CONTROL DE

LIMITE
MICROBIANO
TRABAJO determinar el numero de

GRUPAL
microorganismo aerobios
viables .

objetivo:
y la extencias de
determinadas especies
microbianas en productos
farmaceuticos.

desde materia prima

hasta la forma fina.
 Procedimiento
Recuento de microorganismos aerobios totales:
En Placas: Hacer diluciones de la
muestra, con el fin de obtener entre 30
a 300 colonias por placa. Colocar en
cada una de dos placas Petri estériles 1
mL de la dilución adecuada. Agregar 15
a 20 mL de medio Agar-Soya-Digerido
de Caseína, licuado a 45°C. Mezclar por
rotación. Dejar solidificar Incubar en
posición invertida por 48-72 horas
Examinar las places. Contar las colonias
Multiplicar el número de colonias por
el factor de dilución para obtener el
número de microorganismos por 1 mL
por 1 g de muestra problema
Tubos Múltiples: Preparar 14
tubos de ensayo con 9 mL de
medio Líquido Soya-Digerido de
Caseína estériles. Separar 2 tubos Para gelatina: Colocar 1 mL de la
que denominamos A y B Ordenar solución de gelatina bien agitada en
los tubos restantes en cuatro cada una de 2 placas Petri estériles
series de tres tubos cada una, que Agregar 10 mL del medio Agar-soya-
denominamos “100”, “10”, “1” y digerido de caseína licuado a 45°C por
“control”. A los tubos “100” y al rotación y balanceo. Dejar solidificar.
tubo A, agregarles 1 mL de Incubar a 30-35°C en posición invertida
solución problema Del tubo A por 48 horas. Contar las colonias.
transferir 1 mL al tubo B y 1mL a Calcular por 1 g de muestra.
cada uno de los tubos “10” Del
tubo B transferir 1mL a cada uno
de los tubos “1” Agregar 1 mL de
diluyente los tubos “control”
Realizar todas las operaciones en
condiciones estériles y mezclar
después de cada adición Incubar
48-72 horas
EJEMPLOS
COMBINACIONES EN LAS SERIES DE TUBOS
Miligramos (0 ml) de muestra por tubos
100(0.1 ml) 10(0.01 ml) 1(0.001 ml) Número más probable de microorganismos por g o ml
3 3 3 1100
3 2 3 230
3 1 3 160
 STAPHYLOCOCCUS Y
PSEUDOMONA

A 10 mL ó 10 g de muestra
agregar medio líquido
soya-digerido de caseína
en cantidad suficiente para
100 mL. Mezclar. Incubar

Observar si hay Examinar las caracteristicas

Si lo hubiera, transferir una placas.
crecimiento asada a la superficie del Incubar en
medio Vogel-Johnson y de posición invertida.
Agar Cetrimida, contenidos
en placas petri. Agar Vogel-
Agar Cetrimida:
No debe haber Johnson
No debe haber crecimiento de
colonias de gérmenes
con las siguientes colonias verdosas,
caractristicas colonias negras
rodeadas de zona fluorescentes. Gram -,
amarilla. Gram +, bacilos: Pseudomona
en racimos, cocos aeruginosa
Staphylococcus
aureus
En caso de sospecha,
comprobar con la
prueba de coagulasa
para Staphylococcus
aureus y de oxidasa para
la Pseudomona
aeruginosa
 INVESTIGACION DE ESPECIES DE
SALMONELLA.

La muestra se coloca en un matras esteril ,agregale medio

liquido lactosado 100ml ,incubar examinar las placas .

SALMONELLA :Transferir de ambos
cultivos a la superficie de placas petri
que contienen agar verde brillante ,agar
xilosa ,lisina ,desoxicolato y agar sulfito
de bismuto ,incubar . No debe haber
crecimiento de colonias de germenes
E.Coli:
-Transferir una asada del crecimiento en caldo
lactosado a la superficie de placas con agar Mc
Conkey. Incubar en posición invertida
- Examinar las placas. No debe haber crecimiento de
colonias de gérmenes con las siguientes
características
Agar Mc Conkey: colonias rojo ladrillo que pueden
estar rodeadas de zonas de bilis precipitada.
Gram -, bacilo
CARACTERISTICAS : Agar-Verde Brillante:
colonias pequeñas, transparentes,
incoloras, rosadas o blancas (rosadas
a veces de halos rosados o rojos)
Agar-xilosa-lisina-desoxicolato: colonias
rojas con o sin centros negros
Agar-sulfito Bismuto: colonias negras o
verdes