UNIVERSIDAD

NACIONAL DE
CAJAMARCA
Norte de la Universidad Peruana

EAPIAC
MICROSCOPIA

CURSO:
Microbiologa
DOCENTE:
GISELLA. F. PEREZ FLOREZ

ALUMNO:
JARA SAGAY MAKELVIN

CELENDIN-CAJAMARCA

INTRODUCCION
Para todos los investigadores , estudiantes y personal interesado en la ciencias
biolgicos , Es fundamental el conocimiento y manejo adecuado de equipo dude de
magnificacin como los microscopios Simples, compuestos binoculares, electrnicos
y estereoscpicos ; Ya que estos equipos son parte fundamental del trabajo de campo
y laboratorio de microbiologa , Virologa en ciencias al fin.
Los dos principios fundamentales de los microscopios son poder de resolucin y
aumento y magnificacin.
Encuentre mientras menos de la distancia que puede medirse entre dos puntos en un
campo microscpico mayores el poder de resolucin.
La capacidad del microscopio depende del tipo de luz que se emplea.

Los

microscopios de los permiten resolucin de objetos de tamao mayor a la mitad de

longitud de onda De la luz utilizada como portando los microscopios pticos que se
utilizan un lugar visible En (la luz visible se encuentra desde violeta 390 nm; al rojo
780), De 500 nm. No permite resolver objetos separados por distancia interiores
Asilo, 25 u (igual 250 nanmetros) Entre menor sea longitud de onda de luz empleada
como mayor poder de resolucin logra un microscopio En, entre mayor apertura
numrica tengan mayor poder de resolucin tendr el ojo humano, En comparacin
slo puede resolver. Separados por un 25 100uTiln promedio del dara resoluciones
250 veces menor que el microscopio ptico.

OBJETIVOS
Al finalizar el presente laboratorio el estudiante estar en capacidad de
reconocer las diferentes partes del microscopio y utilizarlas correctamente.
Tambin conocer los diferentes instrumentos y materiales usados en el
laboratorio de microbiologa.
MARCO TERICO
EL MICROSCOPIO
Un microscopio simple no es ms que una lente biconvexa, es decir solo tiene
un sistema de lentes, pero el microscopio compuesto emplea dos sistemas de
lentes separados, consiguiendo con ellos mayores aumentos. Al ser el
microscopio compuesto un instrumento fundamental en microbiologa, el
conocer los principios bsicos de la microscopa y la pericia en el empleo y la
manipulacin de este instrumento, son requisitos imprescindibles para casi
cualquier estudio en esta ciencia.
DESCRIPCIN DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO
PARTE MECNICA
Pie base o soporte basal: Es una pieza maciza y pesada para asegurar la
estabilidad del aparato y servir de soporte a sus dems partes.
Platina: Es una pieza metlica redonda o cuadrada, donde se colocan
las preparaciones; tiene en el centro una abertura por la cual pasan los
rayos puede estar fija o adosada a un carro con los tornillos de cremallera
que permiten dos movimientos de traslacin para controlarla, y tambin, si
los tornillos estn graduados para medir sus desplazamientos. Las
preparaciones sujetas con las platinas fijas, por medio de dos palanquitas
mviles y en las platinas de carro por un reborde, en forma de escuadra y
pestillo que le impide cualquier movimiento imprevisto.
Tubo: En l est instalado el sistema ptico. Est constituido por dos tubos
o cuerpos. Uno de ellos externo, en el cual se encuentran la cremallera y el
ocular y otro interno adosado al interior, donde esta el objetivo. Son
corrientes en los aparatos modernos los binoculares, que facilitan la visin
con ambos ojos.

Revolver: Pieza circular y giratoria. En ella se insertan en sentido antihorario

los objetivos; sin embargo su movimiento, para colocar en posicin un
objetivo, debe ser en sentido horario.
Brazo o soporte
vertical: Parte por medio de la cual debe asirse el
microscopio para transportarlo de un lugar a otro.
Carro o escuadra, Pinzas:
Parte mecnica accionable, mediante dos
tornillos que permiten movimientos laterales o longitudinales para colocar la
preparacin en posicin de observacin. En algunos casos es reemplazable por
pinzas.
Tornillo macromtrico: Tornillo de paso largo y por el cual se ejecutan
desplazamientos a veces imperceptibles a simple vista.
Tornillo micromtrico: En contraposicin al anterior su paso es pequesimo
y sus desplazamientos a veces imperceptibles. Debe utilizarse con sumo
cuidado.
PARTE PTICA
Objetivos: Son uno de los elementos ms importantes del microscopio. Estn
formados por la reunin de varias lentes para corregir las aberraciones.
Deben tratarse con mucho cuidado, pues cualquier golpe puede variar la
posicin de las lentes y averiarlas. Se atornillan a la parte del tubo o al
revolver porta-objetivos. En cuanto a los objetivos tenemos dos clases:
Objetivos secos: Son los que se emplean mas corrientemente. Entre la
lente frontal y el porta objetivos slo hay aire. A este grupo
pertenecen los objetivos de menores aumentos tales como 10X y 40X.
Objetivos de inmersin: Como se haba mencionado anteriormente se
llama as a aquellos en los cuales, para la observacin de interponerse
entre la lente frontal y la preparacin un lquido como por ejemplo
aceite.
Oculares: Los forman dos lentes separados por un diafragma y van montados
en la parte superior del tubo. La lente superior se llama lente ocular; la
inferior lente de campo.
Sistema de Iluminacin: Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misin
de iluminar los objetivos por medio de la luz transmitida, con excepcin de
los microscopios que
utilizan el sistema de epiluminacin descrito
anteriormente. Puede constar de: Fuente de luz natural o artificial. En este
ltimo caso es muy comn el uso de un filamento de tungsteno
incandescente por la corriente elctrica.

Espejo:
Redondo y adaptable a las ms variables posiciones, tiene una
superficie plana y otra cncava que pueden intercambiarse a voluntad.
Diafragma:
Va montado sobre la platina y permite graduar segn la
necesidad, la intensidad luminosa; el mas usado hoy es el tipo iris, accionable
mediante manecilla lateral.
Condensador: Consta de un sistema de lentes colocados bajo la platina. Su
funcin es condensar el haz de rayos luminosos, permitiendo una iluminacin
uniforme del campo microscpico. Se acciona por medio de un tornillo, el cual
permite graduar la intensidad.
RECOMENDACIONES PARA LA ADECUADA CONSERVACIN DEL
MICROSCOPIO
No tocar nunca las lentes: Si se ensucian estas, limpiarlas suavemente
con papel de seda especial para lentes.
No dejar el porta-objetos sobre la platina, cuando no se est
usando el microscopio.
Limpiar siempre el objetivo de inmersin despus de usarlo.
Si involuntariamente los objetivos de pocos aumentos se manchan de
aceite, limpiarlos suavemente con papel especial.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio, si se derrama sobre
ella algn lquido, secarla con un pao.
No inclinar el microscopio cuando se est trabajando con aceite de
inmersin.
Este puede caer al sistema mecnico de la platina de donde es difcil
limpiarlo, o puede gotear al condensador y all solidificarse.
Cuando no est en uso el microscopio, cubrirlo con la funda y guardarlo.
No forzarlo nunca. Todas las conexiones deben funcionar suave y
fcilmente.
Si algo
no funciona bien, no
intentar arreglarlo uno mismo.
Llamar inmediatamente al instructor.
Las lentes objetivo no deben tocar nunca el porta-objetos.
No bajar el tubo del microscopio con el tornillo de enfoque grueso
mientras se est mirando por el ocular.
No intercambiar los objetivos o los oculares del microscopio distintos,
y bajo ninguna circunstancia, separar las lentes frontales de los
objetivos.
Cuando no se usa, guardar el microscopio en su caja. Dejarlo con el
objetivo de pocos aumentos y asegurarse que la parte mecnica de la
platina no sobresalga del borde de la misma.

