ANTIVIRALES

A diferencia de las bacterias, los virus son parásitos intracelulares obligados que utilizan la
infraestructura biosintética de la célula hospedadora y sus enzimas para su replicación. Por tanto,
es mucho más difícil inhibir la replicación vírica sin provocar simultáneamente una cierta toxicidad
al organismo hospedador.

Objetivos de los fármacos antivirales.

1. Alteración del virión.

Los virus con envoltura son sensibles a ciertos lípidos y moléculas semejantes a los detergentes
que dispersan o alteran la membrana de la envoltura, lo que impide la adquisición del virus.

 El nonoxinol-9, un componente semejante a un detergente en las cremas anticonceptivas,

puede inactivar al virus del herpes simple (VHS) y el virus de la inmunodeficiencia
adquirida (VIH) e impide la adquisición del virus por vía sexual.
 Los rinovirus son sensibles a los ácidos, por lo que el ácido cítrico se puede incorporar a los
tejidos faciales con el fin de inhibir la transmisión de estos patógenos.

2. Unión.

El primer paso de la replicación vírica está mediado por la interacción de una proteína de unión
vírica con su receptor de la superficie celular. Esta interacción se puede inhibir mediante
anticuerpos neutralizantes que se unen a la proteína de unión vírica, o mediante antagonistas de
los receptores.

La vacunación pasiva es la forma mas antigua de terapia antiviral.

 Antagonistas de receptores: análogos de péptidos o de azúcares del receptor celular o de

la proteína de unión vírica que inhibe competitivamente la interacción del virus con la
célula.
  Los fármacos que se unen a la molécula receptora de quimiocinas C-C 5 bloquean la unión
del VIH a los macrófagos y a algunos linfocitos T CD4 para evitar la infección inicial.
 Los polisacáridos ácidos, como el heparano y el sulfato de dextrano, interfieren en la unión
vírica y se han sugerido para el tratamiento por VIH, VHS y otros virus.

3. Penetración y pérdida de la envoltura.

La introducción del genoma vírico en el citoplasma de la célula hospedadora requiere la

penetración y la pérdida de la envoltura del virus.

 Arildona
 Disoxaril
 Pleconaril
 Derivados del metil isoxazol

Inhiben la desaparición de la envoltura de los picornavirus al introducirse en una hendidura del

cañón de unión al receptor de la cápside e impedir la disociación de la misma.

En los virus que llevan a cabo la penetración por medio de vesículas endocíticas, cambios
conformacionales de las proteínas de unión que favorecen la fusión o bien la alteración de la
membrana provocada por el entorno acídico de la vesícula pueden desencadenar el proceso de
perdida de la envoltura.

 Amantadina, rimantadina y otras aminas hidrófobas son productos antivirales que pueden
neutralizar el pH de estos compuestos e inhibir la perdida de envoltura de la partícula
vírica.

-Amanradina y la rimantadina tienen una actividad mas especifica para el virus de

la gripe A. Estas moléculas se unen a un canal del ion hidrogeno formado por la proteína
M2 vírica y lo inhiben. La inhibición del canal de protones interrumpe el metabolismo
correcto de la proteína hemaglutinina al final del ciclo de la replicación. La hemaglutinina
cambia su conformación y se transforma en su forma de fusión, la cual se inactiva cuando
atraviesa el entorno normalmente acido del aparato de Golgi,

-Tormantadina es un derivado de la amantadina, inhibe la penetración del VHS.

-La penetración y pérdida de envoltura del VIH son inhibidas por un péptido
formado por 33 aminoácidos, T20 (enfuvirtida), que inhibe la acción de la proteína de
fusión vírica gp41.

4. Síntesis de ARN.

La síntesis de ARNm no es un buen objetivo para los fármacos antivirales.

Es difícil inhibir la síntesis de ARNm vírico sin afectar la síntesis del ARN celular.

