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GUA DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA VETERINARIA I

PRACTICA N 01
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO
I.INTRODUCCION:
Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de
Microbiologa, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos
asegurar que los valores que indican son los reales.
En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado
en un laboratorio de Microbiologa que es muy variado y depende fundamentalmente de las
lneas de trabajo a las que est dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo
equipamiento en un centro de investigacin con un alto grado de especializacin.
Por tanto, aqu slo nos referiremos al material bsico que se suele encontrar en un
laboratorio mnimamente dotado
II. OBJETIVOS:

Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de

microbiologa veteriniaria.
Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y

materiales usados en la sala de practicas de microbiologa veterinaria.


Instruir al estudiante en las reglas bsicas de comportamiento y seguridad dentro de
la sala de practicas de microbiologa veterinaria.

III. MARCO TERICO:

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A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas


reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos
como los agentes fsicos, qumicos y mecnicos.
1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.
2. Al iniciar y finalizar las prcticas, el estudiante se lavar las manos con agua y
3.

jabn.
El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar
cada prctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los

4.

desinfectantes ms habituales para este propsito son la leja y el etanol 70-96.


Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean

corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.


5. Durante las prcticas est prohibido comer, beber y fumar. Cuando se
manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,
ojos...
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realizacin de la prctica deben ser apartados del lugar de trabajo.
7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes
adecuados. Estos recipientes sern esterilizados posteriormente. Nunca se debe
tirar nada por el fregadero o la basura comn
8. Bajo ningn concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones
propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo
que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la prctica, evitar
la presencia de sustancias inflamables y revisar peridicamente las
conducciones.
10. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.
11. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de
microorganismos...) se comunicar inmediatamente al instructor
B. EQUIPOS:
1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y
aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podramos

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percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeos


para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliacin.
PARTE MECNICA

Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en l se encuentra la fuente de


iluminacin.

Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se


encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas
que ayudan a conocer qu parte de la muestra se est observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.

Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.

Revlver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.

Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el
microscopio para trasladarlo de lugar.

Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque


de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.

Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la


muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Tambin
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es
el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al
ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

PARTE PTICA

Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se resea en la parte superior de los mismos

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(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarn en esta prctica).


Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.

Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revlver.

Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo

Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin est


constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva los
rayos luminosos hacia la platina.

Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o


cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.

Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es


necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en
el pie del microscopio. Adems, el transformador dispone de un potencimetro para
regular la intensidad de la luz.

2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscpico tiene dos lentes


objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio
compuesto; ambas caractersticas le permiten producir imgenes tridimensionales. Las
partes de este microscopio son prcticamente las mismas que las discutidas para el
microscopio compuesto

El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo

general forma de Y o bien es rectangular


El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan
los oculares.

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El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en

posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija.


La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo

inferior se adapta al pie.


La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos

laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.


Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a

izquierda.
El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos

movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.


El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin.
Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,


la humedad y otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido de
dixido de carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior necesarios para
el desarrollo de un cultivo microbiano.
4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,
productos biolgicos y patolgicos, as como mantener la supervivencia de
algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10

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5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70 C y son indispensables


para conservar determinados productos biolgicos (sueros, microorganismos).
Nos permite darles un tiempo mas prolongado de almacenamiento.
6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrifuga para separar
estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los globulos rojos en la
sangre.
7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza

para mezclar

lquidos

preparar disoluciones y suspensiones, a travez de vibraciones, ideal para agitar


tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma
intercambiable.
8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado
para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una
placa de agar. Los primeros contadores slo eran superficies iluminadas sobre
las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con un rotulador en la
superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el recuento manual
9. BALANZA: Se denomina con el trmino de balanza al instrumento que sirve y
se utiliza para medir o pesar masas.
10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal
para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero
inoxidable se pueden instalar las bolsas de generacin de atmsfera libre de
oxgeno.
11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la
esterilizacin.
12. EQUIPO DE SIEMBRA
a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de
dimetro
b. Asa de kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrn que termina en
argolla, utilizado para realizar siembras por estria.
c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrn que termina en
punta, que se utiliza para realizar las siembras por puncion o picadura.
d. Espatula o asa de drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una
forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminacin.
EQUIPO DE ESTERILIZACIN:

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1. HORNO ELCTRICO: La esterilizacin puede llevarse a cabo mediante calor


seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destruccin
microbiana se produce por oxidacin de los componentes celulares y
desnaturalizacin de protenas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia
de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposicin. 180C -200C(1 hora)
2. AUTOCLAVE: El calor hmedo por medio de utilizacin de vapor de agua es el
agente esterilizante ms frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye
eficazmente los microorganismos por desnaturalizacin de protenas y enzimas,
y desestabilizacin de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121C X
15 min y a presin de 15 libras.
3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos
fsicamente o adsorbidos por los filtros con un tamao de poro adecuado. El
tamao de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 m
aunque ms recientemente se tiende a la utilizacin de poros de 0.1 m
a. Filtro de seitz
b. Matraz de kitasato
c. Bomba de vacio:
4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios
de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentracin de
hidrogeniones.
5. DESTRILADOR ELCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,
mediante procesos controlados de vaporizacin y enfriamiento. Al aplicar
energa trmica al agua en fase lquida, luego de un proceso de calentamiento, se
convierte en vapor de agua. Esto permite separar las molculas de agua, de las
molculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o
diluidos. El vapor de agua se recolecta y
MATERERIALES DE VIDRIO:

1. PROBETA: Este material

permite

medir volmenes, las hay de

vidrio y de plstico y de diferentes capacidades

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2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas


formas que se emplean en el laboratorio para calentar lquidos citando hay
peligro de prdida de vaporacin, o para titular en el anlisis cuantitativa.
3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y
angosto se usa para preparar soluciones.
4. VASO DE PRECIPITACIN:
5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plstico de forma cilndrica
compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos
slidos cuando se desea disponer de una gran superficie
6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los lquidos con
mayor exactitud.
7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el
volumen de los lquidos.
8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeas
cantidades de sustancias lquidas o slidas y preparacin de cultivos. Estos
pueden ser grandes medianos y pequeos.
9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se
oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm
10. PORTAOBJETOS: son lminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados
que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados
para realizar preparaciones microscpicas coloreadas o sin colorear.
11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaos variados, de
forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar
la observacin microscpica del material que se desea examinar.
12. EMBUDO: Sirve para trasvasar lquido de un recipiente a otro, evitando que se
derrame lquido, tambin se utiliza en operaciones de filtracin.
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13. TRPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y
recipientes en observacin, o para poner estos al fuego y aumentar su
temperatura.
MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:
1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos
2. BATERIAS DE COLORACIN DE GRAM: Los colorantes que lo componen
son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.
3. BATERIA DE COLORACIN ACIDO RESISTENTE: La batera esta
compuesto por: fucsina bsica fenolada, alcohol acido y azul de metileno.
4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del
microscopio ptico.
5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, adems se usa para
realizar pruebas bioqumicas por ejemplo la prueba de la catalasa
6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para
identificar las especies bacterianas.

MATERIAL FUNGIBLE:
1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,
para llevarlos al proceso de esterilizacin por calor hmedo.
2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.
3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.
4. JABON CARBLICO
5. PAPEL TOALLA
IV. MATERIALES Y METODOS:
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1. El estudiante har un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se


usan, as como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior
debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.
2. El profesor har una demostracin experimental de la forma como se llenan las
pipetas
V.RESULTADOS

VI. CONCLUCIONES

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CUESTIONARIO

1. Establezca la diferencia entre los siguientes trminos?

Esterilizacin:

Desinfeccin:

Antisepsia:

Higienizacin:

Germicida:

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Asepsia:

Bactericida:

2. Cul es el mtodo de esterilizacin mas efectivo? Mencione las caractersticas.

3. Cul es la funcin de los siguientes equipos y coloque las partes en las


correspondientes flechas?

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4.
es

diferencia entre la congeladora y refrigeradora?

5. Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?

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Cul
la

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6. Cul es la funcin del microscopio y describa los diferentes objetivos?

7. Cuantos placas Petri observamos segn su tamao?

8. Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?

9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?

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10. Defina el trmino siembra y medio de cultivo?

VII. BIBLIOGRAFIA:

1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Practicas de microbiologa.


2. TORRES Miguel. 1996. Manual practico de Bacteriologia medica.
3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.

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PRACTICA N02
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
I.

INTRODUCCION:

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es


observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
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cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes
bsicos y factores fsicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades varan segn
el tipo de microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.
II. OBJETIVOS:

Preparar algunos medios de cultivo, lquidos o slidos, siguiendo las instrucciones


proporcionadas

Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de


microorganismos, aplicando los conceptos bsicos de nutricin y preparacin de los
mismos.

