Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro.

División de Agronomía.
Departamento de Botánica.

Práctica 7.

“Determinación de coliformes totales en agua ”.

Materia

Contaminación ambiental -BOT480

Docente responsable

Dra. Silvia Yudith Martínez Amador

Técnico académico.

Q.F.B. Brenda Verónica Borrego Limón

Integrantes

Ovalle Villela Fatima Monserrath

Pinto Jimenez Jesus
Mendoza Quevedo Darieli
Pedraza Chavez Luis Alexander
Reyes Moran Fatima
Reyes Flores Cibely

Saltillo, Coahuila A 30 de octubre del 2023

Introducción.

Las bacterias coliformes se utilizan frecuentemente como indicador bacteriano de la calidad

sanitaria de los alimentos y el agua. Se definen como bacterias gramnegativas, con forma de
bastón, no formadoras de esporas, que pueden fermentar la lactosa con producción de ácido y
gas cuando se las incuba a 35–37 °C. Los coliformes pueden encontrarse en ambientes
acuáticos, suelo y vegetación; además de estar presentes en grandes cantidades en las heces
de los animales de sangre caliente. Aunque en general los coliformes en sí no causan
enfermedades graves, son fáciles de cultivar y su presencia sirve para indicar la posible
presencia de otros organismos patógenos de origen fecal. Dichos patógenos pueden ser
bacterias, virus o protozoos y una larga serie de parásitos pluricelulares.
El aumento del uso del agua para diferentes fines y el crecimiento de la población a nivel
mundial han contribuido al incremento de los niveles de contaminación de los sistemas
acuáticos. La contaminación de estos ecosistemas es una problemática que se presenta en la
actualidad, debido al constante vertimiento de desechos domésticos e industriales que
constituyen una fuente de deterioro del medio ambiente. El control de la calidad
microbiológica del agua de consumo y de vertido, requiere de análisis dirigidos a determinar
la presencia de microorganismos patógenos. La alternativa para realizar un control fiable,
económico y rápido de la calidad microbiológica del agua es el uso de indicadores de
contaminación fecal. Entre los indicadores de contaminación fecal más utilizados se
encuentran los coliformes totales y termotolerantes, Escherichia coli y enterococos. Las
bacterias indicadoras permiten realizar la clasificación sanitaria de las aguas para diferentes
usos, la determinación de criterios para las normas de calidad, la identificación de
contaminantes, el control de procesos de tratamiento de agua y estudios epidemiológicos, etc.
Como medio confirmativo para coliformes totales, el más generalizado es el caldo bilis
lactosa verde brillante (CBVB). Para confirmar la presencia de coliformes fecales se utiliza
tanto el CBVB como el caldo EC.
La determinación de coliformes totales se lleva a cabo a través de análisis microbiológicos en
laboratorios especializados. El procedimiento implica la recolección de muestras de agua,
alimentos o superficies, seguido por una serie de pasos que permiten identificar y contar las
bacterias coliformes presentes. Primeramente se hará una recolección de muestras; la forma
en que se recolecta depende del tipo de muestra: agua, alimento, superficie, etc. Es
importante seguir pautas específicas de muestra para garantizar la precisión de los resultados.
posteriormente se hará una preparación de medios de cultivo los cuales serán específicos para
fomentar el crecimiento de los coliformes. Es importante también la prevención de la
infección por coliformes, especialmente la causada por bacterias patógenas como Escherichia
coli. para esto se debe hacer :
​ Higiene personal:
● Lávate las manos con agua tibia y jabón.
● Utilice toallas de papel o secadores de aire limpios para secar sus manos.
​ Higiene alimentaria:
● Lava bien frutas y verduras crudas antes de comerlas o cocinarlas.
● Almacenar los alimentos a temperaturas seguras y evitar la contaminación
cruzada entre alimentos crudos y cocidos.
Objetivo.
● Aprender la técnica para determinar la presencia de coliformes totales en diferentes
muestras de agua.
Material.
● Tubos de ensayo
● Tapones de plástico autoclavables
● Pipeta automática 200-1000 µL
● Pipeta automática 1000-5000 µL
● Pipeta volumétrica de 5 mL
● Campanas de Durham
● Gradilla.
● Pinzas de disección
● Vasos de precipitado

Reactivos
● Caldo de cultivo lauril sulfato de sodio
● Caldo de cultivo bilis verde brillante
Equipo
● Incubadora
● Vórtex
● Autoclave