Los virus de ADN usan transcriptasas de la célula hospedadora para la biosíntesis del ARNm. Las
polimerasas de ARN codificadas por los virus ARN no difieren lo suficiente de las transcriptasas de
la célula hospedadora para permitir la acción diferencial de los fármacos antivirales.
  Guanidina y 2-hidroxibenzilbencimidina son compuestos capaces de inhibir la síntesis del
ARN de los piconavirus al unirse a su proteína 2C, la cual desempeña una función clave en
la síntesis del ARN.
 La estructura de la ribavirina es semejante a la de la riboguanosina, por lo que inhibe la
biosíntesis de nucleósidos, la preparación del ARNm y otros procesos celulares víricos.

5. Replicación del genoma.

La mayoría de fármacos antivirales son análogos de nucleósidos que presentan modificaciones de

la base, el azúcar o ambos.

Las polimerasas ADN codificadas por los herpesvirus y las transcriptasas inversas características del
VIH y del virus de la hepatitis B (VHB) son el objetivo principal de la mayoría de fármacos
antivirales debido a su función clave en la replicación vírica y a que diferencian enzimas de la
célula hospedadora.

Antes de ser usados por la polimerasa, los análogos de nucleósidos deben fosforilarse para
convertirse en formas trifosfato por las enzimas víricas, las enzimas celulares o ambas.

 La timidina cinasa del VHS y del virus de la varicela-róster (VVZ) añade el primer fosfato a
la molécula de aciclovir (ACV) y las enzimas celulares unen los grupos fosfato restantes.
Los mutantes de VHS que carecen de la actividad de la timidina cinasa son resistentes a la
acción de ACV.
 El análogo azidotimidina (AZT) y muchos otros análogos de nucleósidos son fosforilados
por las enzimas celulares.
 Estos fármacos impiden la elongación de la cadena como consecuencia de la ausencia de
un 3´-hidroxilo en el azúcar o bien impiden el reconocimiento y el emparejamiento de
bases como consecuencia de una modificación de las mismas.
 ACV, ganciclovir (GCV), valaciclovir, penciclovir, famciclovir, adefovir, cidofovir, adenosina
arabinósido (vidarabina, ara-A), ridovudina (AZT), lamivudina (3TC), didesoxicitidina y
didesoxiinosina. Los fármacos antivirales que se incorporan al genoma vírico y provocan
errores en la replicación (mutación) y transcripción (ARNm y proteínas inactivas).

6. Síntesis de proteínas.

Los virus utilizan los ribosomas y los mecanismos sintéticos de la célula hospedadora para su
replicación, lo que hace imposible llevar a cabo una inhibición selectiva. El interferón a (IFN-alfa) y
el interferón b (IFN-beta) detienen el virus al favorecer la inhibición de la mayor parte de las
reacciones de biosíntesis proteica celular de la célula infectada.

La proteólisis de una poliproteína vírica o la transformación de las glucoproteínas

(castanospermina, desoxinojirimicina), puede inhibir la replicación vírica.

7. Ensamblaje y liberación del virión.

La proteasa del VIH es una molécula única y esencial para la formación de las partículas víricas y la
producción de partículas infecciosas.

 Para diseñar inhibidores de la proteasa del VIH, como saquinavir, ritonavir e indinavir.
  Bocepravir y el telaprevir son dos nuevos inhibidores de la proteasa utilizados para el
tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis C (VHC). Las proteasas de otros virus
también constituyen el objetivo de otros fármacos antivirales.
 La neuraminidasa del virus de la gripe también se ha convertido en un objetivo para los
fármacos antivirales. El zanamivir y el oseltamivir actúan como inhibidores enzimáticos y, a
diferencia de la amantadina y la rimantadina, pueden inhibir los virus de la gripe A y B. La
amantadina y la rimantadina también inhiben la liberación del virus de la gripe A.

8. Estimuladores de respuestas inmunitarias innatas protectoras en el hospedador.

Los mejores compuestos antivirales son los producidos por las respuestas antivíricas innata e
inmunitaria del hospedador.

