GUIA PRÁCTICA VIRTUAL # 3

BUFFER

PRESENTA:

ZARA CASTAÑO BUITRAGO.

MAIRA ALEJANDRA URREA ESPITIA.

DOCENTE:

YEISON FREDY GRAJALES OSPINA.

UNIVERSIDAD CATÓLICA DE MANIZALES.

FACULTAD DE LA SALUD.
BACTERIOLOGÍA.
MANIZALES.
2021.

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UNIDAD ACADÉMICA DE FORMACIÓN EN CIENCIAS NATURALES Y
MATEMÁTICAS
ASIGNATURA BIOQUÍMICA
PRÁCTICA DE LABORATORIO VIRTUAL 3
SOLUCIONES BUFFER

OBJETIVOS

Comprender la importancia que tienen los sistemas amortiguadores o buffers, para

el buen desempeño de las funciones vitales en los seres vivos.

1. PRE – INFORME

 ¿Qué es una solución buffer?

También se les denomina soluciones "Buffer" ó lampón y son aquellas que se

oponen a los cambios de pH, cuando se les adicionan ácidos o álcalis (hidróxidos).
Su acción se basa principalmente en la absorción de hidrogeniones (H+) ó iones
hidróxilo (OH-).

 ¿Cuáles son los sistemas buffer que actúan en un organismo y en que

condiciones?

Los tampones fisiológicos son la primera línea de defensa frente a los cambios de
pH de los líquidos corporales, entre los que destacan: el tampón fosfato, el tampón
bicarbonato y el tampón hemoglobina. Permitiendo con ello la realización de
funciones bioquímicas y fisiológicas de las células, tejidos, órganos, aparatos y
sistemas.

Tampones orgánicos:

Las proteínas y aminoácidos como tampón: son electrolitos anfóteros, es decir,

pueden tanto ceder protones (ácidos) como captarlos (bases) y, a un determinado
pH (en su pI), tener ambos comportamientos al mismo tiempo. La carga depende
del pH del medio. En un medio muy básico se cargan negativamente, mientras
que en el fuertemente ácido lo hacen positivamente.
Tampón hemoglobina: es un tampón fisiológico muy eficiente debido tanto al
cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida, como a
la gran abundancia de esta proteína en la sangre (15 % del volumen total
sanguíneo). Esta propiedad de la hemoglobina, de cambiar su valor de pK,
demuestra el efecto tampón, permite el transporte de una determinada cantidad de
CO2 liberada en los tejidos.
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 Tampones inorgánicos:

Tampón carbónico/bicarbonato: el bicarbonato es un tampón fundamental en el

organismo y normalmente está presente en los fluidos biológicos como
bicarbonato sódico (siendo el sodio el principal ion positivo en los fluidos
extracelulares). Está constituido por H2CO3 y HCO3. Aunque su valor de pK (6,1)
está algo alejado del pH fisiológico de la sangre (7,4), es un sistema muy eficaz
debido a que: 1) La relación HCO3 - / H2CO3 es muy alta (20/1), lo que le
proporciona una alta capacidad tampón frente a los ácidos; 2) es un sistema
abierto, con lo que el exceso de CO2 puede ser eliminado por ventilación
pulmonar de manera rápida; y 3) además, el HCO3 - puede ser eliminado por los
riñones mediante un sistema de intercambio con solutos.

Tampón fosfato: así pues, el tampón fosfato es un sistema muy eficaz para
amortiguar ácidos. La concentración de fosfato en la sangre es baja (2 mEq/L) por
lo que tiene escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con otros tampones
(ej el bicarbonato). En cambio, a nivel intracelular, las concentraciones de fosfato
son elevadas lo que le convierte en un tampón eficiente. Las grandes cantidades
de fosfato dentro de las células corporales y en el hueso hacen que el fosfato sea
un depósito grande y eficaz para amortiguar el pH.

 ¿Qué relación tiene el pH con las soluciones buffer?

Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladora se relaciona con

el pH al tener la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la
adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes ya que,
mantiene la acidez o basicidad de un sistema dentro de un intervalo reducido de
pH y esto es muy importante porque muchas de las reacciones químicas que se
producen en solución acuosa necesitan que el pH del sistema se mantenga
constante, para evitar que ocurran otras reacciones no deseadas.

2. BIOCONCEPTOS

Para mantener la vida, es necesario que se produzcan una serie de reacciones

que son sumamente delicadas y dependen de que varios factores permanecen
casi constantes, o con muy ligera variación, entre los factores más críticos están
una temperatura adecuada, y un pH que muestre un rango de variación muy
estrecho.
LOS BUFFERS O AMORTIGUADORES: Son substancias que se oponen al
cambio brusco de pH de un medio, se les llama también solución tampón, se
hallan formadas por un ácido débil y una sal de dicho ácido.

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LAVOISIER (1777) observó que sustancias como el azufre y el fósforo en
combinación con oxígeno, y en disolución acuosa, daban lugar a sustancias
ácidas. Pensó que el responsable era el oxígeno y lo llamó principio acidificante.
Arrhenius (1887) propuso la Teoría de la disociación electrolítica iónica: Cuando
los electrolitos (ácidos, bases y sales) se disuelven en H O se disocian en
partículas cargadas (Iones).

BRÖNSTED Y LOWRY (1923)

Definieron como
Ácido: Toda especie capaz de ceder protones.
Base: Toda especie capaz de aceptar protones.
Reacción ácido-base, aquella que implica transferencia de protones.

Las sustancias que pueden actuar tanto como ácido como base, se llaman
anfolitos,
anfóteros o anfipróticos.

LEWIS (1938) propuso que no todas las reacciones ácido-base implican

transferencia de protones, pero sin embargo forman siempre un enlace covalente
dativo.
Ácido: Sustancia que puede aceptar un par de electrones de otros grupos de
átomos, para formar un enlace covalente dativo.
Base: Sustancia que tiene pares de electrones libres, capaces de ser compartidos
para formar enlaces covalentes dativos.

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TAMPONES FISIOLÓGICOS
Son los sistemas encargados de mantener el pH de los medios biológicos dentro
de los valores compatibles con la vida. Permitiendo con ello la realización de
funciones bioquímicas y fisiológicas de las células, tejidos, órganos, aparatos y
sistemas. Según su naturaleza química, los amortiguadores se clasifican en
orgánicos e inorgánicos y, así mismo, atendiendo a su ubicación, se distribuyen en
plasmáticos y tisulares.

TAMPONES ORGÁNICOS
Las proteínas y aminoácidos como tampón
Los aminoácidos y proteínas son electrolitos anfóteros, es decir, pueden tanto
ceder protones (ácidos) como captarlos (bases) y, a un determinado pH (en su pI),
tener ambos comportamientos al mismo tiempo. La carga depende del pH del
medio. En un medio muy básico se cargan negativamente, mientras que en el
fuertemente ácido lo hacen positivamente. Desde el punto de vista fisiológico este
tipo de amortiguador es resulta de especial interés a nivel tisular.

TAMPÓN HEMOGLOBINA
Es un tampón fisiológico muy eficiente debido tanto al cambio de pK que
experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida, como a la gran
abundancia de esta proteína en la sangre (15 % del volumen total sanguíneo). La
oxihemoglobina (pK= 7,16) es un ácido más fuerte que la desoxihemoglobina (pK=
7,71). Los valores de pK son tales que determinan que en la disociación siguiente,
el valor x sea, aproximadamente, 0,7

TAMPÓN CARBÓNICO/BICARBONATO
Está constituido por H2CO3 y HCO3, Aunque su valor de pK (6,1) está algo alejado
del pH fisiológico de la sangre (7,4), es un sistema muy eficaz debido a que: 1) La
relación HCO3/ H2CO3 es muy alta (20/1), lo que le proporciona una alta capacidad
tampón frente a los ácidos; 2) es un sistema abierto, con lo que el exceso de CO 2
puede ser eliminado por ventilación pulmonar de manera rápida; y 3) además, el
HCO3 puede ser eliminado por los riñones mediante un sistema de intercambio
con solutos.

