GUÍA DE PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA VETERINARIA I 2015

PRACTICA N° 01

RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

I.INTRODUCCION:

Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de
Microbiología, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos
asegurar que los valores que indican son los reales.

En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado

en un laboratorio de Microbiología que es muy variado y depende fundamentalmente de las
líneas de trabajo a las que está dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo
equipamiento en un centro de investigación con un alto grado de especialización.
Por tanto, aquí sólo nos referiremos al material básico que se suele encontrar en un
laboratorio mínimamente dotado

II. OBJETIVOS:

 Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de

microbiología veteriniaria.
 Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y
materiales usados en la sala de praqcticas de microbiología veterinaria.
 Instruir al estudiante en las reglas básicas de comportamiento y seguridad dentro de
la sala de practicas de microbiología veterinaria.

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III. MARCO TEÓRICO:

A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas

reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos
como los agentes físicos, químicos y mecánicos.

1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.

2. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón.
3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar
cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los
desinfectantes más habituales para este propósito son la lejía y el etanol 70-96°.
4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean
corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.
5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se
manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,
ojos...
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realización de la práctica eben ser apartados del lugar de trabajo.
7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes
adecuados. Estos recipientes serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe
tirar nada por el fregadero o la basura común
8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones
propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo
que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la práctica, evitar
la presencia de sustancias inflamables y revisar periódicamente las
conducciones.

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10. En las prácticas en que se trabaje con luz ultravioleta debe tenerse en cuenta
que la exposición a este tipo de radiación es peligrosa, ya que tiene poder
mutagénico. Por tanto, nunca se debe mirar directamente la fuente de luz. Es
conveniente el uso de gafas, guantes y máscaras.
11. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.
12. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de
microorganismos...) se comunicará inmediatamente al instructor

B. EQUIPOS:

1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y

aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podríamos
percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeños
para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliación.
PARTE MECÁNICA
 Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
 Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas
que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.
  Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.
 Revólver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
 Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el
microscopio para trasladarlo de lugar.

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 Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque

de la muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.
 Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque precidso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es
el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al
ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

PARTE ÓPTICA
 Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.
  Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revólver.
  Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo
  Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está
constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los
rayos luminosos hacia la platina.
   Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o
cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.
   Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es
necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en
el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para
regular la intensidad de la luz.

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2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscópico tiene dos lentes
objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio
compuesto; ambas características le permiten producir imágenes tridimensionales. Las
partes de este microscopio son prácticamente las mismas que las discutidas para el
microscopio compuesto

 El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo

general forma de Y o bien es rectangular
 El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan
los oculares. 
 El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija. 
 La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.  
 La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos
laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. 
 Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda. 
 El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación. 
 El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparación.

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Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para

precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido
dedióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior necesarios
para el desarrollo de un cultivo microbiano.
4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,
productos biológicos y patológicos, así como mantener la supervivencia de
algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10
5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70° C y son indispensables
para conservar determinados productos biológicos (sueros, microorganimos).
Nos permite darles un tiempo mas prolongado de almacenamiento.
6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrifuga para separar
estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los globulos rojos en la
sangre.
7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza para mezclar líquidos o
preparar disoluciones y suspensiones, a travez de vibraciones, ideal para agitar
tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma
intercambiable.
8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado
para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en
unaplaca de agar. Los primeros contadores sólo eran superficies iluminadas
sobre las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con
un rotulador en la superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el
recuento manua
9. BALANZA: Se denomina con el término de balanza al instrumento que sirve y
se utiliza para medir o pesar masas.
10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal
para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero
inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de
oxígeno.

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11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la

esterilización.
12. EQUIPO DE SIEMBRA
a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de
diámetro
b. Asa de kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrón que termina en
argolla, utilizado para realizar siembras por estria.
c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrón que termina en
punta, que se utiliza para realizar las siembras por puncion o picadura.
d. Espatula o sas de drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una
forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminación.