 El imiquimod, el resiquimod y los oligodesoxinucleótidos CpG pueden estimular las

respuestas innatas de las células dendríticas, los macrófagos y otras células al unirse a
receptores de tipo toll para favorecer la liberación de citocinas protectoras y la activación
de las respuestas inmunitarias celulares.
 El interferón y los inductores de interferón, como los polinucleótidos emparejados
incorrectamente y el ARN bicatenario facilitan el tratamiento de las enfermedades
crónicas causadas por el virus de la hepatitis C y los papilomavirus.
 Los anticuerpos, desarrollados de forma natural o mediante vacunación pasiva impiden
tanto la adquisición como la diseminación del virus.
 Por ejemplo, la vacunación pasiva se administra tras la exposición al virus de la rabia, el
virus de la hepatitis A (VHA) y el VHB.

Análogos de nucleósidos.

La mayoría de fármacos antivirales aprobados por la Food and Drug Administration (FDA)
estadounidense son análogos de nucleósidos que inhiben las polimerasas víricas. Las resistencias
frente al fármaco suelen deberse a una mutación de la polimerasa.

1. Aciclovir, valaciclovir, penciclovir y Famciclovir.

 El fármaco aciclovir (ACV) (acicloguanosina) y su derivado valilo, valaciclovir, se diferencian

en algunas consideraciones farmacológicas.
- El ACV difiere del nucleósido guanosina debido a la presencia de una cadena
lateral acíclica (hidroxietoximetil) en lugar de un grupo ribosa o desoxirribosa.
Ejerce una acción selectiva frente al VHS y el VVZ.
- La toxicidad mínima de ACV también es un resultado de un uso por parte de la
polimerasa de ADN vírica que supera en 100 veces o más el uso que hacen las
polimerasas de ADN celulares.
- La resistencia al ACV es una consecuencia de una mutación de la timidina
cinasa que impida la activación de ACV o una mutación de la polimerasa de
ADN que impida su unión a ACV.
- Eficiente frente a infecciones por VHS como encefalitis, el herpes diseminado y
otras enfermedades graves provocadas por este grupo de virus.
 El fármaco valaciclovir, ester valido de ACV se absorbe mas eficientemente.
 - El ACV y el valaciclovir también se pueden usar para el tratamiento de la
infección por VVZ, aunque se necesitan dosis más elevadas. El VVZ es menos
sensible a este compuesto debido a que el ACV es fosforilado con menor
efcacia por la timidina cinasa del VVZ.
 El penciclovir inhibe el VHS y el VVZ de la misma forma que ACV, pero se concentra y
persiste en las células infectadas en mayor medida que este compuesto. También posee
una cierta actividad frente al virus de Epstein-Barr y el citomegalovirus (CMV).
- El famciclovir es un derivado profármaco de penciclovir que se absorbe por vía
oral y se transforma en penciclovir en el hígado o la mucosa intestinal.
- La resistencia a penciclovir y a famciclovir se desarrolla de la misma forma que
la resistencia frente a ACV.

2. Ganciclovir.

 El ganciclovir (GCV) (dihidroxipropoximetil guanina) se distingue de ACV porque tiene un

único grupo hidroximetilo en la cadena lateral acíclica. La consecuencia más destacada de
esta adición es la aparición de una considerable actividad frente al CMV.
 Las polimerasas de ADN víricas tienen una afnidad por el fármaco 30 veces superior que la
polimerasa de ADN celular.
 El GCV es efcar para el tratamiento de la retinitis por CMV.
 Su uso se ve limitado porque el fármaco puede provocar toxicidad medular y de otro tipo.

