MULTIPLICACIÓN IN VITRO

(MICROPROPAGACIÓN)

Foronda S1, Gonzalez M2, Machado A3

1. Estudiante de Biotecnología. Facultad de Ciencias de la Salud,

Institución Universitaria Colegio Mayor de Antioquia. Carrera 78 # 65 –
46, Medellín –Colombia. Mgr115@hotmail.com
2. Estudiante de Biotecnología. Facultad de Ciencias de la Salud,
Institución Universitaria Colegio Mayor de Antioquia. Carrera 78 # 65 –
46, Medellín –Colombia. Santy-14@hotmail.com
3. Estudiante de Biotecnología. Facultad de Ciencias de la Salud,
Institución Universitaria Colegio Mayor de Antioquia. Carrera 78 # 65 –
46, Medellín –Colombia. alexandermachado456@gmail.com

Resumen: La técnica de micropropagación es una de las más usadas en la biotecnología

vegetal, a nivel de laboratorio. En esta práctica de laboratorio usaremos diversos
explantes para la obtención de nuevas plántulas a partir de una pequeña porción. Tras
procesos de desinfección, fabricación de medios y sembrado por parte de los estudiantes
veremos la utilidad de esta técnica, su fundamento y productos.

Palabras clave: Reguladores de crecimiento, propagación , asepsia

1. INTRODUCCIÓN la asepsia de la materia prima, la modificación de los

La micropropagación es una de las técnicas más
utilizadas en el laboratorio a nivel in vitro, debido a
que partiendo de un explante, se pueden obtener otros
explantes o plántulas genéticamente idénticas en
mayor proporción y en menor tiempo. Para estos
procedimientos el material que se desea siempre son
yemas vegetativas.
Para llevar a cabo una multiplicación in vitro, se
deben seguir ciertos parámetros establecidos de
acuerdo al tipo de planta que se desea utilizar, porque
dependiendo de la planta se pueden utilizar diferentes
concentraciones en el medio, se debe tener en cuenta
medios de cultivo y los recipientes a utilizar. El
avance de las ciencias biológicas ha permitido reducir
la influencia de factores externos, controlando
variables como la temperatura, cantidad de nutrientes
y vitaminas en el medio, así como teniendo un buen
manejo y prevención de contaminantes a la hora de
realizar estas técnicas.
El cultivo in vitro es una técnica que exige orden en
el laboratorio, ya que se debe tener un buen manejo
de los materiales en el cual se va a situar los explante
controlando así las contaminaciones, es por ello que
los recipientes donde se van a inocular los explantes
se deben sellar muy bien después de la inoculación y
llevar a estanterías con luces y una temperatura que
oscile entre los 23 ± 2°C. Por otro lado el medio de
cultivo debe tener una proporción de sales minerales,
pH, vitaminas, agua destilada y azúcar haciendo
modificaciones de nutrientes y concentraciones que
requiera el explante.
La micropropagación cuenta con varias etapas las
cuales se dividen de la siguiente forma:
Etapa 0: Preparación de la planta madre; en la cual
se deben obtener los explantes con un buen nivel
nutricional y un grado de desarrollo adecuado,
además se debe usar material homogéneo.
Etapa 1: Desinfección del material vegetal; en esta
fase se extraen los fragmentos de la planta. En esta
fase si no sigue con cierto protocolo se puede
presentar contaminaciones por hongos y bacterias que
habitan en el ambiente por lo tanto se debe utilizar
etanol, hipoclorito, antifúngicos, antibióticos y agua
estéril.
Etapa 2: Multiplicación de los brotes; para esta fase
se espera que los explantes que sobrevivieron a la
fase anterior originen varios brotes, y estos nuevos
brotes se debe volver a inocular en un medio de
cultivo nuevo estéril para evitar que se vuelva a
contaminar y su proliferación sea más limpia.
Etapa 3: Elección de un medio de cultivo de
enraizamiento de los explantes; los brotes obtenidos
durante la fase de propagación se transfieren a un
medio enriquecido con reguladores de crecimiento o
con auxinas para su buen crecimiento.
Etapa 4: Aclimatación de los explantes enraizados;
en esta etapa las plantas tienen cambios de diferentes
tipos, esto permitirán que esta nueva plántula genere
una adaptación al ambiente con unas buenas
condiciones climáticas para su buen desarrollo ex
vitro.
Por medio de la micropropagación se pueden hacer
mejoramientos en diferentes cultivos con evoluciones
rápidas obteniendo resultados muy importantes, tanto
para el avance de los proyectos de investigación
como el desarrollo de nuevas especies productivas.
2. METODOLOGÍA
2.1.Materiales.
Las herramientas de trabajo y el material vegetal
fueron obtenidos por parte de la Institución
Universitaria Colegio Mayor de Antioquia,
mencionados a continuación:
● Frascos compoteros de vidrio
● Papel de aluminio
● Papel kraff
● Alcohol etílico al 70%
● Mecheros
● Frascos de vidrio tapa rosca para autoclave
de 200mL
● Frascos de vidrio tapa rosca para autoclave
de 1 litro
● Cinta de enmascarar
● Agua destilada estéril
● Erlermeyer de vidrio de 1 litro con tapón de
gasa
● Probeta plástica de 250mL
● Probeta plástica de 100mL
● Magneto agitador
● Servilletas
● Vinipel cortado de 5 cm de alto
● Pinzas
● Tijeras
● Etanol al 96% para mechero
● Barreras de bioseguridad: Guantes, bata,
gorro, tapabocas.
● Plantas de papa, orquídea y planta X
2.2. Medio de cultivo.
Se utilizó un medio de cultivo MS realizado en
prácticas anteriores, distribuido en frascos estériles,
con Fitagel como agente gelificante. Los frascos con
el medio fueron esterilizados en autoclave y
almacenados en nevera hasta su posterior uso.
2.3. Obtención y siembra de explantes.
Para la obtención de explantes, fueron utilizados
como material vegetal: orquídea y manzanilla. Estas
fueron llevadas a la cámara de flujo laminar, donde se
les realizaron cortes en los tallos y raíces de
aproximadamente 1.5cm de longitud, con pinzas y
cuchillas estériles en cajas de Petri para evitar
contaminación. Los explantes obtenidos fueron
sembrados verticalmente en los recipientes con el
medio de cultivo. Posteriormente fueron sellados con
papel aluminio y papel chicle y llevados a estanterías
a temperatura ambiente.