BIBLIOGRAFIA

Aguilar Peris, J. 1965 Teora y prctica del microscopio, Ed. Saber, Valencia.
Ramos,

A.2004

.manual

de

prcticas

de

laboratorio

de

microbiologa

general.universidad autnoma metropoitna ,unidad istalapa.mexicodepartamento

biologa .116p
Karp,G. 1991. Biologa Molecular Y Celular . 2 Ed. Lector . Mc.Grawll. Mxico. 746 p.
http://es.wikipedia.org/wiki/optica/microscopio

UNIVERSIDAD
NACIONAL DE
CAJAMARCA
Norte de la Universidad Peruana

EAPIAC
MATERIALES Y EQUIPOS DE USO COMN

CURSO:
Microbiologa
DOCENTE:
GISELLA. F. PEREZ FLOREZ

ALUMNO:
JARA SAGAY MAKELVIN

CELENDIN-CAJAMARCA

INTRODUCCIN

El reconocimiento de materiales y equipos e muy importante por esa razn en

este material se hizo un apartado para presentar el nombre, uso y
clasificacin de algunos materiales que se usan con mucha frecuencia en
esta ciencia que es la microbiologa. Es bueno mencionar que nuestro
objetivo principal sea el profundizar en el uso y clasificacin del instrumental
de laboratorio para lo cual describiremos en las siguientes paginas algunos de
los materiales. Ms usados en nuestro laboratorio de la Escuela De Ingeniera
Ambiental (EAPIAC) CELENDIN-CAJAMARCA. Esto on el nico motivo de
garantizar el aprendizaje estudiantil y uso experimental para la investigacin
cientfica para el desarrollo de capacidades intelectuales tericas y prcticas
as como el manejo y uso adecuado de cada material , el uso de EPP. Para cada
equipo y no daar ni causar perjuicios personales o sociales a la comunidad
estudiantil. . El conocimiento de estos materiales es fundamental al momento
de desempear funciones al interior del laboratorio, tanto para los
profesionales como para el personal auxiliar que colabora., muchas veces
estos materiales pueden ser usados en otras reas clnicas (ejemplo
placas de Petri, tubos de ensayo, unidades refrigerantes, estufas,
refrigeradores, centrifugas, campanas, etc.) y por lo tanto es importante
comprender su uso y cuidados en general.

OBJETIVOS
Identificar los materiales y equipos ms usados en el laboratorio
y sus funciones
Manipular materiales y equipos de uso y cuidados especficos.
MARCO TEORICO:
LOS MATERIALES DE LABORATORIO SE PUEDEN CLASIFICAR EN:
1. material de vidrio: vasos precipitados, placas de petri, tubos de ensayo,
probetas, pipetas aforadas, pipetas volumtricas, buretas, matraces de
Erlen Meyer y matraces aforados.
2. material de calor y fro y sus accesorios: refrigerantes, mecheros (de
Bunsen), baos termorregulados, baos de arena, calefactores elctricos,
congeladores, autoclaves, estufas, etc.
3. materiales de medicin de temperatura, tiempo y masa: termmetros,
balanzas y cronmetros.
MATERIAL DE VIDRIO
Generalmente se utilizan para contener, verter y medir soluciones lquidas.
Algunos son de elevada precisin en sus medidas y otros son menos precisos,
la eleccin depender del uso que se requiera. Entre los ms importantes
estn:

Bureta: Material cilndrico de vidrio graduado, alargado, que termina

en una llave para poder controlar el flujo del lquido que se va a medir.
Se usa en operaciones en que se necesita medir volmenes con gran
exactitud.

Matraz Erlen Meyer: Material de vidrio que se emplea en el

laboratorio para calentar lquidos o preparar soluciones. (Fig. A)

Matraz Aforado: Instrumento de vidrio de cuello largo y angosto, se

usa para preparar soluciones a una concentracin exacta.(Fig. A)

Vasos de Precipitados: Material de laboratorio de vidrio, que se usa

como recipiente y tambin para obtener precipitados. (Fig. A). Son
resistentes al calor.

Pipeta: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los lquidos
con mayor exactitud. (Fig. B). Estas pueden ser aforadas (miden un
volumen exacto) o parciales (miden un volumen aproximado).

Probeta: Instrumento de laboratorio de vidrio o plstico, que se

emplea para medir el volumen de los lquidos. (Fig. A). Estas miden
volmenes aproximados. En laboratorio clnico, es especialmente til al
momento de medir volmenes de orina de recolecciones de 24 horas,
los que fluctan entre los 1200-2500 ml, aproximadamente.

Tubos de ensayo: sin de vidrio o plstico, de distintos tamaos (1, 4,

5, 10, 15, etc ml) y se utilizan para realizar reacciones qumicas.
Tambin existen con tapa, al vaco y con distintas sustancias
anticoagulantes para extracciones de muestras sanguneas.

MATERIALES DE CALOR Y FRO Y SUS ACCESORIOS:

Mechero: Es un instrumento de vidrio o metal, destinado a
proporcionar combustin.
y

los

de

Los

ms

usados

son

los

de

alcohol

gas, principalmente, el de Bunsen. Los mecheros Bunsen

constan de un tubo vertical, enroscado en su parte baja a un pie por

donde entra el gas. Mediante un aro metlico mvil se regula la entrada
de aire. La mezcla se enciende por la parte superior.

Rejilla de asbesto: Es una rejilla con una cubierta de asbesto,

que contribuye a repartir uniformemente el calor. Sobre sta se ponen
vasos, matraces, etc sometidos a calor. Se utiliza sobre un trpode de
metal.

Trpode: artefacto metlico que se utiliza sobre el mechero para

apoyar la rejilla de asbesto y as someter muestras a temperatura.

Estufas: Permiten el calentamiento y desecacin de sustancias. Otras

se utilizan como estufas de incubacin para estudios microbiolgicos.

Autoclave: Es un equipo de paredes gruesas y cierre hermtico, en el

que se realizan reacciones a altas presiones y temperaturas. Se utiliza
para esterilizar materiales y preparados de microbiologa. Mas
adelante vera usos clnicos de gran importancia con estos equipos

MATERIALES DE MEDICIN DE TEMPERATURA, TIEMPO Y MASA:

Termmetros: Se

utilizan

para

medir

la

temperatura,

de

refrigeradores, baos termorregulados, congeladores, temperatura

ambiente, etc.
balanza digital

Balanza: Se utilizan para medir la masa de un compuesto.

Esptula: Aparato de laboratorio que sirve para sacar las sustancias

slidas de los recipientes que las contienen.

Gradilla: Material de laboratorio de madera, metal o plstico, que se

usa como soporte de los tubos de ensayo, o tubos en general ( muestras
de sangre por ejemplo)

Mortero: Material de laboratorio de porcelana o de vidrio, que se usa

para moler

o reducir

el tamao

de

las sustancias

(ejemplo

medicamentos). Consta de dos partes: el mazo y el mortero

propiamente dicho.

Frasco lavador o pizeta: Son frascos cerrados con un tapn

atravesado por dos tubos. Por uno de ellos se sopla, saliendo el agua
por el otro. Se utilizan para enjuagar el material de laboratorio.
Tambin los hay de plstico, con un slo orificio de salida, por el que
sale el agua al presionar el frasco.

Soporte Universal: Est formado por una base o pie pesado, en el que
ajusta perfectamente el extremo de una barra cilndrica de hierro.A
la barra se pueden acoplar aros y pinzas que se utilizan para
sujetar

otros elementos.

A veces se utiliza una rejilla metlica

colocada encima del aro, para sostener los recipiente

Papel filtro: Son papeles de celulosa, redondos, de diferente tamao

de poro. Se utilizan junto con un embudo en las filtraciones. Ejemplo:
muchas tinciones comunes del laboratorio clnico, debe ser filtrados

despus de su preparacin. Se utiliza para filtrar disoluciones,

reteniendo los precipitados o impurezas.

Pinzas: Son metlicas y se utilizan para sujetar material en el soporte

universal. Ejemplo, para sujetar una bureta.

Pinzas para Tubos: Instrumento de laboratorio de madera o metal,

que se usa para coger los tubos de ensayo.

Tenazas: Son metlicas. Se utilizan para retirar los crisoles de la

estufa, o para sujetar otros utensilios calientes.

Placas Petri: Son utilizadas en bioqumica para llevar a cabo cultivos

de microorganismos.

Centrfuga:

equipo

que

se

utiliza

para

separar

soluciones,

generalmente en una fase lquida o sobrenadante, que corresponde a la

porcin superior de la muestra, y una fase slida, tambin llamada
sedimento o pellet,

el que se deposita al fondo del tubo. En el

Laboratorio Clnico se utilizan estos equipos para separar muestras

sanguneas en los elementos figurados y el plasma) o suero).