TAMPÓN FOSFATO
A pH fisiológico, las especies del fosfato con capacidad de tamponar son H2PO4 -
Y HPO4-2 ya que su valor de pK es de 6,8, el tampón fosfato es un sistema muy
eficaz para amortiguar ácidos. La concentración de fosfato en la sangre es baja (2
mEq/L) por lo que tiene escasa capacidad de tamponar si lo comparamos con
otros tampones (ej. el bicarbonato).

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3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales

● Beacker de 250 ml
● Pipetas Pasteur
● pH-metro
● Bureta
● Calculadora (suministrada por el estudiante)
● Earlenmeyers

3.2Reactivos e insumos

● Ácido acético 1M
● Acetato de sodio 1M
● Ácido clorhídrico 1M
● Agua destilada
● Fenolftaleína
● Azul de bromofenol
● NaOH 0,1 M
● HCl 0,1 M
● Na2CO3

3.3 Procedimiento

3.3.1. Ver previamente el video tutorial “Como usar el laboratorio virtual

Chemcollective.” (Duración 19 minutos) a través de este link:
https://youtu.be/vR6VI2NcXEg

3.3.2. Para realizar la practica virtual ingrese al siguiente link:

http://chemcollective.org/vlab/104

3.3.3. Adecuación de la plataforma.

Al ingresar, la plataforma virtual estará en inglés, oprima el botón para
pasarlo a español (Grafica 1) círculo rojo.

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 Grafica 1. Enlace para pasar la plataforma a español.

3.3.4. Manejo de materiales y reactivos.

El dar click en el botón con el círculo rojo “Reactivos”, figura 2, se

despliegan todos los reactivos disponibles:
- Agua destilada
- ácidos y bases (fuertes y débiles).
- Sales acidas débiles (Base conjugada), sales básicas débiles (Acido
conjugado).
- Reactivos puros, sólidos y líquidos.
- Indicadores (Fenolftaleína, naranja de metilo, azul de bromocresol, etc).

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Figura 2. Reactivos disponibles en el laboratorio.

El dar click en el botón con círculo rojo “Material de vidrio”, figura 3, se

despliegan todos los materiales de vidrio disponibles:
- Earlenmeyesrs
- Probetas
- Pipetas (1 ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml)
- Vasos de precipitado
- Matraces aforados.
- Capsulas y buretas de 50 ml.

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 Figura 3. Materiales de vidrio.

- Practica de manejo de reactivos y materiales

Se va a preparar 100 ml de solución diluyendo acido clorhidrico 1M con agua
destilada hasta la concentración de 0.5 M.

1. Abra la persiana de ácidos fuertes. Figura 4. Encontrará todos los ácidos

fuertes disponibles (15 en total). Busque Ácido clorhídrico 1M, y dele un
click como se observa en la figura 5.

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 Figura 4. Selección de ácidos fuertes. Figura 5. 1M
HCl.

2. Después de tener el reactivo de HCl 1M, oprima nuevamente el botón

“Almacén” figura 6, cierre la persiana de “ácidos fuertes” para que se cierre
todas las opciones de ácidos disponibles, y saque el agua destilada dándole
un click como se observa en la figura 7. Vuelva y oprima el botón
“Almacén”.

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 Figura 6. Botón almacén. Figura 7. Agua
destilada.

3. Oprima el botón “Material de vidrio”, luego baje la persiana “matraces

aforados” como se observa en la figura 8 y dele click a matraz aforado de
100 ml, figura 9.

Figura 8. Materiales de vidrio. Matraces. Figura 9. Matraz

aforado 100 ml.

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4. Una vez que tiene los materiales en la poyata como se observa en la figura
10. Tome con el click izquierdo del mouse el HCl y arrástrelo hasta el
matraz de 100 ml hasta que observe que se forma un cuadro de líneas
punteadas alrededor del matraz figura 11.