III. MARCO TEORICO


Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Composicion general de un
medio de cultivo:

Fuente de Carbono:

Este elemento aporta a los microorganismos esqueletos carbonados, y de su catabolismo


le brindan energa para su crecimiento y multiplicacin. Puede ser suministrado a travs
de diferentes fuentes, como hidratos de carbono (glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa,
dextrosa, xilosa, manita, almidn, etc.).

Fuente de Nitrgeno:

Se pueden suministrar en forma de NO3K, (NH4)2SO4.

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Muchos medios de cultivo presentan en un solo compuesto las fuentes de nitrgeno y


carbono; como aquellos que combinan peptonas, aminocidos, algunas protenas como
la casena, etc. El ms utilizado en microbiologa es el extracto de levadura.

Sales minerales:

Estas son fuente de macroelementos (K, Na, S, P, Ca, Fe) y de microelementos (Mn, Zn,
Co, Cu, Ni).

Factores de crecimiento:

Son aquellos elementos esenciales para el desarrollo de los microorganismos, ya que


estos no lo pueden sintetizar a partir de compuestos ms simples. Ej.: vitaminas,
coenzimas, aminocidos. Para hacer selectivo un medio de cultivo se puede proceder de
la siguiente manera:

a. Aportando los compuestos nutritivos que un determinado microorganismo necesita y


no lo que otros necesitan.
b. Inhibiendo el desarrollo de algunos microorganismos no deseados, a travs del pH,
que limite su desarrollo, o incorporando sustancias inhibidoras, como por ejemplo
colorantes

(eosina,

azul

de

metileno),

metales

pesados

(bismuto),

agentes

antimicrobianos (pimaricina, gentamicina, cloranfenicol), sustancias qumicas (sales en


concentraciones que inhiben el desarrollo).

Indicadores de pH:

Cumplen la funcin de visualizar fcilmente si en un medio hay o no crecimiento o si


acidifica o basifica el medio. Ej: azul de bromotimol, rojo neutro, rojo de fenol, prpura
de bromocresol, etc.
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
1. POR SU ORIGEN:

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a. Medios sintticos o indefinidos: son aquellos que son preparados a partir de


sustancias naturales (animales o vegetales); de composicin rigurosamente
constante. Su composicin qumica exacta se desconoce, ya que son el producto de
realizar infusiones y extractos de materiales complejos. Ejemplo la leche, jugos
vegetales, sangre.
b. Medios complejos o definidos: Se obtienen disolviendo en agua destilada
cantidades concretas de distintas sustancias qumicas puras, orgnicas, inorgnicas.
Agar nutritivo, agar manitol salado,
2. POR SU CONSISTENCIA
a. Medios lquidos: Es un medio de cultivo fluido, libre de agar que contiene
productos crnicos o proteicos (peptonas o extractos), con adicin de algn tampn
para mantener el pH adecuado. Ejemplo: caldo nutritivo, caldo de tioglicolato, agua
peptonada, etc. Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos
las clulas que se producen en cada divisin continan su vida independientemente
formndose una suspensin de clulas libres.
b. Medios solidos: Es un medio para verter o en tubos de ensayo, con un contenido de
agar del 1-2%.
Cuando una clula microbiana se siembra sobre un medio de cultivo slido, sta se
desarrolla multiplicndose varias veces hasta formar una estructura macroscpica
denominada colonia. As, se puede definir una colonia como el desarrollo aislado de
una cepa microbiana, la cual crece hasta alcanzar un tamao determinado que se
mide en milmetros. Una colonia est formada por aproximadamente 10 8 clulas
(clones de la clula original que dio origen a la colonia). Su aspecto macroscpico
es caracterstico de cada especie, siempre y cuando se siembre en el mismo medio y
se incube bajo las mismas condiciones ambientales. La caracterizacin de colonias
se hace en base a los siguientes criterios:

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c. Medios semislidos: Cuando contiene un 0.5% de agar. tiles para la observacin del
metabolismo, as como la propagacin y obtencin de cultivos de bacterias anaerobias
3. POR SU OBJETIVO:
a. Medios de transporte: Son medios que deben mantener viables a los
microorganismos presentes en una muestra antes de que se procesen, los conserva
evitando su multiplicacin y muerte. Mayormente son medios de consistencia
liquida o semislidos.

