UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL DE TOLUCA VALLE

PROGRAMA EDUCATIVO: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA.

ASIGNATURA: CONTROL DE BIOPROCESOS.
UNIDAD 2: INSTRUMENTACIÓN Y CONTROL DE BIOPROCESOS.

PROYECTO: ELABORACIÓN DE UNA PROPUESTA PARA LA

IMPLEMENTACIÓN DE UN BIORREACTOR DE INMERSIÓN
TEMPORAL EN LA MICROPROPAGACIÓN DE EUPHORBIA
PULCHERRIMA.
IBT. JESÚS GONZÁLEZ SANTANA.

INTEGRANTES:
Nombre: Matricula:
1 Mondragón Galván Joana 1319281138
2 González García Rubén 1319281100
3 González Rojas Corina 1319281254
5 Contreras González Jesús 1120291004
6 Peña Benítez Cristina de Fátima 1319281375
7 Aguacate Martínez Alan 1120291038
8 Ramírez Ocaña Gabriela 1319281272
9 Millán Osorio Janeth 1319281025
10 Hernández Chávez Carlos 1319281208
11 Hernández Gutiérrez Amanda Citlalli 1319281170
12 De Dios González Mónica Nineth 1319281011
13 Jiménez González Abdiel Farid 1218241049
14 Díaz Jardón Brenda 1120291066
15 César Morales Hernández 1118231045
16 Malvaez Pineda Karla Citlali 1319281391
17 Esquivel Sáenz Jaime Eduardo 1319281279

IBT8VA.

SEPTIEMBRE -DICIEMBRE 2022.

 Índice

I. Introducción
II. Planteamiento del problema
III. Objetivos
a. General
b. Específicos
IV. Justificación
V. Diagrama de Gantt
VI. Antecedentes
VII. Euphorbia pulcherrima
a. Planta madre
b. Características generales del cultivo de Euphorbia pulcherrima
c. Necesidades de nutrientes en Euphorbia pulcherrima
d. Principales variedades comerciales
VIII. Biorreactor
a. Biorreactor de inmersión temporal
b. Sensores arduinos
c. Timers
d. Bombas
IX. Medio de cultivo MS
X. Método de desinfección
XI. Contaminantes durante la micropropagación de plantas
XII. Formas de combatir la contaminación in vitro
XIII. Ecuaciones
XIV. Física aplicable: el modelado en ingeniería
XV. Modelos matemáticos de bioprocesos
XVI. Ingeniería
XVII. Prototipo del biorreactor
XVIII. Costos
XIX. Normatividad aplicable
XX. Materiales y métodos
 a. Materiales
i. Frascos gemelos
ii. Tapas con fitting
iii. Empaques para tapas (neupreno)
iv. Mangueras de succion de silicón con malla
v. Filtros hidrofobicos
vi. Manguera de acoplamiento
vii. Sensor de pH
viii. Hardware del sistema
b. Medidas específicas del biorreactor de inmersión temporal
c. Lugar de instalación del biorreactor
XXI. Referencias
Introducción

Hoy en día los cultivos expuestos a la intemperie han tenido menor producción que
aquellos cultivados mediante la implementación de tecnologías y sistemas
específicos, que aceleran la producción y mejoran la calidad del producto al tener un
entorno regulado, al no contar con un ambiente controlado, se afecta directamente a
los productores ya que en muchos casos se limitan a la producción de un solo cultivo
o un solo ciclo, reduciendo la competitividad y sin remunerar la inversión (Espinosa et
al., 2017).

Un Sistema de Inmersión Temporal (SIT) permite la micropropagación de plantas en

ambientes esterilizados y herméticos, es una técnica que se ha empleado para la
micro propagación de varias especies agrícolas y forestales. Se tienen grandes
ventajas al disminuir la manipulación manual intensiva, incrementar la tasa de
proliferación reducir costos de producción y mejorar la calidad del material vegetal,
incluyendo la clonación de especies difíciles de propagar o aquellas que están en
peligro de extinción. Los cultivos pueden ser iniciados a partir de varias porciones de
tejido vegetal, por ejemplo, de una hoja pueden regenerarse embriones somáticos o
brotes adventicios que para mantener su multiplicación se requiere del control del
medio de cultivo, así como del fotoperiodo la calidad de la luz y la temperatura de
forma continua y periódica durante el día y la noche, desde el inicio de su desarrollo
hasta que son capaces de sobrevivir en condiciones de invernaderos (Espinosa et al.,
2017).

Un SIT se compone de frascos (biorreactores), con dos compartimentos, uno superior

donde crecen los explantes y otro en la parte inferior, donde se coloca el medio de
cultivo líquido. A este sistema se le aplica un flujo de aire a presión por medio de un
compresor que hace que suba el medio de cultivo líquido y lo pone en contacto con
los explantes por tiempos intermitentes. Después de que cesa la inyección de aire el
medio de cultivo desciende por gravedad. Este sistema provoca cambios en la
atmósfera interna del frasco, trayendo consigo un mayor crecimiento y desarrollo del
cultivo, además de que se mantiene una capa superf icial de medio de cultivo hasta la
próxima inmersión (Espinosa et al., 2017).
Planteamiento del problema

En la universidad Politécnica del Valle de Toluca se quiere hacer una propuesta para
la elaboración de un biorreactor de inmersión temporal que pueda ser manipulado por
los alumnos, sea accesible y cuente con el equipamiento necesario para la
manipulación, control y micropropagación de tejidos celulares, vegetales etc
específicamente para el desarrollo de Euphorbia pulcherrima.

Principalmente se sabe que un biorreactor de inmersión temporal puede rebasar los

costos de hasta 10’000.00 MXN con un volumen aproximado de entre 5 litros a 10
litros. por lo que no resulta accesible y redituable para llevar a cabo su obtención y
manipulación para llevar a cabo proyectos sobre micropropagación de cultivo
celulares.

Por otra parte, en la universidad Politécnica del Valle de Toluca no se cuenta con un
área específica donde se pueda colocar el biorreactor ya que este debe estar en un
medio óptimo, innocuo y al alcance de los alumnos.
Objetivos

General:

Elaborar una propuesta para la implementación de un biorreactor de inmersión

temporal en la micropropagación de euphorbia pulcherrima.

Específicos:

• Proponer un prototipo de un biorreactor de inmersión temporal para cultivo de

euphorbia pulcherrima.
• Establecer las condiciones adecuadas de la planta y del medio para el cultivo
de euphorbia pulcherrima en un biorreactor de inmersión temporal.
• Estimar costos de cada uno de los materiales a utilizar para la elaboración del
biorreactor.
• Realizar cultivo in vitro de explantes para la germinación de euphorbia
pulcherrima.
Justificación

El sistema de biorreactores de inmersión temporal (SIT), es una técnica que se ha

empleado para la micro propagación de varias especies agrícolas y forestales, buscan
mantener ciertas condiciones ambientales propicias (pH, temperatura, concentración
de oxígeno, etcétera) al organismo o sustancia química que se cultiva.

Se tienen grandes ventajas al disminuir la manipulación manual intensiva, incrementar

la tasa de proliferación reducir costos de producción y mejorar la calidad del material
vegetal, incluyendo la clonación de especies difíciles de propagar o aquellas que
están en peligro de extinción.