Figura 10. Poyata 1 con los materiales

Figura 11. Margen punteada indicando que ya se puede verte el HCl sobre
el matraz.

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 Como se puede observar en la figura 12, ya está listo para verter el HCl sobre el
matraz, el punto 1 indica el nivel máximo del matraz a llenar, que en este caso es
de 100 ml, el punto 2 indica el volumen vertido en el matraz, que en este caso
esta en cero. En el punto 3 es donde debe indicar el volumen a verter dentro del
matraz, escriba 50 sin unidades solo cifras, esto corresponde al volumen de 50
ml. Luego oprima el botón “añadir” que es el que esta enumerado como 4. Y
luego oprima “X”, punto 5 para cerrar el procedimiento y desvincularlos. Repita
el procedimiento con el agua destilada vertiendo 50 ml al matraz.

Figura 12. Descripción de las partes del laboratorio

En la figura 13 se pueden observar los datos generados después de vertido el HCl

y el agua destilada. Los puntos 1 indican el volumen final, que en este caso es de
100 ml, el punto 2 indica el pH de la nueva solución (pHmetro), el punto 3 indica la
temperatura final de la solución. El punto 4 indica la nueva molaridad que en este
caso es de 0.5 M.

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 Figura 13. Datos de respuesta del experimento.

3.3.5. Capacidad de amortiguación: efecto de la concentración del ácido y la

sal en el buffer

Primera actividad:
a. Prepara tres Beaker (Vasos de precipitado) según lo indicado en la
siguiente tabla.
Saque 3 Beakers de 250 ml de “Material de vidrio” – “Vasos de precipitado”. Y
renombrelos con 1, 2 y 3. Saque ácido acético 1M de la pestaña de “Ácidos
débiles” y saque el acetato de sodio 1M de la pestaña “Bases conjugadas” prepare
las soluciones según la tabla 1 y según la figura 14.

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 Figura 14. Primera actividad de 3 beakers

Beaker 1 2 3
Ácido acético 1M 9ml 5ml 1ml
Acetato de sodio 1M 1ml 5ml 9ml
Tabla 1. Contenido de ácido acético y acetato de sodio para cada uno de los
beakers.

b. Determina el pH de cada uno. Y reporte los resultados en la tabla 2.

Beaker 1 2 3
Ph 3.80 4.76 5.71
Tabla 2. pH de cada uno de los 3 Beaker.

c. Agrégale a cada Beaker 20 gotas (1 ml) de ácido clorhídrico 1 M y

enseguida determine el pH de cada Beaker según la tabla 3.

Beaker 1 2 3
Ácido acético 1M 9mL 5mL 1mL
Acetato de sodio 1M 1mL 5mL 9mL
Ácido clorhídrico 1M 20 gotas 20 gotas 20 gotas
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Tabla 3. Cantidad de HCl 1M a agregar a cada Beaker.

d. Determina el pH de cada tubo, y reporte los resultados en la tabla 4.

Tubos de ensayo 1 2 3
pH 2.4 4.58 5.36
Tabla 4. Datos de pH después de la bufferización.

Segunda actividad

a. Prepara cinco beakers según lo indicado en la tabla 5, por lo cual debe

renombrarlas con el numero correspondiente. Para prepararlas adicione:

Recomendación: prepare cada Beaker y titule por separado

Tubo 1. Agua destilada + fenolftaleína + HCl 0,1 M

Tubo 2. Agua destilada + Verde de bromocresol + NaOH 0,1 M
Tubo 3. Fenolftaleína + HCl 0,1 M + ácido acético 0,2 M + acetato de sodio 1M
Tubo 4. Verde de bromocresol + NaOH 0,1 M + ácido acético 0,1M + acetato de
sodio 1M
Tubo 5. Agua destilada + fenolftaleína + HCl 0,2 M + ácido acético 1M + acetato
de sodio 1M

Beakers
Reactivos 1 2 3 4 5
H2O destilada 1 mL 1 ml 1mL
Fenolftaleína 0.1 mL 0.1 mL 0.1 mL
Verde de bromocresol 0.1 mL 0.1 mL
NaOH 0,1 M 1 mL 1mL
HCl 0,1 M 1 mL 1 mL 1 mL
Ácido acético 1 M 1 mL 2 mL 1mL
Acetato de sodio 1 M 1 mL 2 mL 1mL
Titulante NaOH 1M HCl 1M NaOH 1M HCl 1M NaOH 1M
Tabla 5. Preparación de las muestras para ensayos de bufferización

b. Determina el pH inicial de cada Beaker.