3. RESULTADOS Y ANÁLISIS

Se realizaron cultivos de explantes obtenidos de dos

especies de planta diferentes durante 15 días en
medio MS, sin modificaciones en cuanto a la
concentración de vitaminas o fuente de carbono. El
porcentaje de contaminación, producción de callos y Fig. 2 Medios que presentaron crecimiento
crecimiento foliar de cada tipo de explante. El
porcentaje de contaminación no fue mayor al 13% en Los explantes de manzanilla fueron proporcionados
general, predominando el crecimiento de bacterias por el profesor, la cual mostraba un gran crecimiento,
(Fig. 1) debido a que estas tienen una tasa mayor de aunque parece que el explante necesita desde hace
reproducción en menor tiempo a comparación de rato cambiarse de medio, debido a que ese ya se lo
mohos y levaduras ambientales. Es posible que el había consumido por completo, (Fig. 3).
porcentaje de contaminación haya disminuido puesto
que las plantas utilizadas estaban bajo condiciones de
asepsia, en recipientes aislados del ambiente exterior.

Fig. 3. Manzanilla.
Tomado de:http://3.bp.blogspot.com/-uI7chCHF46k/T492xU-AmDI/AAAAAAAAAI8/cX0LiEKKYj0/s1600/UNO.jpg

4. CONCLUSIONES.

 A partir de técnicas como la

Fig. 1 Medio contaminado
En los explantes de orquídea (Fig. 2) no hubo
producción de callos ni formación de raíces debido a
que no fue adicionada ninguna proporción de estas al
medio de cultivo y la producción de fitohormonas por
las células no generó suficiente impacto en la planta
en el tiempo evaluado. En general hubo un
crecimiento foliar en los explantes de orquídea, pero
no fueron eficientes en cuanto al tiempo de
elongación debido a varios factores.
microporopagacion podemos obtener nuevos
explantes más puros, para diferentes
tratamientos futuros de interés. La técnica
nos ayuda a prolongar el tiempo de vida de
nuestras plantas, conociendo ya esto
podemos aplicarla en cultivos que tienden a
la extinción o de algún modo poseemos un
método para producir nuestros cultivos a
nivel de laboratorio en condiciones
controladas.
 A partir de los resultados obtenidos nos
damos cuenta que los procedimientos
utilizados fueron los adecuados para seguir
aplicándolos en futuras prácticas. Se cumplió
con el objetivo principal que era llegar a la
propagación de diferentes plantas como se
pudo observar e identificar en los resultados.
5. REFERENCIAS.
Silvia Radice. (2010). Biotecnología y Mejoramiento Vegetal II,
Argenbio, INTA. pags.: 26-33.
ArgenBio. (2007). Cultivo in vitro de plantas y su relación con
la Biotecnología. Cuaderno 35. ¿Por Qué Biotecnología?.
Skoog, F & Tsui, Ch. 1948. Chemical Control of Growth and
Bud Formation in Tobacco Stem Segments and Callus
Cultured in
Vitro. American Journal of Botany Vol. 35, No. 10 (Dec., 1948),
pp.
782-787.
Barrera, Eduardo A. Higiene en planta de alimentos. (2012).
Universidad Nacional Abierta y a Distancia, UNAD.
Aceves, R, J, L. & Hernández, H, J. Propagación comercial de
plantas ornamentales por cultivo in vitro de tejidos vegetales
para beneficio social de la comunidad. Disponible en:
http://www.uv.mx/iiesca/revista2/aceves2.html
Montoya, H, L, M. 1991. Cultivo de tejido vegetal.
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/
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https://bteduc.com/guias_es/
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