3. Cidofovir y adefovir.

 El cidofovir y el adefovir son dos análogos de nucleótidos que contienen un grupo fosfato
unido al análogo del azúcar. Esta adición hace innecesaria la fosforilación inicial por una
enzima vírica.
 Los compuestos que poseen este tipo de análogo de azúcar funcionan como sustratos de
las polimerasas de ADN o las transcriptasas inversas y actúan sobre un abanico más amplio
de virus sensibles.
 El cidofovir, un análogo de la citidina, ha recibido la aprobación para su uso en infecciones
por CMV en pacientes con SIDA, pero también inhibe la replicación de los poliomavirus y
papilomavirus e inhibe las polimerasas de los herpesvirus, los adenovirus y los poxvirus.

4. Azidotimidina.

 Desarrollado originalmente como fármaco anticancerígeno, la azidotimidina (AZT) fue el

primer tratamiento útil en las infecciones por VIH.
 Nucleosido derivado de la timidina, inhibe la transcriptasa inversa del VIH.
 La AZT debe someterse a una fosforilación por enrimas de la célula hospedadora. Carece
del grupo 3´-hidroxilo necesario para la elongación de la cadena de ADN e impide la
síntesis del ADN complementario.
  El efecto terapéutico selectivo de AZT procede de la sensibilidad 100 veces menor de la
polimerasa de ADN de la célula hospedadora en comparación con la transcriptasa inversa
del VIH.
 La elevada tasa de error de la VIH polimerasa crea numerosas mutaciones y estimula el
desarrollo de cepas resistentes a los fármacos antivirales. Este problema se controla
administrando un tratamiento polifarmacológico como terapia inicial (tratamiento
antirretroviral de gran actividad [TARGA]).

5. Didesoxiinosina, didesoxicitidina, estavudina y lamivudina.

Se han aprobado otros análogos nucleósidos como fármacos anti-VIH.

 La didesoxiinosina (didanosina) es un análogo de nucleósidos que se convierte en

didesoxiadenosina trifosfato.
 La didesoxicitidina y la estavudina (d4T) carecen de un grupo 3´-hidroxilo.

Estos fármacos están disponibles para el tratamiento del SIDA que no responde al tratamiento con
AZT, o pueden administrarse combinados con AZT. La lamivudina también es activa frente a la
polimerasa-transcriptasa inversa del VHB. La mayoría de los fármacos anti-VIH pueden producir
efectos adversos tóxicos.

6. Ribavirina.

 El fármaco ribavirina es un análogo del nucleósido guanosina, aunque se diferencia de ésta

en que su anillo base está incompleto y abierto. Igual que otros análogos de nucleósidos,
la ribavirina debe fosforilarse para disponer de actividad. El fármaco es activo in vitro
frente a una gran variedad de virus.
 El monofosfato de ribavirina se parece al monofosfato de guanosina e inhibe la biosíntesis
de nucleósidos, la formación de la cabera del extremo del ARNm y otros procesos
importantes para la replicación de muchos virus.
 La ribavirina agota las reservas celulares de guanina inhibiendo la inosina monofosfato
deshidrogenasa, una enzima importante en la ruta de síntesis de la guanosina.
 También impide la síntesis del extremo 5´ del ARNm al interferir en la guanilación y la
metilación de la base del ácido nucleico.
 La ribavirina se administra en forma de aerosol a los niños con bronconeumonía grave
provocada por el virus respiratorio sincitial, y se puede administrar a adultos con gripe o
sarampión graves. El fármaco puede ser eficaz para tratar el virus de la gripe B, así como
las fiebres del valle del Rif, de Crimea-Congo, de Corea y de Argentina.

7. Otros análogos de nucleósidos.

 Los análogos idoxuridina, trifuorotimidina y fuorouracilo son análogos de la timidina. Estos

fármacos 1) inhiben la biosíntesis de la timidina, un nucleótido esencial para la síntesis del
 ADN, o 2) sustituyen a la timidina y se incorporan al ADN vírico. Estas acciones inhiben la
síntesis de virus o provocan extensas lecturas erróneas del genoma, lo que da lugar a la
mutación e inactivación del virus. Estos fármacos se dirigen a células en las que se está
produciendo una intensa replicación del ADN, como es el caso de las infectadas por VHS, y
protegen a las células en estado estacionario frente al daño.
 La adenina arabinósido fue el principal fármaco anti-VHS hasta que se descubrió ACV, pero
ya no se utilira en la actualidad. El ara-A es un análogo del nucleósido adenosina en el que
la molécula de arúcar arabinosa se sustituye por desoxirribosa. Este producto es
fosforilado por las enrimas celulares, incluso en las células no infectadas. Ara-A tiene un
mayor potencial de causar toxicidad que ACV y es difícil de administrar. La enrima vírica es
entre 6 y 12 veces más sensible que la enrima celular.