Procedimiento.
Prueba presuntiva
1. Realizar diluciones seriadas de 101 hasta 106 , las cuales se realizan por triplicado
(3x).
2. Marcar los tubos con la dilución y la muestra correspondiente.
3. Agregar 22.5 mL de Caldo Lauril Sulfato de Sodio (CLSS) a cada tubo de ensaye (22
mL directo con una pipeta, y 0.5 mL en la campana de Durham).
4. Llenar la campana de Durham e introducirla al tubo de ensayo rápidamente por
inversión cuidando que no queden burbujas en el proceso.
5. Colocar correctamente los tapones de plástico en la boca de los tubos de ensaye.
6. Esterilizar los tubos de ensaye con el medio de cultivo por 15 min a 121°C/15 lbp.
7. Esterilizar el área a trabajar y agregar a cada tubo de ensaye correspondiente a la
dilución 101 2.5 mL de muestra (3x). Tapar nuevamente los tubos al finalizar este
paso.
8. Mezclar cada tubo en el vortex para homogeneizar la muestra con el caldo de cultivo.
9. Tomar 2.5 mL de los tubos de la dilución 101 y vaciarlo en el tubo correspondiente
de la dilución 102 .
10. Mezclar cada tubo en el vortex para homogeneizar la muestra con el caldo de cultivo.
11. Realizar los pasos 9 y 10 a fin de que se realicen las diluciones seriadas hasta 106.
12. Incubar los tubos de ensayo a 35°C ±1 por 24-48 hrs ±3.
 13. Observar los resultados, los tubos positivos deben tener turbio el caldo de cultivo y
observarse producción de gas en la campana de Durham (desplazamiento de líquido –
vacío).
14. Guardar los tubos positivos y desechar los tubos negativos.

Prueba confirmatoria coliformes totales

15. Solo se trabajará en este punto con los tubos que resultaron positivos en la prueba
presuntiva.
16. Marcar los tubos con la dilución y la muestra correspondiente.
Agregar 24.75 mL de caldo bilis verde brillante (CBVB) a cada tubo de ensaye (24.25
mL directo con una pipeta, y 0.5 mL en la campana de Durham).
17. Llenar la campana de Durham e introducirla al tubo de ensayo rápidamente por
inversión cuidando que no queden burbujas en el proceso.
18. Colocar correctamente los tapones de plástico en la boca de los tubos de ensaye.
19. Esterilizar los tubos de ensaye con el medio de cultivo por 15 min a 121°C/15 lbp.
20. Esterilizar el área a trabajar y agregar a cada tubo de ensaye con la dilución
correspondiente 0.25 mL (250µL) de muestra. Tapar nuevamente los tubos al finalizar
este paso.
21. Mezclar cada tubo en el vortex para homogeneizar la muestra con el caldo de cultivo.
22. Incubar los tubos de ensayo a 35°C ±1 por 24-48 hrs ±3.
23. Observar los resultados, los tubos positivos deben tener turbio el caldo de cultivo y
observarse producción de gas en la campana de Durham (desplazamiento de líquido –
vacío).

Diagrama de Flujo.

1)Lavar material (solo los tubos de

ensaye)
2)Secar el material previamente lavado.

3)Tarar la bascula analitica

4)Pesar el reactivo para el medio de

cultivo, colocando en un vaso de
precipitado y pesar 26.7 gr de agar CLSS.

5) Con la ayuda de una probeta se

procede a medir 750 Ml de agua destilada,
para la preparación del medio de cultivo.
 6) Agregar lentamente el agar y agregar el
agua destilada para preparar el medio de
cultivo.

7) Etiquetar los tubos de ensayo con el

número del equipo y el número de la
dilución.

9).- Agregar 2 ml de medio CLSS a los

tubos de ensaye

10) Agregar 22 ml de medio CLSS a los

tubos de ensaye.
11) Agregar 0.5 ml de medio CLSS a la
campana e introducirla en el tubo de
ensaye.

12) Acomodar en la gradilla los tubos de

ensayo por dilución.

13) Tomar muestra de agua residual de la

escuela.

14) Tomamos la micropipeta para ajustarla

a la cantidad que necesitamos.
15) Teniendo nuestra muestra
comenzamos a introducirla en nuestros
cultivos sólidos.

16) Colocar la gradilla de los tubos de

ensayo en la incubadora a 35°C ±1 por
24-48 hrs ±3.

Observaciones.

Estas muestras fue observada a las 24 horas

desde su inoculación en un medio líquido
apto para el crecimiento de bacteria en este
caso coliforme, se utilizó un campana
durham para cada tubo en la cual almaceno
el gas producido por la actividad de las
bacterias.
Una muestra positiva indica que si están
presente los microorganismos
correspondientes a coliformes en el tipo de
agua la cual se analizó
 Una muestra que no presenta gas en el
interior de la campana durham indica que la
muestra posiblemente no contiene
coliformes o porque la maestra madre fue
muy diluida y que y ya no que machos
microorganismos los cuales se consuman el
medio o interactúen el en a esos factores se
debe la baja producción de gas.
En este caso si la muestra no presenta
producción de gas se puede decir que la
muestra es negativa puesto que no presenta
signos de fermentación del medio y por
ende no producen gas.

