Institución: universidad Martin Lutero

Sede: San Carlos, Rio San Juan

Carrera: Farmacia IV

Asignatura: Biotecnología

Elaborado por Rebeca Gabriela Urbina López.

Docente: Brenda Martínez

Fecha: 26/03/2022
Vectores de clonación

 en Biología Celular   Etiquetado Plásmidos

Los vectores de clonación son plásmidos (moléculas de ADN circular extra cromosómico y

que se replican independiente del DNA nuclear) que llevan insertados fragmentos de ADN,

típicamente un gen, que nosotros queremos introducir o expresar en el hospedador. Para

poder ser insertado es necesario cortar el vector con enzimas de restricción y una vez

introducido pasa a denominarse: vector recombinante.

Existen múltiples sistemas para poder llevar a cabo el proceso, sin embargo, todos ellos
varían en función de la especificad de la célula o del tamaño del inserto.
La transformación consiste en la introducción de material genético en las bacterias gracias
al uso de plásmidos en los cuales se ha insertado el material genético deseado. Los
elementos básicos de los que debe constar un plásmido son: un origen de replicación, el
cual le proporciona autonomía propia e independiente del DNA nuclear, y un gen de
resistencia a un antibiótico, que permite seleccionar a la bacteria transformada de las otras
que no lo están. Además, la presencia de un gen reportero en el plásmido nos puede servir
para corroborar y visualizar la transcripción del plásmido. Sin embargo, hay que tener en
cuenta que la adquisición del material muchas veces va a depender de las condiciones del
cultivo: pH, densidad celular del cultivo, temperatura, nutrientes.
La transfección consiste en la introducción de material genético externo en células
eucariotas mediante plásmidos, vectores víricos (transducción) u otras herramientas. Estas
técnicas, se llevan a cabo abriendo poros en la membrana celular (electroporación) o
mediante liposomas que se obtienen mediante la mezcla del material genético con lípidos
catiónicos.
Invivogen te ofrece una gran colección de vectores diseñados para distintas aplicaciones.
Estos vectores son plásmidos que proporcionan un alto nivel de expresión tanto in vitro
como in vivo. Además, poseen una gran variedad de marcadores para ser usados tanto en E.
Coli como en células de mamíferos.
 

Expression Plasmids

Es una colección de vectores de clonación para diversas necesidades como la expresión del
gen de interés en líneas celulares de mamífero e in vivo, la expresión de genes marcados, la
expresión simultánea de dos genes.
 

psiRNA™ Vectors
Una familia de vectores de clonación que ofrecen el promotor de 7SK RNA polimerasa III
humano y una selección de marcadores para la clonación de los insertos siRNA/shRNA.
Permiten la expresión de uno o dos shRNAs en un plásmido estándar o un plásmido CpG
free.
 

pFUSE-CLIg and pFUSE-CHIg

Estos plásmidos están diseñados para cambiar un anticuerpo monoclonal de un isotipo a
otro, por lo tanto, permiten la generación de anticuerpos con la misma afinidad para el
antígeno, pero con diferentes funciones efectoras.
 
 
Fc-Fusion

Es una familia de plásmidos desarrollados para facilitar la construcción de proteínas de

fusión-Fc mediante la fusión de una secuencia que codifica una proteína dada a la región Fc
de una inmunoglobulina.
 
 

DNA Vaccination
Los plásmidos pBOOST se desarrollaron como adyuvantes genéticos para potenciar la
respuesta inmune a un antígeno específico.
pVAC es un plásmido específicamente diseñado para estimular una respuesta inmune
humoral por inyección intramuscular.
 

CpG-free Plasmids
InvivoGen ha desarrollado una nueva familia de plásmidos que son libres de dinucleótidos
CpG (pCpGfree) y que se llaman plásmidos pCpGfree.
 

E. coli Growth & Selection

InvivoGen proporciona células competentes con genotipos optimizados para mejorar la
eficiencia y facilidad de uso.
InvivoGen también ha desarrollado los  Fast-Media, que son medios para E. coli, listos para
usar y que se suministran en formato sólidos o en formato líquidos, Los Fast-
Media incluyen en su formulación un antibiótico selectivo, y sustratos cromogénicos, por lo
tanto, estan optimizado para el crecimiento o la selección de colonias de E. coli
transformantes.

