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180
Marcel Sayol Quadres
MARCEL SAYOL
FUNDAMENTOS Y TÉCNICAS DE
ANALISIS BIOQUÍMICO
QUÍMICA CLÍNICA
CRÉDITO 4
Año 2005
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Definir los términos: ácido, base, base conjugada, ácido fuerte, ácido débil, base
fuerte, base débil y pH.
entre las células y está separado del compartimento intracelular por la membrana
Figura 6.1
Compartimento transcelular
Compartimento extracelular
Globular
(unos 2 litros)
Comartimento
intravascular
( 20 % del peso)
Plasmático
(unos 3 litros)
Compartimento intersticial
(15 % del peso)
Compartimento intracelular
(40 % del peso)
aparentemente se debería distribuir por igual en todos los compartimentos, pero esto
electrolitos, puesto que éstos no atraviesan libremente las membranas y por ello se
procesos osmóticos consúltese la obra citada del mismo autor en su unidad número
16).
Los cationes (iones con carga positiva) más importantes que circulan por el torrente
sanguíneo son: el sodio (Na+), el potasio (K+), el calcio (Ca2+), y el magnesio (Mg2+).
Los aniones (iones con carga negativa) séricos más importantes son: el cloro (Cl-), el
ion bicarbonato (HCO3-), el ion fosfórico (HPO42-), el ion sulfúrico (SO42-), así como
TABLA 6.1
Los iones provienen de diversas moléculas que al disociarse en medio acuoso ceden
de manera irregular por los distintos compartimentos corporales, de forma tal que
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Fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico. Química Clínica. 185
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pesar de esta diferencia la carga eléctrica total de cada compartimento resulta ser
neutra, hecho que implica que necesariamente exista el mismo número de cargas
positivas que de negativas, pero sin que ello signifique que este equilibrio se
eléctrica total es neutra, todas las cargas positivas (y todas las cargas negativas), están
formadas por distintos tipo de iones, pero existe el mismo número de positivos que
de negativos.
La distribución de los iones entre las células y el espacio extracelular se lleva a cabo
celular.
los cálculos por el hecho que 1 mEq de cualquier anión se combina con 1 mEq de
(S.I.).
1.3 Sodio
sitúa entre los valores de 136 y 145 mmol/L. El sodio tiene dos funciones
entrada de agua a la célula. Este fenómeno tiene mucha importancia desde el punto
de vista clínico puesto que una dieta rica en sodio tenderá a aumentar la osmolaridad
arterial.
Una persona adulta y sana que mantiene una dieta equilibrada consume
distal (TCD), en este último lugar mediante un control hormonal, (figura 6.2).
Aparato yuxtaglomerular
+ +
K H
Filtrado
TCP
TCD Figura 6.2
Glomérulo
+ -
Na Cl +
Na
Na+ H2 O
HCO-3
+ Túbulo
K+ K
+ colector
Ca 2+ Na
HPO42-
+
K
+
K
H2O +
Na
+
H
-
Lugar de acción Asa de Cl
de la aldosterona Henle Na+ Na
+
Lugar de acción de 2+
las fuerzas de Starling Ca
Lugar de acción
de la ANP
Lugar de acción
de la PTH
angiotensina-II así convertida, (que tiene una acción de unos 2 minutos), actúa
angiotensina puede ser inhibida por unos fármacos llamados inhibidores del
Péptido atrial natriurético. Otro factor que interviene en la regulación del sodio es
el llamado péptido atrial natriurético (PNA) que es una hormona que se produce
y agua.
presión hidrostática que existen en los túbulos contorneados renales, así como en
ortostatismo fundamentalmente.
Figura 6.3
Vasoconstricción
ECA directa
Renina
Aldosterona
ADH
Estimulan
Na+ (Cl - ) bajo en
mácula densa
Presión baja en
barorreceptores Na+
Sistema H2O
simpáti co
1.4 Potasio
tal que impulsan el sodio hacia el exterior celular y al potasio hacia el interior con
sentido que ésta aumentará la excreción urinaria de potasio mientras que absorberá
1.5 Cloro
está muy relacionado con el del sodio y como él, sus funciones fundamentales son el
de cloro serán por lo general paralelas a las de sodio. Cuando exista una
eléctricas puesto que se intercambia con el ion bicarbonato como se comentará más
adelante.
