Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
1. PARCIAL 1: Introducción
a. Generalidades del ciclo celular
Ciclo celular: Es el ciclo vital de una célula, conjunto de procesos que conducen al
crecimiento de la célula y a la división de dos células hijas.
2 Fases:
MEIOSIS I
Profase II
No haploide, no hay duplicación, estado condensado, se forma el huso
Metafase II
Placa ecuatorial
Anafase II
Centrómeros se separan, YA pueden llamarse cromosomas
Telofase II
Se forma membrana nuclear, citocinesis, 4 CÉLULAS HIJAS CON JUEGO HAPLOIDE
● Al final 92 cr y 184 cromátidas
TELOMERASA
Telómero: Es un nudo que forma una triple hebra para evitar que el ADN se deshilache. Se
encuentra al final del ADN nuclear.
Telomerasa: Es el respaldo (Secuencia final de un telómero)
RNA molde: Tiene una copia de la información anterior.
Transcriptasa reversa: Copia la información y la pega.
Endonucleasa: Enzima que corta el ADN.
Cada que la célula se divide, la polimerasa no puede pasar por el telómero y llega una
endonucleasa y corta el ADN. Y cada que se divide va perdiendo longitud en sus telómeros.
Por lo que la telomerasa llega y pone pegamento para hacer el nudo de nuevo.
c. El DNA
Watson y Crick: 1953 propusieron el modelo de la estructura del DNA.
COMPONENTES:
* Unidad básica para construir DNA es un nucleótido qué es lo
siguiente:
● Fosfato
● Azúcar (pentosa)
● Base nitrogenada
○ Purinas: A, G (2 anillo)
○ Pirimidinas: C, T, U (1 anillo)
Tipos de unión:
● Enlace fosfodiester: 5’3’ (fuerte)
● Puente de hidrógeno (débil)
Importancia de la propuesta:
● Almacén de la información genética
● Replicación y herencia
● La expresión del mensaje genético.
ARN
Es el ácido nucleico más abundante en la célula eucariota, donde suele ser 10 veces más
abundante que el ADN.
d. Replicación
*Se lleva acabo en la fase S del CC.
*Direccion 5’3’ la síntesis de las cadenas.
*La replicación es semiconservadora, bidireccional y antiparalela.
*Separación gradual de las cadenas de la doble hélice por la enzima helicasa, una vez
separadas, la proteínas SSB mantienen separadas las cadenas para qué la ADN
polimerasa II y III hagan la síntesis de la cadena complementaria.
*Molde: 3’5’
*Hebra discontinua: fragmentos de okazaki
AÑO 1953
➔ Regla de Chargaff: La proporción de purinas y pirimidinas es la misma.
➔ Difracción de Rayos X: Para visualizar estructuras muy pequeñas.
LINUS PAULING
➔ Descubre estructura a-hélice de la hemoglobina.
FRANKLIN
➔ Estructura helicoidal.
f. Integración del Genoma
g. Transcripción
En la transcripción se va a llevar a cabo el copiado del ADN A ARN, haciendo el cambio de
la Timina por el Uracilo en las bases nitrogenadas.
1. Las enzimas Helicasas llegan y abren las cadenas de ADN.
2. Proteínas de Unión a cadenas sencillas o SSB se adhieren a estas cadenas para
evitar la formación de puentes de hidrógeno.
3. La ADN Polimerasa se va a encargar de hacer la copia ‘sintetizar’ la nueva cadena
(ARNm).
a. En la cadena 3’ ➜ 5’: La ADN Polimerasa va a añadir los nucleótidos de
forma normal.
b. En la cadena 5’ ➜ 3’: Se van a formar los fragmentos de Okazaki para
poder sintetizar la.
4. Se retiran las SSB y la Helicasa para que la cadena de ADN vuelva a su estado
normal.
i. Traducción
Se lleva a cabo en los ribosomas, los cuales
tienen dos fragmentos el a y p.