Inhibidores de la polimerasa no nucleósidos.

 El foscarnet (PFA) y el ácido fosfonoacético (PAA) relacionado con él son compuestos

sencillos que se parecen a los pirofosfatos. Estos fármacos impiden la replicación vírica.
- Las moléculas de PFA y PAA no inhiben las polimerasas celulares a
concentraciones farmacológicas, pero pueden provocar problemas renales y
de otro tipo debido a su capacidad para quelar los iones metales divalentes e
incorporarse a los huesos.
- El PFA inhibe la polimerasa de ADN de los herpesvirus y la transcriptasa inversa
del VIH sin necesidad de ser fosforilado por las nucleósido cinasas.
 La nevirapina, la delavirdina, el efavirenz y otros inhibidores de la transcriptasa inversa no
nucleósidos se unen a sitios de la enrima distintos a los que se une el sustrato.
- Puesto que los mecanismos de acción de estos fármacos diferen de los de los
análogos de nucleósidos, el mecanismo de resistencia del VIH a estos agentes
también es distinto. En consecuencia, estos fármacos pueden ser muy útiles
cuando se combinan con análogos de nucleósidos para el tratamiento de la
infección por el VIH.

Inhibidores de la proteasa.

La estructura única de la proteasa del VIH y su función clave en la producción de una cápsula vírica
funcional ha convertido a esta enrima en un buen objetivo para los fármacos antivirales.

 El saquinavir, el indinavir, el ritonavir, el nelfnavir, el amprenavir y otros agentes actúan

introduciéndose en el sitio activo hidrófobo de la enrima.
 La combinación de un inhibidor de la proteasa con AZT y un segundo análogo de
nucleósidos (TARGA) puede reducir los valores sanguíneos de VIH hasta límites
indetectables. Además, es menos probable el desarrollo de resistencias frente a un
«cóctel» de fármacos anti-VIH que frente a un único compuesto.
 Los inhibidores de proteasas tienen un gran potencial en el tratamiento de las infecciones
por el virus de la hepatitis C y otros virus.
Fármacos antigripales.

 Amantadina y rimantadona son aminas con eficiencia clínica frente al virus de la gripe A,
pero no frente al virus de la gripe B.
- Estos fármacos tienen diversos efectos sobre la replicación del virus de la gripe
A. Ambos compuestos son acidotrófcos y se concentran en el contenido de las
vesículas citoplásmicas involucradas en la entrada del virus de la gripe. Este
efecto puede inhibir el cambio conformacional de la proteína hemaglutinina
mediado por ácidos que facilita la fusión de la envoltura del virus con la
membrana celular.
- La amantadina y la rimantadina pueden ser útiles para aliviar una infección por
el virus de la gripe A cuando se administran durante las 48 horas siguientes al
contagio. También son útiles como tratamiento profláctico en lugar de una
vacuna.
 El zanamivir y el oseltamivir inhiben el virus de la gripe A y B debido a que son inhibidores
enrimáticos de la neuraminidasa de estos virus.
- La inhibición de la neuraminidasa permite que la hemaglutinina vírica se una
al ácido siálico de otras glucoproteínas para formar coágulos e impedir el
ensamblaje y la liberación de los virus.

Inmunomoduladores.

