UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MORELOS

FACULTAD DE MEDICINA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

BIOL. MARÍA LETICIA GARCÍA GÓMEZ

MANEJO DE MICROSCOPIO

ALUMNO: DANIEL BENÍTEZ CARTEÑO

EDUARDO HERNANDEZ OCAMPO

GRUPO: 2-D
OBJETIVO

El alumno aprenderá a manejar el microscopio compuesto y conocer las partes de que consta; de
igual manera se enseñará a cuidarlo y a tratarlo como un importante aparato de laboratorio; para
lo cual deberá desarrollar la siguiente metodología.

I.- MARCO TEORICO:

1.- Reseña histórica del microscopio óptico

El microscopio compuesto, a diferencia del microscopio simple, está provisto de dos sistemas de
lentes: uno son los objetivos y el otro son los oculares, usualmente montados en un tubo o cuerpo
del microscopio.

La invención de este aparato o herramienta de laboratorio fue indispensable para que el hombre
pudiera observar los microorganismos y determinar su morfología como la conocemos hoy en día.
Este hecho se atribuye indistintamente al fabricante de gafas danés Zacarías Jensen (1590), y a
Galileo (1609) aunque la capacidad de aumento de los lentes convexos era ya conocida tiempo atrás.

Sin embargo en la historia del microscopio óptico compuesto se atribuye mención oficial al Holandés
Anthony Van Leeuwenhoek (1632-1723); quien fue uno de los primeros en dejar constancia de sus
observaciones, elaborando notas detalladas y bosquejos de los diminutos pobladores de las aguas
estancadas, de las heces de un diarreico y del sarro dental.

Leeuwenhoek diseño diferentes tipos de microscopios. Todos ellos poseían una gran capacidad
óptica. Se estima que monto alrededor de 247 lentes, la mitad de las cuales eran de plata, tres de
oro y el resto de bronce. Aunque la estructura era rudimentaria, la calidad de las lentes utilizadas y
su capacidad como observador dieron como resultado una serie de observaciones que causaron
sensación entre los naturistas de su época. Durante su vida envió a las sociedades científicas más
de 350 cartas con observaciones microscópicas.

En la subsiguiente evolución del microscopio óptico han participado eminentes científicos y técnicos
desde si invención hasta nuestros días, para darnos el modelo de instrumento de laboratorio que
podemos emplear exitosamente en nuestras experimentaciones día con día.

2.- Conocimiento de sus partes fundamentales:

Se considera que la física del microscopio óptico (que en lo sucesivo llamaremos simplemente
“microscopio”) consta de tres sistemas: sistema óptico, sistema mecánico y sistema de iluminación;
cada uno de los cuales posee las siguientes partes, mismas que podemos observar en la figura 1,
son las siguientes:

● Sistema óptico (O): Está formado por oculares, objetivos y condensador.

● Sistema mecánico (M): Está formado por soporte, el brazo, la platina, el revólver, tornillo
macrométrico y micrométrico, tornillo del condensador y otros.
● Sistema de iluminación: (I): Formado por una fuente luminosa generalmente integrada a la base
del microscopio, aunque puede darse el caso de que esta sea una lámpara periférica, ajena a la
estructura del instrumento.

El sistema óptico puede ser muy variado según el modelo del instrumento de que se trate, así puede
tener un solo ocular (monocular) o dos oculares (binocular), además pueden ser un solo tipo de
aumento o juegos de oculares de diferentes aumentos.

Los objetivos generalmente son varios, por lo regular tres montados en el revolver. Estos objetivos
son:

● Objetivo 10 X o seco débil ● Objetivo 40 X o seco fuerte ● Objetivo 100 X o de inmersión

Por último, el condensador de la luz tiene también una lente o juego de lentes que sirven para
concentrar y orientar los rayos luminosos hacia la preparación

El sistema mecánico consta del tubo del microscopio, en cuya parte superior están colocados los
oculares y en la inferior sobre el revólver están los objetivos, los cuales están montados por medio
de engranes a un soporte y este es accionado por dos tornillos: el primero es el macrométrico, de
movimientos rápidos y el segundo es el micrométrico, de movimientos lentos o finos.

Hacia la mitad inferior del tubo se encuentra el dispositivo para sostener las preparaciones en la
posición correcta: la platina, que puede ser fija o móvil, para lo cual estará provista de dos tornillos
que constituyen el carro y que permiten desplazar con seguridad la preparación hacia atrás y hacia
delante o a la izquierda y a la derecha. El tornillo del condensador se encuentra en la parte inferior
de la platina.

Para el sistema de iluminación, dos tipos de fuentes luminosas se pueden encontrar: una puede ser
una lámpara periférica que proyecta la luz que choca contra un espejo cóncavo o plano; la segunda
es una lámpara ínter construida en el microscopio que proyecta los rayos luminosos directamente
al condensador sin el uso del espejo.