CONCLUSIONE
El buen uso del material de laboratorio, ayudar Ha realizar la mejor las prcticas
de laboratorio.
Si se conoce el correcto uso de cada material har que el trabajo no se muestre
tan pesado para el alumno ni el docente lo cual ayudara al mejor entendimiento de
los conocimientos repartidos por el docente logrndose un fortalecimiento de
capacidades hacia la comunidad estudiantil.
Debemos tratar con cuidado nuestro material de laboratorio ya que este nos hace
de mucha ayuda para la realizacin de las prcticas en laboratorio, la cual
profundiza el conocimiento hacindola real y concreta .adems e ayudarnos a
formarnos como profesionales avils de identificar .los distintos problemas
ambientales .

BIBLIOGRAFIA
Lpez ,C.2005 . gua de materiales de laboratorio.1ed. pontificie uiversidad
catlica. Chile. 8-18
Rojas.A.2011 . conceptos y prcticas de microbiologa general .universidad
nacional de Colombia sede Palmira.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
CAJAMARCA
Norte de la Universidad Peruana

EAPIAC
MTODOS DE ESTERILIZACIN

CURSO:
Microbiologa
DOCENTE:
GISELLA. F. PEREZ FLOREZ

ALUMNO:
JARA SAGAY MAKELVIN

CELENDIN-CAJAMARCA

INTRODUCCION
La esterilizacin es un mtodo de control del crecimiento microbiano que involucra
la eliminacin de todas las formas de vida microscpicas, incluidos virus y esporas,
la temperatura utilizada para la destruccin de los mismos, es de 100 C en adelante.
Es un trmino absoluto que implica la prdida de la viabilidad mediante la destruccin
de todos los microorganismos contenidos en un objeto, rea especfica o sustancia,
evitando de tal modo la posterior propagacin o contaminacin a otros objetos o al
medio ambiente.
Los microbios se eliminan, inhiben o matan por medio de agentes fsicos o agentes
qumicos, otros incluyen los agentes mecnicos que eliminan hasta las formas ms
resistentes como lo son las endoesporas.
Los agentes qumicos esterilizantes que destruyen patgenos suelen denominarse
desinfectantes, los cuales en su gran mayora son txicos para el ser humano; sin
embargo, son tiles para destruir microorganismos en el medio humano o animal. Los
agentes desinfectantes que pueden aplicarse tpicamente en la superficie corporal
se les designan con el nombre de antisptico.
Los ms utilizados en la actualidad son los mtodos fsicos (calor, radiaciones,
filtracin, centrifugacin) y los mtodos qumicos (agente qumico)
Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, en la
fabricacin de cualquier producto destinado a la administracin parenteral, al
contacto con heridas en la piel, con mucosas superficiales, o con rganos internos,
ya que estos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles.

OBJETIVOS
Que el alumno conozca los principios generales de la preparacin y tcnicas de
esterilizacin de diversos materiales y medios de cultivo de uso comn en
Microbiologa. Conocer el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la
contaminacin microbiana en el laboratorio.

I.
MARCO TEORICO
Los microorganismos pueden ser eliminados, inhibidos o muertos por agentes
fsicos, agentes qumicos, o por procesos fsicos y agentes quimioterapticos.
Se dispone de una gran variedad de tcnicas y agentes que actan de maneras
diferentes y cada uno tiene su aplicacin y lmite de uso.
Un agente fsico es una propiedad o condicin que causa un cambio, por
ejemplo la temperatura, la presin, radiacin y los filtros.
Un agente qumico es una sustancia que causa una reaccin especfica y que
se caracterizan por una estructura molecular tpica, por ejemplo tenemos los
compuestos fenlicos, los alcoholes, algenos (cloro y yodo), aldehdos, oxido
de etilo, fenoles.
Un proceso fsico es un procedimiento que causa un cambio, por ejemplo la
filtracin la esterilizacin, incineracin, higienizacin.

Se utilizan varios trminos especficos para escribir a estos agentes

y procesos:
Esterilizacin: El proceso que destruye todas las formas de vida se llama
esterilizacin. Un objeto estril, en sentido microbiolgico esta libre de
microorganismo vivos. Un objeto una sustancia est estril no est
estril; no puede estar nunca semiestril o casi estril.
Desinfectante: Un agente, usualmente un producto qumico que mata las
clulas vegetativas pero no necesariamente las formas esporuladas
de
los microorganismos productores de enfermedades, se denomina un
desinfectante. El trmino se aplica comnmente a sustancias usadas sobre
objetos inanimados. La desinfeccin es el proceso mediante el cual se
destruyen las clulas vegetativas pero no necesariamente las esporas de los
agentes infecciosos.

Antisptico: Una sustancia que se opone a la infeccin (sepsis) o previene

crecimiento o accin de los microorganismos, bien sea destruyendo o bien
inhibiendo su crecimiento actividad, se denomina un antisptico. El trmino
est usualmente asociado a sustancias aplicadas al cuerpo.
Higienizacin: Un agente que reduce la poblacin microbiana hasta niveles
que se juzgan seguros para las exigencias de la salud pblica se denomina un
higienizante. Usualmente es un agente qumico que mata el 99.9% de
las bacterias en crecimiento. Los higienizantes suelen aplicarse a objetos
inanimados y generalmente se emplean en el cuidado diario de equipos y
utensilios en las plantas lecheras y de preparacin de alimentos, as como
para los vasos, platos y utensilios en los restaurantes. El proceso de
desinfeccin producir higienizacin. Sin embargo en el sentido estricto,
higienizacin implica una condicin sanitaria de limpieza cosa que la
infeccin no implica necesariamente.
CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES FISICOS Y/O
PROCESOS FISICOS
Son una condicin o propiedad fsica que causa un cambio. La temperatura, la
presin, la radiacin, la desecacin, as como la filtracin son ejemplos de
agentes fsicos.
TEMPERATURA
Es un factor de enorme importancia ya que la temperatura influye mucho en
las velocidades de reaccin de todos los procesos qumicos metablicos
ligados al crecimiento de todo organismo. El aumento o la disminucin de la
temperatura pueden retardar en algunos casos el crecimiento, e incluso
pueden destruir al microorganismo contaminante. La temperatura es una
magnitud que expresa el nivel de calor que sufre un cuerpo, entonces, el
control de microorganismos por aumento de la temperatura es igual que por
el aumento de calor del medio donde se encuentra.
Es bien sabido que todos los organismos dependen del agua, la mayora de su
medio acuosos (por ejemplo el citoplasma). Al mismo tiempo uno de los
factores externos que influye en el crecimiento y reproduccin de los
microorganismos es la temperatura. Existen muchos microorganismos que
crecen bien a temperaturas medias de 35C pero otros crecen mejor a
temperaturas ms altas o ms bajas. En todo caso todos los microorganismos
presentan una temperatura ptima, una temperatura mxima y otra
temperatura mnima.
En el primer caso es la temperatura a la cual el
desarrollo de un microorganismo es mayor, las otras temperaturas son puntos
a los cuales tiene lugar el desarrollo pero de una manera ms reducida, es
decir disminuye la velocidad de crecimiento pero sin afectarlo. Las

temperaturas por encima de la mxima conllevan a una letalidad para la clula,

es decir, inhibe su crecimiento produciendo la muerte de la misma, las
temperaturas inferiores a la mnima no matan al microorganismo paro si
detiene su metabolismo, es decir, detiene su crecimiento.
As pues, la utilizacin de calor es un mtodo bueno para lograr la esterilidad
de los medios de cultivo, materiales y otros elementos, pero la combinacin
de la temperatura (calor) y agua (humedad) puede ser aplicado para la
esterilizacin ms efectiva de diferentes elementos y materiales.
Los mtodos ms usados en el control de microorganismos con la temperatura
incluyen el calor hmedo, el calor seco, la refrigeracin y la congelacin.
Calor hmedo: El efecto que causa este calor es matar al microorganismo por
la coagulacin de sus protenas cuando se encuentran en una zona atmsfera
hmeda y sometidos a altas temperaturas, adems, es mucho ms rpido y
efectivo en su accin.
La accin letal del vapor proviene del calor latente liberado cuando se
condensa en una superficie fra aumentando de esta manera la temperatura
de la zona enfriada. La destruccin de las esporas bacterianas sigue un
comportamiento de forma similar en tanto que el vapor se condensa en la
pared de la espora y aumenta su contenido en agua que finalmente hidroliza y
degrada el contenido proteico.
El uso de temperaturas por debajo de 100C son recomendadas para tratar
medios que contienen compuestos sensibles a las altas temperaturas
(evitando la desnaturalizacin de los mismos). Esta practica no asegura una
esterilizacin pero s una desinfeccin (METODO USADO).
Pasteurizacin:Consiste en un tratamiento por calor controlado que mata a
los microorganismos de ciertos tipos pero no a otros.
La temperatura
seleccionada para la pasteurizacin depende del tiempo de muerte por calor
del patgeno ms resistente que se debe destruir. Por lo tanto la sustancia
pasteurizada no es una sustancia estril.
Calor seco:En una atmsfera seca, totalmente exenta de humedad, las
bacterias como muchas protenas son ms resistentes y no mueren hasta que
tiene lugar la oxidacin de sus componentes, lo cual ocurre a
temperaturas mucho ms elevados que la que se requiere para coagular las
protenas.
Se recomienda el calor seco siempre que el vapor de agua que se emplea no
sea deseable o no sea posible que entre en contacto directo con el material
que se va a esterilizar.