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BIker 1: 1.32
c. Realiza la titulación a cada beaker hasta que el indicador vire de color.
Para este fin añade a la bureta HCl 1M o NaOH 1M una cantidad de 52 ml, según
corresponda a cada uno de los Beakers. Empiece a verter al Beaker de a 0.1 ml
como se observa en la figura 15. Anota el volumen de ácido o base añadido hasta
cambio de color, y determine el pH al final completando la tabla 6.

Figura 15. Montaje para la titulación de cada Beaker.

Tubos de ensayo 1 2 3 4 5
Volumen de ácido o
0.2 ml 0.2 ml 2.1ml 4.0ml 1.2ml
base añadido
1.32
pH inicial 12.67 4.67 4.80 4.67
pH final 12.63 1.36 12.36 0.68 12.26
Tabla 6. Resultados finales del experimento.

Tanto la fenolftaleína como el Verde de bromocresol son indicadores de pH. Se

trata de compuestos ionizables en los que las formas disociada y sin disociar
tienen diferente color. La fenolftaleína tiene un valor de pK de 8,9 y la forma no

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disociada es incolora y la disociada es rosa. El Verde de bromocresol tiene un
valor de pK de 3.22, la forma no disociada es amarilla y la forma disociada es azul.

4. CÁLCULOS Y RESULTADOS

 Primera actividad

Diferencia entre la tabla 1 y la 4

Biker 1 pH
3.80−2.4=1.4

Biker 2 pH
4.76−4.58=0.18

Biker 3 pH

5.71−5.36=0.35

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  Segunda actividad

Biker 1

Biker 2

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Biker 3

2
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Biker 4

2
1
Biker 5

2
2
5. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
 En el tubo 3 al combinar fenolftaleína, HCL 0.1 M, ácido acético a 1ml y
acetato de sodio a 1ml se observa que la solución es incolora, ya que su
indicador no presenta ninguna coloración y su pH se encuentra en 4.65,
pero cuándo se le agrega el agente titulante se evidencia un cambio de
color a rosado y un cambio en su pH de 12.36 a un volumen del ácido
clorhídrico añadido de 2.1ml.

2
3
  En el tubo 4 se combina un indicador llamado verde de bromocresol al
0.1ml, NaOH a 1ml, acido acético a 2ml y acetato de sodio a 2ml, todo este
proceso se realizo en un vaso precipitado que al aplicarle el indicador este
tiene un color azul indicando que su pH era de 4.80, pero al agregarle el
agente titulante ácido clorhídrico (HCL a 1M), esto quiere decir que se le
agrego 0.1ml hasta llegar un volumen de 4.0ml y esto ocasionó que pH final
fuese de 0.68.
 En el tubo 5 se agregaron a un vaso precipitado los siguientes compuestos:
Agua destilada de 1ml, el indicador de la fenolftaleína de 0.1ml, ácido
clorhídrico de 1ml, acido acético de 1ml y acetato de sodio de 1ml, los
cuales no mostraron ninguna coloración con un pH inicial de 4,67 siendo
acido, pero se le agrega un agente titulante el cual es NaOH de 1M y se
evidencia un cambio de color a rosado con un pH de 12.26 y un volumen
agregado de 1.2ml.

6. PREGUNTAS DE PROFUNDIZACIÓN

a. ¿Qué observaste al comparar los valores de pH en la actividad uno? Justifica.

b. ¿Qué tubo mostró mejor capacidad de amortiguación para ácidos en la

actividad uno? Justifica?

c. Si tienes un buffer formado por acetato de sodio 0,3M y ácido acético 0,1M
(Ka=2,78 x 10-5). Calcula el pH de esta solución.

