Universidad Autónoma de San

Luis Potosí
Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Químico Farmacobiologo

Laboratorio de Agentes Microscópicos y el Ser Humano

Practica 10: Microbiología Sanitaria

Alumno: Prado Ruiz Moises 338365

Semestre Agosto – Diciembre
Fecha del ejercicio: 14/11/23 – 16/11/23
Grupo: Martes a Jueves 8:00-9:00

Jueves 23 de Noviembre del 2023

 Practica 10. Microbiología Sanitaria
Diagramas de trabajo
SESIÓN 1. A) RECUENTO DEL
NUMERO MAS PROBABLE

Pesar 10 g del alimento en Tomar 1 mL de la dilución 10-

condiciones asépticas y 1 , transferir a un tubo que
transferir a un vaso de contiene 9 mL de diluyente de Inocular una serie de tres
licuadora, agregar 90 mL de peptona (10-2 ) y agitar 25 tubos que contengan 10
diluyente de peptona y licuar veces. Esta operación se mL de caldo lauril sulfato
por 2 minutos. Esta dilución repetirá nuevamente para y campana de Durham,
corresponderá a 10-1. preparar una dilución 10 -3 . con 1 mL de dilución 10-1
. Proceder de igual
manera con las
diluciones 10-2 y 10-3 .
Incubar los tubos por 24 h a 35 ± 0.5°C. Revisarlos En total deberán ser
a las 24 h, si la producción de gas es positiva, nueve tubos por muestra.
realizar la prueba confirmativa. En caso de no
haber formación de gas, incubar 24 h más.

SESIÓN 2. B) PRUEBA
CONFIRMATIVA PARA COLIFORMES
TOTALES Y FECALES

De los tubos que resultaron positivos (presencia de

Incubar los tubos para prueba
gas) en la prueba presuntiva, transferir a un mismo
de coliformes totales a 35°C
número de tubos con CALDO EC de 3 a 5 asadas.
± 0.5°C por 24 h y para la
Este procedimiento se hará dos veces: un juego de
prueba de coliformes fecales
tubos se utiliza para la prueba de coliformes totales
a 45.5°C ± 0.2°C por 24 h.
y otro juego para la prueba de coliformes fecales.

Estimar el número Considerar la prueba positiva Observar si hay formación de

de Organismos si hay formación de gas en
Coliformes Totales y cualquier cantidad dentro de
Fecales con base en la campana de Durham. En
la Tabla 10.1, caso no haber formación de
considerando los gas, incubar 24 h más.
tubos que dieron Estimar el número de
positiva la prueba. Organismos Coliformes Totales y
Fecales con base en la Tabla
10.1, considerando los tubos
que dieron positiva la prueba.
gas dentro de la campana de
Durham y registrar la lectura.
. Reportar el NMP de
Organismos
Coliformes Totales y
Fecales por unidad de
muestra analizada
(Tabla 10.1).
Sesión 3 C) IDENTIFICACIÓN
DE Escherichia coli

Resembrar los tubos En caso de que exista Reportar presencia de E.

de caldo lauril sulfato
que presenten gas en
agar eosina azul de
metileno e incubar a
35 ± 1ºC por 24 h.
desarrollo de colonias
características de Escherichia
coli*, resembrar pruebas
bioquímicas IMViC e incubar
a 35 ± 0.5 ºC por 24 ± 2 h.
coli en la muestra
analizada, si las pruebas
bioquímicas coinciden con
los resultados expresados
en la Tabla 10.2.

Calcular el NMP de E. coli

basada en la proporción
de los tubos positivos de
caldo EC confirmados.

Sesión3 D) TECNICA DE
FILTRACIÓN POR MEMBRANA:
COLIFORMES TOTALES Y FECALES

Montar el aparato de Colocar el embudo Medir en el embudo

filtración de membrana y la membrana en 100 mL de muestra.
(bomba de vacío, condiciones de Encender la bomba
boquillas o conexiones). esterilidad. de vacío y filtrar.