El diseño de los biorreactores de inmersión temporal es una tarea de ingeniería

relativamente compleja y difícil.
Diagrama de Gantt

En el siguiente diagrama se pueden observan las actividades que se van a desarrollar

a lo largo del proyecto y el tiempo establecido para cada una de ellas.

DIAGRAMA DE GANTT

Semanas
Semana % de
Etapa/Tare
Avan
a Inici Finaliza ce 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
o ción
Investigaci
ón de
Euphorbia
pulcherrim
a. 1 2 13% x x
Investigaci
ón de
biorreactor
de
inmersión,
medio de
cultivo y
materiales
a utilizar. 2 2 20% x
Practica de
cultivo in
vitro y
cotización
de costos
de
materiales. 3 4 46% x x
Recepción
de
materiales
por
paquetería. 4 5 x x
Culminació
n del
proyecto. 6 10 80% x x x x x
Evaluación
del
proyecto. 11 12 100% x x
Antecedentes

En el año 1997 surgió el sistema de inmersión temporal, que se logró a partir de la

aplicación de un flujo de aire a uno de sus frascos, el cual hacía subir el medio de
cultivo que, luego de bañar los explantes, descendía por gravedad. En consecuencia,
la técnica SIT se inserta como un complemento o herramienta de apoyo, y no como
una alternativa a la micropropagación.

Los primeros biorreactores utilizados fueron de inmersión permanente, similares a los

fermentadores utilizados para cultivos celulares. En este sistema los explantes están
sumergidos en el medio de cultivo y reciben aireación y/o agitación para mejorar las
condiciones de crecimiento. Dado que hay pocas especies vegetales capaces de
adaptarse a crecer en condiciones de inundación, con baja presencia de oxígeno, en
la mayoría de los casos los explantes se asfixian y sufren un trastorno fisiológico
denominado hiperhidricidad o vitrificación (malformaciones que frecuentemente se
observan en plantas herbáceas y leñosas). La propagación o clonación in vitro de
plantas es una de las aplicaciones biotecnológicas más desarrollada en los últimos
años. En la actualidad constituye una de las herramientas más utilizadas. Por esta
vía, es posible obtener un gran número de individuos libres de plagas y enfermedades
en menor tiempo y empleando espacios reducidos. Actualmente la industria
biotecnológica agrícola en México cuenta con potencial productivo para la
propagación masiva de plantas.

El cultivo en inmersión temporal puede constituir una alternativa de micropropagación

a corto plazo, mientras a largo plazo se logran vencer los obstáculos biológicos que
permitan la obtención eficiente de plantas y embriones somáticos en biorreactores
(Escalona, 2006).
Euphorbia pulcherrima

Fig. 1 Euphorbia pulcherima

La nochebuena (Euphorbia pulcherrima) es una de las plantas de ornato más

importantes en el mundo, tanto económica como culturalmente, por ser el símbolo
floral de la Navidad. Sin embargo, su domesticación, diversidad genética e historia
han sido poco estudiadas.

Existen dos variantes genéticas o haplotipos. Una de estas variantes proviene del
estado de Guerrero, mientras que la otra pertenece a cultivares mexicanos
cercanamente emparentados a las poblaciones silvestres de Guerrero y Morelos.
Documentos históricos señalan que desde la época prehispánica las nochebuenas se
cultivaban en el centro de México, y en un manuscrito de 1801 se ilustran
nochebuenas en los jardines de la Nueva España con modificaciones con respecto a
las silvestres.

El reconocimiento de la diversidad genética de plantas cultivadas, así como la

inferencia de su posible origen geográfico, permitirá la protección, manejo sostenible,
conservación y mejoramiento genético del germoplasma mexicano de nochebuena.

Planta madre

La Nochebuena se propaga por esquejes suaves tomados de la planta madre, la

propagación con semilla, la utilizan los mejoradores para el cruzamiento y obtención
de nuevas variedades.En la actualidad los reproductores autorizados para venta de
esqueje de Nochebuena en México son:
 • Viveros Plantec: (Puente de Ixtla, Mor.) 751 34 802 20
• Vivero Internacional: (Tepozotlán, Mor.) 757 39 517 32
• Floraplant : (Cuernavaca, Mor.) 773 31 635 71

Los esquejes comprados constituyen su planta madre, se pueden comprar desde el

mes de marzo hasta el mes de junio.

Características generales del cultivo de euphorbia pulcherrima

• La temperatura ideal para el crecimiento y mantenimiento de tu nochebuena es de

20 a 22 °C y durante la floración de 18 °C.
• En el lugar donde siembres tu planta no debe haber vientos o cambios bruscos de
temperatura.
• Sustrato porosidad de 50% a 70% de espacio poroso total, del cual mínimo una
tercera parte debe estar constituido por macro poros que permitan drenar después
del riego.
• El pH óptimo para tener un buen desarrollo de las plantas en un sustrato con tierra
es de 6.3 a 6.8.
• Para aumentar el PH:
o Incorporar al sustrato cal Agrícola (CaCO3). Dosis 1 a 15 kg/m3. I
o ncorporar arcilla dolomitica (Carbonato de Calcio y Magnesio). Dosis 1 a 15
kg/m3
• Para disminuir el PH:
o Incorporar al sustrato materia orgánica
o Incorporar al sustrato azufre 100grs a 1kg/m3 empezará a bajar el PH en
aproximadamente 8 semanas. Se debe mezclar con el sustrato ya que no
es soluble.
o Incorporar al sustrato Sulfato de Fierro. De acción más rápida que el Azufre.
Dosis: de 200grs a 2kg/m3
o Incorporar al sustrato Sulfato de Aluminio
• Respecto a la humedad, la planta debe mantenerse debajo de un 75%, no debe
acumular grandes cantidades ya que esto ocasionaría que las raíces de tu planta
pudieran pudrirse.
• Requiere buenas cantidades de luz, sin embargo, no se puede dejar al sol directo.
• Esterilización de sustratos: con este procedimiento se eliminan semillas de
hierbas, insectos y nematodos. También son eliminados algunos microorganismos
patógenos.
• Fertilización
o La Nochebuena requiere de altos niveles de nitrógeno y de potasio, niveles
regulares de fósforo, calcio y magnesio y un suplemento adicional de
molibdeno y una dosis media de micro elementos.
o En la mezcla, para suministrar fósforo, se puede incorporar Súper fosfato
de Calcio Simple (1 a 3 Kg/m3), que además aporta 26% de CaO.
o Súper fosfato de Calcio Triple (0.5 a 1kg/m3), que además aporta 20% de
CaO.
o Fosfato monoamonico (0.5 a 1 kg/m3), que además aporta 15% de
Nitrógeno.
o Fosfato di amónico (0.5 a 1 kg/m3), que además aporta 18% de Nitrógeno.
o Para suministro de Calcio, se puede incorporar Súper simple o triple de
Calcio, Cal agrícola (32% de CaO) o Arcilla dolomitica (22% de CaO y 10%
de magnesio).