3.- Tipos de microscopios

Siendo la microscopia el examen de preparaciones a través del microscopio, es sin lugar a dudas
más que este simple concepto; ya que el uso de este y los diferentes tipos que existen le dan la
capacidad de ser multifacético y su uso se ha extendido a todas las ramas del área biomédica. De tal
modo que los microscopios se clasifican por el tipo de fuente luminosa empleada y por el medio de
refracción y resolución en:

a).- Microscopios ópticos:

Usan la luz blanca visible (con sus diferentes modificaciones). Se basan parcial o totalmente en la
refracción o desviación de la luz visible, fenómeno que ocurre cuando esta pasa de un medio
transparente a otro o de idéntica característica pero óptimamente más densa que el primero.

Dentro de estos se encuentra el microscopio simple o lupa, el microscopio compuesto, el

estereoscopio, el de polarización, el de fluorescencia, el de campo oscuro, el de fase, el de
interferencia, el de proyección y otros.
b).- Microscopios no ópticos:

Los que utilizan radiaciones tales como: de onda corta, de rayos X, de iones o de electrones. Estos
instrumentos aumentan el tamaño de los objetos por medio de radiaciones d onda corta, de rayos
X, de iones o de electrones. El aumento depende de la emisión de onda, mientras más corta, mayor
aumento. Su aumento puede ser de 100,000 o más que el de los ópticos (tomando como referencia
el aumento 200 X). En estos, la obtención de la imagen se logra de varias maneras: por medio de
una pantalla fluorescente, por medio de una película fotográfica o por medio de tubos de televisión
y de rayos catódicos especiales. Entre estos microscopios destaca el microscopio electrónico con el
cual es posible observar estructuras como los virus, que no pueden ser vistos con el microscopio de
luz ordinaria.

II.- MEDIDAS DE SEGURIDAD:

1.- Para el transporte del microscopio:

● Al trasladarlo del área de despacho del material a la mesa de trabajo debe tomarse con la mano
derecha el brazo del microscopio, deslizarse hasta la orilla de la mesa y apoyar la base sobre la palma
de la mano izquierda. Mantenerlo siempre en posición vertical, por ningún motivo inclinarlo puesto
que se le pueden caer las piezas que no son fijas, como el filtro azul, los oculares u otras.

● Para colocarse sobre la mesa de trabajo debe depositarse suavemente sobre ella y deslizarlo son
cuidado hacia el lugar donde se encuentran las conexiones de corriente eléctrica.

● Nunca deberá colocarse cerca de mecheros encendidos ni sobre mesas en donde halla equipos
que al estar en funcionamiento estén vibrando; como rotadores, agitadores, centrífugas, etc.

2.- Para su manejo

● Antes de hacer uso de él debe cerciorarse de que los oculares, objetivos y condensador estén
limpias; de no ser así, deberá proceder a limpiarlas con un trozo de papel seda (papel especial para
instrumentos ópticos). Nunca usar papeles ni telas que desprendan pelusas.

● No deben quitarse ni desarmarse las lentes de su lugar, porque al hacerlo permite el paso del
polvo al interior del microscopio que no podría ser quitado con una limpieza simple, sino mediante
el desensamble de las lentes y esto solo puede hacerlo un técnico especializado.

● Los objetivos, el condensador y los oculares en los que la limpieza con papel seda no sea suficiente
para remover los residuos deberán reportarse al técnico auxiliar del laboratorio; por ningún motivo
el alumno podrá usar agua, detergentes, jabones, solventes orgánicos como el xilol, etc.

● Cuando se ha usado el objetivo de inmersión, se deberá quitar primero el exceso de aceite con un
paño o trozo de papel suave y posteriormente con papel seda. Nunca se usará xilol.

3.- Para su almacenaje: Mientras el microscopio no se está usando debe de mantenerse protegido
del polvo, la humedad y los vapores corrosivos, por lo que debe mantenerse en lugares secos y
guardados en su estuche o cubierto con una funda de material plástico de tamaño adecuado.

4.- Factores que lo dañan: Todos los mencionados en cada maniobra que se ejecute para su manejo,
transporte y almacenaje.
III.- OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES MICROSCÓPICAS:

Tomando en consideración el contenido temático de la materia de Microbiología y la naturaleza del

trabajo del laboratorio que el alumno desempeñara, es indispensable que su entrenamiento en el
manejo adecuado del microscopio óptico compuesto los inicia con los diferentes tipos de
preparaciones que tendrá necesidad de efectuar en la mayoría de sus prácticas; las cuales son:
Preparaciones en portaobjetos para objetivos 10X, 40X, 100X; además de la técnica de iluminación
del campo microscópico.

A continuación se dan las metodologías y técnicas que el alumno tendrá que desarrollar para cada
una de las secciones antes mencionadas.