EQUIPO DE ESTERILIZACIÓN:
1. HORNO ELÉCTRICO: La esterilización puede llevarse a cabo mediante calor
seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destrucción
microbiana se produce por oxidación de los componentes celulares y
desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia
de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposición. 180°C -200°C(1 hora)
2. AUTOCLAVE: El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es
el agente esterilizante más frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye
eficazmente los microorganismos por desnaturalización de proteínas y enzimas,
y desestabilización de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121°C X
15 min y a presión de 15 libras.
3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos
físicamente o adsorbidos por los filtros con un tamaño de poro adecuado. El
tamaño de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 µm
aunque más recientemente se tiende a la utilización de poros de 0.1 µm
a. Filtro de seitz
b. Matraz de kitasato
c. Boma de vacio:

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4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios

de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentración de
hidrogeniones.
5. DESTRILADOR ELÉCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,
mediante procesos controlados de vaporización y enfriamiento. Al aplicar
energía térmica al agua en fase líquida, luego de un proceso de calentamiento, se
convierte en vapor de agua. Esto permite separar las moléculas de agua, de las
moléculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o
diluidos. El vapor de agua se recolecta y

MATERERIALES DE VIDRIO:

1. PROBETA: Este material permite medir volúmenes, las hay de

vidrio y de plástico y de diferentes capacidades
2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas
formas que se emplean en el laboratorio para calentar líquidos citando hay
peligro de pérdida de vaporación, o para titular en el análisis cuantitativa.
3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y
angosto se usa para preparar soluciones.
4. VASO DE PRECIPITACIÓN:
5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plástico de forma cilíndrica
compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos
sólidos cuando se desea disponer de una gran superficie
6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los líquidos con
mayor exactitud.
7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el
volumen de los líquidos.
8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeñas
cantidades de sustancias líquidas o sólidas y preparación de cultivos. Estos
pueden ser grandes medianos y pequeños.

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9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se

oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm
10. PORTAOBJETOS: son láminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados
que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados
para realizar preparaciones microscópicas coloreadas o sin colorear.
11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaños variados, de
forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar
la observación microscópica del material que se desea examinar.
12. EMBUDO: Sirve para trasvasar líquido de un recipiente a otro, evitando que se
derrame líquido, también se utiliza en operaciones de filtración.
13. TRÍPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y
recipientes en observación, o para poner estos al fuego y aumentar su
temperatura.
MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:

1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,

factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos

2. BATERIAS DE COLORACIÓN DE GRAM: Los colorantes que lo componen

son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.

3. BATERIA DE COLORACIÓN ACIDO RESISTENTE: La batería esta

compuesto por: fucsina básica fenolada, alcohol acido y azul de metileno.

4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del

microscopio óptico.

5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, además se usa para

realizar pruebas bioquímicas por ejemplo la prueba de la catalasa

6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para

identificar las especies bacterianas.

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MATERIAL FUNGIBLE:

1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,
para llevarlos al proceso de esterilización por calor húmedo.

2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.

3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.

4. JABON CARBÓLICO

5. PAPEL TOALLA

IV. MATERIALES Y METODOS:

1. El estudiante hará un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se
usan, así como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior
debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.
2. El profesor hará una demostración experimental de la forma como se llenan las
pipetas

V.RESULTADOS

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VI. CONCLUCIONES

CUESTIONARIO

1. ¿Establezca la diferencia entre los siguientes términos?

 Esterilización:

 Desinfección:

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 Antisepsia:

 Higienización:

 Germicida:

 Asepsia:

 Bactericida:

2. ¿Cuál es el método de esterilización mas efectivo? Mencione las características.

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3. ¿Cuál es la función de los siguientes equipos y coloque las partes en las

correspondientes flechas?

4. ¿Cuál
es la

diferencia entre la congeladora y refrigeradora?

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5. ¿Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?

6. ¿Cuál es la función del microscopio y describa los diferentes objetivos?

7. ¿Cuantos placas Petri observamos según su tamaño?

8. ¿Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?

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9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?

10. ¿Defina el término siembra y medio de cultivo?

