Tema 15.

Métodos y técnicas para el estudio de relaciones

hídricas en las plantas

1. INTRODUCCIÓN. Potencial químico del agua

El estado del agua en las plantas
El agua es el medio universal en el que ocurren las reacciones metabólicas esenciales para la vida.

Es continuamente absorbida por las plantas desde el suelo y movida hacia la atmósfera siguiendo un gradiente
decreciente de potencial hídrico.

¿Cómo se mueve el agua en la planta?

Las plantas son sistemas conductores abiertos y forman un sistema continuo entre el suelo y la atmósfera (suelo,
planta, atmósfera). El agua circula en ese sentido y puede moverse mediante difusión, ósmosis, flujo masal.
Si dicho movimiento ocurre:
1) Dentro de una misma célula (viva) o entre células vecinas, el agua se mueve por ósmosis-difusión.
Movimiento dentro de estructuras celulares vivas (transporte a cortas distancias).
→ La difusión es un movimiento de moléculas de agua de un lado a otro de una membrana. Movimientos a
distancias cortas. El agua pasa de donde hay más concentración a donde menos. Las membranas
lipoproteicas son permeables al agua. Este movimiento es molecular y puede ser de dos tipos: de manera
pasiva o facilitado por estructuras proteicas específicas (acuaporinas).

→ Ósmosis es el proceso por el cual el agua difunde (se mueve) a través de las membranas selectivamente
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permeables, desde regiones de alta concentración de agua a otras de baja concentración. Por ejemplo:
movimiento entre citoplasma y vacuola a través de la membrana vacuolar.

2) Dentro del xilema (elementos conductores muertos), el agua se mueve por flujo masal. Movimiento a través
del xilema (transporte a largas distancias).
El agua se mueve en forma líquida o flujo masal como consecuencia de diferencias de presión entre dos
puntos del sistema vascular, por ejemplo, entre el xilema de la raíz y de las hojas.
Es independiente de la concentración de solutos. Explica el transporte de agua en largas distancias dentro de
las plantas.

¿Qué fuerzas/factores determinan la dirección del movimiento del agua en la planta?

El movimiento del agua entre los tejidos y los diversos espacios de una planta está gobernado por diferencias de
potencial hídrico, siguiendo un gradiente decreciente.

El potencial hídrico se define como la variación del potencial químico del agua en una condición dada, respecto al
potencial químico del agua pura (pot. qco. máximo, valor 0, a presión y temperatura normales, 1 atm y 25ºC).
Ψw = Ψp + Ψs + Ψm + Ψg
Ψw = potencial hídrico (J.m-3 / MPa)
Ψs = potencial del soluto / osmótico
Ψp = potencial de presión
Ψm = potencial matricial
Ψg = potencial gravitacional
¿Cómo funciona el potencial químico del agua?
Cualquier factor que disminuya el potencial hídrico del agua va a ser negativo. Si en un sistema más complejo
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como la disolución de NaCl, la energía cinética que presentan las moléculas de agua se ha disminuido debido a
que la molécula de agua (que presenta tanto una parte positiva como una negativa) se han unido a la disociación
de anión de sodio y catión de cloro, respectivamente. Serán más negativos cuanta mayor concentración haya de
soluto. Por las leyes de la termodinámica, los sistemas tienden a equilibrarse por lo que el agua va
transportándose desde zonas con mayor potencial hídrico a las zonas de menor potencial hídrico.

Potencial hídrico de una célula

El potencial queda afectado de forma distinta según si la célula vegetal está viva o no:
❖ El potencial hídrico de un sistema complejo, como una célula vegetal viva, es afectado por:
 solutos
 coloides y otras partículas grandes
 presión ejercida por la pared celular
La pared semirrígida de la célula se hincha y en una célula turgente tiene valores positivos.
𝚿 = 𝚿𝑷 + 𝚿𝑺
▪ Ψ es el potencial hídrico de la célula
▪ ΨP es el potencial de presión o de turgencia
▪ ΨS es el potencial osmótico.
❖ El potencial hídrico de una célula vegetal muerta, como, por ejemplo, un vaso o traqueida es afectado por:
 diferencias de presión a nivel de la pared celular
 acción gravitatoria (en árboles)