1.- Iluminación del campo microscopio.

a) Conectar el cable del microscopio a la corriente eléctrica, cerciorándose de que no halla falsos
contactos ni alambres que puedan ocasionar un corto circuito.

b) Efectuar las maniobras de limpieza en oculares, objetivos y condensador.

c) Colocar el objetivo 10X (seco débil) sobre la apertura del platina teniendo cuidado de que este no
quede de lado (inclinado) si no exactamente vertical a la platina y al condensador. d) Cerrar el
diafragma para evitar una cantidad de luz excesiva que pueda dañar la vista.

e) Encender la fuente luminosa. Si esta tiene galvanómetro para ajuste de la intensidad, tener
cuidado de que no quede al máximo; un ajuste entre 2 y 3 graduaciones puede ser bueno.

f) Observar a través de los oculares. El campo microscopio estará oscuro.

g) Abrir lenta y cuidadosamente el diafragma hasta obtener un campo microscopio nítido, uniforme,
sin destellos policromáticos ni sombras, de tal manera que no hiera la vista.

h) Si estos pasos se han realizado adecuadamente, el campo microscópico deberá ser semejante a
la imagen que nos proporciona una luna llena. De lo contrario vuelva a repetir el procedimiento; si
el instrumento tuviese algún desperfecto comunicarlo al profesor o al auxiliar académico. El campo
microscópico se encuentra ahora listo para que sea posible colocar sobre la platina la preparación
que se desee observar, siguiendo la técnica de enfoque adecuada.

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO:

● Portaobjetos (4) ● Cubreobjetos (2) ● Muestra bacteriológica en tubo de 16 x 150 con 10 ml de

caldo nutritivo ● Pipetas Pasteur con gotero (1) ● Mechero Bunsen ● Tina de Tinción con puente de
vidrio ● Preparación bacteriológica teñida, fija en portaobjetos, SIN CUBREOBJETOS ● Microscopio
óptico compuesto ● Papel seda ● Aceite de inmersión

2.- OBSERVACIÓN CON OBJETIVO 10x (Seco Débil)

Para llevar a cabo este método o técnica, el alumno requiere haber realizado la revisión ocular de
los puntos de seguridad para el manejo del microscopio y la técnica de iluminación del campo
microscópico.

METODO:
1.- Cerciorarse de que el objetivo 10X este colocado correctamente sobre la apertura de la platina
y de que se encuentre a la altura tope.*

* Si el microscopio está provisto de tope móvil por medio de un tornillo situado entre la platina y el
brazo; se deberá buscar la altura tope idónea mediante la ubicación primero del objetivo de mayor
tamaño (el de 100X), el cual deberá quedar a una altura aproximada al espesor del portaobjetos (2
a 3 mm. aproximadamente). Fijar en este punto el tornillo tope móvil e INTERCAMBIAR
inmediatamente al objetivo 10X

2.- Solicitar al profesor o al auxiliar del laboratorio, una preparación fresca de muestra microbiana
montada entre porta y cubreobjetos

3.- Colocar la preparación sobre la platina del microscopio, teniendo cuidado de accionar la pinza
para sujetar en firme el portaobjetos.

4.- Observar a través de los oculares. Verificar que la iluminación del campo sea correcta.

5.- Para el caso de las preparaciones en fresco, suele ser útil cerrar parcialmente el diafragma antes
de intentar el enfoque de la preparación. Ajustarlo a posterior.

6.- Sin dejar de observar el campo microscópico, accionar mediante movimientos suaves el tornillo
macrométrico en sentido contrario al movimiento realizado para localizar el punto tope (haciendo
que la distancia entre la preparación y el objetivo 10X sea mayor) hasta encontrar el punto de
enfoque, o sea una imagen más o menos definida del objetivo microscópico.

7.- Mediante movimientos finos con el tornillo micrométrico, afinar la imagen microscópica.

8.- Analizar la preparación recorriéndola con el objetivo 10X mediante el dispositivo del carro de la
platina; empezando en el ángulo superior derecho del área del cubreobjetos y terminando en el
ángulo inferior correspondiente, teniendo cuidado de que el traslado de la preparación sea siempre
con movimientos finos o suaves de derecha a izquierda y a la inversa.

9.- Anotar las técnicas y procedimientos manuales, representar gráficamente los campos
microscópicos importantes, etc.

3.- OBSERVACIONES CON OBJETIVO 40 x (Seco fuerte) Para este método se continúa trabajando con
la preparación anterior.

METODO:

1.- SIN RETIRAR DE LA PLATINA LA PREPARACIÓN DEL PROCEDIMIENTO ANTERIOR, SIN MOVER EL
ENFOQUE LOGRADO CON EL OBJETIVO 10X; girar el revolver hacia el objetivo 40X, teniendo cuidado
de que quede ajustado en posición exactamente vertical.

2.- Observar a través de los oculares. Como el enfoque ya está dado por el objetivo 10X, la imagen
del objeto se observará ahora (con el objetivo 40X) inmediatamente, pero ahora con mayor
aumento (poder de resolución).

3.- Si la imagen no esté bien definido, ajustar el enfoque accionando el tornillo micrométrico
suavemente en el sentido que sea necesario (hacia el frente o hacia atrás)
4.- Analizar la preparación recorriéndola de la misma manera que para el objetivo seco débil. Punto
8 del método anterior.

5.- Anotar las técnicas y procedimientos manuales, representar gráficamente los campos
microscópicos importantes, etc.

4.- OBSERVACIONES CON OBJETIVO 100x, (INMERSIÓN): Para este tipo de observaciones se requiere
que el alumno haya realizado la técnica de iluminación del campo microscópico; la revisión ocular
de los puntos de seguridad del microscopio.