VII. BIBLIOGRAFIA:

1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Practicas de microbiología.

2. TORRES Miguel. 1996. Manual practico de Bacteriologia medica.
3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.

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PRACTICA N°02

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

I. INTRODUCCION:

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

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El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.

Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes
básicos y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades varían según
el tipo de microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.

II. OBJETIVOS:

 Preparar algunos medios de cultivo, líquidos o sólidos, siguiendo las instrucciones

proporcionadas

 Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de

microorganismos, aplicando los conceptos básicos de nutrición y preparación de los
mismos.

III. MARCO TEORICO

Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Composicion general de un
medio de cultivo:

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 Fuente de Carbono:
Este elemento aporta a los microorganismos esqueletos carbonados, y de su catabolismo
le brindan energía para su crecimiento y multiplicación. Puede ser suministrado a través
de diferentes fuentes, como hidratos de carbono (glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa,
dextrosa, xilosa, manita, almidón, etc.).

 Fuente de Nitrógeno:
Se pueden suministrar en forma de NO3K, (NH4)2SO4.
Muchos medios de cultivo presentan en un solo compuesto las fuentes de nitrógeno y
carbono; como aquellos que combinan peptonas, aminoácidos, algunas proteínas como
la caseína, etc. El más utilizado en microbiología es el extracto de levadura.

 Sales minerales:
Estas son fuente de macroelementos (K, Na, S, P, Ca, Fe) y de microelementos (Mn, Zn,
Co, Cu, Ni).

 Factores de crecimiento:
Son aquellos elementos esenciales para el desarrollo de los microorganismos, ya que
estos no lo pueden sintetizar a partir de compuestos más simples. Ej.: vitaminas,
coenzimas, aminoácidos. Para hacer selectivo un medio de cultivo se puede proceder de
la siguiente manera:

a. Aportando los compuestos nutritivos que un determinado microorganismo necesita y

no lo que otros necesitan.
b. Inhibiendo el desarrollo de algunos microorganismos no deseados, a través del pH,
que limite su desarrollo, o incorporando sustancias inhibidoras, como por ejemplo
colorantes (eosina, azul de metileno), metales pesados (bismuto), agentes
antimicrobianos (pimaricina, gentamicina, cloranfenicol), sustancias químicas (sales en
concentraciones que inhiben el desarrollo).
 Indicadores de pH:

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Cumplen la función de visualizar fácilmente si en un medio hay o no crecimiento o si

acidifica o basifica el medio. Ej: azul de bromotimol, rojo neutro, rojo de fenol, púrpura
de bromocresol, etc.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. POR SU ORIGEN:

a. Medios sintéticos o indefinidos: son aquellos que son preparados a partir de

sustancias naturales (animales o vegetales); de composición rigurosamente
constante. Su composición química exacta se desconoce, ya que son el producto de
realizar infusiones y extractos de materiales complejos. Ejemplo la leche, jugos
vegetales, sangre.

b. Medios complejos o definidos: Se obtienen disolviendo en agua destilada

cantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas,
inorgánicas. Agar nutritivo, agar manitol salado,

2. POR SU CONSISTENCIA

a. Medios líquidos: Es un medio de cultivo fluido, libre de agar que contiene

productos cárnicos o proteicos (peptonas o extractos), con adición de algún tampón
para mantener el pH adecuado. Ejemplo: caldo nutritivo, caldo de tioglicolato, agua
peptonada, etc. Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos
las células que se producen en cada división continúan su vida independientemente
formándose una suspensión de células libres.

b. Medios solidos: Es un medio para verter o en tubos de ensayo, con un contenido de

agar del 1-2%.
Cuando una célula microbiana se siembra sobre un medio de cultivo sólido, ésta se
desarrolla multiplicándose varias veces hasta formar una estructura macroscópica

