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Universidad de Chile Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Qumica Biolgica Lic.

Ciencias mencin Qumica

Laboratorio N1

Protenas Como Electrolitos Parte a y b.

Integrantes: lvaro Etcheverry Matas Leal. Profesora: M Cecilia Rojas Fecha del Entrega: Jueves 14 de Abril de 2011

INTRODUCCIN Las protenas forman parte importante de las reacciones llevadas a cabo en los organismos vivos, e incluso podemos llegar a decir que prcticamente no existe funcin biolgica en la que no participen protenas. Esta caracterstica trascendental de las protenas se debe a los miles de aos que demor la evolucin en perfeccionar la capacidad cataltica de ellas y a la extraordinaria especificidad que presentan al reconocer el sustrato indicado. stas caractersticas vienen dadas por la variedad de aminocidos existentes los que al ser combinados en distintas secuencias determinan la funcin de cada protena. Cada aminocido posee una cadena lateral que lo distingue de los dems y que posee un comportamiento cido-base nico, el cual puede ser modificado debido a las interacciones con otras cadenas laterales de aminocidos vecinos. Son estas cadenas laterales, las que debido a su variedad, le otorgan a las protenas la capacidad de funcionar como buffers al estar en solucin, amortiguando el pH al cambiar la concentracin de los otros componentes. Esto es muy importante a nivel biolgico, ya que el mantenimiento de la homeostasis es vital para el mantenimiento de la vida. Debido a que en una protena se encuentran aminocidos cuyos pKa difieren bastante unos con otros, es que la carga neta de la molcula va a depender del pH al cual se encuentre la protena en solucin. De esta forma, es posible que a cierto pH la protena no tenga carga neta, por lo que las repulsiones electroestticas son mayores y la protena alcanza una solubilidad mnima, el punto al cual el pH provoca este cambio en la protena es llamado punto isoelctrico (pI). RESULTADOS Y ANLISIS DE DATOS 1a.- Propiedad amortiguadora del pH de las protenas plasmticas. Los miliequivalentes en solucin son determinados a partir de la siguiente ecuacin:

Luego para HCl 0,01 N


0,01 N = 0,01eq 1L

Finalmente los miliequivalentes se calculan como sigue:


0,01meq ( HCl ) = X mL ( HCl ) gastados

Tabla 1: Miliequivalentes de HCl utilizados en cada valoracin. Volumen Gastado HCl Solucin mEq en la solucin [mEq] 0,01 N [mL] 1 mL suero sanguneo + 6,0 0,060 9 mL de NaCl 0,01 N 10 mL NaCl 0,1 N 0,3 0,003 1 mL suero sanguneo desproteinizado + 3,0 0,030 9 mL de NaCl 0,01 N Al observar los resultados de la tabla 1 se ve claramente que la cantidad de miliequivalentes de HCl utilizados en las valoraciones es mucho mayor en el suero sanguneo, esto indica que las protenas en solucin actan como un buen amortiguador de pH gracias a que sus cadenas laterales se hidrolizan a diferentes pH. En el caso del suero desproteinizado, se obtuvo un gasto menor de HCl debido a que ya no est el poder tamponante de las protenas, aun as se aprecia un cierto grado de amortiguacin el cual se atribuye al buffer bicarbonato/dixido de carbono presente en el plasma sanguneo. Por ltimo, en la titulacin de NaCl se obtuvo un gasto muy pequeo de HCl lo cual refleja la ausencia de efecto amortiguador propio del suero. 1b.- Efecto del pH sobre la solubilidad de la casena. Determinacin del punto isoelctrico. Para calcular la cantidad de cido actico que se debe agregar en cada tubo se utiliza la ecuacin de Henderson-Hasselbalch:

Tabla 2: Composicin de cada una de las muestras de casena. Tubo 1 2 3 Casena [mL] 1 1 1 H2O [mL] 8,4 8,5 8,0 AcOH 0,01 N [mL] 0,6 AcOH 0,1 N [mL] 0,5 1,0 AcOH 1,0 N [mL] pH 6,0 5,0 4,75 Tabla 3: Solubilidad de la casena para cada tubo en distintos tiempos. Tubo 0 minutos 10 minutos 1 o o 2 + + 3 + x 4 + + 5 o o

4 1 7,0 2,0 4,4

5 1 7,4 1,6 3,5

20 minutos o x x x o 3

o : no se observa cambio + : opalescencia x : precipitado De la tabla 3, se deduce que el punto isoelctrico est entre pH 4,4 y 4,75, puesto que en este rango es donde se observ una mayor cantidad de precipitado, o sea una solubilidad baja de la protena a esta acidez. El punto isoelctrico de la literatura es 4,6 a temperatura ambiente, como vemos es un numero que est dentro de nuestro rango de pH, por lo tanto podemos decir con seguridad que el pI esta entre 4,4 y 4,75. La casena esta formada por muchas casenas, las cuales constituyen cerca del 80% de la leche. Son protenas fosforadas que entran dentro de la definicin de globulinas, son solubles y poseen una gran capacidad de retencin de agua. La casena est compuesta por distintas fracciones, casena a, casena b y casena k y una pequea porcin de casena g, las cuales se diferencian en peso molecular y en la cantidad de grupos fosfatos que llevan unidos. CUESTIONARIO Experimento N1: Propiedades amortiguadoras del pH de las protenas plasmticas 1.- Qu caractersticas debe tener una sustancia para ser eficiente como amortiguador del pH? Un amortiguador de pH debe ser una especie cida que tenga su base conjugada, como el amortiguador NH3/NH4+ o tambin el CH3COOH/CH3COONa. Un amortiguador de pH debe mantener el pH estable, o sea que al aplicar una base o cido el pH de la solucin no vare en ms de +1. 2.- En qu rango de pH se manifestar el efecto amortiguador de una solucin de poliglutamato? El poliglutamato posee un residuo de aminocido glutmico, el que posee un grupo ionizable en la cadena lateral -carboxilato, el cual tiene un pKa 4,0, teniendo un rango amortiguador entre pH 3 y 5. Experimento N 2: Efecto del pH sobre la solubilidad de la casena y determinacin del punto isoelctrico 1.- Cul es la metdica ms apropiada para determinar el punto isoelctrico de una protena? Sometindola a electroforesis, la cual tiene una gradiente en donde el pH se mantiene estable, y al aumentar el pH, cada protena migrar al pH que corresponda al punto isoelctrico.

2.- Calcule el pH de una solucin 0,02 M de cido actico y 0,01 M de acetato de sodio. Primero planteemos las ecuaciones involucradas:
CH 3COO Na + CH 3COO + Na + CH 3COO + H + CH 3COOH

Segn la ecuacin de Henderson:

pH = pK a + log

[ CH 3COOH]
0,01 0,02

[CH COO ]
3

pH = 4,75 + log

pH = 4,45

CONCLUSIONES En base a las observaciones realizadas en esta sesin de laboratorio podemos concluir lo siguiente: Debido a la presencia de cadenas laterales de pKa distintos las protenas funcionan como buffers, logrando amortiguar las variaciones del pH en sistemas biolgicos, lo que es de vital importancia para el mantenimiento de la vida. Como se observ con la casena, las protenas poseen un punto en el pH (punto isoelctrico), al cual al no poseer una carga neta aumentan las repulsiones electroestticas y por lo tanto la protena precipita. Segn lo observado, la casena debe tener un punto isoelctrico cercano al pH 4,5. Al buscar informacin en la literatura nos encontramos con el pI exacto de la casena es de 4,75 lo cual nos permite confirmar lo observado en el laboratorio. REFERENCIAS Gua de trabajos prcticos Bioqumica 2011

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