Necesidades de nutrientes en euphorbia pulcherrima

La Nochebuena requiere:

• 200 a 300 ppm de Nitrógeno (N)

• 50 a 100 ppm de Fósforo (P)
• 200 a 300 ppm de Potasio (K)
• 80 a 120 ppm de Calcio (Ca)
• 40 a 60 ppm de Magnesio (Mg)
• 0.10 a 0.20 ppm de Molibdeno (Mo)

Esto cuando se fertiliza en cada riego; cuando se fertiliza de forma intermitente se

requiere el doble de las cantidades anteriores
Principales variedades comerciales

• Valenciana
• Jingle Bells 3
• Fredom
• V-10 Amy
• V-14
• V-17 (Angelika)
• Lilo
• Celebrate 2
• Lemondrop
• Pink Peppermint
• Red Sails
• Peter Star
• Supjibi
• Cultivares Annette Hegg
• Cultivares Mikkel

Biorreactor

Biorreactor de inmersión temporal

Los biorreactores de inmersión temporal se distinguen por utilizar un método que

consiste en humedecer de manera intermitente y por un corto periodo de tiempo el
tejido de una planta con medio de cultivo líquido, seguido por el secado por gravedad
o automatizado. Estos sistemas de propagación de plantas utilizan el mecanismo de
adición y remoción del medio de cultivo líquido, lo que evita problemas de asfixia e
hiperhidricidad (tejidos con alto contenido de agua), los daños mecánicos, con lo que
se logra un aumento en la eficiencia de la micropropagación, dado por el incremento
de los ritmos de producción y la calidad de las plantas propagadas. Con este sistema
se provee a todos los tejidos bajo cultivo de un óptimo contacto con el medio de cultivo
durante un período de tiempo muy corto y con una determinada frecuencia diaria, lo
que acelera los procesos de formación, desarrollo y proliferación de plántulas.
Sensores arduinos

El sistema Arduino consiste en una tarjeta electrónica y un ambiente de programación.

Arduino está formado por una familia de tarjetas con diferentes capacidades y costos.
Arduino UNO es una tarjeta de gama baja, adecuada para proyectos sencillos y para
un primer contacto con este tipo de sistemas. El microcontrolador es el dispositivo
encargado de almacenar y ejecutar el programa desarrollado por el usuario. La tarjeta
Arduino UNO está basada en un microcontrolador de la compañía ATMEL (ver Fig.
2). La tarjeta, además del microcontrolador, cuenta con componentes necesarios para
la operación del mismo, entre ellos un circuito para alimentación de voltaje, así como
puerto USB (que se utiliza para la programación desde una computadora personal) y
terminales de conexión para conectarlo a sensores, motores, focos, etc.

Fig. 2. Fotografía de la tarjeta Arduino UNO donde se señalan los conectores principales.

La tarjeta Arduino cuenta con una entrada para conectarle un eliminador de baterías.
Mediante ese conector es posible alimentar también con una pila de 9 V.

El puerto USB sirve para conectar la tarjeta Arduino a una computadora personal y
desde ahí programarla utilizando un lenguaje propio del Arduino. Este programa
(Arduino Software IDE) es gratuito.Existen versiones para Windows, Linux y Mac OS
X. En el caso de Windows se recomienda descargar la versión Windows Installer. El
puerto USB también le proporciona voltaje a la tarjeta Arduino, entonces como
alimentación de energía se puede usar el puerto USB, o el conector de alimentación
que acepta voltajes de 7 a 12 V corriente directa. Otra opción, es utilizar la conexión
etiquetada Vin, por donde también se puede suministrar un voltaje de 7 a 12 V de
corriente directa.

Timers

Un temporizador o timer es un pequeño aparato que abre y cierra un circuito eléctrico

de forma automática y durante un tiempo determinado. De forma breve, podemos
decir que nos permite programar el encendido y apagado de diferentes dispositivos
de forma sencilla.

Fig. 3,4,5. Timers

Características generales

• Voltaje: 110 a 127volts.

• Batería: litio 3.7volts de reloj.
• Relay interno: hasta 220V10A.
• Potencia Max: 2200Watt.
• Frecuencia: 60Hz.
• Tamaño: 62x62x32mm.

Otras características

• Tipo de tecnología: Digital

• Voltaje nominal: 127V
• Corriente nominal: 60 mA
• Tiempo mínimo - Tiempo máximo: 1 m - 24 h
 • Cantidad máxima de programaciones de encendido: 16
• Cantidad máxima de programaciones de apagado: 16

Bombas

Hygger Mini kit de bomba de aire para acuario, bomba de aire pequeña de 1 W para
pecera de 1 a 20 galones con tubo de aire, válvula de retención de piedra (1 W).

Fig. 6. Hygger Mini kit de bomba de aire para acuario

• Nice Bang for Your Buck — Hygger proporciona un kit de bomba de aire listo para
usarse, incluyendo bomba de aire HG-949, tubo de aire de 3.6 pies de largo,
válvula de retención y manual de usuario (válvula de retención para evitar el sifón
trasero)
• Fuerte flujo de aire, bajo consumo: nuestra pequeña bomba de aire betta de 1
vatios ahorra muy energía con un caudal máximo de hasta 50 galones por hora,
capaz de operar un pequeño filtro de esponja, crea toneladas de pequeñas
burbujas, aumentando el movimiento del agua y la circulación siendo de gran
ayuda para el aireacion del medio de cultivo y este lleve una buena oxigenacion al
explante el cual de esta forma crecera en condiciones parecidas al exterior.
• Amplia aplicación: La mini bomba de aire para acuario solo mide 3.5 x 2 x 2
pulgadas. Potente, ligero, bajo ruido, junto con una larga vida útil. Esto la hace util
 para una facil manipulacion y se pueda colocar en un lugar donde no cause alguna
incomodidad.

Bomba Elite 800 para 10 gal

Fig. 7. Bomba Elite 800 para 10 gal

Descripción:

Utilizada para acuarios de hasta 37.8 litros, además de contener un brazo oscilante
de alta precisión con iman permanente. • Diafragma “Tensile Flex” durable, de goma
altamente flexible. • Las salidas del aire estan empotradas para proteger el
respiradero y proporcionar un movimiento uniforme del brazo oscilante.

Características:

• 1 salidas, para acuarios de hasta 37.8 litros, 1500 cc/minutos, 2.5 PSI, 2
Watts/hora
• Caudal máximo de agua: 37.8 l/h
• Cubierta para amortiguar el ruido.
• La placa de la base impide la vibración y el movimiento de la bomba
• Bobinas que no se calientan de larga vida útil.
• Bisagra de brazo oscilante integrada al ensamble del diafragma Tensible Flex
• Ensamble de la salida de aire integrado al cuerpo de la válvula.
Ventajas:

Combina la producción de aire con alto rendimiento y un funcionamiento silencioso.

Precio:

El precio varía un poco de entre los $ 170 a 220 pesos.

Si se pone la bomba de aire por debajo de la manguera de agua, utilice siempre una
válvula de retención. Nunca ponga la bomba de aire en un lugar donde pueda
mojarse. Constate que la manguera de aire no esté enroscada y que todos los
accesorios estén limpios y no restrinjan el flujo de aire. Fije la manguera de aire a la
salida de la bomba de aire ELITE y después conéctela a un tomacorriente.