.Medio de Stuart: permite la conservacin y el transporte e un gran nmero de


microorganismos patgenos, como Neisseria gonorrhoeae, Heamophilus
influenzae, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus sp., Salmonella sp.,
Shigellas sp., etc Se utiliza para transporte muestras de materiales purulentos

Medio de Cary Blair: El medio de transporte Cary-Blair, es semislido debido a


la baja concentracin de agar. Tiene un mnimo aporte de nutrientes que permite
la recuperacin de los microorganismos sin que haya replicacin, es para la
recoleccin, transporte y conservacin, especialmente para muestras fecales. Se
asegura la viabilidad de Vibrio cholerae durante el tiempo de transporte y de
donde la bacteria pueda ser recuperada mediante coprocultivo.

Medio de amies: es una modificacin del medio de Cary Blair, Neisseria sp.,
Haemophilus sp., Corynebacterium sp., Streptococcus pyogenes, Streptococcus
pneumoniae, Enterobacterias, sp., etc. permite la supervivencia de organismos
incluso hasta 48 horas., Algunos microorganismos pueden resistir en el medio
durante tres o ms das, sin embargo, es conveniente que la muestra llegue al
laboratorio antes de las 24 horas.

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b. Medios de enriquecimiento: Son medios liquidos que por su composicin qumica


favorecen o permiten la multiplicacin de, inhibiendo parcialmente a otras.
Despues de la incubacin se debe efectuar subcultivos de estos medios en medios
slidos, para obtener colonias aisladas. Ejemplo:
Caldo de selenito: Se usa para enriquecimiento de miembros del grupo
salmonella, cuando se aslan de materiales infecciosos como heces, orina, etc. El
selenito inhibe a las coliformes, enterococos y estafilococos, no as a las

salmonellas, proteus, shigella y pseudomonas


Caldo de tetrationato: Caldo utilizado para el enriquecimiento de salmonella.

c. Medios de enriquecimiento mejorados: Son los medios comunes, a los que se les
aaden ciertos productos, a manera de un suplemento nutritivo(sangre, suero,
glucosa, hemoglobina, etc.) que permiten el aporte de factores de crecimiento o
sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento, en bacterias
exigentes. Ejemplo: Agar sangre, agar pata glucosa, etc.
d. Medios de aislamiento: Son medios de consistencia slida, sirven para poder
observar a las colonias aisladas unas de otras. Se subclasifican en :
d.1. Medios no selectivos: O comunes, son medios cuya nica finalidad es el
crecimiento de microorganismos poco frecuentes. Pueden ser liquidos, de
enriquecimiento, para conseguir gran cantidad de bacterias a travs del inoculo
efectuado. Tambien pueden ser solidos de aislamiento. Aqu desarrollan la mayor
parte de la flora bacteriana. Ejemplo:
Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el
aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a
requerimientos nutritivos, No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.

Caractersticas del medio: mbar claro a medio ligeramente opalescente


Agar tripticasa soya
Agar infusin cerebro corazn
Agar muller hinton: Es un medio que sirve para realizar las pruebas de

sensibilidad bacteriana.
Agar recuento en placa: Medio de cultivo recomendado para el recuento de
bacterias aer- bicas en aguas, aguas residuales, productos lcteos y otros

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alimentos. Tambin es recomendado como medio general para determinar


poblaciones microbianas.
d.2. Medios selectivos: Son aquellos que permiten seleccionar un tipo de
microorganismos. En el laboratorio se emplean muchos medios selectivos.

Medios para el desarrollo de gram negativas: Contienen sustancias, reactivos


que inhiben el desarrollo de las gram positivas, as tenemos a los medios:
+Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite
diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en
el mismo.
+Agar EMB: Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
+Agar S-S: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp.
y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros
materiales en los cuales se sospeche su presencia. Es un medio de cultivo
selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el
verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en
el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
+Agar XLD: El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio
selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
patgenos entricos Gram negativos, especialmente del gnero Shigella. La
degradacin de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y

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sacarosa) genera la produccin de cido haciendo virar el indicador (rojo


fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es
prcticamente fermentada por todas las enterobacterias con excepcin de los
microorganismos pertenecientes al gnero Shigella.