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d. ¿Cómo afecta la concentración del buffer la capacidad amortiguadora?
Justifica.

e. Si tú varías la concentración del buffer ¿el rango de amortiguación se verá

afectado? Justifica.

Cuando se habla del rango de amortiguador de un buffer se hace referencia a

el pKa-1 y pKa +1 y esto depende de la constante de acidez (tampón acido) o
la constante basicidad (tampón básico), al formar una solución reguladora se
habla de combinar un ácido débil y una sal o una base débil con su sal y el pH
dependerá de la cantidad de ácido, base y sal que se mezclen.

f. ¿Qué especies del tampón fosfato están presentes en condiciones fisiológicas

o ambientales?

Los tampones de fosfatos están presentes en las condiciones fisiológicas ya

que su valor de pK es de 6.8 y podría actuar de la siguiente manera pH = 6,8 +
log HPO4 2- / H2PO4 – A, llegándose a ser un sistema muy eficaz para
amortiguar ácidos, en el nivel intracelular dentro de las células corporales y en
las de los huesos las concentraciones de fosfato son elevadas y así se
convierten en un tampón eficiente y un deposito grande para amortiguar el pH.

g. ¿Qué capacidad amortiguadora tendremos en los tubos 3 y 4 de la segunda

actividad?. Justifica.

TUBO 3:
NaOH
h. Calcula la cantidad de HCl (en el tubo 4) y NaOH (en el tubo 3) de la actividad
dos que es necesario añadir para que vire el indicador de color. ¿Coincide con
lo que ha salido en la práctica? Comprobar lo que ha ocurrido en los tubos 1 y
2.

Tubo 3:
1. C20H14O4 (fenolftaleína) 0.1ml + HCL (acido clorhídrico) 1ml + CH3-COOH
(ácido acético) 1ml + NaC2H3O2 (acetato de sodio) 1ml
2. Se le agrega el agente titulante NaOH (hidróxido de sodio) 1M

NaOH= Na+ + OH-

Ka=¿ ¿

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 Ka=¿ ¿
[ NaOH ]
−¿= Ka∙ ¿
OH ¿¿

[ NaOH ]
pH= pKa+log
¿¿
[ NaOH ]
pH=8,9+ log
¿¿

i. Discute lo que ha ocurrido en el tubo 5 al añadir HCl de la segunda actividad.

¿Por qué el tampón bicarbonato es un sistema abierto?

El tampón bicarbonato tiene un valor en su pK de 6.1 y tiene una relación

(20/10) muy alta HCO3 - / H2CO3, proporcionando alta capacidad tampón
frente a muchos ácidos H+. Siendo este un sistema abierto, ya que el exceso
de CO2 podría ser eliminado por los pulmones (ventilación) de una manera
eficaz y el HCO3 puede ser eliminado por los riñones en un intercambio de
solutos. Esto quiere decir que el acido clorhídrico fue eliminado y paso de ser
acido a una base cuando se le agrega el agente titulante llamado NaOH.

pH = pK + log HCO3 - / CO2d

pH = 6,1 + log HCO3 - / (3 x 10-5) . PCO2

7. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA

Autor (es) Libro – Revista Paginas Año Editorial

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 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA, &

U.N.W.S.E.S.I.N.G. (2014, 1 agosto). Soluciones Buffer ó Amortiguadoras.

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA ESCUELA DE

CIENCIAS AGRICOLA, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE ECAPMA.

https://repository.unad.edu.co/bitstream/handle/10596/4810/334001-

%20Soluciones%20Buffer-Amortiguadoras.pdf?sequence=1

 Túnez Fiñana, I. (06–09-16). pH AMORTIGUADORES: Tampones

fisiológicos. 06 pH AMORTIGUADORES.pdf.

https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/06%20pH

%20AMORTIGUADORES.pdf

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