2.Verificación y conservación proteica

Método de conservación y péptidos o proteínas
Sector de la técnica
En el que se presenta la invención es el biotecnológico y su ámbito de aplicación es la
conservación y el transporte de proteínas de interés sanitario, diagnostico, farmacéutico,
industrial.
Las proteínas generalmente son inestables cuando son conservados a temperatura ambiente
(aproximadamente entre 18 y 25 °C) en medios líquidos o soluciones acuosas, a si en pocas
horas comienzan a aparecer fenómenos de degradación, desnaturalización o crecimientos
de contaminantes microbianos.
Con el objetivo de evitar dichos fenómenos se utilizan diversos métodos de conservación
de proteína dentro de lo más habitúales están:
1. Conservación a temperatura refrigerada.
2. Edición de agentes estabilizantes.
3. Deshidratación o liofilización.
Las proteínas han sido conservadas en solución acuosa a temperatura refrigerada, de forma
líquida 4°C o bien de forma congelada -20°C. de esta forma se reduce la velocidad de las
reacciones de degradación. No obstante los procesos de congelación-descongelación
repetida provocan alteraciones en la estructura de las proteínas.
Loa agentes estabilizantes son sustancias inertes que modifican las características físico-
químicas de las soluciones acuosas empleadas para conservar proteínas reduciendo a si el
riesgo de degradación.
La liofilización es un proceso de deshidratación en el cual las moléculas de agua son
eliminadas de una muestra congelada en el interior de un sistema vacío. Este método de
conservación requiere que las proteínas disuelto en un medio o solución acuosa sea
congelada de forma rápida, consiste en su inmersión en nitrógeno líquido.
 Verificación de proteínas

RapidChek™ Proteína Total

La prueba RapidChek™ Proteína Total es un ensayo colorimétrico diseñado para
examinar superficies en busca de residuos de proteínas. Una limpieza insuficiente
puede resultar en condiciones antihigiénicas. Por lo tanto, analizar las superficies
para detectar residuos de proteínas puede ayudar a verificar la efectividad de un
programa de saneamiento.

Aplicaciones
RapidChek™ Proteína Total detecta residuos de alimentos que quedan en la superficie de
los equipos de producción y procesamiento. La prueba está diseñada para ayudar al
personal de limpieza a verificar su procedimiento de limpieza. La prueba dura 30
segundos y no se necesita ningún equipo adicional, aparte de un dispositivo para la
aplicación de agua desionizada o destilada. Solo la almohadilla del hisopo entra en contacto
con la superficie, por lo que no es necesario limpiarla después de probar la superficie.
Los sistemas de análisis de proteínas son un complemento perfecto para cualquier
sistema de gestión de higiene microbiológica, ya que pueden proporcionar indicadores de
higiene inmediatamente antes del inicio de un lote de producción.

Características y Beneficios
Procedimiento rápido y sencillo
 • Tiempo para el resultado: 30 segundos
• No se requiere equipo adicional
• No requiere incubación, independiente de la temperatura
• Ningún producto químico entra en contacto con la superficie probada •
Compacto y fácil de transportar
Alta sensibilidad
• 3 μg de proteína total (albúmina de suero bovino como control)
Respetuoso con el medio ambiente
• Huella de carbono baja
• Botella de spray reutilizable
• Sin componentes tóxicos
Cómo funciona la prueba
El método se basa en reacciones químicas que ocurren en presencia de aminoácidos,
péptidos y proteínas. Cuando las proteínas están presentes en la superficie de la muestra y
se ponen en contacto con el reactivo en la tira de prueba, se producirá un cambio de color
visualmente perceptible de amarillo a azul. El límite de detección (LOD) es de 3 μg de
proteína total (albúmina de suero bovino como control). El límite LOD puede variar
según la fuente de proteína.

Humedezca el área de muestreo con una cantidad suficiente de agua destilada o

desionizada.
Frote la superficie con una tira de RapidChek™ Proteína Total.

Espere 30 segundos para permitir que se produzca la reacción de color.

• Línea amarilla sin cambios: resultado no válido (no llegó suficiente agua a la línea
de prueba)
• Línea amarilla incolora a borrosa: negativa (no se detectan residuos de proteínas)
• Azul: positiva (residuos de proteínas detectados)