TÉCNICA

FISH
Ana Cervera, Anafé Espinosa y Naydeline López
 ¿QUÉ ES?
El FISH o Hibridación in situ fluorescente es una técnica que detecta
secuencias de ácidos nucleicos en células o tejidos por medio de una sonda
marcada con un fluorocromo.
 SONDAS
Una sonda es un fragmento de ADN de un pequeño tamaño utilizado en la
biología molecular como herramienta para detectar la presencia de
secuencias complementarias al ADN o ARN diana u objetivo.

Existen 4 tipos de sondas (FISH):

Sondas centroméricas
Sondas de secuencia única específicas de un cromosoma
Sondas teloméricas
Sondas de pintado del cromosoma completo
SONDAS
FUNDAMENTO
Basado en la capacidad de los ácidos nucleicos
para hibridarse entre sí.

Existe una secuencia de ADN o ARN complementaria

a otra secuencia, que son unidas a través de puentes
de hidrógeno

Puentes formados entre las bases adenina- timina

(DNA) o uracilo (RNA) y citosina- guanina (DNA y
RNA).
¿QUÉ DETECTA?
Alteraciones numéricas y estructurales
Cromosomas marcadores
Recuento de células totales
 PROCEDIMIENTO

Un protocolo de la técnica de FISH incluye 4 pasos:

1. Fijación y permeabilización de la muestra
2. Hibridación
3. Lavado
4. Detección de las células marcadas a través del
microscopio de epifluorescencia o confocal
 APLICACIONES
SEGUIMIENTO DE TRASPLANTES

microorganismos presentes en muestras tanto ambientales como clínicas. Se estima

que únicamente el 0,3 % de bacterias del suelo y < 0,1 % de agua marina son
cultivables; por eso, uno de los usos de FISH es el recuento microscópico de células
totales, el cual supera al número de bacterias que logran crecer en un medio de cultivo;
además permite apreciar la variación filogenética y geográfica de las bacterias
presentes en una comunidad microbiana.
 APLICACIONES
DIAGNÓSTICO PRENATAL CITOGÉNICO
Es realizado en células de líquido amniótico y establece un nexo entre los
genes y los cromosomas sin necesidad de realizar cultivos celulares.

Permite la detección de anomalías cromosómicas en células en interfase

Identificación del síndrome de Down.
Es complementada mediante el examen cromosómico de las células
fetales.
 APLICACIONES
IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS
Se realiza un recuento microscópico de células totales, que supera al número de bacterias que
logran crecer en un medio de cultivo.

Pueden ser muestras tanto ambientales como clínicas.

Se estima que únicamente el 0,3 % de bacterias del suelo y < 0,1 % de agua marina son
cultivables
Permite apreciar la variación filogenética y geográfica de las bacterias presentes en una
comunidad microbiana.
VARIACIONES DE LA TÉCNICA
 FISH en Hebra, Fiber FISH ó Halo
FISH
Se aplica sobre hebras de ADN desproteinizadas (es decir, desprovistas de las histonas encargadas de
su compactación). Se extiende linealmente y de forma mecánica en un porta el fragmento de
cromosoma a estudiar. Se observarán puntos discontinuos por rotura de la hebra de ADN.

Ventajas:
Permite detectar pequeñas reorganizaciones porque admite una mayor resolución

Usos principales:
Puede ser usada para detectar deleciones en clones y para estimar huecos en los proyectos genoma.
 FISH on a Chip
Esta nueva variante de la técnica FISH, ha surgido como una forma de automatizar los
estudios de muestras por el método convencional. La preparación de muestras basada en
chips miniaturiza toda la herramienta de laboratorio en un dispositivo único con un método
de microfabricación y llega a sustituir el costoso equipo utilizado para el laboratorio biológico
y el campo clínico.
 FISH on a Chip
Ventajas:
Se usa menor cantidad de reactivos
Menos tiempo de análisis
Menos dificultades en la muestra
Menor costo
No requieren de método de hilado
Desventajas:
Puede conducir al desarrollo de una prueba de
autoanálisis casero lo que puede llevar a una
interpretación incorrecta de resultados.
Usos principales:
Enfermedades neuronales (Alzheimer en su
estadio temprano)
Anomalías cromosómicas (Aneuploidías)
 Multicolor Fish (M-FISH) ó SKY
Permite la visualización de 23 pares de cromosomas a la
vez teñidos con diferentes sondas. Se utiliza con frecuencia
para el estudio de células tumorales.

Ventajas:
Determinar rápidamente variaciones en los
cromosomas y sus orígenes, sean pequeños o
fragmentados y el material cromosómico que
contienen

Desventajas:
Precio muy elevado
Menor definición que la técnica FISH tradicional
 FISH INVERSO
1. Recortar un fragmento de cromosoma o dicho cromosoma marcador de un porta donde se encuentran
todos los cromosomas fijados. (teñidos con Giemsa o con una sonda, esto sirve para marcar ese ADN y
convertirlo en una nueva sonda).
2. Se ponen los cromosomas de un donante sin anomalías (generalmente de sus linfocitos y de un varón
para contemplar todas las opciones, es decir, tener los cromosomas X e Y) en un porta y se añade la sonda
preparada.
3. Se espera a ver que hay hibridación de la sonda (cromosoma marcador) con alguno de los cromosomas
del donante por complementariedad en su secuencia. Así, se puede determinar que ese cromosoma
marcador procede del cromosoma con el que se hibrida.
4. Una vez identificado, el cromosoma marcador pasaría a ser llamado un cromosoma derivativo.

Ventajas:
Tiene la peculiaridad de ser el ADN problema el que se marca

Usos principales:
Determinar la procedencia de un cromosoma marcador.
 VENTAJAS

Puede ser realizado Tiene gran

en metafases con sensibilidad y Es una técnica rápida
núcleos en interfase especificidad
 VENTAJAS

Se puede hacer uso de

Combina la precisión de
material congelado, material
la genética molecular
incluido en parafina y material
con la información visual
citológico para realizar la
de la microscopía
técnica
 DESVENTAJAS

No se pueden
detectar demasiadas El costo económico
Autofluorescencia
alteraciones al elevado

mismo tiempo
 DESVENTAJAS

Pérdida de Bajo contenido de Especificidad de la

fluorescencia ARNr sonda