1.6 Bicarbonato
dióxido de carbono ya que éste se produce como resultado de los procesos catabólicos
de los tejidos y debe de eliminarse por constituir una molécula final del metabolismo.
disocia en HCO3- por una parte y H+ por otra que se podrán eliminar por la orina. Sin
1.7 Magnesio
El magnesio es el segundo ion intracelular más abundante después del potasio. Una
determinados enzimas. Existen muchos factores de regulación del magnesio que son
1.8 Fosfatos
1.9 Calcio
saber que en el tejido óseo el calcio se combina con el fósforo para formar una
Ca10(PO4)6(OH)2.
La concentración de calcio en sangre (calcemia), tiene mucho que ver con la actividad
El 40% del calcio plasmático se halla unido a proteínas (el 80 % con la albúmina), un
5-15 % forma complejos con otras sustancias como el citrato o el fosfato y un 50% se
halla en forma de iones libres (calcio iónico). Solamente la forma iónica es la activa
calcio total disminuye mientras que el iónico se mantiene normal y un paciente puede
tener una calcemia más baja de lo normal sin que presente ningún signo clínico de
proteínas y por lo tanto baja la cifra de calcio iónico pero se determina un calcio total
normal, pudiendo el enfermo presentar a pesar de ello, signos clínicos tales como
tetania *(6).
que 1 gramo de albúmina sérica se une aproximadamente con 0,8 mg de calcio, así el
La presencia de esta vitamina en el intestino delgado hace que se absorba mucho más
calcio que sin ella y además junto con la parathormona (PTH), actúa en el hueso
de la parte celular dentro de las primeras tres horas post-extracción para evitar las
fugas de potasio intracelular. Hay que tener en cuenta también que cualquier tipo de
Los métodos más habituales para la determinación del sodio y del potasio son la
no los describiremos aquí puesto que ya se hizo ampliamente en las unidades número
Existen diversos métodos para la cuantificación del cloro sanguíneo, entre ellos
donde los iones tiocianato son desplazados del mercurio por los iones cloro, en un
segundo paso, el tiocianato libre se combina con los iones férricos para formar
determinación del fosfato inorgánico se basa en que éste puede reaccionar con el
continuación se reduce en medio alcalino dando lugar a molibdeno de color azul que
puede ser suero u orina, teniendo en cuenta que el suero debe de separarse del
coágulo lo antes posible para evitar la liberación del fosfato de los hematíes. Es
importante tener en cuenta que las muestras con alto contenido en lípidos así como
nm.
Los métodos clásicos se basan en la precipitación del calcio con el oxalato (método
de cloranilato de calcio que se disuelve con una sustancia llamada EDTA (ácido
cuantifica espectrofotométricamente.
Una metodología para este último caso podría ser la siguiente: se mezcla la muestra
que contiene calcio con una solución de calceína en cantidad suficiente para que
fluorescencia común para la muestra y para una solución estándar de calcio (por
calcio mediante:
[Ca ]x =
[EGTA ]x · [Ca ]
[EGTA ]p p
También se pueden utilizar otros colorantes como por ejemplo el llamado arsenazo-
ambiente (18-26°C) sin que se estropee. Utilizar el Arsenazo-III implica realizar una
técnica de punto final con lecturas a 650 nm o a 600 nm. Un posible inconveniente
potencialmente carcinogénica.
absorción atómica.
3.1 Hipernatremia
ser debida tanto al aumento de sodio como a la pérdida de agua. Las causas más
TABLA 6.2
Causas de hipernatremia
Vómito
Cuando las pérdidas de agua son superiores a las de sodio el enfermo presenta signos
mucosas, este tipo de pérdidas puede ser debido a causas gastrointestinales, así
antidiurética (ADH), y con ello los túbulos colectores del riñón no reabsorben agua
a una insuficiencia renal que hace que a pesar de existir una cantidad adecuada de
NaCl o de NaHCO3
en estos casos.
3.2 Hiponatremia
cuando existe una pérdida del contenido total de sodio en el organismo, la segunda se
TABLA 6.3
Causas de hiponatremia
Uso de diuréticos
Enfermedad de Addison
Verdadera
Gastrointestinales
SIADH
generalmente autoinmune.
causa muy frecuente de SIADH son las tumoraciones malignas con producción
asintomáticas.
