Cuestionario 3

1. ¿A qué se denomina técnicas de biología molecular?

Son todas las técnicas de laboratorio que se utilizan para aislar o extraerlo ADN en alta
pureza, para visualizar estado, cortarlo y pegarlo, amplificar una región en una enorme
cantidad de moléculas, corte de una determinada región con enzimas de restricción para
ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de restricción que significa:
diferencias en los tamaños de los fragmentos de restricción debido a polimorfismos en el
ADN entre otras2.

2. Describa los principales tipos de electroforesis.

La electroforesis es la técnica por la cual se separan las biomoléculas en disolución
,sometidas a un campo eléctrico. Esta técnica es fundamentalmente analítica, aunque
también se puede realizar con fines preparativos2. En esta técnica lo que sucede es que
cada molécula se desplaza por efecto del campo, de manera que alcanza una velocidad
constante para equilibrar la fuerza con la resistencia impuesta por el medio que se
desplaza.

3 tipos de electroforesis:

a) De frente móvil: los componentes de la muestra están presentes en toda la

disolución y se determina ópticamente la posición del frente de avance o frontera
con el disolvente4.

b) Zonal: la muestra se aplica como una mancha y sus componentes migran a través
de un disolvente, utilizando además un medio que da soporte a éste. El único
objetivo de la técnica es separar los componentes de la muestra.

c) Continua: la muestra se aplica también en una zona, pero se suministra

continuamente a lo largo del proceso5

3. ¿Qué nuevas técnicas de aplicación existen para la determinación de ácidos

nucleicos?

 Reacción en cadena de la polimerasa (RCP)

Hay nuevos estudios desarrollando nuevas técnicas moleculares de tipificación basadas

en RCP, que han dado un gran avance en la evolución del estudio de las enfermedades
infecciosas por medios de estudios epidemiológicos moleculares, que tienen como
objetivo determinar la relación clonal que existe entre varios aislados en una misma
especie;Por medio de esta técnica se pueden amplificar las secuencias de ADN
polimórficas. Entonces de esta manera los métodos genotípicos amplifican regiones in
vitro específicas de ADN para emplear secuencias que delimitan la zona de
amplificación; Así, a partir de una copia de la región a amplificar se adquieren millones
de copias que posibilitan su detección y reflejan la presencia de la región de ADN en la
muestra a analizar. De esta manera transformación actúan varias proteínas que
cooperan en la síntesis de nuevas hebras de ADN a partir de otra que funciona como
molde4.

 Secuenciación del genoma

La secuenciación del genoma es la que determina la secuencia completa de ADN en el

genoma de una persona; Este consiste en determinar el orden de las bases Adenina,
Citosina, Guanina y Timina en un fragmento de ADN. Mediante esta técnica se logra
obtener secuencias hasta 500 bases aproximadamente. Todas estas bases son
ensambladas a un genoma de referencia que secuencia un genoma completo4.

 Secuencia paralela, masiva o de nueva generación (NGS)

La NGS permite realizar secuencia masiva y paralela de millones de fragmentos del ADN
y/o ARN presente en la muestra, con el empleo de tecnología de punta, a muy bajo costo
y con un muy alto rendimiento, por lo que se pudo amplificar un genoma completo en un
solo día5. Permite establecer el orden de los nucleótidos presentes en el ADN o ARN
para su estudio.

 Pirosecuencia

Se caracteriza por la secuencia por síntesis de ADN con detección en tiempo real,se
realiza para la identificación de bases individuales o secuencias cortas de ácidos
nucleicos en posiciones predeterminadas, por medio del uso de fosfato durante la
incorporación de los nucleótidos a la cadena de ADN, seguido de una serie de reacciones
enzimáticas5.

 Hibridación de sondas de ADN

La hibridación de sondas es el análisis en muestras para detectar la presencia de ácidos

nucleicos , de manera que realiza una combinación anti paralela de estas con una
molécula de doble cadena. Sus técnicas permiten detectar una molécula diana partiendo
de una sonda complementaria a ella. Es utilizada para el diagnóstico de enfermedades,
estudio de perfiles de expresión génica, la identificación de microorganismos patógenos,
localización de genes en cromosomas o de ARNm en tejidos in situ5.

 RAPD (Polimorfismo amplificado aleatorio ADN)

Conociada como polimorfismo de producto amplificado al azar, es una técnica que
emplea marcadores moleculares para amplificación por RCP de secuencias cortas de
ADN polimórfico empleando un cebador de secuencia corta (10 a 12 pares de bases –
pb). Al ser una técnica basada en la RCP, requiere control sobre ciertos factores que
pueden influir directamente en el trabajo de la técnica como la integridad de la cadena
molde, los dNTPs, TaqDNA polimerasa, tiempo de extensión, ciclos & temperatura de
hibridación.5

 RFLP (Polimorfismo de Longitud de Fragmento de Restricción)

La RFLP también conocida como fragmentos de restricción de longitud polimórfica; Es el

resultante de la variación de una secuencia de ADN reconocida por las enzimas de
restricción usadas para cortar secuencias de ADN en lugares conocidos. Esta técnica es
empleada para reconocer marcadores en mapas genéticos. Este método es de obtención
rápida de resultados, bajo costo y baja especificidad.

Referencia Bibliografía

1 Luque Cabrera, J., & Herráez Sanchez, A. (2006). Texto ilustrado de biología
molecular e ingeniería genética: conceptos, técnicas y aplicaciones en ciencias de la
salud. Elsevier,

2Iglesias,G. (2005). TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR. Desde Mendel hasta las

moléculas. Recuperado 5 Marzo 2019, a partir de https://genmolecular.com/tecnicas-de-
biologia-molecular/
3Herráez,
A. (2009). Electroforesis de proteínas y de ácidos nucleicos. Biomodel.uah.es.
Recuperado 5 Marzo 2019, a partir de http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm
4Angarita Merchán, M., Torres Caicedo, M., & Díaz Torres, A. (2017). Técnicas de
Biología Molecular en el desarrollo de la investigación. Revisión de la
literatura. Scielo.sld.cu. Recuperado 5 Marzo 2019, a partir de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1729519X2017000500012
5Laboratorio de Genética Clínica S.L. (2004). Prueba de ADN post-mortem sobre restos
cadavéricos. LabGenetics. Recuperado 6 March 2019, a partir de
https://www.labgenetics.es/pruebas-de-adn-e-identificacion-genetica/pruebas-de-
paternidad-y-parentesco/prueba-de-paternidad-post-mortem-sobre-restos-cadavericos/