 Incineracin y esterilizacin al rojo: Mtodos usados para

esterilizar asa metlicas, esptulas, destruccin de carcasas,
animales de laboratorio y cualquier otro material de laboratorio
infectado que es preciso eliminar o material que slo se usa por
el momento y constantemente. Estos mtodos consisten en la
exposicin directa del material a la accin de la llama hasta
alcanzar una coloracin roja.
Flameado: Mtodo utilizado para esterilizar bistures, agujas
hipodrmicas, boca de tubos de ensayo, porta y Cubreobjetos,
etc. Consiste en pasar varias veces el objeto (de 3 a 4 veces) a
travs de la llama sin permitir que este alcance el rojo.
Aire caliente:
Mtodo usado para esterilizar material de
vidrio y objetos adems, los tubos, erlemeyeres, pipetas y todo
material en forma cilndrica deben ser cubiertos por un tapn de
algodn en su boca. Se usan temperaturas de 160C por 2
horas y es suficiente para esterilizar el material.
ESTERILIZACION POR CALOR
SECO

Temperatura (C)

Tiempo (minutos)

Material de vidrio

160

120

Instrumental con filo (se alteran a ms

de 160oC)

140

120

Instrumental sin filo

160

60

Agujas para administracin parenteral

160

60

Agujas para sutura

160-170

60

Jeringas de vidrio envueltas

160

60

Bajas temperaturas:
Las temperaturas por debajo del ptimo de
crecimiento microbiano disminuyen la tasa de metabolismo y si la temperatura
es suficientemente baja, cesan el crecimiento y el metabolismo.

 Refrigeracin: Este mtodo es muy utilizado en los laboratorios

de microbiologa para mantener y conservar cepas de
microorganismos a temperaturas de 4C a 7C durante algunos
meses.
Temperaturas bajo cero:
Las bacterias y los virus pueden
conservarse a temperaturas de -20C (congeladores normales),
a -70C (Hielo seco, gas carbnico) e incluso a -195C (Nitrgeno
lquido). En todos estos procedimientos, el congelamiento inicial
mata a algunas de las clulas, pero la mayor parte de las
supervivientes generalmente permanecen viables durante largos
periodos de tiempo. Por esto, las bajas temperaturas, aun las
extremas no sirven para desinfectar ni esterilizar.
Los
microorganismos mantenidos a estas temperaturas pueden
considerarse como durmientes, no tiene ninguna actividad
metablica detectable. Esta es la base de la conservacin de los
alimentos usando bajas temperaturas.
INCINERACI
N

El material se quema. Mtodo ms comn de tratamiento de deshechos

infecciosos. Un ejemplo de este mtodo es el flameo de la parte inferior del
asa colocndola en la llama de un mechero de Bunsen.

CALOR
HMEDO

Calor (121oC) hmedo a 1 atmsfera 30-60 minutos. Se usa autoclave (calor a

alta presin). Para desechos de peligro biolgico y objetos resistentes al
calor.

CALOR SECO

160-180C durante 1-3 horas. Se usa estufa. Para material de vidrio, aceites,
etc.

FILTRACIN

Pasaje de soluciones a travs de membranas con vaco. Para soluciones de

antibiticos, qumicos txicos, radioistopos, vacunas, carbohidratos, etc.,
sensibles al calor.

RADIACIN
GAMMA

Radiacin ionizante de corta longitud de onda y alta energa. Para material

descartable como jeringas de plstico, catteres, guantes, etc., antes de su
uso.

RADIACIN
UV

Radiacin no ionizante de bajo poder de penetracin. Slo esteriliza las

superficies sobre las que incide directamente o volmenes pequeos de
lquidos.

PRESIN OSMTICA
RADIACIN
espectro electromagntico.
Radiaciones no ionizantes:
Radiaciones infrarrojas
Radiaciones U.V.
Radiaciones ionizantes:
Los

rayos

Los rayos gamma:

Los rayos catdicos
FILTRACIN
DESECACIN
CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES QUMICOS

Muchas sustancias qumicas son capaces de inhibir o matar microorganismos.

Comprenden desde elementos metlicos pesados como la plata y el cobre,
hasta molculas orgnicas complejas como los compuestos de amonio
cuaternario. los principales grupos de agentes qumicos antimicrobianos son:
Fenol y compuestos fnolicos:
Alcoholes:El alcohol etlico a concentraciones de 50 a 70% es efectivo contra
microorganismos vegetativos o no esporulados. El alcohol etlico tiene bajo
poder esporocida. El alcohol metlico es menos bactericida que el etanol. El
metanol no se emplea como desinfectante ya que es venenoso y sus vapores
txicos pueden daar los ojos. Los alcoholes con mayor peso molecular son
ms germicidas pero al mismo tiempo son menos inmisibles con el agua y por
ello se usan poco. El alcohol es efectivo para reducir la flora microbiana de
la piel y para desinfectar termmetros.
Los alcoholes desnaturalizan las protenas, propiedad que en gran medida
explica su actividad antimicrobiana, son tambin disolventes de los lpidos
y por eso daan la membrana celular.
La familia de los halgenos consta de elementos como el flor, cloro,
bromo y yodo.
El cloro
Detergentes

 CONTROL
DE
MICROORGANISMOS
QUIMIOTERAPEUTICOS:
Penicilina y derivados B-lactmicos
Cefalosporinas
Estreptomicina
Tetraciclinas, entre otros.

CALOR HMEDO

POR

AGENTES

EBULLICIN
TYNDALIZACION
PASTEURIZACIN
VAPOR A PRESIN
(AUTOCLAVE)

FSICOS

CALOR SECO

FLAMEADO
INCINERACIN
HORNO PASTEUR
(AIRE CALIENTE)

Mtodos
esterilizacin

de

RADIACIONES

RADIACIONES
IONIZANTES
RAYOS GAMMA

RAYOS X
RAYOS
ULTRAVIOLETA

QUMICOS

MECNICOS

FILTRACIN
SEDIMENTACIN

GASES

OXIDO DE ETILENO
OTROS

II.

MATERIALES

o
o

Un paquete de algodn.
Cinta mastquing.

o
o

Tubos de ensayo
Placas Petri

Papel seda,alumino.

Mandil

o
o
o

Guantes quirrgicos.
Mascarilla.
Gorrito descartable.

Matraz erlenmeyer

III. DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Primeramente para ingresar al laboratorio, hay que hacerlo con el mandil
puesto y de la mejor manera.
2. Luego proceder a lavarse las manos con detergente y secarse.
3. Posteriormente colocarse la mascarilla, los guantes y el gorrito descartable
para evitar el contacto con los microorganismos.
4. Proceder a limpiar la mesa de trabajo.
5. Una vez seca la mesa, empezar con la envoltura de cada una de las placas
petri con el papel seda. este cortado a medidas optimas que se considere,
asegurndolo con la cinta.

6. los tubos de ensayo, el matraz erlen meyer (previamente lavados y tapados

con algodn), con los pliegos de papel aluminio asegurados con cinta.

7. 6.Por ltimo llevar todo el material hacia el autoclave para su posterior

esterilizacin mediante el calor humedo.

usualmente destruye todos los microorganismos no esporulados y la mayora

de los esporulados en 10 minutos. Esta practica no asegura una esterilizacin
pero si una desinfeccin, por lo que no se debe confiar mucho en los mtodos
anteriores.
El uso de temperatura de 121C se logra con el uso de equipos especiales
(Autoclave) que combinan el efecto de la temperatura con la presin, as, a
una presin de 15Lb el agua hierve a 100C, pero si la presin es superior la
temperatura del agua sube (Vapor de agua), por encima de los100C, por
ejemplo, a 10 lb/pulg de presin la temperatura del vapor de agua e de 105C
y a 15 lb/pulg es de 121C. El uso de vapor de agua a temperaturas de 121C
por 15 minutos mata todos los microorganismos incluyendo las esporas
bacterianas. Este proceso es el principio que aplica el autoclave en el
laboratorio.
8. almacenamiento del material estril se pondr a la estufa a unos 35 a
37 C.