Incubar en las Cerrar y golpear Retirar el embudo y tomar con pinzas

condiciones suavemente en la estériles la membrana y colocarla en una
adecuadas según mesa, para adherir caja de Petri especial, conteniendo un
el medio y el la membrana al cojinete con el medio de cultivo adecuado
microorganismo a medio de cultivo. (medio M-ENDO para Coliformes Totales,
detectar. medio M-FC para Coliformes Fecales).

• 35 ± 2°C por 24 h para Colocar el cojinete en

Coliformes Totales.
• 44.5ºC por 24 h para
Coliformes Fecales.
• Realizar el conteo de
UFC/100 mL de
muestra.
las cajas de Petri en
área de esterilidad y
verter sobre éste,
aproximadamente 2
mL del medio de
cultivo a utilizar.
La preparación de las
cajas NO debe
hacerse mucho tiempo
antes del filtrado, para
facilitar la adhesión de
la membrana al medio.
Resultados
Sesión 1. Control sanitario de leche
Se realizaron diluciones de una
leche de marca comercial “Santa
clara” en tubos con caldo lauril
sulfato triptosa con el fin de
identificar la presencia de
microorganismos coliformes, se
realizaron diluciones 1:10, 1:100 y
1:1000 en las cuales se buscaba
la presencia y turbidez y la
formación de una burbuja de gas
que quedaría atrapada en la
campana de Durham que fue
colocada dentro del tubo.
Imagen 1. Diluciones en tubo para análisis de leche Después de la incubación todos
los tubos resultaron negativos
(imagen 1), por lo que el resultado según las tablas de recuento de NMP con 95%
en intervalo de confianza es < 3 NMP/mL con rango de 0 – 9.5NPM/mL.
Sesión 2. Control sanitario de agua
Para esta práctica se realizaron varias pruebas con el fin de detectar organismos
coliformes totales y organismos coliformes fecales para observar si cumplían o no
con el control de calidad descrito en la NOM-127-SSA1-2021 “Agua para uso y
consumo humano. Límites permisibles de la calidad del agua.”
Fue analizada una muestra de agua de grifo
proporcionada por una compañera de grupo en
esta se realizó la filtración por membrana en dos
muestras iguales, una se destinó para
identificación de coliformes totales y la restante
para identificación de coliformes fecales.

Imagen 2. Medio-ENDO para La membrana de filtración fue colocada en el

medio de cultivo ENDO (imagen 2) con el fin de
identificación de coliformes totales
que crecieran coliformes totales con colonias de
coloración verde brillante, el agar Endo es un medio de cultivo diferencial y
ligeramente selectivo utilizado para la detección de coliformes y otros
microorganismos entéricos. Después de dos días de incubación a 35±2°C se
encontró la presencia de una sola UFC que creció en el medio (imagen 3), sin
embargo, esta no es de un color verde brillante por lo que podemos descartar la
presencia de coliformes totales en nuestra muestra
de agua, el medio-ENDO al no ser tan selectivo
puede permitir el crecimiento de otras bacterias no
coliformes.

Imagen 3. Crecimiento después

de incubación en Medio-ENDO

La segunda membrana de filtración fue colocada en

el medio-FC, ya que este se utiliza para el cultivo de
organismos coliformes fecales (Escherichia y
Klebsiella). El m-FC Agar es un medio selectivo y
diferencial para la enumeración de coliformes
fecales en agua contaminada (imagen 4). Este
medio incluye una concentración de sales biliares,
por lo que lo hace selectivo para Enterobacterias
Imagen 4. Medio-FC para teniendo en cuenta una temperatura óptima de
identificación de coliformes incubación a 44,5 ± 0,5 °C. Los microorganismos
fecales
coliformes fecales son
bacilos Gram negativos que son capaces de fermentar
la glucosa con formación de gas que crecen a 44,5 ±
0,5 °C.
Después de 48horas de incubación a 44,5 ± 0,5 °C se
revisó la caja Petri con el fin de encontrar el
crecimiento de algún organismo, los resultados fueron
como se esperaban ya que en el medio-ENDO no se
encontró crecimiento de coliformes totales, se
esperaba que en el medio-FC resultara
Imagen 5. Nulo crecimiento
completamente limpio (imagen 5). en medio-FC para coliformes
fecales.