 Se han aprobado formas de IFN-a modificadas por ingeniería genética para su

administración en el ser humano. Los interferones actúan uniéndose a los receptores de la
superficie.
 Además, los interferones estimulan la respuesta inmunitaria y favorecen la eliminación
inmunitaria de la infección vírica.
 El IFN-a es activo frente a muchas infecciones víricas, incluidas las hepatitis A, B, y C, el
VHS, el papilomavirus y el rinovirus.
 Se ha aprobado para el tratamiento del condiloma acuminado (verrugas genitales, una
presentación del papilomavirus) y la hepatitis C (en especial con ribovirina). La unión de
polietileno glicol al IFN-a (IFN-a pegilado) aumenta su potencia.
 El imiquimod, un ligando de receptores de tipo toll, estimula respuestas inmunitarias para
atajar la infección vírica. Este abordaje terapéutico puede activar respuestas protectoras
locales frente a los papilomavirus, los cuales suelen eludir los mecanismos de control
inmunitario.

Control de infecciones.

La diseminación vírica se puede controlar de las siguientes formas:

1. Limitando los contactos personales con las fuentes de infección (p. ej., llevando guantes,
mascarilla, gafas y aplicando cuarentenas).
2. Mejorando la higiene, las condiciones sanitarias y la desinfección.
 3. Asegurándose de que todo el personal está vacunado frente a las enfermedades
habituales.
4. Educando a todo el personal sobre los puntos 1, 2 y 3 y en las formas de reducir los
comportamientos de riesgo.

La mayoría de los virus de inactiva con etanol al 70%, lejía clorada al 15%, glutaraldehído al 2%,
formaldehído al 4% o un proceso de autoclavado.

La mayoría de los virus con envoltura no requiere un tratamiento tan riguroso ya que se inactivan
con jabón y detergentes.
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE ENFERMEDADES VIRICAS.

Los métodos de laboratorio permiten llevar a cabo las siguientes tareas:

1. Descripción de los efectos citopatológicos (ECP) inducidos por el virus en las células.
2. Detección de partículas víricas.
3. Aislamiento y crecimiento del virus.
4. Detección y análisis de componentes víricos (p. ej., proteínas (antígenos), enzimas,
genomas).
5. Evaluación de la respuesta inmunitaria del paciente frente al virus (serología).

Obtención de muestras.

La elección de la muestra adecuada para el estudio acostumbra a ser complicada debido a que
diversos virus son capaces de producir un mismo cuadro clínico.

Las muestras se deben obtener en una etapa precoz de la fase aguda de la infección, antes de que
deje de difundirse el virus.

Cuanto menor sea el intervalo transcurrido entre la obtención de la muestra y su remisión al

laboratorio, mayor será la posibilidad de aislar un virus.

Los motivos son que muchos virus son lábiles y que las muestras son susceptibles de
contaminación bacteriana o fúngica.

La mejor forma de transportar y almacenar los virus es en hielo y en un medio especial que
contenga antibióticos y proteínas, como albúmina sérica o gelatina.
Citología.

 Muchos virus producen unos ECP característicos.

 Los sincitios son células gigantes multinucleadas formadas como consecuencia de la fusión
vírica de células individuales.
 Los cuerpos de inclusión constituyen cambios histológicos de las células provocados por
componentes víricos o bien alteraciones de las estructuras celulares inducidas por los
virus. Por ejemplo, los cuerpos de inclusión basófilos (en ojo de búho) presentes en las
células de tejidos infectados por citomegalovirus (CMV) o en el sedimento de la orina de
pacientes con una infección se identifican con facilidad.
 A menudo, las muestras citológicas se analizan para comprobar la presencia de antígenos
víricos mediante técnicas de inmunofluorescencia de genomas víricos por PCR con el fin de
llevar a cabo una identificación.

Microscopia electrónica.

 La adición de un anticuerpo específco del virus a una muestra puede hacer que las
partículas víricas se agrupen, facilitando así la detección e identificación instantánea del
virus.

Aislamiento y cultivo del virus.