Dejar que los materiales que salen de la estufa alcancen la temperatura

ambiente antes de ser almacenados, de esta forma se evita la condensacin
dentro del empaque.
Una vez que un material esta estril puede mantener esta condicin si est
protegido en la forma apropiada. Es decir la duracin de la esterilidad de un
material no est relacionada directamente con el tiempo, sino con los
factores que comprometen su exposicin al medio ambiente.

IV.

RESULTADOS

Los materiales estriles pierden su esterilidad:

Cuando se produce cualquier ruptura, accidental o no. Del material

que lo recubre durante su transporte o almacenamiento.
En nuestro caso se humedecieron las placas petric ademas de observar
humedad en un matraz erlen meyer ,pr no secar bien el recipiente despus
de haber sido lavado . o por no haber asegurado el tapon o el papel aluminio .

Al humedecerse el material del empaque es recomendable no

manipular los materiales estriles con las manos hmedas, ni colocarlos
sobre superficies mojadas ni frias al contacto con el medio frio podra
partirse el o romperse el material. Al almacenar los materiales estriles se
deben tomar una serie de precauciones como:
Controlar la temperatura y humedad de las reas de almacenamiento.
Utilizar, posteriormente estantes cerrados para colocar el material.
V.

CONCLUSIONES
La importancia del conocimiento no solo se basa en la observacin y aprendizaje de
la esterilizacin, desinfeccin, manipulacin e identificacin de materiales, sino de
comprender la importancia de los microorganismos y cmo influyen directamente en
nuestras vidas as como manejos adecuados de asepsia para estos microorganismos y
su control.

Se obtiene como resultado la ausencia de todo germen vivo consiguiendo material

estril (placas Petri, matraz y tubos de ensayo utilizados en las siguientes prcticas)

La esterilizacin es una tcnica de saneamiento preventivo para conseguir la

asepsia, o sea, la destruccin de todos los microorganismos y sus formas de
resistencia que puedan existir en la superficie o en el espesor de un objeto
cualquiera.

Los mtodos de esterilizacin evitan los cultivos de microorganismos que pueden

ocasionar graves enfermedades.

 No existe un desinfectante nico capaz de eliminar todos los grmenes. Cada

desinfectante tiene unas propiedades determinadas. Algunos presentan elevada
actividad germicida, o amplio espectro antimicrobiano. Pueden ser de accin rpida
o diferida, aunque la duracin del efecto vara entre ellos. Otro elemento a
considerar es la toxicidad y efecto corrosivo sobre el instrumental. Tambin se
debe considerar el olor y color agradable
VI.

RECOMENDACIONES:
La limpieza (eliminacin fsica, por arrastre, de materia orgnica de los objetos)
cuidadosa del material es el requisito imprescindible y el ms importante, ya que los
restos de materia orgnica protegen a los microorganismos frente a la desinfeccin
y/o esterilizacin ,se debe lavar y secar con algodn por dentro y fuera del
recipiente (matraz ,tubos de ensayo).

Siempre usar las condiciones necesaria aspticas para no diferir con la correcta
esterizacion

Asegurar bien los tapones y el papel seda para no tener incombenientes despus de
l esterificacin como curio en nuestro caso.

BIBLIOGRAFA

HIGIENE Y PROTECCIN DE LOS ALIMENTOS. Opresaba. 2004

MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS. Michel. P Doyle. Editorial Acribia , S.A.

1997

MICROBIOLOGA AMBIENTAL. W.D.Grant. Editorial Acribia. Zaragoza 1989

MICROBIOLOGIA. Prescott.L. Editorial McGraw-Hill Interamericana. 1999

ESTERILIZACION 2010.pdf
ESTERILIZACION Y DESINFECCION Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp. 2012pdf

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
CAJAMARCA
Norte de la Universidad Peruana

EAPIAC
TCNICAS MICROBIOLGICAS
MEDIOS DE CULTIVO PREPARACION Y ESTERILIZACION

CURSO:
Microbiologa
DOCENTE:
GISELLA. F. PEREZ FLOREZ

ALUMNO:

JARA SAGAY MAKELVIN

CELENDIN-CAJAMARCA

I.

INTRODUCCION

La esterilizacin es un mtodo de eliminacin total de todo tipo de organismo que

asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilizacin
deficiente o manipulacin incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a
contaminaciones, resultados errneos o prdida del material biolgico. Por ello, se
requieren buenas prcticas de laboratorio para su adecuado manejo. La
esterilizacin por calor seco o hmedo son los mtodos que se utilizan con mayor
frecuencia en el Laboratorio de Microbiologa. El calor seco destruye a los
microorganismos por oxidacin, por ejemplo, al exponerlos directamente a la flama
de un mechero o en horno a 150-180C durante 2 horas. Estos mtodos se aplican en
la esterilizacin de asas de inoculacin y para todo tipo de material de vidrio y
quirrgico.
Los procesos con calor hmedo afectan la estabilidad de estructuras celulares y
protenas; se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones termoestables,
materiales de vidrio y cultivos bacterianos que se desechan.
El equipo de uso comn es la autoclave, que utiliza vapor de agua a presin (15 lb/in2);
con esta presin el material alcanza una temperatura de 121 C y si se mantiene
durante 15 minutos se asegurar la inactivacin de endosporas, que son las
estructuras bacterianas ms resistentes al calor.

II.

OBJETIVOS
Esterilizar los materiales que usaran para preparar los medios de cultivo y
posterior sembrado.

Entender el concepto de medio de cultivo en microbiologa y su importancia.

Aplicar algunas metodologas de medios de cultivo.

Preparar medios de cultivo con diferente estado fsico y explicar la

diferencia en el procedimiento de preparacin.

III.

MARCO TEORICO
LOS MEDIOS DE CULTIVO

Entonces, un medio de cultivo es un sustrato natural o artificial o una solucin de

ciertos nutrientes que permiten cultivar los microorganismos de una manera ms
eficiente para su posterior uso en el laboratorio.
Clasificacin de los medios de cultivo
De acuerdo a la consistencia o estado fsico:
Medios lquidos: Son medios de cultivo que carecen de un polisacrido denominado
agar-agar extrado de algas marinas del gnero Gellidium sp. un medio tpico es el
caldo nutritivo o el caldo BHI. Al crecer en un medio lquido un microorganismo
utiliza los compuestos del mismo as como excreta los productos metablicos
bacterianos en l y puesto que en el medio originalmente no contena estos productos
sirven como una ayuda para la identificacin del microorganismo en cuestin. As
ciertos microorganismos originan un producto denominado indol formado a partir de
triptfano presente en la peptona por lo que cultivando estos microorganismos en
un medio rico en nitrgeno (peptona) y exento de indol pueden efectuarse
pruebas con objeto de comprobar si el microorganismo cultivado es o no
productor de indol.
Medios

slidos:

Estos

medios

son

usados

frecuentemente

para

aislar

microorganismos, en los medios lquidos los microorganismos al encontrarse libres

pueden desplazarse en tanto que en los medios slidos se multiplican localmente en
el punto de la inoculacin y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es tpica
de cada especie determinada. Para conseguir medios slidos se agrega a un medio
lquido agar en una proporcin del 1.5% al 2%. Hoy en da se presenta en forma de
polvo que incluye el agar, el punto de fusin de estos medios oscila alrededor de los
98C y se solidifica al enfriarse al 42-45C. Los fluidos orgnicos como la sangre
o el suero sanguneo que coagulan a 60C deben ser incorporados antes de que
se solidifique el agar (por Ej. A 50C). La gelatina tambin puede emplearse como

agente solidificante, se trata de una protena obtenida a partir del colgeno de la

piel, cuero, tendones, y huesos y forma un gel de buenas caractersticas a
concentraciones de 12-15% en caldo nutritivo siendo su punto de fusin de 22C
quedando destruidas sus propiedades al alcanzar temperaturas por encima de 100C.
Muchas bacterias producen fermentos proteolticos y su capacidad de licuar la
gelatina se utiliza para clasificarlos a temperaturas de laboratorio.