Resultados.

R1 x10*1 x10*2 x10*3 x10*4 x10*5 x10*6 x10*7 x10*8

+ + + + + + _ +

R2 x10*1 x10*2 x10*3 x10*4 x10*5 x10*6 x10*7 x10*8

+ + + + + + + +

R3 x10*1 x10*2 x10*3 x10*4 x10*5 x10*6 x10*7 x10*8

+ + + + + + + +

Discusión.
1. . ¿Qué son los microorganismos coliformes?

Los microorganismos coliformes son un grupo de bacterias que se encuentran en los

entornos, como el suelo, el agua, desecho de humanos y animales. Son comunes en el medio
ambiente y pueden aparecer en la piel. Algunos tipos de bacterias coliformes se encuentran
en grandes cantidades. La mayoría de los tipos de bacterias coliformes son inofensivas para
los humanos, pero algunas pueden causar enfermedades leves y otras, transmitidas por el
agua, pueden provocar enfermedades graves.

Las bacterias coliformes se utilizan frecuentemente como indicador bacteriano de la calidad

sanitaria de los alimentos y el agua. Se definen como bacterias gramnegativas, con forma de
bastón, no formadoras de esporas, que pueden fermentar la lactosa con producción de ácido y
gas cuando se las incuba a 35-37°C.
 2. Menciona la diferencia entre coliformes totales y coliformes fecales.

Los coliformes totales y los coliformes fecales son dos categorías de bacterias coliformes que
se utilizan como indicadores de la calidad sanitaria del agua y los alimentos:

Coliformes totales: Este grupo incluye a todas las bacterias coliformes, independientemente
de su origen. Los coliformes totales pueden encontrarse en el suelo, el agua y los desechos
animales, así como en el tracto intestinal de los humanos y los animales de sangre caliente.
Son un indicador general de la posible contaminación fecal y se utilizan para evaluar la
calidad del agua y los alimentos.

Coliformes fecales: Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales y están
relacionados con la flora intestinal de los animales de sangre caliente, esto involucra a los
humanos. Estas bacterias son más específicas de la contaminación fecal y su presencia indica
un mayor riesgo de contaminación por aguas residuales o desechos animales. La prueba de
coliformes fecales es más específica y se utiliza para detectar la contaminación fecal en el
agua y los alimentos.

Los coliformes totales son un grupo más amplio que incluye todas las bacterias coliformes,
mientras que los coliformes fecales son un subgrupo específico relacionado con la
contaminación fecal. La presencia de coliformes fecales indica un mayor riesgo de
contaminación fecal en el agua o los alimentos.

3. ¿Cuál es la importancia (a la salud y al ambiente) de la determinación de estos

organismos en el agua potable?

Importancia para la salud: Los coliformes, especialmente los coliformes fecales y la

bacteria Escherichia coli (E. coli), son indicadores de contaminación fecal. Su presencia en el
agua potable puede indicar la posible presencia de otros microorganismos patógenos
asociados con aguas residuales o desechos animales. La detección de coliformes en el agua
potable es esencial para prevenir enfermedades transmitidas por el agua, como la
gastroenteritis y la hepatitis A. Al realizar pruebas regulares de coliformes en el agua potable,
se puede garantizar la seguridad y proteger la salud de las personas.

Importancia para el medio ambiente: La detección de coliformes en el agua potable

también es importante para evaluar la calidad del agua y proteger el medio ambiente. Los
coliformes son indicadores de contaminación fecal y su presencia puede indicar la posible
contaminación de fuentes de agua por aguas residuales o desechos animales. Al monitorear y
controlar los niveles de coliformes en el agua potable, se pueden tomar medidas adecuadas
para prevenir la contaminación y proteger los ecosistemas acuáticos.

La detección de coliformes en el agua potable es esencial tanto para proteger la salud de las
personas como para preservar el medio ambiente. Permite prevenir enfermedades
transmitidas por el agua y garantizar la calidad y seguridad del suministro de agua potable.
 4. ¿Cuáles son los límites establecidos para la presencia organismos coliformes fecales
en agua para consumo humano? ¿Qué NOM aborda este tema?