3.3 Hiperpotasemia
aguda o crónica, pero también existen otras situaciones que producen aumento del
que son aquellos que eliminan agua y sodio pero no potasio. También algunos
plasmático.
cerrar la mano antes de la extracción, maniobra que puede aumentar el potasio hasta
2,5 mEq/L por encima de su valor real. Otra causa frecuente es la hemólisis de la
3.4Hipopotasemia
Se produce cuando el potasio sérico se sitúa por debajo de los 3,5 mEq/L. Una causa
tiene una capacidad muy limitada para evitar las pérdidas renales. Otras causas son el
de regaliz puesto que contiene ácido glicirrínico con una actividad semejante a la
También es interesante resaltar que algunas pomadas de uso tópico que contienen 9-
laxantes que además constituye una situación que el enfermo no suele reconocer.
espacio intracelular.
hipopotasemia (niveles entre 2 y 2,5 mEq/L) aparece debilidad muscular que puede
enfermos con insuficiencia cardíaca que estén tomando digitálicos *(10), puesto que
3.5 Hipercalcemia
tipo hematológico que producen secreción de una sustancia llamada PTHrP (proteína
PTH.
úlcera péptica, pero que hoy en día es muy poco frecuente. La hipercalcemia también
3.6Hipocalcemia
Las hipocalcemias pueden ser debidas a múltiples causas, de las más frecuentes cabe
ansiedad que provoca una alcalosis y con ello una redistribución del calcio plasmático
libre hacia el calcio ligado a proteínas. De esta manera disminuye el calcio iónico
(forma activa) pero sin que disminuya el calcio total. Otras causas son el
secreción de PTH y a su vez, una resistencia del hueso a la acción de la misma PTH.
4.1 Introducción
y para ello es necesario equilibrar las sustancias ácidas con las básicas. El
metabolismo en general.
Recordemos, tal como se ha expuesto en la tercera parte del libro citado del mismo
autor, que un ácido es una sustancia que cede iones hidrógeno a la solución en la que
disuelve un ácido en agua, el ion negativo (A-) que se disocia del hidrógeno se llama
base conjugada puesto que ésta puede aceptar H+ y por tanto actuar como base.
Todos los ácidos y todas las bases se disocian en agua, unas lo hacen en su totalidad
(ácidos o bases fuertes), y otras lo hacen parcialmente (ácidos y bases débiles). Así
pues, un ácido fuerte tiene poca afinidad hacia el hidrógeno y por ese motivo se
disocia con facilidad en el agua cediendo H+, en cambio un ácido débil tiene gran
producto de las concentraciones de ambos iones es: [H+] · [OH-] = 10-14 moles/L el
Cualquier solución que tuviera un pH>7 resultará ser de carácter alcalino y cualquier
Las soluciones amortiguadoras están formadas por un ácido débil y una sal de dicho
márgenes muy estrechos a pesar de que se adicionen ácidos o bases a la misma, (todo
(anión) y del ácido sin disociar, interviniendo además el pKa que se define como: pKa
= - log Ka, siendo Ka la constante de ionización del ácido y sus valores vienen
tabulados para muchas clases de ácidos. En cuanto al significado del pKa , éste es el
siguiente:
pH = pK a + log
[A ] −
[AH ]
una base fuerte a la solución, el pH cambia muy poco por ser una función logarítmica,
Los principales buffers o sistemas amortiguadores del organismo son los siguientes:
del dióxido de carbono que tiene el valor de 0,031 *(12). Sabiendo que la
tendremos:
24
pH = 6,1 + log = 7,4
0,031· 40
que es el pH plasmático fisiológico. Obsérvese que el cociente entre las
aproximadamente de 20:1.