Medio de cultivo MS

El medio Murashige y Skoog (también llamado medio MS, MSO o MS0) es una de las
formulaciones de medios más esenciales utilizadas para cultivar plantas. Este medio
contiene todos los micronutrientes y macronutrientes, vitaminas, suplementos
orgánicos y reguladores del crecimiento vegetal necesarios para el crecimiento y la
multiplicación in vitro de células, tejidos y órganos vegetales.

• Agua

Es el componente que se encuentra en mayor cantidad en el medio y es una fuente

potencial de impurezas que puede afectar el crecimiento de los cultivos.

El agua utilizada en la preparación de medios de cultivo debe ser destilada y

desionizada, o bidestilada. Esto se logra mediante el uso de destiladores, filtros de
carbón activado o acetato de celulosa y columnas de intercambio iónico. Se debe
almacenar en envases de material que no aporten impurezas orgánicas o inorgánicas.

• Macronutrientes

Los macronutrientes son elementos esenciales que la planta los requiere en

cantidades del orden de gramos/litro (C, H, N, O, S, Mg, Ca, K, P). Son incluidos en
los medios de cultivo en forma de sales inorgánicas, pudiendo el nitrógeno y el azufre
ser incorporados como suplemento orgánico (P.ej. caseína hidrolizada, urea,
aminoácidos).

El comportamiento de los elementos esenciales en el cultivo in vitro difiere en

ocasiones, de lo observado in vivo, debido principalmente a las condiciones propias
del crecimiento en un ambiente confinado.

• Micronutrientes

Los micronutrientes son elementos esenciales que la planta requiere en cantidades

del orden de mg/litro (Fe, Mo, Ni, Cu, Zn, Mn, B). Los micronutrientes del medio de
Murashige & Skoog incluyen todos aquellos elementos minerales aceptados como
esenciales para plantas superiores, con el agregado de Co y I. El agregado de Na+ o
Cl- se verifica para algunos medios en particular, como acompañantes de otros iones.

• Carbohidratos

Las células, tejidos y plántulas cultivadas in vitro no poseen las condiciones de

irradiancia ni la concentración de CO2 adecuada para realizar fotosíntesis que
sustente su crecimiento. Por ello los carbohidratos proporcionan la energía metabólica
y los esqueletos carbonados necesarios para la biosíntesis de aminoácidos y
proteínas, polisacáridos estructurales como celulosa, etc.

La sacarosa es el carbohidrato más utilizado en la preparación de medios de cultivo.

Las concentraciones varían dentro de ciertos rangos de acuerdo al tipo de respuesta
esperada, la más utilizada es de 3% p/v. Otros azúcares como fructuosa, glucosa,
celobiosa, maltosa, rafinosa y galactosa son recomendados para algunas especies
en particular.

• Vitaminas

Las vitaminas, en la mayoría de los casos, cumplen funciones de cofactores de

reacciones enzimáticas (tiaminafosfato, piridoxina), en otros se comportan como
sustrato de reacciones metabólicas (ácido nicotínico). La combinación de vitaminas
en el medio de cultivo se definió a partir de los primeros estudios de cultivo de raíces.
La composición vitamínica, en el caso de medio MS, está constituida por tiamina
(Vitamina B1), ácido nicotínico (niacina) y piridoxina (vitamina B6), a la que
normalmente se le adiciona el aminoácido glicina. Las concentraciones más usuales
oscilan entre 0.1 a 0.5 mg por litro de solución de medio. Otros compuestos utilizados
son: ácido ascórbico, ácido fólico, riboflavina y biotina. En todos los casos las
variaciones en la formulación están dada por la especie utilizada y la respuesta
buscada.

• Mio inositol

El mio inositol es una hexosa cíclica hidroxilada, que se incorpora al medio MS y a la

mayoría de los medios de cultivo usados en la actualidad. Su presencia es necesaria
en todas las células para lograr la ciclación de la glucosa. Debido a que la biosíntesis
no siempre se verifica in vitro, se hace imprescindible su incorporación a los medios.
Posee efecto estimulador para el crecimiento de callos y en la organogénesis directa
de algunas especies. Se usa en concentraciones de 100 mg/l. Actualmente se sabe
que el myo-inositol se incorpora a las moléculas de fosfolípidos de la membrana
plasmática. Otra función estaría asociada a la conjugación de auxinas, formando un
complejo auxina-inositol, que es inactivo como regulador de crecimiento.

• Agentes gelificantes

Los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos. En el primer caso normalmente
exige algún soporte o agitación para asegurar la oxigenación del explante. Se usan
puentes de papel de filtro o de fibras de celulosa, o se colocan los medios en
agitadores orbitales o en recipientes con flujo y reflujo del medio de cultivo.

En los medios sólidos o semisólidos se utilizan diferentes agentes gelificantes. El agar

es un polisacárido extraido de algas marinas, debe disolverse en agua hirviendo y la
gelificación se logra a pH 5.8 aproximadamente. Actualmente existen otros agentes
gelificantes como el “phytagel” comercializado por Sigma y el “gerlite” de la firma
Merck & Co. Todos están constituídos por polisacáridos del ácido glucurónico con
ramnosa y glucosa y grupos O-acetil.

• El pH
Es necesario ajustar el pH de la solución con el fin de lograr una correcta gelificación
del medio y considerando que el pH también incide en la capacidad de absorción de
sales minerales. En general el pH no debe ser inferior a 5,8 y es ajustado con ClH o
NaOH 1N, luego de agregar todos los ingredientes excluidos el agente gelificante. En
ocasiones se agrega soluciones tampón, debido a que la capacidad tamponante de
los medios de cultivo es baja y los valores de pH decrecen con el autoclavado y, en
muchos casos, se altera por la absorción de iones durante el cultivo y con la excreción
de metabolitos del explante.

Método de desinfección.

Para poder realizar el cultivo in vitro de se llevó a cabo un método de desinfección

para evitar la contaminación del cultivo.

Fig. 8 Diagrama de desinfección del esqueje

Contaminantes durante la micropropagación de plantas

Una de las condiciones básicas que se requieren para la micropropagación es la

asepsia, es decir la ausencia en el sistema de cualquier organismo contaminante que
pudiera afectar los resultados o incluso matar el tejido vegetal cultivado.
La contaminación microbiana (Figura 1) es uno de los problemas más graves en la
micropropagación de especies vegetales en el mundo, produce cuantiosas pérdidas
de material tanto en la micropropagación comercial como en los trabajos de
investigación (Digonzelli, 2005).

Fig. 9. Contaminación microbiana en micropropagación in vitro (FIA, 2009)

Existen dos fuentes probables de contaminación para los cultivos; aquella que
proviene de los instrumentos utilizados y las condiciones en que se manipula los
mismos y segundo, aquella que proviene del explante mismo siendo esta más difícil
de control.

Los hongos y bacterias son los microorganismos más comunes que se encuentran
sobre o en los tejidos vegetales. Para eliminar la contaminación bacteriana durante la
propagación in vitro, se han desarrollado diferentes métodos en los últimos años
(Barrett y Cassells 1994; Hussain et al., 1994).