En las paredes de las cámaras subestomáticas es donde se produce el cambio de estado líquido a estado
gaseoso, esto provoca una tensión o presión negativa llamada succión provocando que la tensión se
transmita por toda la columna hídrica hasta llegar a la atmósfera.
𝚿 = 𝚿𝑷
▪ Ψ es el potencial hídrico de la célula
▪ ΨP es el potencial de presión

2. Métodos de medición del potencial hídrico

Método de Chardakov
Se basa en la utilización de dos series idénticas de diferentes concentraciones de una solución, y por tanto de
diferente potencial hídrico:
serie a): se colocan muestras de tejido
serie b): se colocan cristales de azul de metileno.
Luego de un cierto tiempo, necesario para que ocurra el intercambio líquido, se retira el tejido y se agrega una
gota de la solución equivalente de la serie coloreada (A), que no ha sufrido cambios.

Se deben observar cambios de densidad entre las dos series.

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• Si la gota coloreada tiende a subir, el tejido tenía un potencial hídrico más bajo que la solución de ese tubo.
• Si la gota coloreada tiende a bajar la solución en este caso, el tejido tenía un potencial hídrico más alto que la
solución de ese tubo.
• Si la gota coloreada no se mueve y difunde en forma homogénea en todas direcciones, no ha habido cambio
en la concentración de la solución. En este caso, potencial hídrico de la solución es igual al potencial hídrico del
tejido. Ψs solución = Ψ tejido

Método gravimétrico
1. Se extraen cilindros del tubérculo con un sacabocado.
2. Se pesan los cilindros.
3. Se introducen en soluciones con diferentes concentraciones de sacarosa.
4. Tras 1 hora de incubación se pesan de nuevo los cilindros.

•Si la muestra pesa más, el potencial hídrico del tubérculo es más bajo que el de la solución.
• Si la muestra pesa menos, el potencial hídrico del tubérculo es más alto que el de la solución.
• Si no varía de peso, el potencial hídrico de la muestra y de la solución es la misma
Ψs solución = Ψ tejido

Método psicométrico
Los psicrómetros miden la presión de vapor de agua de una solución o de una muestra vegetal, basándose en
el principio de que la evaporación del agua de una superficie enfría dicha superficie.
• Se coloca un trozo de tejido sellado dentro de una pequeña cámara que contiene un sensor de
temperatura (en este caso, un termopar) en contacto con una pequeña gota de una solución estándar de
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concentración de soluto conocida (Ψs conocido y, por tanto, Ψ conocido):

o Si el tejido tiene un potencial hídrico inferior al de la gota, el agua se evaporará de la gota e irá al
tejido. La gota se enfría.
o Si la solución patrón tiene un potencial hídrico inferior al de la muestra que se va a medir, el agua se
difundirá del tejido a la gota. La gota se calienta. Ψs solución = Ψ tejido

3. Calcular el potencial osmótico Ψ tejido = Ψs solución

El potencial osmótico (Ψs) se refiere a la interacción entre partículas cargadas, usualmente iones y moléculas
de bajo peso molecular (osmolitos) y el agua.

El agua es una molécula dipolar, por lo tanto es capaz de ser atraída electrostáticamente por partículas
cargadas eléctricamente (ejemplo: Iones), disminuyendo su energía libre o potencial químico. Por ello, el
potencial osmótico siempre tiene valores negativos.

El cálculo del potencial osmótico de una solución verdadera es sencillo y se basa en la ley de Vant´Hoff: Ψs = -
i.R.T.C Donde:
i es la constante de ionización (p.e. 1 para sacarosa, 2 para NaCl)
R es la constante de los gases (8,31 J/mol. ºK)
T es la temperatura absoluta (ºK)
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C es la concentración del soluto

Métodos de medición del potencial osmótico

𝚿 = 𝚿𝑷 + 𝚿𝑺
Si: 𝚿𝑷 = 𝟎
Entonces: 𝚿 = 𝚿𝑺
En ausencia de potencial de presión, el potencial agua de la célula está determinado sólo por el potencial
osmótico.
Problema: Obtener un valor de presión nulo (cero) en el tejido.
Solución: Plasmólisis incipiente. Se colocan muestras de tejido en una serie de soluciones de glucosa (o
manitol), de ΨS conocidos. Luego 30 min a una hora cada muestra se examina bajo microscopio.