1. Llega el ARNm y se inserta en la porción
pequeña del ribosoma. Este ARNm tiene
una cadena enorme de bases
nitrogenadas unidas a él.
2. La porción que se encuentra en el
ARNm se le llama codón y la porción
que se le va a adherir del ARNt
(transferencia) se le conoce como
anticodón. Se van a ir uniendo codones
y anticodones en las secciones a y p de
la subunidad mayor del ribosoma. Cada anticodón está formado por 3 bases
nitrogenadas.
a. Codón de inicio: Metionina AUG
b. Codones de terminación: UAA, UAG, UGA.
3. Finalmente se rompe el enlace entre el aminoácido y las bases nitrogenadas, y estos
aminoácidos se van uniendo unos con otros, formando cadenas de polipéptidos.
a. Las cadenas de polipéptidos: se enrollan formando las proteínas.
b. Los ARNt se salen del ribosoma y son hidrolizados por RNasas para
reciclarlos y volver a ser utilizados más adelante.
j. Maduración de proteínas
Las cadenas de polipéptidos van a adquirir una estructura tridimensional para tener
funcionalidad. Esto se lleva a cabo mediante el añadido de grupos o átomos que le dan
función.
➔ Fosfatos
➔ Metilos
➔ Hisroxilo Se adicionan a una proteína y se convierte en una proteína
➔ Acetilo funcional
➔ Carboxilo
➔ Amino
k. Epigenética
Cambios heredables en la función del genoma humano qué son extrínsecos a la secuencia
primaria de DNA.
TIPOS DE PCR:
➔ RQ-PCR: Real time / PCR cuantitativa.
◆ Detección y cuantificación de la señal emitida por un reporter fluorescente
que aumenta la cantidad de producto de PCR.
◆ Cuantificación de la expresión de genes o reordenamiento. Es más rápida y
menos laboriosa. Utiliza fluorescencia.
◆ Tipos de cuantificación:
● Cuantificación relativa: Expresión.
● Cuantificación absoluta: N° de copias.
◆ Reactivos fluorescentes:
● Agentes intercalantes (SYBR Green): Se pega y se mete en donde
detecta dobles cadenas y emite fotómetros.
○ Ventajas: Simple y barato. Fácil de usar. Sensibilidad 10 -6
Versátil.
○ Desventajas: Sobrestimación de la cantidad molde.
● Sondas de Hidrólisis (Taq Man): Son más específicas. Se diseñan, se
adhieren en donde va el primer. Fotomero en fase de extensión.
○ Ventajas: Especificidad. Librerias de cebadores y sondas
(Casas comerciales)
○ Desventajas: Diseño de cebador y sonda para genes no
estudiados.
● Sondas de hibridación.
● Sondas de horquilla.
➔ RT-PCR
◆ Detección de la expresión de un gen por presencia de ARNm.
◆ Enzima ARN retrotranscriptasa
◆ ADNm ➝ ADNc ➝ PCR + enzima taq polimerasa
➔ PCR ANIDADA:
◆ Amplificación de fragmentos grandes.
◆ Se aísla y se vuelve a poner en proceso de reacción para una selección más
específica a amplificar.
➔ PCR ALELO ESPECÍFICO
◆ Se basa en SNPs (single-nucleotide polymorfisms)
◆ Requiere conocimiento de una secuencia de ADN, incluyendo las diferencias
entre los alelos.
➔ PCR MÚLTIPLE
◆ Reacciones que consiguen amplificar al mismo tiempo y en un único tubo
diferentes secuencias diana.
◆ Aplicaciones:
● 1) Control de calidad de una muestra.
● 2) Amplificación de una translocación.
● 3) Amplificación de alelos específicos.
➔ PCR IN SITU
◆ Dentro de las células (ej.tumorales) para él dx de virus o agentes
intracelulares con fines diagnósticos.
Microarreglos
Son una nueva herramienta. Conjunto ordenado de genes en una superficie pequeña.