Formas de combatir la contaminación in vitro

Uno de ellos es realizar todas las manipulaciones que implique la exposición de los
tejidos o del medio de cultivo en área axénica, siendo lo ideal trabajar en una campana
de flujo laminar. Así también esterilizar todos los implementos utilizados para la
manipulación de los tejidos antes de hacer uso de ellos. Los frascos o recipientes de
cultivo deben permanecer sellados en un ambiente libre de polvo y de corrientes de
aire durante el período de incubación. (Molphe-Balch et al., 1999). Los antibióticos se
utilizan comúnmente en el medio para eliminar los contaminantes no deseados en los
sistemas de micropropagación.

Ecuaciones

Se recomienda utilizar un suministro de presión de 0.2 bar debido a que esta presión
se asegura que no ocurra estrés abiótico ocasionado por el exceso de turbulencias y
así promueva el crecimiento de las plantas.

• Cálculo de la velocidad media:

Donde:

𝑉 : velocidad media.

𝛾 : densidad relativa del fluido.

𝜇 : viscosidad del fluido.

𝑑ℎ
𝑑𝑠
: se define como el gradiente de presiones.

𝑟02 : radio de la tubería.

• Cálculo de caudal:

Donde:

Q: caudal

V: velocidad de fluido
A: área transversal de la travesía del fluido.

• Cálculo de presión interna en el biorreactor y conocer si el medio de cultivo se

elevaría con la presión suministrada establecida (0,2 bar):

Donde:

𝑃
𝛾
: representa la altura de presión.

z: altura de posición.

h: altura piezométrica del fluido.

• Cálculo del número de Reynolds a través de una tubería lisa:

Donde:

Re: número de Reynolds a través de una tubería lisa.

𝑉 : Velocidad media del fluido.

DT: diámetro de la tubería.

v: viscosidad cinemática.

• Cálculo del número de Reynolds a trates de un lecho poroso:

Donde:

Rep: es el número de Reynolds a través de un lecho poroso.

𝑉 : velocidad media del fluido.

Dp: diámetro de la partícula.

ρ: densidad del fluido.

μ: viscosidad dinámica.

• Cálculo del esfuerzo de corte:

Donde;

yx: esfuerzo de corte en la dirección y perpendicular a la dirección x en N·m -2 .

ρ:densidad en kg/m3.

vx: velocidad media en la dirección x m/s.

• Cálculo de velocidad angular:

Donde:

w: Velocidad angular

v: Velocidad en la dirección x

r: radio interno.

Física aplicable: el modelado en ingeniería

En la industria de procesos hay un incremento en la demanda de modelos puesto que

su uso es muy importante en el diseño, control, optimización, estimación de estados,
detección de fallas e inclusive en la formación e instrucción del personal de la planta.
Una gran ventaja de los modelos es que son una herramienta muy valiosa cuando se
quiere observar el comportamiento de un sistema, pero no se quiere o no se puede
experimentar con él. La disponibilidad de modelos buenos hace que las distintas
actividades realizadas en la práctica industrial sean mejor evaluadas

A continuación, se describe la clasificación de los modelos de acuerdo al

conocimiento previo del proceso y de acuerdo con la cantidad de información
adicional que brindan sobre el fenómeno. Dicha información adicional va más allá de
los resultados obtenidos al resolver el modelo en una simulación

Tipos de modelos

Los modelos se pueden clasificar de acuerdo al conocimiento previo sobre el proceso

en tres tipos:

Fenomenológicos: También llamados de caja blanca, que están basados en

fundamentos teóricos que permiten explicar perfectamente el comportamiento de los
procesos. Todo en dichos modelos proviene de leyes o principios básicos de la
química, la física y la biología. Sus principios de formulación son la ley de
conservación y la ley de causalidad

Empíricos: También llamados de caja negra, se construyen sólo a partir de datos

experimentales para ajustar parámetros en una estructura matemática dada. Para su
construcción, se apoyan en las herramientas de la estadística y el tratamiento de
señales. Su baja complejidad computacional los hace atractivos para usos en línea
en las tareas de optimización y control de procesos

Explicativos: El contenido de información en el modelo es el mayor posible, puesto

que explican todos y cada uno de los fenómenos presentes en el sistema.
Normalmente, se basan en leyes y principios. En la investigación científica responden
a la pregunta ¿Por qué y de qué forma ocurren determinados fenómenos en un
proceso? La explicación usa todos los rasgos del proceso para construir el modelo.

La velocidad media: la velocidad del aire medida en el ducto que permite el

desplazamiento del aire desde la tubería principal hasta el Biorreactor
El número de Reynold (Re): caracteriza el comportamiento del flujo del aire para saber
de qué tipo es este.

Fuerza: con la que el fluido entra al Biorreactor (presión)

Hidrodinámica: analizar el movimiento de los fluidos

Cinética: movimiento

Modelos matemáticos de bioprocesos

La historia de los modelos en bioprocesos comienza en 1905, con la ecuación

propuesta por Frederick Blackman para la velocidad específica de crecimiento.

En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron la teoría del complejo

enzima-sustrato (cuyo concepto había sido introducido en 1894 por Emil Fisher) y
propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético de las
enzimas.

Los Modelos Semifísicos de Base Fenomenológica (MSBF) en el modelado de

bioprocesos. La utilización de Modelos Semifísicos de Base Fenomenológica (MSBF)
con características de parámetros concentrados, los cuales relacionan las variables
más significativas del medio ambiente del proceso (estados), ha sido una constante
en las últimas décadas de investigación en los bioprocesos

Bastin G y Dochain D plantearon un modelo dinámico general en el espacio de estado

para la descripción de procesos biotecnológicos en biorreactores de tanque agitado,
modelo que escrito en forma matricial es:

Donde:

D: es la tasa de dilución

F: es el vector de los flujos másicos de entrada en el biorreactor de los componentes

ξ: es el vector de concentración de los componentes en el biorreactor

φ(ξ,t): es el vector de velocidades de reacción

K: es la matriz de coeficientes de rendimiento, compuesta por elementos Kij (i

reacciones y j compuestos) estrictamente constantes positivas de coeficientes de
rendimientos, sin dimensiones, y con signo menos (-) cuando ξi es un reactante y
signo más (+) cuando ξi es un producto de la reacción;

Q(ξ): es el vector de los flujos másicos de salida de los componentes ξi en forma

gaseosa desde el biorreactor

Obviamente, y ante la ausencia de una forma descriptiva de las relaciones entre el

medio ambiente y material biológico, dichos submodelos para los términos de K serán
empíricos y por lo tanto el modelo general será un modelo semifísico de base
fenomenológica. Por ejemplo, el modelo más utilizado para el coeficiente de
rendimiento, más conocido como la velocidad de crecimiento específico del
microorganismo, es el modelo de Monod:

Donde: µ* es la velocidad de crecimiento máximo

KM: es la constante de saturación

S: es la concentración de sustrato.

Ingeniería

Se definen los recursos necesarios para la ejecución de planes o tareas: máquinas y

equipos, lugar de implantación, tareas para el suministro de insumos, recursos
humanos, obras complementarias, dispositivo de protección ambiental, entre otros.

• Sistema de soporte o andamiaje.