Una variante de los medio slidos son los medios condensados preparados a partir
de materias coagulables como el suelo o la albmina de huevo y condensados en forma
de pico de flauta a temperaturas cuidadosamente controladas en la zona de los 75C.
Medio

semislidos: son medios que usualmente contienen una pequea cantidad

de agar, esta cantidad promedio es de 0.5%, estos medios son muy usados para
determinar la movilidad de un microorganismo gracias a su escaso poder retenedor,
es decir, que no impiden que el microorganismo mvil se desplace por el medio.

Segn las sustancias primarias los medios de cultivo se pueden clasificar en:

Medios naturales: son aquellos medios empleados tal como se encuentran en la

naturaleza para cultivar microorganismos, como ejemplo de estos medios
encontramos la leche, los extractos vegetales o la sangre diluida.

Medios sintticos: como su nombre lo indica son medios que han sido creados por
el hombre y por lo tanto se conoce su formulacin completamente, son utilizados
para el cultivo de microorganismos coincidiendo de antemano los requerimientos
nutricionales que estos organismos necesitan.

Como ejemplo podemos mencionar

todos los medios deshidratados que distribuyen las casa comerciales.

Medios

semisintticos: son medios de cultivo que llevan una mezcla de medio

naturales y medios artificiales, ya que algunos de los componentes pueden ser

susceptibles a los tratamientos empleados durante la elaboracin de estos medios o
tratamientos posteriores.

Como ejemplo de estos medios podemos encontrar el

agar Baird Parker o el agar sangre.

Medio

vivos: son aquellos medios que contienen clulas u organismos vivos y que

son ampliamente utilizados para demostrar reacciones susceptibles de organismos

superiores en presencia de microorganismos causantes de alteraciones,
tambin tienen importancia en el estudio y cultivo de los virus. Ejemplos de estos
medios pueden ser las clulas de rin de mono, huevos embrionados o clulas de
intestino de cobayos y conejos.
Muchos microorganismos tienen la capacidad de crecer o utilizar material inorgnico
en su metabolismo como el CO2, estos son llamados microorganismos auttrofos,
otros requieren para crecer de la presencia de sustancias orgnicas, es decir no son
capaces de utilizar el CO2. Algunos de estos son hetertrofos se pueden desarrollar
sobre medio sencillos sin demasiados nutrientes, algunos por el contrario requieren
de una cantidad suficiente o an mucho ms para poderse desarrollar. En otros casos
se requieren de medio muy elaborados con una capacidad de diferenciar e identificar
al mismo tiempo alguna clase o clases de organismos, para ellos se han desarrollos
medios que gracias a la presencia de sustancias especiales los hacen nicos ya que el
crecimiento de ciertos grupos de microorganismos provocan una reaccin especfica
como el cambio del color del medio o el crecimiento diferencial de estos
microorganismos en cuanto al color de la colonia.
De acuerdo a los nutrientes en:
Medios simples: son medios que poseen los nutrientes mnimos para permitir el
desarrollo de microorganismos menos exigentes, como ejemplo encontramos el caldo
nutritivo o el agar nutritivo.
Medio enriquecidos: son aquellos medios a los cuales se les han incorporado
sustancias que proporcionan caractersticas complementarias nutritivas para que el
medio pueda servir como sustrato para los microorganismos ms exigentes. Estos
medios, tales como agar sangre, suero o chocolate en caldo o en agar, se emplean
para conseguir el crecimiento de aquellos microorganismos sensibles que no crecen
en medios corrientes.
Medios selectivos: son aquellos medios a los que se les incorporan sustancias para
inhibir al crecimiento de la mayor parte de los microorganismos con excepcin
de aquellos para los que fueron ideados, por ejemplo, el medio telurito para el bacilo
productor de la difteria y el agar citrato-dexosicolato para los grupos de Salmonella
sp y Shigella sp.
Medios

diferenciales: son medios que contienen sustancias o indicadores que

permiten la diferenciacin de un microorganismo a otro. Por ejemplo, el agar Mac-

Conkey permite distinguir los microorganismos fermentadores de la lactosa de los

no fermentadores por la coloracin que toman.

Otro ejemplo claro de estos

medios es el agar sangre que permite distinguir los microorganismos que lisan o
producen hemlisis de los eritrocitos de aquellos que no son, es decir, que al mismo
tiempo se pueden distinguir microorganismos productores de hemlisis alfa, beta o
gamma.
Medio auxanogrficos: son determinados medios a los que les faltan ciertos
factores nutritivos.

El medio, generalmente slido se inocula con un

microorganismo, y luego se distribuye por la superficie discos con diferentes

compuestos nutritivos que puedan requerir los microorganismos en estudio y de esta
manera determinar que nutrientes favorecen o no al desarrollo por el crecimiento
del microorganismo alrededor del disco.
Medios para transporte o

carriers: son medios slidos o semislidos que

pueden contener o no sustancias selectivas.

Se preparan para detener la

viabilidad de los microorganismos durante varias horas o das, permitiendo de esta

manera el aislamiento de las especies menos resistentes despus de transcurrido
cierto tiempo entre la toma de la muestra y la entrega al laboratorio.

IV.

MATERIALES

Matraz

Balanza

Tubos de ensayo

estufa

agua destilada

Agares SPC (estndar para

Placa Petri
Papel aluminio
Autoclave

mechero alcohol

Esptula

conteo en placa), EMB (eosina

azul

de

metileno),

OGY

(oxitetraciclina glucosa yeast),

y caldo nutritivo.

V.

DESARROLLO DE PRCTICA.
1. Preparacin de medios de cultivo

Siempre es recomendable y se incluye como una regla bsica la de leer las

instrucciones de las etiquetas de los medios de cultivo, por ello no se recomienda
reenvasar los medios sino, mantenerlos en los recipientes originales.
Para lograr una preparacin adecuada de los medios de cultivo es recomendable
seguir las siguientes instrucciones:

Realizar los clculos respectivos para agar y caldo teniendo en cuenta que
para cada caja deben servir 15-18 ml de agar y para cada tubo entre 7-10 ml
de caldo.

Mida el volumen de agua destilada segn sus clculos.

Teniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, haga la relacin de polvo de

agar que debe pesar de acuerdo a lo especificado en la etiqueta del medio.

Pese la cantidad del medio necesario de acuerdo a los clculos.

Mida el volumen de agua destilada segn sus clculos.

Teniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, haga la relacin de polvo de

agar que debe pesar de acuerdo a lo especificado en la etiqueta del medio.

Pese 5 gr.del medio necesario de acuerdo a los clculos.

2. Preparacin de la solucin:
los medios de cultivo deben ser mezclados o hidratados en el matraz, libres de
detergente y su volumen debe ser el doble de la cantidad que se vaya a preparar. El
agua que se utiliza para su mezclado o reconstitucin debe ser destilada o
desmineralizada en nuestro caso.

Para su preparacin primero debe calcularse y determinar la cantidad de los

componentes bsicos de los medios que deben ser preparados con elementos
individuales o en el caso de los medios deshidratados pesarse la cantidad deseada
del medio de cultivo en la balanza analtica , mezclar con aproximadamente la
cantidad del volumen total requerido de agua y agitar vigorosamente hasta obtener
un dilucin homognea, luego agregar el resto de agua para enjuagar de las paredes
del recipiente el material adherido.

Los medios de cultivo semisoidos o solidos que no contienen agar ni gelatinas,

(lquidos) pueden ser disueltos en agua fra o ligeramente caliente. Pero si contienen
alguna de las dos sustancias deben ser calentados hasta ebullicin para solubilizar el
agar. Nunca sobre calentar porque se puede alterar su composicin.

Antes de distribuirlo en los recipientes definitivos, enfriar a 50C-60C, ya que el

agar hirviendo es peligroso de manejar, puede rajar el vidrio fro y dar lugar a
condensaciones excesivas. Adems, mezclar bien los componentes insolubles que en
algunos casos son parte integral de la formulacin y deben ser resuspendidos
adecuadamente durante su distribucin.

3.

Esterilizacin:Se esteriliza por autoclave o por ebullicin de acuerdo a las

instrucciones para cada preparacin. el tiempo es de 15 minutos y a una
temperatura de 121 C recomendados estn relacionados con las temperaturas
alcanzadas en el medio y el tiempo en el que se mantengan a la temperatura
especificada.

Todas las instrucciones que indiquen adicionar un reactivo compuesto estril

en el medio despus de autoclavado, se deben realizar teniendo en cuenta las
precauciones aspticas. Ademas de tener encuenta que al sacar el material
no darle cambios bruscos de temperatura ponerolo sobre un papel.