Los límites establecidos para la presencia de organismos coliformes fecales en agua para
consumo humano están definidos en la Norma Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-1994
"Salud Ambiental, Agua para Uso y Consumo Humano - Límites Permisibles de Calidad y
Tratamientos a que Debe Someterse el Agua para su Potabilización". Esta norma establece
los parámetros y límites de calidad que el agua potable debe cumplir para garantizar su
seguridad y aptitud para el consumo humano.

La NOM-127-SSA1-1994 establece que el agua para consumo humano no debe contener

coliformes fecales. Esta norma es la que aborda el tema de los límites para la presencia de
organismos coliformes fecales en agua para consumo humano en México.

5. Menciona los métodos analíticos por los cuales se puede medir los organismos
coliformes.

Existen varios métodos analíticos para medir los organismos coliformes en el agua. Algunos
de los métodos comunes incluyen:

Método del Número Más Probable (NMP): Este método se basa en la dilución de la
muestra de agua y la inoculación en medios de cultivo selectivos. Luego, se realiza un
recuento de las colonias de coliformes presentes en los medios y se utiliza una tabla
estadística para determinar el número más probable de coliformes en la muestra.

Método de Filtración por Membrana: En este método, se filtra una muestra de agua a
través de una membrana porosa. Los coliformes presentes en la muestra quedan atrapados en
la membrana, que luego se coloca en un medio de cultivo selectivo. Después de un período de
incubación, se cuentan las colonias de coliformes presentes en la membrana.

Método de Fermentación en Tubos Múltiples: Este método implica la inoculación de la

muestra de agua en tubos de fermentación que contienen un medio de cultivo selectivo.
Después de la incubación, se observa la producción de gas en los tubos, lo que indica la
presencia de coliformes.

Método de Presencia-Ausencia: En este método, se inocula una muestra de agua en un

medio de cultivo selectivo y se observa si hay crecimiento de coliformes o no. Si se observa
crecimiento, se considera que la muestra es positiva para coliformes.
La elección del método depende de varios factores, como la disponibilidad de equipos y
reactivos, la sensibilidad requerida y los recursos disponibles.

6. ¿De acuerdo con los resultados las muestras de los cuatro equipos están dentro de los
límites máximos permisibles para agua apta para consumo humano? No ¿Por qué?
Porque segun el metodo de analisis la mayoría de las muestras indicaron que fueron positivas
a la presencia de coliformes puesto que contenía gas en la campana durham en su interior esto
es el indicador de que si está presente este tipo de microorganismos y según las normas
establecidas en méxico indican que las aguas destinadas al consumo humano deben estar
libres de coliformes. Es así que esta agua analizadas por ningún motivo debe de ser destinada
a consumo humano.

Conclusión.

La determinación de coliformes totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos como
en los sistemas de agua potable, es decir en el ambiente, son factores indicativos de algunos
otros organismos ya sean de origen bacteriano, viral o parasitario. ya que estos
microorganismos se pueden transmitir a través de diferentes vías.

La práctica de coliformes totales nos ayuda a determinar si los productos alimenticios y el

agua son actos para el debido consumo humano.

En esta práctica se hizo con aguas residuales haciendo una recolección en la UAAAN en una
de dos ductos o piletas acumulativas de aguas residuales, recaudadas de laboratorios y baños
analizando así el porcentaje de bacterias que podría tener. Y llevar a cabo y poner medidas
preventivas porque algunas veces se encuentran en agua potables de igual manera en comida
para hacer una disminución de enfermedades gastrointestinales y así mismo minimizar la
contaminación de un futuro

Realizar campañas de educación y concientización sobre hábitos higiénicos y medidas de

prevención contra las infecciones intestinales transmitidas por el agua.

Bibliografias.
● Larrea-Murrell, Jeny Adina; Rojas-Badía, Marcia María; Romeu-Álvarez, Beatriz;
Rojas-Hernández, Nidia Mercedes; Heydrich-Pérez, Mayra Bacterias indicadoras de
contaminación fecal en la evaluación de la calidad de las aguas: revisión de la
literatura Revista CENIC. Ciencias Biológicas, vol. 44, núm. 3, 2013, pp. 24-34
Centro Nacional de Investigaciones Científicas Ciudad de La Habana, Cuba.
● Cázares, M., & Alcantara, A. (2014). Análisis microbiológico de la calidad del agua
de ciudad Nezahualcóytl, acorde a la norma oficial mexicana nom-127-ssa1-1994. In
Congreso Iberoamericano de Ciencia, Tecnología, Innovación y Educación.
Argentina (p. 30).
● Debe, c. y. t. a. q., & su, s. e. a. p. (1994). norma oficial mexicana
nom-127-ssa1-1994," salud ambiental, agua para uso y consumo humano-límites
permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su
potabilizacion". introducción.