 Los virus pueden crecer en cultivos tisulares, huevos embrionados o animales de

experimentación.
 En los laboratorios clínicos rara vez se utilizan animales de experimentación para aislar
virus.

1. Cultivo celular.

 Para cultivar virus se utilizan tipos específcos de células de cultivo tisular.

 Los cultivos de células primarias se obtienen por tratamiento de algún órgano animal
específco.
 Las células obtenidas con este método se cultivan en monocapa. Las células primarias
se pueden separar con tripsina, se diluyen y crecen en nuevas monocapas
(subcultivos) para convertirse en cultivos celulares secundarios.
 Las líneas de células diploides son cultivos de un único tipo de célula con los que se
puede hacer un gran número de pases.
 Las células primarias de riñón de mono son muy adecuadas para llevar a cabo el
aislamiento del virus de la gripe, paramixovirus, muchos enterovirus y algunos
adenovirus. Las células diploides fetales humanas, que generalmente son fbroblastos,
permiten el crecimiento de un amplio abanico de virus (p. ej., VHS, VVZ, CMV,
adenovirus, picornavirus). Las células HeLa, una línea continua de células epiteliales
derivada de un cáncer humano, son excelentes para aislar el virus respiratorio sincitial,
 los adenovirus y el VHS. Muchos virus con importancia clínica se pueden aislar, al
menos, con alguno de estos cultivos celulares.

2. Detección vírica.

 Un virus se puede detectar e identifcar inicialmente mediante la observación de los ECP

que producen en la monocapa celular o bien mediante técnicas de inmunofuorescencia o
de análisis genómico del cultivo celular infectado.
 El tipo de cultivo celular, las características de los ECP y la rapidez del crecimiento vírico se
pueden utilizar para identificar inicialmente muchos virus clínicamente importantes.
 Los virus se pueden cuantificar de acuerdo a la dilución mayor que conserva las siguientes
propiedades (título):
1. Dosis de cultivo tisular (DCT50): título de virus que provoca efectos citopatológicos en
la mitad de las células de cultivo celular.
2. Dosis letal (DL50): título de virus que destruye el 50% de un conjunto de animales
incluidos en la prueba.
3. Dosis infecciosa (DI50): título de virus que provoca un síntoma identificable u otra
respuesta en el 50% de un conjunto de animales participantes en la prueba.

Detección de proteínas víricas.

 Durante la replicación vírica se sintetiran enrimas y otras proteínas que se pueden

detectar a través de métodos bioquímicos, inmunológicos y de biología molecular.
 Las proteínas víricas se pueden separar por electroforesis. Por ejemplo, las proteínas de
una célula infectada por el VHS separadas mediante electroforesis y las proteínas del
virión presentan patrones diferentes en los distintos tipos y cepas del VHS-1 y el VHS-2.
 El virus o el antígeno desprendido de las células infectadas se pueden detectar mediante
un análisis de inmunoadsorción ligada a enzimas (ELISA), radioinmunoanálisis (RIA) y
aglutinación con látex (LA).
Detección de material genético vírico.

 La secuencia genética de un virus es una característica diferencial importante de la familia,