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denominada colonia. Así, se puede definir una colonia como el desarrollo aislado de
una cepa microbiana, la cual crece hasta alcanzar un tamaño determinado que se
mide en milímetros. Una colonia está formada por aproximadamente 10 8 células
(clones de la célula original que dio origen a la colonia). Su aspecto macroscópico
es característico de cada especie, siempre y cuando se siembre en el mismo medio y
se incube bajo las mismas condiciones ambientales. La caracterización de colonias
se hace en base a los siguientes criterios:

c. Medios semisólidos: Cuando contiene un 0.5% de agar. Útiles para la observación del
metabolismo, así como la propagación y obtención de cultivos de bacterias anaerobias

3. POR SU OBJETIVO:

a. Medios de transporte: Son medios que deben mantener viables a los

microorganismos presentes en una muestra antes de que se procesen, los conserva

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evitando su multiplicación y muerte. Mayormente son medios de consistencia

liquida o semisólidos.

 .Medio de Stuart: permite la conservación y el transporte e un gran número de

microorganismos patógenos, como Neisseria gonorrhoeae, Heamophilus
influenzae, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus sp., Salmonella sp.,
Shigellas sp., etc Se utiliza para transporte muestras de materiales purulentos
 Medio de Cary Blair: El medio de transporte Cary-Blair, es semisólido debido a
la baja concentración de agar. Tiene un mínimo aporte de nutrientes que permite
la recuperación de los microorganismos sin que haya replicación, es para la
recolección, transporte y conservación, especialmente para muestras fecales. Se
asegura la viabilidad de Vibrio cholerae durante el tiempo de transporte y de
donde la bacteria pueda ser recuperada mediante coprocultivo.
 Medio de amies: es una modificación del medio de Cary Blair, Neisseria sp.,
Haemophilus sp., Corynebacterium sp., Streptococcus pyogenes, Streptococcus
pneumoniae, Enterobacterias, sp., etc. permite la supervivencia de organismos
incluso hasta 48 horas., Algunos microorganismos pueden resistir en el medio
durante tres o más días, sin embargo, es conveniente que la muestra llegue al
laboratorio antes de las 24 horas.
b. Medios de enriquecimiento: Son medios liquidos que por su composición química
favorecen o permiten la multiplicación de, inhibiendo parcialmente a otras.
Despues de la incubación se debe efectuar subcultivos de estos medios en medios
sólidos, para obtener colonias aisladas. Ejemplo:
 Caldo de selenito: Se usa para enriquecimiento de miembros del grupo
salmonella, cuando se aíslan de materiales infecciosos como heces, orina, etc. El
selenito inhibe a las coliformes, enterococos y estafilococos, no así a las
salmonellas, proteus, shigella y pseudomonas
 Caldo de tetrationato: Caldo utilizado para el enriquecimiento de salmonella.

c. Medios de enriquecimiento mejorados: Son los medios comunes, a los que se les
añaden ciertos productos, a manera de un suplemento nutritivo(sangre, suero,

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glucosa, hemoglobina, etc.) que permiten el aporte de factores de crecimiento o

sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento, en bacterias
exigentes. Ejemplo: Agar sangre, agar pata glucosa, etc.

d. Medios de aislamiento: Son medios de consistencia sólida, sirven para poder

observar a las colonias aisladas unas de otras. Se subclasifican en :

d.1. Medios no selectivos: O comunes, son medios cuya única finalidad es el

crecimiento de microorganismos poco frecuentes. Pueden ser liquidos, de
enriquecimiento, para conseguir gran cantidad de bacterias a través del inoculo
efectuado. Tambien pueden ser solidos de aislamiento. Aquí desarrollan la mayor
parte de la flora bacteriana. Ejemplo:
 Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el
aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a
requerimientos nutritivos, No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.
Características del medio: ámbar claro a medio ligeramente opalescente
 Agar tripticasa soya
 Agar infusión cerebro corazón
 Agar muller hinton: Es un medio que sirve para realizar las pruebas de
sensibilidad bacteriana.
 Agar recuento en placa: Medio de cultivo recomendado para el recuento de
bacterias aeró- bicas en aguas, aguas residuales, productos lácteos y otros
alimentos. También es recomendado como medio general para determinar
poblaciones microbianas.
d.2. Medios selectivos: Son aquellos que permiten seleccionar un tipo de
microorganismos. En el laboratorio se emplean muchos medios selectivos.