unos 20.000 mEq de ácido carbónico además de unos 50 o 100 mEq de ácidos
reabsorción de iones Na+ que antes estaban unidos al HCO3- que se había
Por otra parte la generación de nuevo bicarbonato que tiene lugar sobretodo en
Figura 6.4
Circulación
Luz del túbulo
sanguínea
- +
HCO 3 + Na+ Na Na+
Túbulo proximal
H+ H+ + HCO-3 -
HCO3
H2CO3 H 2CO3
+ 2- + +
Na + HPO4 + Na+ Na Na
H + HCO3- HCO-3
+ +
H
CO2 + H2O
Túbulo distal
- + + +
Cl + Na Na Na
+ + - -
H H + HCO3 HCO3
H CO3
2
NH 3 Glutamina
- +
Cl + NH4
(Amonio urinario)
Figura 6.5
Oxihemoglobina Desoxihemoglobina
FeO2 Fe + O2
H H
C C
+
N N N NH
+
+ H
HC C HC C
Hemoglobina Hemoglobina
(resto de la proteína) (resto de la proteína)
[HPO ] 2−
= 6 ,8 + log
[H PO ]
4
pH −
2 4
amoniaco (NH3) forman ion amonio (NH4+), el amoniaco actúa como una base
fuerte y el amonio como un ácido débil. El pKa del sistema tiene el valor de 9 y
formando sales de amonio como por ejemplo el cloruro amónico (NH4Cl) antes
mencionado
5.1 Introducción
Hay que ser precavidos para tomar muestras de sangre que posteriormente servirán
para la determinación del pH. Las muestras pueden ser de sangre venosa o arterial
pero para su toma será necesario asegurarse que el paciente esté relajado, ya que la
CO2 y de O2, se debe de utilizar una jeringa especial de plástico o de vidrio, que se
con presión negativa, por lo tanto no debe de utilizarse un “tubo de vacío” ya que ésta
sangre se mezcla con la heparina haciendo girar la jeringa entre las palmas de la
Para la toma de sangre venosa es también necesario tomar una serie de precauciones.
torniquete y se libera éste en seguida que la sangre empiece a fluir. Por otra parte el
paciente no debe cerrar el puño para evitar que la actividad muscular disminuya la
pO2 y el pH.
suelen realizar en los lactantes los cuales se les debe precalentar la zona con una
toallita húmeda. Hay que tener en cuenta que la primera gota contiene líquidos de
los tejidos y debe de rechazarse. Otra precaución es el correcto sellado de los tubos
electrodo de referencia está constituido por un metal y una sal en contacto con
una solución que contiene el mismo ion y que genera un potencial constante con el
disponen de una membrana que solo es permeable al gas a determinar, (figura 6.6).
Figura 6.6
Membrana semipermeable
+ - + -
H + HCO 3 H + HCO 3
Electrodo de referencia
H2CO3 H2CO3
Electrodo de medición
alcanza el equilibrio con el CO2 de la muestra que por difusión atraviesa la membrana
K=
[H ] [HCO ]+
3
−
[H 2CO3 ]
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K=
[H ] [HCO ]
+
3
−
0,031 · pCO2
tomando logaritmos en la anterior ecuación tendremos:
CO2, podremos decir que el valor log[HCO3-] se mantiene constante, al igual que lo
hacen los valores de pK y de log 0,031, entonces si agrupamos en un solo valor (k)
pH = k – log pCO2
de donde se desprende que el pH guarda una relación lineal con el log de la presión
parcial de CO2, de ahí que si el electrodo se calibra con una disolución de calibración
Los electrodos que generalmente se utilizan son del tipo electrodo de vidrio para el de
goma de silicona que resultan ser permeables al CO2 disuelto pero impermeables a los
consiguen una respuesta del 99% del equilibrio de CO2 en un tiempo de unos 120
segundos, mientras que las membranas de goma de silicona suelen tener un espesor
pCO2 de tal manera que previamente se debe mezclar la muestra con una solución
ácida. La adición de ácido fuerza la reacción hacia la producción de CO2 hasta que
[HCO3-] ≅ [CO2]total
-
e
O2 O2
AgCl - Ag 0
-
Cl
Solución tampón
O2 + 4e- → 2O -2
Los dos iones de oxígeno (2O -2) se combinan con 4H+ para formar agua y los
6.1 Introducción
hidrogeniones.