Imagen 6. Prueba negativa vs
positiva AquaCHROM
Finalmente fue realizada una prueba rápida para la
identificación de microorganismo coliformes totales
o E. coli, esta prueba es colorimétrica, se vertieron
100mL de muestra de agua y se añadió el reactivo
de AquaCHROM, en caso de haber presencia de
coliformes totales se coloreará la solución a color
amarillo, en caso de presencia de E. coli la solución
se colorará de verde. Después de ser incubado por
dos días a 35 ± 2°C no se observó ningún cambio
en la coloración de la solución, permaneció incolora
por lo que descartamos la presencia de coliformes
(imagen 6).

Discusión de resultados
Durante la practica se realizaron pruebas para el control sanitario de leche y de agua
que están destinadas para consumo humano, se buscaba la presencia de
organismos coliformes totales y fecales que nos indicarían la calidad microbiológica
de estos productos. Para la leche en los 9 tubos con 3 diluciones seriadas
geométricas no se observó formación de gas en la campana de Durham ni tampoco
turbidez, al ser una muestra de leche recién abierta es común que no se presenten
organismos, según el recuento de NMP se obtuvo < 3 NMP/mL con rango de 0 –
9.5NPM/mL con 95% en intervalo de confianza, cumpliendo correctamente con los
parámetros establecidos en la “NORMA Oficial Mexicana NOM-243-SSA1-2010,
Productos y servicios. Leche, fórmula láctea, producto lácteo combinado y derivados
lácteos. Disposiciones y especificaciones sanitarias. Métodos de prueba.”
Para el análisis de agua para consumo humano se tomó una muestra de
aproximadamente 1 litro del grifo de la red común, a pesar de no ser un agua
potabilizada se presentaron muy buenos resultados, se esperaba ausencia en
coliformes totales y fecales en la técnica de filtrado de membrana según la
“NORMA Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-2021, Agua para uso y consumo
humano. Límites permisibles de la calidad del agua.” Se esperaba <1 UFC/100mL,
al no haber crecimiento de ni una sola colonia en ninguno de los dos medios ENDO
y FC podemos discutir que se cumple con la norma y se considera segura para el
consumo, finalmente se realizó la prueba rápida de AquaCHROM que igualmente
resulto negativa para organismos coliformes.

Conclusiones
La práctica tenía como objetivo identificar y llevar a cabo técnicas y pruebas con el
fin de determinar coliformes totales, fecales y Escherichia coli en productos
destinados para consumo humano, según los resultados obtenidos para la muestra
de leche de marca comercial “Santa Clara” podemos concluir que se trata de un
producto que si cumple con la normativa y que es seguro para el consumo gracias
a su buena calidad microbiológica. Según los resultados obtenidos para la muestra
de agua de grifo podemos concluir que se trata de un agua segura para el consumo
humano hablando sobre su calidad microbiológica, ya que hay ausencia de
microorganismos coliformes totales y fecales, esto identificado mediante filtración
de membrana y prueba rápida de AquaCHROM.
Este tipo de análisis abren una amplia gama de áreas laborales en las cuales
hacemos la función de determinar la calidad microbiológica de alimentos y bebidas
para consumo humano, esto siendo de importancia crítica para la preservación de
la salud y la prevención de enfermedades ocasionadas por el consumo de alimentos
contaminados.

Referencias
• Fernando. (2023, 16 noviembre). M-FC Agar | Enterobacterias | coliformes
fecales | Bioser. Bioser. https://www.bioser.com/productos/m-fc-agar-1163p/
• NORMA Oficial Mexicana NOM-243-SSA1-2010, Productos y servicios.
Leche, fórmula láctea, producto lácteo combinado y derivados lácteos.
Disposiciones y especificaciones sanitarias. Métodos de prueba.
• NORMA Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-2021, Agua para uso y consumo
humano. Límites permisibles de la calidad del agua.