Medios selectivos para gram positivas:


+Agar Manitol salado: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento
de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos
cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria
+Agar SPS (Sulfato polimixina sulfadiazina): Utilizado para aislar al clostridium

Medios especiales:
+Agar Brucella: Medio recomendado para el aislamiento y cultivo de Brucella spp.
Con la adicin de sangre, el medio se usa para el aislamiento y cultivo de Brucella
spp. y de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes, a
partir de una gran variedad de muestras clnicas. Tambin es til para observar
reacciones de hemlisis.
+Agar Sauboroud: Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y
conservacin de hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de
levaduras.
+Agar TCSC: Contiene: tiosulfito, citrato, sales biliares y sacarosa. Indicador: azul
de Bromotimol Vibrionaceaes

e. Medios bioqumicos: Determinan la actividad metablica de una cepa pura. Son


empleadas principalmente la identificacin y clasificacin de bacterias y hongos
Ensayos

que

ponen

de

manifiesto

caractersticas

metablicas

de

los

microorganismos. Ejmplos: Agar KIA, agar citrato, agar manitol salado, agar TSI,
Caldo peptonado, etc.

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IV. MATERIALES Y METODOS:


IV.1.

MATERIALES

Matraz de Erlynmeyer.
Probeta graduada.
Balanza de precisin.
Medios de cultivo deshidratado.
Mechero bunzen.
Agua destilada.
Autoclave.
Estufa a 37C.

IV.2.

METODOLOGIA (PROCEDIMIENTO) Haga el desarrollo usted

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V. RESULTADOS

VI. CONCLUIONES

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CUESTIONARIO
1. Defina los trminos?

Colonia

Cepa

Especie

2. Qu es el agar?

3. Qu es medio de cultivo y cultivo?

4. Enumere las 6 diferencias entre los medios selectivos y no selectivos?

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5. Ponga 4 ejemplos de medios de cultivos selectivos y fundamente por que?

6. Mencione que medio de cultivo no se debe esteriliza?

7. Por qu utilizamos agua destilada para la preparacin de los medios de


cultivo?

8. Qu son los medios bioqumicos y ponga 3 ejemplos?

9. Qu medio de cultivo nos sirve para la identificacin de la Escherichia coli?

10. Con que medio vemos la fermentacin de la lactosa?


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VII. BIBLIOGRAFIA:

MENDO Rubio, Manuel.2014. Manual de laboratorio Medios de cultivo en


microbiologa, sexta edicin, editorial Ebisa. Lima-Per.

ROJAS Trivio, Alberto. 2011. Conceptos y practica de microbiologa general.


https://www.google.com.pe/search?
q=conceptos+y+practica+de+microbiologia+general&oq=conceptos+y+practica+
de+microbiologia+general&aqs=chrome..69i57j69i65j5j69i59j69i61j69i60.7567j0
j9&sourceid=chrome&es_sm=122&ie=UTF-8. 02 de abril del 2015.

AQUIHUATI Ramos, Maria de los Angeles y PERES Chavela, Maria de Lourdes.


2004.

Manual

de

prcticas

del

laboratorio

de

microbiologa

general.

http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_
RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf.
abril del 2015

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03

de

GUA DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA VETERINARIA I

PRACTICA N03
TECNICAS DE SIEMBRA
I.

INTRODUCCION:
EnMicrobiologaseentiendecomosiembraelprocesomedianteelcualsellevauna
porcindeunapoblacindemicroorganismos,denominadaentoncesinculo,deun
cultivocrecidoaunmedionutritivoparasucrecimiento.Todoesteprocesohayque
llevarloacaboconinstrumentosymediospreviamenteesterilizadosysiguiendolas
instrucciones de los monitores de prcticas. La principal advertencia consiste en
trabajar siempre prximos a la llama del mechero que, debido a las corrientes de
conveccin verticales que genera, es capaz de crear unambiente estril enla zona
inmediatamentealrededorydebajodelallama.
Comoinstrumentoportainculosmsfrecuenteseutilizaelasadesiembra,conelque
sepuedetomarinculoapartirdecoloniasodemediolquido,debidoaquemantiene
un pequeo volumen de agua por tensin superficial. Para depositar el inculo en
lquidobastaconintroducirelextremoenelmedioyagitarligeramente.Sobreslido
hayquehacerunrecorridolargosobrelasuperficiesalvoenelcasodelmedioTSI,en
el que tambin hay que inocular picando en profundidad para observar reacciones
metablicasenanaerobiosis.Avecesseutilizanpipetasparatransportarvolmenes

II.

grandesdeinculoscomoenlaprcticadecrecimientobacteriano.
OBJETIVOS:
: qu el alumno realice algunas de las tcnicas de cultivo

utilizadas en el laboratorio de bacteriologa: estras, picadura y


agitacin
III.

MARCO TEORICO:

En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el


cual se lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) de un
cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento.
IV.
V.
VI.

VII.

MATERIALES Y METODOS:
RESULTADOS:
CONCLUCIONES:
BIBLIOGRAFIA:

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