compuesto altamente venenoso
que es un inhibidor de algunos procesos
metabólicos, que ha demostrado ser un
inhibidor especialmente potente de las
enzimas heme (Facultad de Química UNAM
2016) y en la reacción de la deshidrogenasa
para la formación del piruvato, el cianuro
rompe el equilibrio de la reacción reversible
dando equilibrio a la reacción únicamente a
los productos, al no adicionar este la
reacción al ser reversible se encuentra
dirigida tanto hacia piruvato como lactato, es
decir que es posible que en el tubo pueda o
no observarse la decoloración, que en el caso
de la muestra de corazón e hígado no hubo
decoloración. Cuando el medio de reacción
es homogéneo, en ausencia de catalizadores,
las velocidades de reacción directa e inversa
son directamente proporcionales a las
concentraciones de los reaccionantes. La
reacción ocurre con una velocidad neta hasta
que se alcanza el estado de equilibrio, la
velocidad a la que los productos se
transforman en los reactivos iguala a la
velocidad de transformación de reactivos en
productos y se instala un estado de equilibrio
dinámico (Brown, LeMay, Bursten. 2004). Por
lo que teóricamente podría darnos al final de
la incubación la presencia de la decoloración
o no.
Conclusiones.
Bibliografía.
 Wilkinson, H. 1970. Isoenzymes.
Segunda edición. Editorial Chapman
and Hall. London. 358 pp.
 Almonacid, C. 1996. Caracterización
Molecular de isoenzimas de treo-
dsisocitrato NADP oxidoreuctasa en
Hyla labialis. (Tesis de maestría).
Pontificia Universidad Javeriana.
Facultad de Ciencias. Bogotá,
Colombia. 67 pp.
 Brown,LeMay,Bursten. (2004).
Química. La ciencia central (novena
edición). México: Ediciones Pearson
Educación.
 Genaro, O. et al. (Sep.-Oct., 2020).
Las funciones metabólicas,
endocrinas y reguladoras de la
expresión genética del lactato. Rev.
Fac. Med. (Méx.) vol.63 no.5 Ciudad
de México.
 Melo Ruiz, Virginia. “Bioquímica
de losprocesos metabólicos”
Reverté, México2006. Pág 160.