el tipo y la cepa del virus. Los patrones electroforéticos del ácido ribonucleico (ARN) (virus
de la gripe, reovirus) o las longitudes de los fragmentos de restricción resultantes de la
digestión del ADN del genoma vírico por una endonucleasa son semejantes a las huellas
dactilares genéticas de estos virus.
 Las cepas de VHS-1 y VHS-2 se pueden distinguir por el polimorfismo de la longitud de los
fragmentos de restricción.
 Las sondas de ADN con secuencias complementarias a regiones específicas del genoma
vírico se pueden utilizar como herramientas sensibles y específcas para detectar un virus,
igual que los anticuerpos. Estas sondas son capaces de detectar el virus incluso en
ausencia de replicación vírica. El análisis de las sondas de ADN es especialmente útil para
detectar virus de replicación lenta o no productivos, como el CMV y el papilomavirus
humano, o cuando no se puede detectar el antígeno vírico por medio de pruebas
inmunológicas.
 La hibridación in situ (p. ej., hibridación in situ fuorescente [FISH, por sus siglas en inglés])
permite detectar secuencias genéticas víricas específicas por medio de biopsia de tejido
fjadas y permeabiliradas.
 Los genomas víricos también se pueden detectar en muestras clínicas aplicando dot blot o
Southern blot.
  Para muchos laboratorios, las técnicas de amplificación del genoma, como la PCR para
genomas ADN y la PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR) para genomas ARN son el
método de elección para la detección e identificación del virus.
 Esta técnica es especialmente útil para detectar secuencias latentes e integradas de virus,
como retrovirus, herpesvirus, papilomavirus y otros papovavirus, así como las secuencias
de virus presentes a bajas concentraciones y los virus cuyo aislamiento resulta complejo o
peligroso a partir de cultivos celulares.
 La cuantifcación de la cantidad de genoma en un paciente (carga vírica) se puede
determinar a través de la PCR en tiempo real. Por ejemplo, la concentración de genoma
vírico (genoma ARN que se convierten en ADN) es proporcional a la tasa inicial de
amplifcación por PCR del ADN genómico. Esta prueba es especialmente importante para
controlar la evolución de la infección por VIH.
 Otras técnicas de amplifcación y detección genómicas son similares conceptualmente al
método ELISA. Estos abordajes emplean secuencias inmoviliradas de ADN que son
complementarias para una secuencia genómica vírica relevante y permiten capturar el
genoma vírico.

Serología vírica.

 La respuesta inmunitaria humoral contiene los antecedentes de cuadros infecciosos del

paciente. Se utiliran estudios serológicos para identifcar los virus difíciles de aislar y
cultivar en cultivos celulares, así como para aquellos virus que provocan enfermedades de
larga duración.
 Las pruebas serológicas se pueden utilirar para identifcar un virus y su cepa o serotipo con
el fin de identificar si se trata de una enfermedad aguda o crónica.
 La detección de anticuerpos de tipo inmunoglobulina M (IgM) específicos del virus, que
aparecen durante las primeras 2 o 3 semanas de una infección primaria, generalmente
indica una infección primaria reciente.
 La seroconversión está indicada por al menos un incremento del cuádruple en el título de
anticuerpos entre el suero obtenido durante la fase aguda de la enfermedad y el obtenido
por lo menos 2 o 3 semanas después durante la fase de convalecencia.
 La reinfección o la posterior recurrencia a lo largo de la vida provocan una respuesta
anamnésica (secundaria o de recuerdo).
 El curso crónico de la infección también puede determinarse a partir de un perfl
serológico. Concretamente, la presencia de anticuerpos frente a determinados antígenos
víricos clave.
 Los primeros anticuerpos que se detectan son los que van dirigidos contra los antígenos
más accesibles para el sistema inmunitario.
 En una fase más avanrada de la infección, cuando las células han sido lisadas por el virus
infectante o por la respuesta inmunitaria celular, se detectan los anticuerpos frente a las
proteínas y enrimas víricas intracelulares. Por ejemplo, los anticuerpos fabricados frente a
antígenos de la envoltura y la cápside del virus de Epstein-Barr se detectan en primer
lugar. Posteriormente, durante la convalecencia, se detectan anticuerpos frente a
antígenos nucleares, como el antígeno nuclear del virus de Epstein-Barr.
Métodos de análisis serológicos.

 Los análisis de neutralización e IH estudian los anticuerpos basándose en el

reconocimiento y la unión a los virus. Los anticuerpos que recubren el virus inhiben su
unión a las células indicadoras.

 La neutraliración del virus por los anticuerpos inhibe la infección y los efectos
citopatológicos en las células del cultivo tisular.
 El análisis de fuorescencia indirecta de anticuerpos y los inmunoanálisis en fase sólida
como la aglutinación con látex y la técnica ELISA.