INTRODUCCIÓN

El análisis microbiológico del agua es un proceso esencial para evaluar la calidad y

seguridad del suministro de agua. A través de este análisis, se busca identificar y cuantificar
los microorganismos presentes en el agua, lo que permite detectar posibles contaminantes
biológicos y evaluar los niveles de riesgo para la salud pública.

Entre los microorganismos más comunes que se encuentran en el agua, se destacan los
coliformes totales y termotolerantes. Los coliformes totales son bacterias presentes en el
intestino de los animales de sangre caliente, incluyendo a los seres humanos. Su presencia
en el agua indica la posible contaminación fecal y, por lo tanto, la existencia de un riesgo
potencial para la salud. Por otro lado, los coliformes termotolerantes son un subgrupo de los
coliformes totales que tienen la capacidad de crecer a temperaturas elevadas, lo que los
hace más indicativos de contaminación fecal reciente.(Coliformes | 3M Perú, s. f.)

Para el análisis de estos microorganismos, se utiliza comúnmente el método del número

más probable (NMP). Este método se basa en la detección de la presencia de
microorganismos mediante el cultivo en medios de agar específicos y la observación de la
producción de gases característicos. El NMP se aplica mediante la dilución seriada del agua
de muestra y la inoculación de cada dilución en tubos o placas de cultivo. Luego, se realiza
la lectura de los resultados y se determina el número más probable de microorganismos
presentes en la muestra original, utilizando tablas estadísticas. (Divaagen, 2021)

El método del número más probable tiene ventajas significativas, como su rapidez y la
capacidad de proporcionar una estimación cuantitativa de la concentración de
microorganismos presentes en el agua. Sin embargo, es importante tener en cuenta sus
limitaciones, como la incapacidad de identificar de forma precisa los tipos específicos de
microorganismos presentes. Para ello, se requieren técnicas adicionales, como el uso de
medios selectivos y pruebas bioquímicas. (Divaagen, 2021)

En conclusión, el análisis microbiológico del agua, incluyendo la detección de

microorganismos como los coliformes totales y termotolerantes mediante el método del
número más probable, es fundamental para garantizar la calidad y seguridad del suministro
de agua. Este análisis proporciona información valiosa sobre posibles contaminantes
biológicos y ayuda a prevenir enfermedades transmitidas por el agua. La implementación
regular de estos análisis es esencial para proteger la salud pública y promover el acceso a
agua potable segura y libre de riesgos.
IV. REPORTE DE RESULTADOS

a) Completar la siguiente tabla para Coliformes Totales:

Dilución Volumen de muestra Denomina Tubos positivos en la Tubos positivos en la Tubos positivos en la
inoculada (mL) ción de la prueba presuntiva prueba confirmativa prueba confirmativa
serie de 5 para coliformes totales para coliformes para coliformes
tubos totales termotolerantes

1:1 10 mL 5-5-5 positivo positivo positivo

1:10 1 mL 5-5-5 positivo positivo positivo

1:100 0.1 mL 5-5-5 positivo positivo positivo

Tubos positivos en la prueba En los tubos de doble

presuntiva para coliformes concentración con 10 mL
totales del medio de cultivo se
visualiza una turbidez y
presencia de gas en los
tubos durham, dando así
positivo a la prueba
presuntiva para coliformes
totales

Tubos positivos en la prueba En los tubos de simple

presuntiva para coliformes concentración con 9 mL del
totales medio de cultivo se visualiza
una turbidez y presencia de
gas en los tubos durham,
dando así positivo a la
prueba presuntiva para
coliformes totales

Tubos positivos en la prueba En los tubos de simple

presuntiva para coliformes concentración con 9,9 mL
totales del medio de cultivo se
visualiza una turbidez y
presencia de gas en los
tubos durham, dando así
positivo a la prueba
presuntiva para coliformes
totales
 Tubos positivos en la prueba En los tubos de caldo brila
confirmativa para coliformes se manifestó turbidez del
totales medio y gas en los tubos
durham, lo que indica que
hay coliforme en las
distintas disoluciones
corroborando la prueba
presuntiva.

Tubos positivos en la prueba Hay presencia de E. coli,

confirmativa para coliformes por lo tanto en los tubos de
termotolerantes distintas diluciones dan la
prueba confirmativa de
coliformes tolerantes por la
florescencia. Esto se debe a
que el medio de cultivo
contiene MUG (reactivo)
esto hace que la bacteria E.
Coli florezca.

b) Calcular y expresar los resultados para Coliformes Totales:

De acuerdo con el método del Número Más Probable, para coliformes totales se obtuvo que
para las tres diluciones realizadas (1:1; 1:10; 1:100), los cinco tubos que se emplearon para
cada disolución fueron positivos para la presencia de coliformes, esto se evidenció por la
turbidez del tubo y la presencia de gas acumulado en el tubo Durham.
De esta manera utilizando la tabla del NMP se obtuvo lo siguiente:

De tal manera que se logra interpretar que el número más probable para la muestra es de
1600 NMP/100ml.

c) Calcular y expresar los resultados para Coliformes Termotolerantes:

En cuanto a los resultados para coliformes termotolerantes, se extrajo una muestra de cada
uno de los tubos resultantes, posteriormente se colocaron en baño María a una temperatura
de 44.5°C durante 24h, logrando apreciar finalmente que, los resultados nuevamente dieron
positivo para todos los tubos empleados. teniendo los mismos resultados en la tabla de
Número Más Probable, que para coliformes totales, por lo que se consideró 1600
NMP/100ml

En adición, mediante la Prueba confirmativa con Caldo Brili se logró corroborar la presencia
de Coliformes termotolerantes en todos los tubos.
V. CUESTIONARIO

a) ¿Qué permite determinar el estudio cuantitativo de bacterias?