 Medios para el desarrollo de gram negativas: Contienen sustancias, reactivos

que inhiben el desarrollo de las gram positivas, así tenemos a los medios:

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+Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram
negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite
diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en
el mismo.

+Agar EMB: Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos

Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

+Agar S-S: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp.

y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros
materiales en los cuales se sospeche su presencia. Es un medio de cultivo
selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el
verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en
el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formación de sulfuro de hierro.

+Agar XLD: El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio

selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de
patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella. La
degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y
sacarosa) genera la producción de ácido haciendo virar el indicador (rojo
fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es
prácticamente fermentada por todas las enterobacterias con excepción de los
microorganismos pertenecientes al género Shigella.

 Medios selectivos para gram positivas:

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+Agar Manitol salado: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el

aislamiento y diferenciación de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento
de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos
cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria

+Agar SPS (Sulfato polimixina sulfadiazina): Utilizado para aislar al clostridium

 Medios especiales:
+Agar Brucella: Medio recomendado para el aislamiento y cultivo de Brucella spp.
Con la adición de sangre, el medio se usa para el aislamiento y cultivo de Brucella
spp. y de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes, a
partir de una gran variedad de muestras clínicas. También es útil para observar
reacciones de hemólisis.

+Agar Sauboroud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y

conservación de hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de
levaduras.

+Agar TCSC: Contiene: tiosulfito, citrato, sales biliares y sacarosa. Indicador: azul
de Bromotimol Vibrionaceaes

e. Medios bioquímicos: Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son

empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos
Ensayos que ponen de manifiesto características metabólicas de los
microorganismos. Ejmplos: Agar KIA, agar citrato, agar manitol salado, agar TSI,
Caldo peptonado, etc.

IV. MATERIALES Y METODOS:

IV.1. MATERIALES

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 Matraz de Erlynmeyer.
 Probeta graduada.
 Balanza de precisión.
 Medios de cultivo deshidratado.
 Mechero bunzen.
 Agua destilada.
 Autoclave.
 Estufa a 37°C.

IV.2. METODOLOGIA (PROCEDIMIENTO) Haga el desarrollo usted

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V. RESULTADOS

VI. CONCLUIONES

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CUESTIONARIO

1. ¿Defina los términos?

 Colonia

 Cepa

 Especie

2. ¿Qué es el agar?

3. ¿Qué es medio de cultivo y cultivo?

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4. ¿Enumere las 6 diferencias entre los medios selectivos y no selectivos?

5. ¿Ponga 4 ejemplos de medios de cultivos selectivos y fundamente por que?

6. ¿Mencione que medio de cultivo no se debe esteriliza?

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7. ¿Por qué utilizamos agua destilada para la preparación de los medios de

cultivo?

8. ¿Qué son los medios bioquímicos y ponga 3 ejemplos?

9. ¿Qué medio de cultivo nos sirve para la identificación de la Escherichia coli?

10. ¿Con que medio vemos la fermentación de la lactosa?

VII. BIBLIOGRAFIA:

 MENDO Rubio, Manuel.2014. Manual de laboratorio “Medios de cultivo en

microbiología”, sexta edición, editorial Ebisa. Lima-Perú.

 ROJAS Triviño, Alberto. 2011. Conceptos y practica de microbiología general.

https://www.google.com.pe/search?
q=conceptos+y+practica+de+microbiologia+general&oq=conceptos+y+practica+

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de+microbiologia+general&aqs=chrome..69i57j69i65j5j69i59j69i61j69i60.7567j0
j9&sourceid=chrome&es_sm=122&ie=UTF-8. 02 de abril del 2015.

 AQUIHUATI Ramos, Maria de los Angeles y PERES Chavela, Maria de Lourdes.

2004. Manual de prácticas del laboratorio de microbiología general.
http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL
_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf. 03 de
abril del 2015

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