TINCION DE PAS

Consiste en oxidar los tejidos mediante el acido periódico para incrementar el numero de
grupos carbonilos (aldehídos o cetona) presentes en ellos, de forma que puedan ser
demostrados posteriormente mediante reactivo de Schiff.
Los carbohidratos contienen grupos carbonilos aislados, aproximadamente de uno por
molécula de monosacáridos.
Por esta razón es necesario oxidarlos con el fin de incrementar dichos grupos, que solo
pueden ser detectados por el reactivo de Schiff si se encuentran situados en carbonos
contiguos y delimitados por grupos alcohólicos o amino.

PROCEDIMIENTO
Preparación de reactivos:
1. Ácido peryódico al 0.5%:
0.5gr de ácido peryódico
100ml de agua destilada

2. Reactivo de Schiff:
 Llevar hasta ebullición el agua destilada
 Tomar 200ml de agua destilada
 Agregar 1gr de fuscina básica
 Mezclar
 Dejar enfriar a 50°C y filtrar
 Añadir 1gr de metabisulfito de sodio
 Dejar en reposo 24 hrs, en un frasco oscuro (la solución debe tomar un
color rosa pálido)
 Agregar 4gr de carbón activado (sirve como filtro y debe decolorarla)
 Envasar y guardar a 4°C

3. Baño de ácido sulfuroso:

5ml de ácido clorhídrico (HCl) 1N
6ml metabisulfito sódico 10%
100ml de agua destilada

4. Colorante de contrastes
Hematoxilina de Harris

TECNICA
1. Desparafinar e hidratar
2. Adicionar ácido peryódico al 0.5%, 5 min
3. Lavar con agua destilada
4. Agregar el reactivo de Schiff, 15 – 30 min
5. Aclarar en 3 baños de agua sulfurosa 2 min, cada uno
6. Lavar en agua corriente, 5 min
 7. Sumergir en hematoxilina de Harris de 30 a 60 seg
8. Lavar con agua corriente durante 5 min
9. Deshidratar, aclarar y montar

OTRA FORMA
Preparación del reactivo de Schiff:
Hervir el agua destilada y agregar fuscina básica, dejar enfriar y agregar metabisulfito de
sodio y 10ml de acido clorhídrico 1N. se envasa en un frasco oscuro y se deja madurar
por 24hrs. Agregar 4gr de carbón activado. Almacenar en refrigerador

TECNICA
1. Desparafinar e hidratar
2. Adicionar acido peryodico al 0.5%, 5 min
3. Lavar con agua destilada
4. Agregar el reactivo de Schiff, 20 min
5. Lavar con agua corriente
6. Sumergir en hematoxilina de Harris, 5 min
7. Lavar con agua corriente
8. Deshidratar, aclarar y montar

RESULTADOS
Material PAS+: rojo oscuro a magenta
 Polisacáridos simples: como el glucógeno y la célula
 Mucopolisacáridos neutros: se encuentran en el epitelio gástrico, en glándulas del
duodeno y en capsulas bacterianas, también en intestino y estómago
 Mucoproteínas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del árbol
respiratorio o bronquial, también la tiroglobulina que esta en el tiroides y la
hormona estimulante
 Glucoproteínas del suero, membrana basal y fibras de retícula
 Glucolípidos: como los gangliósidos y cerebrósidos

COMPUESTOS PAS-
Los mucopolisacáridos ácidos no pueden ser oxidados por el acido peryódico y por eso
son PAS-
USOS
Tejido conjuntivo, moco, glicocálix y lámina basal.
También puede usarse para ayudar en el diagnóstico de varias enfermedades:

 Glucogenosis (frente a otros trastornos de almacenamiento).

 Adenocarcinomas, que a menudo secretan mucinas neutras.
 Enfermedad del seno de Paget.1
 Sarcoma alveolar de las partes blandas.
  Tinción de macrófagos en la enfermedad de Whipple.2
 Puede usarse en diagnóstico de deficiencia de alfa-1 antitripsina si
los hepatocitos del hígado se tiñen positivamente.
 Los agregados de linfocitos PAS-positivos están presentes en la epidermis en
la Micosis fungoide y en el Síndrome de Sezary, llamados microabcesos
Pautrier.
 Sarcoma de Ewing.
 Eritroleucemia, una leucemia de los glóbulos rojos inmaduros, que se tiñen de
color fucsia brillante.
 Proteinosis alveolar pulmonar.
 Infección fúngica. Las paredes celulares de los hongos vivos se tiñen de
magenta.
 Usada para identificar el glicógeno en muestras de biopsias de pulmón de
lactantes con glicogenosis intersticial pulmonar (PIG).
 Se puede usar para resaltar inclusiones de lípidos super-reticulados
en Ceroidolipofuscinosis (NCL).
La tinción PAS también se usa para teñir la celulosa.
TINCIÓN DE FEULGEN
PASOS TECNICA DE FEULGEN

 Hidrolisis ácida: se introduce directamente el portaobjetos en una solución de HCl

6N durante 60 minutos a una temperatura de 25°
 Lavado de agua corriente durante un minuto, seguido de otros 2 lavados de un
minuto en agua destilada. Se agitan suavemente los portaobjetos con el fin de
eliminar la mayor cantidad de impurezas
 Tratamiento con e reactivo de Schiff durante una hora a una temperatura de 25°C
y en la oscuridad. Se procura que los portaobjetos tengan la menor cantidad de
agua posible al entrar en el reactivo de Schiff, pero evitando que se sequen.
Durante todo el proceso los portaobjetos son agitados suave y periódicamente.
 Lavado en baño sulfuroso durante un minuto a temperatura ambiente 2 veces
consecutivas para eliminar el exceso de colorante
 Lavado en agua corriente de 10 minutos de duración
 Deshidratación y montaje de las muestras para su estudio

CARACTERISTICAS DE LAS MUESTRAS QUE SE PUEDEN TEÑIR CON ESTA

TECNICA
El método de feulgen puede considerarse estequiométrico en donde es posible observar
una intensidad de coloración proporcional a la concentración de DNA
Los grupos aldehídos liberados por la hidrolisis de Feulgen son teñidos con reactivos de
Schiff
Opcionalmente, la muestra se puede contra teñir con Light Green SF amarillento
Los resultados son DNA (cromatina nuclear, cromosomas) teñido color fucsia y fondo
incoloro, en el caso de que se utilice una coloración de contraste como el Fast Green FCF
el fondo seria verde.

VENTAJAS
Las muestras fijadas se mantienen estables durante mucho tiempo, el material se
endurece, por lo que es fácil trabajar con él. Las enzimas tales como fosfatasa alcalina,
esterasas inespecíficas, esterasa y lipasa especifica permanecen activas después de la
fijación con formalina.

DESVENTAJAS
Investigaciones histoquímicas pueden llegar a ser difíciles cuando las enzimas y epítopes
son enmascarados. Sin embargo, el enmascaramiento puede ser parcialmente eliminado
por el lavado. El formaldehído puede causar problemas de salud, es alergizante y un
irritante químico.