La determinación de la cantidad de bacterias presentes en alimentos, agua, suelos u otros

entornos es importante para evaluar la seguridad y calidad de los mismos. El estudio
cuantitativo permite identificar posibles fuentes de contaminación y establecer medidas de
control y prevención.
Permite estudiar cómo varía la población bacteriana en el tiempo. Esto puede ocasionar
cambios en la cantidad de diferentes especies bacterianas y comprender los factores que
influyen en su crecimiento, reproducción y supervivencia.
El estudio cuantitativo de bacterias puede emplearse para determinar la susceptibilidad de
las bacterias a diferentes agentes antimicrobianos.

b) ¿Qué tipo de muestras se pueden analizar? Mencione 3 ejemplos

● Muestras de agua: El agua es un ambiente propicio para el crecimiento de
bacterias, por lo que es importante analizarla para evaluar su calidad y seguridad.
Se pueden tomar muestras de agua potable, agua residual, agua de ríos, lagos o
cualquier fuente de agua, y realizar análisis cuantitativos para determinar la
concentración bacteriana. Esto es especialmente relevante para identificar la
presencia de bacterias patógenas y asegurar que el agua sea segura para el
consumo humano.
● Muestras de superficies: Las superficies, ya sean de equipos médicos, utensilios
de cocina, superficies de contacto humano o cualquier otra, pueden albergar
bacterias y contribuir a la propagación de infecciones. En un estudio cuantitativo, se
pueden tomar muestras de diferentes superficies, utilizando hisopos o técnicas de
impresión, y analizar la cantidad de bacterias presentes. Esto puede ayudar a
evaluar la eficacia de los procedimientos de limpieza y desinfección, así como a
implementar medidas de control de infecciones.
● Muestras de alimentos: Los alimentos pueden ser una fuente de contaminación
bacteriana y representar un riesgo para la salud pública. En un estudio cuantitativo,
se pueden analizar muestras de alimentos como carne, aves, productos lácteos,
frutas y verduras, para determinar la carga bacteriana presente. Esto puede
realizarse mediante técnicas de cultivo y recuento de bacterias, o mediante técnicas
moleculares para identificar y cuantificar especies bacterianas específicas.

c) ¿En qué consiste el medio Mc Conkey reforzado y por qué se lo utiliza?

Agar Mac Conkey : Es un medio de cultivo basado en peptona , lactosa, sales biliares y
cristal violeta; que aportan nutrientes para el crecimiento bacteriano, hidratación de carbono
fermentable y es un medio selectivo por sus últimas composiciones inhibiendo mayor parte
de flora gram positiva . Donde se puede encontrar el E.Coli con una tonalidad rosado o
rojizo , pero también Proteus mirabilis e Shigella flexneri como incoloros. (Britania, 2021)

Usos : Para el aislamiento de bacilos gram negativos , de fácil desarrollo, aerobios y

anaerobios facultativos, mediante muestras clínicas de aguas o alimentos . (Britania, 2021),
Donde una variación de este agar como Agar MacConkey Sorbitol llega al extremo de solo
ser un medio selectivo directamente para E.Coli.
d) Mencione las limitaciones del método del recuento de colonias en placa
Las limitaciones para el método del recuento de colonias en placa son:
- Tiempo prolongado que se necesita para la preparación de los
medios.(Ramírez S et al., 2017)
- Riesgo de contaminación por otros microorganismos que pueden afectar el
medio de cultivo.(Ramírez S et al., 2017)
- Si la muestra tiene una concentración celular alta es difícil de
contar.(Ramírez S et al., 2017)
- Si el tamaño de la célula del microorganismo es muy pequeño esta será
difícil de ver.(Ramírez S et al., 2017)
- Al hacer el conteo muy rápido nos podemos confundir, y tendríamos mal el
número de microorganismos implicados. (Ramírez S et al., 2017)

References

Britania. (2021). Mac Conkey Agar.

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60707267ecda2.pdf

Ramírez S, J. A., Parra V., J. A., & Alvarez Aldana, A. (2017). Análisis de técnicas de
recuento de Microorganismos. Mente Joven, 6, 01–08.
https://doi.org/10.18041/2323-0312/mente_joven.0.2017.3665

Coliformes | 3M Peru. (s. f.). MMM-ext.

https://www.3m.com.pe/3M/es_PE/food-safety-la/biblioteca-de-documentos/microorganismo
s/coliformes/#:~:text=Las%20bacterias%20Coliformes%2C%20un%20grupo,durante%20m
%C3%A1s%20de%20un%20siglo

Divaagen. (2021). Método del Número Más Probable (NMP). Divaagen.

https://www.divaagen.com/metodo-del-numero-mas-probable/