• Sistema de iluminación.
 • Sistema de aireación.
• Sistema de filtrado.
• Tanques o contenedores.
• Sistema de control y automatización.
• Sensores
• Medio de cultivo

Prototipo del biorreactor

Fig. 10. Diseño del biorreactor de inmersión temporal

1. Dos frascos de cultivo conectados entre sí, uno para los explantes y otro para
el medio de cultivo.
2. Inicio de la inmersión, el medio de cultivo es impulsado por el aire del
compresor al frasco que contiene los explantes.
 3. Fin de la inmersión, la segunda válvula solenoide se abre y el medio decultivo
regresa al frasco que lo contiene.

Costos

Cantidad Marca Producto Descripción del Imagen Costo Costo

Total
servicio Unitario

1 Mv Sensor Sensor de pH con $500 $500

de ph
electroni electrodo
ca -Voltaje de
alimentación: 5V
-Corriente: 10mA
-Dimensiones:
42x32x20mm
-Tipo de sonda:
Grado de
laboratorio
-Tiempo de
respuesta: 5seg
-Rango de
detección: 0-14
(ácido-base)
-Temperatura de
trabajo: 10-15 ºC
-Humedad de
trabajo: 95RH sin
consideración

1 Elite Bomba Producto con $200 $200

materiales de
calidad.
 Materiales seguros
y amistosos.
El material brinda
excelente
durabilidad y
resistencia.

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automáticos

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1 puerta que
resguarda dos
repisas y 3 repisas
abiertas con
espacio amplio
para almacenar
objetos y artículos
personales en las
recámaras del
hogar. Se
encuentra
elaborado en
melamina
resistente y
duradera, con un
diseño moderno en
tono chocolate y
café miel mate que
combina con
cualquier
decoración. Sus
dimensiones de
81.4 x 120.1 X 35.3
cm permiten
ahorrar espacio en
las habitaciones. El
empaque contiene
herrajes para su
montaje.
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de vidrio .60
(máxima) 99C,
con boca
ancha soporta cambios te
temperatura de
menos de 24C
Material: vidrio
templado

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N automatiza el
encendido y
apagado de tus
equipos / Tú eliges
que días se repiten
los eventos
Programa hasta 20
eventos de
encendido y
apagado / Periodos
programables cada
1 min
Batería interna de
respaldo para no
perder la
programación en un
apagón / Función
de cuenta regresiva
(countdown)
Función aleatoria
(random) / Potencia
soportada: 1 800 W
máx.
Carga lámpara de
tungsteno: 720 W
máx.
6 philips lampara Alta Eficiencia $27 $162
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- Enciende al
Instante
- Disipación Del
 Calor
- Resistencia a La
Humedad
- Material: Metálico
- Potencia: 18 W
- Flujo Luminoso:
1260Lm
- Tensión: 85V-
265V
- Temperatura de
color: Luz Blanca
(6500k)
- Frecuencia:
50/60Hz
- Horas De Vida:
50,000h
- Protección: IP65
(Resiste: polvo,
lluvia y humedad)
- Angulo: 270°
- Índice de
reproducción
cromática: 75
- Medidas:
21.5x21.5x3
6 Conector fitting $80.00 $480
Conector para biorreactor en
plastico plástico
polipropileno,
completamente
esterilizable en
autoclave.
Estos conectores
permiten realizar
una transferencia
aséptica de líquidos
entre dos
recipientes ya que
permiten atravesar
las tapas o envases
para poder realizar
la conexión por
 medio de una
manguera.
TOTAL $5303.6

Normatividad aplicable

Campo de aplicación

Esta Norma Mexicana es aplicable a las actividades realizadas por las entidades
públicas y privadas que operen procesos de tratamiento aerobio de la fracción
orgánica de los residuos sólidos urbanos (RSU) y residuos de manejo especial (RME),
así como de productores y comercializadores de los productos y subproductos
derivados, descritos en la misma.

Referencias normativas

Para la correcta aplicación de esta Norma Mexicana, se deben consultar las

siguientes Normas vigentes o las que las sustituyan:

• Norma Oficial Mexicana NOM-004-SEMARNAT-2002, Protección ambiental -

Lodos y biosólidos.-Especificaciones y límites máximos permisibles de
contaminantes para su aprovechamiento y disposición final. Publicada en el Diario
Oficial de la Federación 2003-08-15.
• Norma Oficial Mexicana NOM-050-SCFI-2004, Información comercial - Etiquetado
general de productos. Publicada en el Diario Oficial de la Federación 2004-06-01.
• Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005, Que establece las
características, el procedimiento de identificación, clasificación y los listados de
los residuos peligrosos. Publicada en el Diario Oficial de la Federación 2006-06-
23.
• Norma Ambiental para el Distrito Federal NADF-002-RNAT-2002, Que establece
las condiciones para la agricultura ecológica en el suelo de conservación del
Distrito Federal. Publicada en la Gaceta Oficial del Distrito Federal 2003-12-18.
• Norma Ambiental para el Distrito Federal NADF-020-AMBT-2011, Que establece
los requerimientos mínimos para la producción de composta a partir de la fracción
 orgánica de los residuos sólidos urbanos, agrícolas, pecuarios y forestales, así
como las especificaciones mínimas de calidad de la composta producida o
distribuida en el Distrito Federal. Publicada en la Gaceta Oficial del Distrito Federal
2012-11-30
• Norma Técnica Estatal Ambiental NTEA-006-SMA-RS-2006, Que establece los
requisitos para la producción de los mejoradores de suelos elaborados a partir de
residuos orgánicos. Publicada en el Periódico Oficial del Gobierno del Estado Libre
y Soberano de México 2006-10-09.

Materiales Y Métodos

Materiales.

1) 2 frascos de 1 litro
2) 2 tapas con fitting
3) 2 empaques para tapas
4) 2 mangueras de succión de silicón con malla
5) 1 puente comunicante
6) 2 filtros de 0.2 um de diámetro
7) Manguera de acoplamiento a conectar de 6 mm
8) Hardware del Sistema

Frascos gemelos

Éstos son contenedores de ambiente estéril que aprovecha los sistemas de

nutrientes líquidos y aire en un sistema de entrada y salida. Está diseñado para el
cultivo intensivo y para el escalamiento, ofrece la oportunidad de monitorear y
controlar las condiciones micro ambientales.
 Fig. 11. Frascos gemelos

Tapas con fitting

Los fittings o accesorios para soldadura son elementos que permiten a dos
tuberías interconectarse entre sí, donde cada segmento de la tubería logra que,
al finalizar la fusión, la tubería pueda trasladar toda clase de fluidos: desde gases
hasta líquidos.

Algunos materiales utilizados para los fitting son el bronce, el acero inoxidable y
los aceros resistentes a la corrosión.

Si un fitting no es bien puesto o electrofusionado, pueden provocarse fugas o

factores que influyan en el movimiento del líquido que pase por las tuberías.

Fig. 12. Tapas con fitting

 Empaques para tapas (neupreno)
El neopreno o policloropreno (CR) es un caucho sintético extremadamente versátil,
Es resistente a la degradación causada por el sol, el ozono y las condiciones
climáticas.

El neopreno o el policloropreno pertenece a la familia de los cauchos sintéticos

producidos por polimerización del cloropreno.

Los empaques se utilizan para sellar las uniones entre bridas de tuberías,
conexiones o válvulas, lo que permite que no haya fuga de fluidos.

Fig. 13. Empaques para tapas

Mangueras de succión de silicón con malla.