Se utiliza cuando queremos medir el potencial osmótico en células vivas. Este experimento se incuba a la lupa.
Se ponen trozos de epidermis de cebolla en disoluciones de distintas concentraciones de sacarosa. Consiste en
encontrar un potencial osmótico donde se encuentre esa condición de pared cero. Se tiene que buscar que el
contenido de la célula esté en plasmólisis incipiente.

Plasmólisis incipiente: El 50% de las células han comenzado a plasmolizarse.

𝚿𝑷 = 𝟎 𝚿𝑺 𝒔𝒐𝒍𝒖𝒄𝒊ó𝒏 = 𝚿𝑺 𝒕𝒆𝒋𝒊𝒅𝒐

4. Métodos de medición del potencial de presión (en células vivas y turgentes)

Consiste en una especie de microjeringuilla compuesta por un fino microcapilar de cristal, lleno de aceite de
silicona, líquido prácticamente incompresible, que se distingue fácilmente del contenido celular con empleo
del microscopio óptico.

1. Cuando insertamos la punta del microcapilar en la célula, el contenido celular (que está a presión positiva)
fluye hacia el capilar desplazando al aceite de silicona.
2. Este desplazamiento es proporcional a la presión de turgencia celular y puede verse al microscopio.

3. Mediante un sistema de tornillo acoplado al otro extremo del capilar, se puede realizar presión en sentido
contrario a la desarrollada por la célula y llevar el menisco del aceite de silicona a su posición inicial.
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Esa presión compensatoria será igual a la presión de turgencia celular.

Cámara de presión (bomba de Schölander) -En el xilema

Utilizada en plantas que están transpirando activamente, puesto que la columna hídrica del xilema estará
sometida a una tensión o presión hidrostática negativa (por lo tanto el ΨP tendrá valores negativos).
Las medidas con la cámara Schölander serán también una buena estimación del Ψ del xilema, y prácticamente
de toda la sección de tallo en estudio, ya que la mayor parte (cerca del 95%) del recorrido del agua, desde la
raíz hasta la hoja, discurre a lo largo del xilema.

Consta de una cámara hermética provista de un dispositivo que permite fijar una hoja o un trozo del tallo de tal
forma que la superficie cortada se proyecte hacia el exterior y el resto quede dentro de la cámara.
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Al seccionarse el tallo o la hoja desaparece la tensión a la que se hallaban sometidos los hilos de agua en el
xilema, y la superficie de agua se retira de los bordes de los vasos seccionados y se mueve hacia la hoja.

Si se aumenta la presión del gas dentro de la cámara, los hilos de agua se moverán otra vez hacia la superficie
cortada.

Cuando la superficie de agua quede enrasada con las paredes seccionadas la presión medida en el manómetro
es igual y opuesta al valor de la presión (tensión) que existía en el xilema en el momento de hacer el corte.

5. Métodos de medición de la transpiración

La transpiración es la evaporación de agua desde las hojas hacia la atmósfera. Este movimiento de agua se
realiza a través de los estomas.
Estos son células diferenciadas de las plantas con las que realizan la expulsión de los gases al exterior,
alrededor del 95% del agua que toma la planta se elimina con este proceso.

Existen varios métodos para medir los niveles de transpiración:

1) Método gravimétrico, que consiste en pesar periódicamente, en balanza de precisión, una planta en
maceta (con el suelo sellado para evitar pérdidas de agua desde el mismo). Se asume que todo cambio en
peso en el intervalo de tiempo considerado se debe a la transpiración.
2) Porómetro de difusión. Este instrumento permite medir el grado de apertura de los estomas
(conductancia estomática)

Principales componentes:
o El cuerpo del instrumento, con la fuente de poder, una bomba de aire y componentes electrónicos. o Un
cabezal sensor, que consta de una pequeña cámara que contiene un sensor de humedad y otro de
temperatura, montados en una pinza para aprisionar la hoja .
o Un cronómetro digital.
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Al aprisionar una hoja entre las mandíbulas de la pinza, la superficie del sensor queda expuesta al vapor de
agua proveniente de la hoja.

El tiempo que tarda en cambiar la HR en la cámara de la pinza, entre dos valores de HR % establecidos por el
aparato, es función del grado de apertura de los estomas y de la velocidad de transpiración.

3) Potómetro de Ganong. La tasa de transpiración se mide siguiendo la distancia recorrida por la burbuja de
aire en el tubo graduado por unidad de tiempo.