Cualquier alteración de uno de estos dos componentes (pCO2 o [HCO3-]), implica una
variación del otro en el sentido de intentar compensar el cambio producido, así pues
ante una acidosis metabólica, el organismo se defiende con una alcalosis respiratoria
viceversa. Existe sin embargo una excepción: la alcalosis respiratoria crónica, en ésta
Existen también los denominados trastornos mixtos que ocurren cuando coexisten
simultáneamente las dos anomalías, por ejemplo una acidosis metabólica y una
caso, de presentar unos valores normales de pH, pCO2 y [HCO3-], y además suele
acontecer en casos de uremia que provoca la alcalosis metabólica por los importantes
puesto que son situaciones que pueden desviar el pH hasta niveles peligrosos.
negativo) que es necesario añadir a 1 litro de sangre para volver al pH normal de 7,4 y
[HCO ] = 20
3
−
[H 2 CO 3 ]
ya que corresponde a un pH de 7,4.
conocer los siguientes datos en sangre: pH, [HCO3-], pCO2 y el hiato aniónico.
Los tres primeros datos procedentes de una misma analítica deben cumplir la
relación siguiente que nos permite comprobar la veracidad de los mismos y evitar
posibles errores:
[H ] = 24 · [HCO
+ pCO
]
2
−
3
El hiato aniónico representa la diferencia entre los aniones y los cationes que no se
miden. En efecto, por una parte se cumple que in vivo, la concentración total de
aniones debe ser igual a la concentración total de cationes, y por otra parte no todos
Entre los aniones no medidos (llamados también iones indeterminados), cabe citar la
albúmina, las proteínas alfa y beta, así como el fosfato, el sulfato, el lactato y otros
aniones orgánicos como por ejemplo los cetoácidos. Entre los cationes
El valor normal del hiato aniónico se sitúa entre 8 y 16 mEq/L (valor medio de 12).
por aumento del ácido láctico (acidosis láctica), o también en la intoxicación por
como también en los estados de inanición. Una disminución del hiato aniónico se da
El hiato aniónico resulta también útil para el control de calidad de los resultados de
cálculo del hiato aniónico debe situarse entre los límites de la normalidad, de no ser
___________________________________________________
APÉNDICE
tensión arterial. Está formado por tres elementos: 1) las células yuxtaglomerulares
depósito de ésta. Estas células son sensibles a las variaciones de presión sanguínea
y el túbulo contorneado distal se ponen en contacto. Estas células son sensibles a los
cambios de composición del líquido que se encuentra dentro del TCD (función
estimula a la mácula densa. 3) Las células del lacis: llamadas también células de
*(2) La renina es una enzima proteolítica con un peso molecular de unos 40.000
llamadas células epitelioides. El efecto de la renina no es por acción directa sino que
*(4) Las catecolaminas son sustancias sintetizadas a partir del aminoácido tirosina
adrenalina o epinefrina.
*(10) Los digitálicos son un conjunto de fármacos que se obtienen de las hojas de
unas plantas llamadas Digitalis purpurea y Digitalis lanata o bien de las semillas de
*(11) Los valores de pH límite compatibles con la vida se sitúan entre 6,8 y 7,8.
*(12) La ley de Henry nos informa de este hecho diciendo que: “la cantidad de gas
ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACIÓN
a) 15 %
b) 20 %
c) 70-80 %
d) 1-2 %
a) un anión divalente
b) un catión divalente
c) un anión monovalente
d) un catión monovalente
a) sodio
b) potasio
c) calcio
d) cloro
5) Uno de los siguientes métodos es menos útil para la determinación del calcio
sérico:
a) Cresoftaleín-complexona
c) Arsenazo-III
d) nefelometría
6) Una de las siguientes patologías no es causada por pérdidas de agua mayores que
pérdidas de sodio:
b) sudación copiosa
c) hiperaldosteronismo primario
d) membrana de tetrafluoroetilén
a) membrana de polipropileno
sistemas
ácido fosfórico (ácido triprótico) que tiene un papel importante como sistema
amortiguador fisiológico
de amonio
c) los límites de pH plasmático compatibles con la vida oscilan entre 6,8 y 7,8
psicosis
PROBLEMAS
mmHg.
3) Calcular el hiato aniónico a partir de los siguientes datos analíticos: sodio: 132
si existe coherencia entre ellos: pH = 7,4 ; pCO2 = 41 torr ; CO2 total = 25 mmol/L;
7) El resultado de una analítica muestra entre otros datos, los siguientes: albúmina:
6,2 g/dL ; calcio total: 6,4 mg/dL. Calcular la concentración ajustada de calcio.