4. Servido de los medios de cultivo: Una vez estril los medios de cultivo debe
ser enfriados a temperatura promedio de 45 - 55C para ser adicionados en
los recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las tcnicas aspticas.
5. Dispensacin e inoculacin
Prender el mechero y mantenerlo encendido para formar un rea de
esterilidad.

vaciar en las cajas de petri y a los tubos de ensayo aproximadamente de

15 ml. A 20 ml De Agar por caja o placa procurando que no se forman
burbujas. Tapar la caja inmediatamente.

Dejamos que el medio solidifique. De la siguiente manera.

Los caldos y medios slidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a

temperatura ambiente pero para reducir su deshidratacin y el consiguiente
cambio en las concentraciones de sus componentes es preferible
conservarlos a 4C.

VI.

RESULTADOS

los resultados obtenidos de los medios que utilizo teniendo en cuenta el de los
caldos y los agares.
Lo resultados de la prctica fueron ptimos salvo en el caso de algunas muestras
que no tomamos la mediada necesaria de taparlas bien.
A las cuales ingreso el agua y no sirvi lo cual fueron descartadas . estas muestras
tomaron un color muy diferente a las que deberan salir su color era de un verde
oscuro casi negro.
Y se podra decir que hemos hecho una buena esterilizacin 99%Porque e la
observacin despus de las 24 horas se encontr en una de las placas Petri
crecimiento no identificado ,Se podra decir que fue un hongo Por las formas
blanquecinas.(esto contribuye a tener mas responsabilidad al momento de el
manejo de materiales y manipulacin de los mismos .
Los caldos no tienen el color adecuado de que debera tener en nuestro caso un
color rojizo Por lo cual stos muestras no nos sirven .
Tal vez haya sido por los agares y caldos Que han sido vencidos Pero los resultados
que encontramos fue en que los Agares no solidificado en condiciones Normales
para siembra .
Por lo cual han la prctica un sea desarrollado nuevamente para la esterilizacin y
preparacin de los cultivos.

Por lo cual sea desarrollado nuevamente es la esterilizacin para siembras

posteriores .

VII.

CONCLUSIONE

Debemos tener los cuidados aspticos necesarios De demos debemos usar

mandil guantes quirrgicos gorritos descartables lo cual ayudarn a La
desarrolle la prctica normalmente Sin tener los mayores percances Y de
esta manera poder avanzar con las prcticas Para llegar a nuestro objetivo.

Tenemos un conocimiento necesario de lo que es un cultivo En nuestro caso

se us agar y caldos nutritivos , el desarrollo del crecimiento de nuestras
bacterias u hongos Que podremos identificar Despus de las siembras .

Las metodologas utilizadas en los medios de cultivo fueron desarrolladas de

acuerdo a lo estipulado ilustre y el prctica as como, se recomienda en las
etiquetas de los Agares y caldos usados en nuestro prctica.

Se ha preparado medios de cultivo En estado slido y en estado lquido los

que han sido puestos En placas Petri y tubo de ensayo Y han sido guardados
Las placas Petri en una estufa a 35C a 37 37C.Y los tubos de ensayo en
una refrigeradora de laboratorio de qumica.

BIBLIOGRAFIA

MICROBIOLOGA AMBIENTAL. W.D.Grant. Editorial Acribia. Zaragoza 1989

MICROBIOLOGIA. Prescott.L. Editorial McGraw-Hill Interamericana. 1999
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO. Concepcin Casado G. Gertrudis Torrico C.
Mara Medina A.2012
ESTERILIZACIN Y PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO 2013.pdf
MICROBIOLOGIA. Prescott.L. Editorial McGraw-Hill Interamericana. 1999.pdf

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
CAJAMARCA
Norte de la Universidad Peruana

EAPIAC
MTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

CURSO:
Microbiologa
DOCENTE:
GISELLA. F. PEREZ FLOREZ

ALUMNO:
JARA SAGAY MAKELVIN

CELENDIN-CAJAMARCA

INTRODUCCIN

Cuando se trata de estudiar la flora bacteriana de un cuerpo, suelo, agua, alimento

o cualquier otra parte de nuestro medio ambiente se ha encontrado que la mayora
de las bacterias existen en poblaciones mixtas. Solamente en muy raras situaciones
es que estas se encuentran como especies simples .
Para ser capaz de estudiar las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de un
cultivo es esencial ante todo que los organismos sean separados de otras especies
con las que normalmente se encuentran es su hbitat natural, es decir se debe
obtener cultivo puro del microorganismo. Existen varios mtodos para obtener un
cultivo puro a partir de mezclas de cultivos. Los dos mtodos mas frecuentemente
usados involucran hacer una estra en una placa o una sobre un tubo. Ambas tcnicas
involucran el uso de pequeas cantidades de microorganismos .

OBJETIVOS
Con la presente prctica se busquen que el alumno con los climas las diferentes formas de
siembra En los diferentes tipos de medios de cultivo .
Aprenda utilizado corrientemente dos diferentes herramientas y Materiales de siembra As
como su manipulacin.

I.

MARCO TEORICO

Las tcnicas empleadas para el aislamiento

Las tcnicas empleadas para el aislamiento presente en una muestra se han
desarrollado para propsitos especficos, segn sea la naturaleza del material a
partir del cual se toman las muestras, el tipo de microorganismos que interesa
determinar, sus condiciones de crecimiento el tiempo y costo de cada una de las
tcnicas:
Procedencia del material y toma de muestra:
Teniendo en cuenta que los microorganismos son ubicuos es decir que se encuentran
en cualquier ambiente, pueden aislarse igualmente de diversos substratos, la
decisin para elegir un substrato de muestreo depende del grupo de
Microorganismos de inters o por que es un substrato de inters industrial, o
sanitario. Algunas veces los microorganismos se han adaptado a condiciones muy
especficas y podrn requerir procedimientos de trabajo para aislamiento
siembra

especiales

como

es

el

caso

de

microorganismos anaerobios,

auttrofos, etc.
Recomendaciones Generales
El matraz se protegen cubriendo la tapa con papel de aluminio u otro material
resistente, no deben usarse despus de 8 das de esterilizado, ya que no se garantiza
su esterilidad despus de este tiempo, no debe destaparse sino hasta el momento
del muestreo, desprenderle la cubierta de papel de aluminio. Debe evitarse el
contacto con objetos aledaos para protegerlos de contaminacin. Despus de la
toma de la muestra debe cuidarse de lavar el exterior del recipiente s este a estado
en contacto con la muestra, para no contaminar las reas de contacto posterior. se
tolera un tiempo mximo de 30 horas con buena refrigeracin. Se descartar toda
muestra que sobrepase este lmite, as como tambin si no se cumplen los requisitos
mnimos requeridos de recoleccin. Las muestras se transportan refrigeradas si su
procedencia est ubicada lejos del laboratorio y se mantienen refrigeradas hasta el
momento del anlisis.

El asa:
Es un alambre de cromo nquel, tiene un dimetro de 0,3 a 1 mm. de dimetro y est
sujeto a un mango de vidrio o de metal. El hilo puede terminar recto (aguja), en anillo
(asa) o aplastado (esptula). Los medios de cultivo, como ya se ha dicho, pueden ser
slidos o lquidos, y estar contenidos en tubos, placas o frascos. La tcnica general
de las siembras variar segn el estado fsico del material a sembrar y del medio de
cultivo.
METODOS DE CULTIVO DE USO RUTINARIO:
Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mecheroDe alcohol (30
cm.), o, en el ambiente dentro de una campana de flujo laminar, ya que, la corriente
ascendente de aire que va por la llama, o la corriente de aire del flujo laminar
arrastra el polvo y otras partculas con el aire hacia arriba, o hacia afuera;
impidiendo la contaminacin del medio de cultivo. El asa debe ser flameada
adecuadamente y enfriada antes de tocar el inculo, o el medio de cultivo.

II. MATERIALES

Asas de siembra
Mechero de alcohol
Medio de cultivo en placas Petri

III.

DESARROLLO DE PRCTICA

1. Siembra en placas:
Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de lquido o de una emulsin
del producto patolgico Con nuestro caso lo muestra de salchi pollo .

Se toma la caja de petri en la palma de la mano izquierda, ligeramente

inclinada; con la mano derecha se maneja el asa previamente esterilizada
y con ella se recoge el material de cultivo se inocula en una pequea rea
de la caja y se trazan estras paralelas hasta la mitad o tercera parte de
la caja

Se quema el asa; se hace girar la caja y se hacen estras en la misma

forma hasta la mitad de la superficie libre; se quema nuevamente el asa y
se hace girar la caja; se trazan estras perpendiculares a las
anteriormente trazadas en el cuadrante libre las estras a partir de ese
punto pasando suavemente el asa en zig-zag, Se esteriliza el asa antes de
descartarla.