PROCEDIMIENTO:
➔ 1) Se fabrica una sonda para una región específica. Ocurre en cada pozo del chip.
➔ 2) Se coloca en ADN
➔ 3) Emite señal
Southern
Se utilizan sondas de ADNc para identificar qué bandas del gel contienen secuencias
complementarias de la sonda. Enzimas de restricción.
Northern
Muestra ➝ Extracción ARN ➝ Electroforesis ➝ Northern blot➝ RNA arreglado a membrana
con vr ➝ membrana hibridizada➝ visualización del etiquetado RNA con X-ray film.
Captura de hibridos
ETAPAS
➔ Desnaturalización (45 min)
➔ Hibridación con sondas de ARN (60 min)
➔ Captura de híbridos (60 min) anticuerpos detectan los híbridos (el primero se adhiere
al pozo y el segundo se adhiere a los híbridos y actúan el fluorosforo por un ag-ac.
➔ Detección (60 min)
➔ Lectura (15 min)
PROCESO
1. La muestra se va a desnaturalizar.
2. Se van a añadir las sondas de ARN, se baja la temperatura y se va a dar la
hibridación.
3. Viene la captura de híbridos que funciona como un antígeno.
4. Se añade el anticuerpo adherido a la pared del pocillo.
5. Se da la unión del anticuerpo primario con el secundario.
6. Se deja reposar y posteriormente se leen los resultados para obtener un diagnóstico.
DESVENTAJA VENTAJA
No es muy específica Sirve para la detección de VPH
Si la absorbancia es menor ➜ hay más híbridos (más color)
Si la absorbancia es mayor ➜ hay menos hibridos (menos color)
Hibridación genómica
Detección de enfermedades y cáncer
Se necesita una muestra control y una muestra del paciente, estos dos se introducen en un
chip con oligonucleótidos de cobertura genómica variable.
➔ Si se hibrida la muestra del paciente: hay problema
➔ Si se hibrida la de control: Está bien
➔ Si se hibridan ambas: Hay genes tanto buenos como malos.
c. Anticuerpos Monoclonales
d. Principios de terapia génica
Es el tratamiento o prevención de una enfermedad mediante la inserción de secuencias de
nucleótidos (ADN o ARN) en la célula.
➔ Propósito: Restablecer una función celular que ha sido abolida o defectuosa, para
introducir una nueva función o interferir en una ya existente.
➔ El desarrollo de la terapia génica se dirige a células SOMÁTICAS debido a que solo
afectaría al individuo y no a toda su descendencia.
➔ Elementos:
◆ Material genético a transferir: El gen terapéutico debe llevar la función que
ayuda a combatir la enfermedad.
● Los genes terapéuticos cancerígenos: bloquean las capacidades de
crecimiento, diseminación e invasión, angiogénesis y evasión del
Sistema inmunitario de las células cancerosas.
● Ej: Para crear tejido nuevo ➜ Gen del factor de crecimiento.
● Ej: Cáncer ➜ Eliminación de células neoplásicas o restricción del
crecimiento.
● EL GEN SIEMPRE VA ACOMPAÑADO DE UN PROMOTOR.
◆ Método de transferencia: Son los vectores.
◆ Tipo de célula objetivo.
Vectores no virales:
DNA “desnudo”: NO integración
Liposomas
j. Ética y regulación
La terapia génica está bajo la regulación del código de Nuremberg (1947) y la declaración
de Helsinki (1964) que estableció la principal etica de investigación sobre la vulnerabilidad y
el interés del paciente, así como el beneficio de la revisión independiente.
➔ Comites de etica:
◆ Comité asesor de ADN Recombinante de los EE.UU. (RAC)
◆ Comité Asesor de Terapia Génica del Reino Unido (GTAC)
◆ Panel Asesor de Investigación de Terapias Génicas de Australia (GTRAP)
*Terapia génica con células germinales está prohibida*