• Materia prima 100% silicona pura manipulada por maquinaria de alta tecnología
y precisión con el más exigente control del proceso.
• Disponible versión montada con diferentes gamas de racores en uno o ambos
extremos.
• Propiedades antiestáticas.
 Fig. 14. Mangueras de succion de silicón con malla.

Filtros hidrofóbicos

Los filtros de membrana PETE hidrófobos son una excelente opción para
aplicaciones de ventilación donde tradicionalmente se han utilizado.

Estos filtros de membrana de poliéster se han tratado mediante un proceso

patentado para hacerlos permanentemente hidrófobos y oleófobos. Tienen una
estabilidad dimensional superior en comparación con los filtros de membrana de
PTFE y exhiben una mejor resistencia térmica que los filtros de membrana de
poliolefina. Además, estos filtros PETE generalmente tienen una mayor presión
de entrada de agua que los filtros de ventilación tradicionales con clasificaciones
de tamaño de poro similares. A diferencia del PTFE y el polipropileno, el poliéster
es compatible con la esterilización por irradiación gamma y puede soldarse
térmicamente a una amplia variedad de sustratos.

Los poros de los filtros de membrana microporosos actúan como pequeños

capilares. Cuando las membranas hidrófilas entran en contacto con el agua, la
acción capilar asociada con las fuerzas de tensión de la superficie hace que el
agua entre espontáneamente y llene los poros. De esta manera, las membranas
se humedecen fácilmente y permiten el flujo masivo de agua a través de los poros.
Una vez humedecidas, las membranas hidrófilas no permitirán el flujo masivo de
aire u otros gases, a menos que se apliquen a presiones superiores al punto de
burbuja de la membrana.

Los filtros de membrana hidrófilos se utilizan típicamente con agua y soluciones

acuosas.
 Fig. 15. Filtros hidrofobicos.

Manguera de acoplamiento

(Manguera de silicón curada con platino)

El mayor beneficio de usar manguera de silicona curada con platino es que el

proceso de curado con platino no produce residuos de peróxido, por lo que el
riesgo de ensuciamiento de la manguera se reduce considerablemente.

Otras ventajas del curado con platino pueden incluir una claridad y una
consistencia mejoradas del producto y potencialmente un alargamiento,
resistencia a la tracción y resistencia al desgarro algo mejores en comparación
con los materiales curados con peróxido.

Las propiedades únicas de la silicona curada con platino la prestan a una amplia
gama de aplicaciones potenciales, que incluyen: cualquier proceso en el que se
desee la capacidad de soportar temperaturas extremas, radiación, corona,
exposición al ozono, humedad y / o vapor. La silicona curada con platino de alta
pureza se utiliza a menudo en la producción de productos farmacéuticos,
biotecnológicos, inyectables y de alimentos y bebidas.
Cualquier proceso que requiera una exposición prolongada al calor o la tensión,
personalización detallada o dureza extrema. Los atributos clave de la silicona
curada con platino incluyen alta resistencia al desgarro y a la tracción, muy baja
contracción, reproducción de detalles finos y una amplia gama de durezas.

Fig. 16. Manguera de silicón curada con platino.

Sensor de pH

El sensor de pH puede hacer mediciones de pH (valores que mide la acidez o

alcalinidad) en soluciones (líquidos), a través de una entrada analógica, dichas
lecturas podemos aprovecharlas para manipularlas de acuerdo a nuestras
necesidades o en alguna aplicación que estemos diseñando. El sensor de pH
está conformado por una sonda que es la que toma la lectura, y mediante el
conector BCN se conecta hacia una interfaz, que a su vez es enviada hacia el
puerto de entrada analógica de cualquier controlador Arduino.

La interfaz cuenta con dos diodos LED, uno es el indicador de la alimentación y

el otro el indicador del valor bajo de pH, también tiene un conector en donde se
conecta la sonda.

Características Interfaz:

Voltaje de alimentación: 5 V.
Corriente: 5-10 mA.

Consumo: ≤ 0.5 W.

Temperatura de trabajo: 10-50 ºC.

LED Verde: Alimentación.

LED Rojo: Límite de pH.

Conector de sonda: BNC (conector de rápida conexión/desconexión).

Precisión de medición: ±0.1 a 25℃.

Sonda:

Tipo de sonda: Grado de laboratorio.

Rango de detección: 0 ~ 14.

Rango de temperatura: 5 ~ 60 ° C.

Punto cero: 7 ± 0.5.

Tiempo de respuesta: <2 min.

Vida de la sonda:> 0.5 año (dependiendo de la frecuencia de uso).

Terminales:
Lista de materiales:

Sonda de pH.

Interfaz (circuito) de pH.

2 Arduino uno.

LCD 16×2.

Potenciómetro de 10K.

2 diodos LED.

Cable dupont macho-macho.

Protoboard.

Hardware del Sistema

Está compuesto por tre s elementos principales:

A) Sensores.
B) Actuadores.
C) Placas electrónicas de plataforma abierta junto con shields (placas
electrónicas que agregan una funcionalidad específ ica al sistema).

Los sensores que se utilizaron fueron: DS18B20: Sensor de temperatura digital

creado por Dallas Semiconductor de tres terminales (5V, datos y tierra), no
requiere componentes externos, se alimenta con 3V a 5.5V y captura una
temperatura de -55 °C hasta 125 °C (Maxim Integrated, 2015); fotorresistencia:
componente electrónico, el cual varía su resistencia conforme aumenta o
disminuye la intensidad de la luz. La radiación óptica aporta la energía necesaria
para incrementar el número de electrones libres, disminuyendo así la resistividad.

2. Actuadores utilizados:
 A) Relevador: Componente electromecánico que funciona como interruptor
para activar diversos aparatos a partir de una señal eléctrica; con una
capacidad de 10A.
B) Electroválvulas: Componentes electrónicos que permiten el paso de líquido
o aire, siendo activados por un mecanismo (en este caso relevadores); con
el f in de regar o realizar inmersiones en cultivos (Ritter et al., 2009).

3. Control electrónico: Se utilizaron 2 placas Arduino Uno (una para el sistema en

el SIT y otro para el control remoto), la elección se basó en la versatilidad, bajo
costo, facilidad de uso y alta potencia que ofrece la plataforma de código abierto;
posee un controlador ATMega con 6 entradas analógicas y 14 digitales, además
cuenta con comunicación serial por USB y es compatible con una gran gama de
placas prefabricadas (Martínez et al., 2009).

Medidas específicas del biorreactor de inmersión temporal.

El espacio en donde se ubicará el biorreactor de inmersión temporal será de las

medidas 27.5 cm de anchura por 60 cm de largo y altura de 33 cm; ubicándose en el
laboratorio con simbología H en la Universidad Politécnica del Valle de Toluca.
(Siendo así las medidas de un estante común, ya que cuenta con las medidas
requeridas para su operación y manipulación de dicho biorreactor).
Fig 17. Ilustración de las medidas específicas del estante donde será colocado el
biorreactor de inmersión temporal.

Fig 18. Croquis sobre los sistemas piezoeléctricos para el control del biorreactor de
inmersión temporal.
Lugar de instalación para el biorreactor.