Tener los cuidados aspticos en el desarrollo de la prctica En especial la inoculacin (esterilizar el

asa) (mantener seca del mechero la muestra) ademas de crecimiento bacteriolgico se mostr ms
notorio al tercer da de haber sembrado de muestra de cultivo de salchi pollo

Teniendo nuestro cultivo las placas Petri De salchi pollo Se procede a la

siembra lo en medio lquido y solido En tubos de ensayo.
2. Siembra en medio lquido
Lo siembra en este medio puede hacerse utilizando pipeta para lo cual el caso
de muestra lquida es necesario colocar una cantidad de inculo .Coger con el
asa de muestreo bacteriano de salchi pollo Dejar caer directamente sobre el
caldo de cultivo evitando el contacto con las paredes Del tubo.
Puede usarse tambin en la zona de siembra en un anillo con dos de requiere
sembrar cantidades mnimas por ejemplo Al hacerse del repique de cultivo ;
en caso de urocultivo donde se usa grasos graduados . El asa de siembra debe
esterilizarse antes y despus de haber realizado la siembra .

3. Siembra en tubos Medio slido :

El cuello del tubo debe ser flameado antes y despus de ser sembrado. Con el asa
previamente esterilizada a la llama, se toma una pequea cantidad de la muestra y
se lleva al fondo del tubo, luego se estra suavemente la superficie del medio en
forma ondulante. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse
suelto el tapn de algodn para evitar que los gases expulsen el tapn.

4. Siembra por picadura:

El inculo es introducido con el asa recta o pipeta Pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada
que de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y despus de la siembra.
Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir de modo
que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no de la
boca.
Los tapones de algodn de los tubos deben mantenerse en la mano derecha
sostenidos entre el meique y el anular y el dedo del corazn. Nunca deben colocarse
sobre la mesa de trabajo o algn otro lugar. Deben prepararse de algodn no
absorbente.
-

Flamear la boca del tubo.

Quemar el asa.

Sumergirla en el medio sin tocar las paredes del tubo.

Enfriarla en una parte del medio.

Tomar el inoculo con el asa.

Despus practicar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca

del tubo. Colocar los tapones.

5.

Siembra en superficie y picadura:

Igualmente se realizan siembras mixtas en picadura en el fondo del tubo y luego se

desliza el asa por la superficie en bisel marcado estras.
El inculo es introducido con el asa recta o pipeta Pasteur hasta el fondo del medio
con un solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada
que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del Agar haciendo suavemente una
estra ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y despus de la siembra.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapn de algodon
para evitar que los gases expulsen el tapn.

DETERMINACIN

DE

POBLACIN

MICROBIANA

PRESENTE

EN

UNA

MUESTRA
La determinacin de poblacin de microorganismos presentes en una muestra es
posible mediante el empleo de diferentes tcnicas que se basan en el crecimiento
poblacional de los microorganismos. El crecimiento poblacional es resultado de la
existencia de al menos una unidad viable, a partir de la cual se desarrolla la poblacin
denominada colonia y en medio slido se le pude diferenciar entre otras
caractersticas por su apariencia, coloracin y tamao.

Recuentos de colonias en superficie de placa de agar o determinacin del nmero

de bacterias vivas en la poblacin bacteriana

Otros mtodos comunes en microbiologa es el agotamiento por estra: Para llevar a

cabo el aislamiento con este mtodo se preparan cajas con el medio de cultivo donde
previamente ha crecido el microorganismo y en el cual tambin crecen otros
microorganismos.

Como regla general estos medios no son altamente selectivos y

es por esta razn se puede utilizar para hacer un diagnostico 2 grupos grandes de

Al desarrollarse en medios slidos las bacterias forman estructuras visibles

denominadas colonias. Como regla general cada especie forma siempre en el mismo
medio colonias semejantes. Los rasgos de las colonias por tanto son importantes
para la identificacin primaria de grupos de bacterias diferentes. En algunos casos
la identificacin inclusive hasta familia o gnero. En nuestro caso escherichia coli

IV.

RESULTADOS

1. Las muestras llevadas al laboratorio Eran de diferentes tipos que se

encontraba Asequibles a la comunidad para el consumo .
2. Pero hubo fracaso de la siembra por la razn a de que nuestro medio de
cultivo Se encontraban en estado casi lquido y no se pudo hacer la siembra
correctamente.
3. Ni se tuvo que hacer en previamente otro preparado para luego hacer la
siembra respectiva.
4. Despus de las 72 horas en la siembra de ensayo pollo se muestran seis
colonias en crecimiento .
5. La cual los servir como muestra para las siguientes prcticas a desarrollar.
Despus de cinco das la muestra lo tienen ocho colonias muy visibles las
cuales se utilizara Para el aislamiento en los tubos en medio slido y lquido.
6. la practica se llevo a cabo Con normalidad Y de los el tubo algunas
deficiencias Al momento en Que tendramos que manejar las asas
bacteriolgicas .Ya que ste requiere de mucha prctica Adems de
mantener un estado de equilibrio normal De la mano Y manipulacin Del
material de laboratorio .
7. Fue un poco difcil el aislamiento en los tubos de ensayo por siembra de
picadura Y estriado.
8. Por las razones de que an no se ha tenido prctica y unas afectar el
nerviosismo Por lo que se malograron cuatro nuestras del medio slido en
tubo de ensayo En la prctica de siembra por picadura .
9. Como tambin la muestra que estaba mal logrado porque no estaba slida
Y se mova al momento de la picadura .
10.

LECTURA E INTERPRETACIN DE LAS PLACAS

Y TUBOS CON

MEDIO
En la interpretacin de datos a las 24:00 horas se muestran En los tubos
de ensayo en medio lquido que se ha producido un gas positivo Por la
evidencia de la campana de durgan se encuentren en superficie .
En e TCI Se muestra de un color amarillento por la presencia de clorafenil
y que el ph es acido Lo que lo convertido en un color amarillento o ambar
Ya que la muestra tiras de un color rosado o rojo Adems de mostrar
partituras por la accin de los gases positivos La batera indicada por la
docente en Fue escherichia coli .

Placa/ tubo

Imagen

Crecimiento en
colonias
Hongos

Interpretacin

Bacterias

tubo de
ensayo En
medio slido

coloracin mbar
homognea. El alto
contenido de glucosa,
la presencia de

Escherichia coli

TCI.Se observa

No se identific

Control De

cloranfenicol y el pH
cido,Productora de
gas , por que la
bacteria y tienen la
capacidad infectare l
medio .

Escherichia coli

lquido

No se identific

Control del
tubo de
ensayo en
medio

Se observa la
presencia de casas
positivos Porque la
campana de durgan
Ha subido la
superficie del medio
lquido .

V.

RECOMENDACIONES

Toda siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales:

1. Practicarla en medios de cultivo favorable y previamente esterilizado.
2. Emplear instrumentos aspticos.
3. No contaminar ni destruir el inculo,
4. Depositarla aspticamente en los medios elegidos.
5. Esterilizar los instrumentos empleados antes y despus de cada operacin.

VI.

CONCLUSIONES

Al terminar la prctica de mtodos de siembra y aislamiento Sido reconocido las diferentes

formas de siembra en medios de cultivo Lo cual han conllevado a la mejora de las capacidades
intelectuales y desarrollo ,complementacin De las teoras atendidas en clase adems del buen
uso y manejo de los materiales y equipos Que se encuentre en el laboratorio .
si las siembras no se hacen sin con las medidas aspticas adecuadas nos conllevar al fracaso y
la repeticin de la practica como en nuetro caso.
Las medidas tomadas en lboratorio son mu importates para poder obtener resultados
positivos y poder identificar las muestras si es que existe contaminacin o no existe
contaminacin .

BIBLIOGRAFIA

Feller, Williams (1950) An introduction to probability theory and its

applications third edition. Volume I .A Wiley International Edition.

ISO 14698-1: reas Limpias y ambientes controlados asociados- Control de

biocontaminantes. Parte 1: Principios y mtodos generales.

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Microbiological Evaluation of Clean Rooms and other Controlled

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Ministerio de Salud. Norma General Tcnica N 59. Manipulacin de

Medicamentos

Estriles en Farmacias de Hospitales. Chile. 2001.

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Diciembre 11, 2002.

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