El lugar óptimo para colocar el biorreactor de inmersión es en el laboratorio de

microbiología, ya que en este se encuentran los aparatos correspondientes para
lograr tener un lugar antiséptico para lograr un correcto cultivo in vitro de las plantas,
las condiciones de luz y temperatura se regularán mediante una tarjeta Arduino para
controlar el tiempo de estas dos condiciones.

La preparación adecuada de un biorreactor de inmersión para aumentar la

productividad, la reproducibilidad y evitar las interrupciones del proceso requiere una
limpieza a fondo del recipiente y de todos los componentes asociados. Los
biorreactores utilizados habitualmente en la investigación farmacéutica,
biotecnológica, de vacunas y biológica requieren una limpieza y posterior
esterilización entre las secuencias de trabajo o antes de iniciar nuevas aplicaciones.
Los protocolos para estos escenarios de limpieza y esterilización suelen ser
establecidos por agencias de cumplimiento y supervisión internas o de terceros.

Sin embargo, una vez adoptados, estos protocolos deben aplicarse dentro de un
procedimiento operativo estándar que sea fundamental para el funcionamiento de la
instalación. Cualquier ventaja en el diseño o en el proceso que pueda contribuir a una
limpieza eficaz antes de la esterilización, incluyendo el conjunto de biorreactores y la
lavadora de material de laboratorio, puede ofrecer un ahorro en el ciclo de vida medido
internamente en cuanto a mano de obra, mejor rendimiento y uso predecible de
detergentes y aditivos. Este artículo ilustra la relación simbiótica entre el diseño del
biorreactor y la ingeniería de la lavadora de material de vidrio, especialmente
configurada para minimizar el trabajo, asegurar resultados predecibles y aprovechar
los beneficios de la validación previa que permiten el biorreactor y las bandejas de
lavado de la lavadora de laboratorio cuando se utilizan en secuencia.

Entre las ventajas específicas del diseño del biorreactor que coinciden con el diseño
de las bandejas de lavado extraíbles se encuentran la seguridad del personal, la
ergonomía, la preparación para la transición de las zonas BSL3 a las BSL1 o BSL2 y
la reducción de las posibilidades de rotura del recipiente del reactor o de daños en los
componentes.
Al establecer procesos rutinarios de desmontaje y limpieza, el laboratorio puede
mejorar la reproducibilidad de un procedimiento a otro, al tiempo que acelera el
rendimiento y minimiza el tiempo de inactividad.

En particular, la capacidad de limpiar y esterilizar el biorreactor dentro de un proceso

previamente validado asegura la repetibilidad cuando se utiliza de un laboratorio a
otro laboratorio y entre múltiple personal con diversos niveles de habilidad.

Un laboratorio de Biotecnología debe tener las condiciones mínimas de seguridad.

Los aspectos básicos relacionados con estas condiciones de seguridad, se indican
de la siguiente manera.

Orden y limpieza: Ambos factores deben ser consustanciales con el trabajo, porque
un laboratorio limpio y ordenado significa trabajar en condiciones que permiten
prevenir incidentes que puedan poner en riesgo la salud de los trabajadores del
laboratorio y al mismo tiempo disponer de lo necesario y en condiciones óptimas para
desarrollar cualquier actividad en todo momento.

Algunas directrices generales para mantener limpia y ordenada el área de trabajo en

el laboratorio se indican de la manera siguiente:

1. No sobrecargar las estanterías y zonas de almacenamiento.

2. Mantener siempre limpias, libres de obstáculos y debidamente señalizadas las
escaleras y zonas de paso.
3. No bloquear los extintores, mangueras y elementos de lucha contra incendios
con cajas o mobiliario.
4. No dejar botellas, garrafas y objetos en general tirados por el suelo y evitar que
se derramen líquidos por las mesas de trabajo y el piso.
5. Colocar siempre los residuos y la basura en contenedores y recipientes
adecuados.
6. Recoger los frascos de reactivos, materiales y útiles de trabajo al acabar de
utilizarlos
Espacios de trabajo por trabajador: Para que puedan darse unas buenas condiciones
de orden y limpieza es necesario también respetar las dimensiones mínimas de los
espacios de trabajo, permitiendo a trabajadores realizar sus actividades sin riesgos
para su seguridad y salud y en condiciones ergonómicas aceptables. Las dimensiones
mínimas que deben reunir tales espacios son las siguientes:

1. Altura desde el suelo hasta el techo: 3 metros.

2. Superficie libre por trabajador: 2 metros cuadrados.
3. Volumen (metros cúbicos) no ocupado por el trabajador: 10 metros cúbicos.

Cuando el espacio libre de que se disponga en el laboratorio no permita a los

trabajadores la libertad de movimientos requerida para el desarrollo de su actividad,
deberá disponerse de un espacio adicional suficiente en las inmediaciones del puesto
de trabajo.
Temperatura, humedad y ventilación: La exposición de los trabajadores a las
condiciones ambientales de los laboratorios en general no debe suponer un riesgo
para su seguridad y salud, ni debe ser una fuente de incomodidad o molestia.

Deben evitarse:

1. Humedad y temperaturas extremas.

2. Cambios bruscos de temperatura.
3. Corrientes de aire molestas.
4. Olores desagradables
5. Límites de temperatura, humedad y ventilación, según lo establecido en
normas vigentes de bioseguridad

Concepto Límites

Temperatura 17°C- 27°C

 Humedad relativa 30%-70%

Velocidad del aire 0.25 – 0.50 m/s

Sistemas de aire acondicionado 0.25 m/s

Renovación del aire 30 m3 por hora y trabajador

Infraestructura

Características de los muebles:

1. Base de madera.
2. Terminado en laminado plástico.
3. Cubierta en acero inoxidable, resina epóxica o laminado

Espacio de trabajo:

1. Gabinetes, estantes, vitrinas, muebles de guardado.

2. Mesa isla, mesa para titular, mesa de trabajo, mesa de lavado.
3. Mesa para balanza, mesas escolares.
4. Repisas, campanas de flujo, campanas de extracción laminar.
Referencias

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evolution of crop plants. American Journal of Botany, 95, 113–122.
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California: Paul Ecke Poinsettias.
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Bartram
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Garden. The Edinburgh New Philosophical Journal, 20, 412–413.
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biorreactores-para-la-propagacion-de-plantas-a-escala-comercial.html
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establece los métodos y procedimientos para el tratamiento aerobio de la
fracción orgánica de los residuos sólidos urbanos y de manejo especial, así
como la información comercial y de sus parámetros de calidad de los productos
finales. semarnat. recuperado 29 de septiembre de 2022, de
https://biblioteca.semarnat.gob.mx/janium/Documentos/Ciga/agenda/PPD1/N
MX-AA-180-SCFI-2018.pdf
• Abdi, G., Salehi, H. and Khosh-Khui, M. 2008. Nano-Silver: a novel
nanomaterial for removal of bacterial contaminants in valerian (Valeriana
officinalis L.) tissue culture. Acta Physiologiae Plantarum, 30: 709-714.
• Acosta, M., Y. Alvarado y A. Flores. 1999. Contaminantes fungosos en la
micropropa-gación de plantas con el uso de la esterilización química de los
medios de cultivo. Libro de reportes cortos “Biotecnología Vegetal”. 5° Coloquio
Internacional de Biotecnología Vegetal: 239-240.