Nombre de la asignatura

Ingeniería de las fermentaciones

Unidad 6.

Mantenimiento y conservación de

microorganismos de interés

industrial

NOMBRE DEL PROFESOR: Isaías Negra Jiménez

ESTUDIANTE: Jorge Eduardo Pérez Campos
Valeria Pérez Ramírez
Iván Adalberto Rojas Pérez
GRUPO: B
GRADO: 10mo cuatrimestre
FECHA DE ENTREGA: 28 de noviembre de 2022
Introducción
Dentro de la industria, el conocer los métodos en los cuales se comportan, actúan,
adaptan y desarrollan la materia con la que se trabaja es de suma importancia, de esta
manera se pueden acoplar condiciones y técnicas para conservar o mejorar dicha
materia, en este caso, los microorganismos.
Desde los procesos por los cuales se llevan a cabo las mutaciones, al igual que técnicas
para modificarlas, tales como las mutaciones físicas o químicas, al igual que realizar
mutaciones dirigidas como lo puede ser por el uso de ADN recombinante para poder
modificar y mejorar dicho microorganismo, sin embargo, la modificación de estos no lo
es todo en la industria, ya que, de igual manera se requiere tanto conservar como
cultivar dichos microorganismos, por lo que el conocer los métodos de conservación, al
igual que conocer la manera de desarrollar inóculos y tener en posesión colecciones
microbianas es de alta utilidad.
Mutagénesis al azar: agentes químicos y físicos
La mutagénesis es el proceso en donde ocurren alteraciones en la secuencia de ADN
de un organismo, se pueden dar al azar o provocados por agentes mutagénicos. Es
aquella modificación de material genético que resulta estable y transmitible a las células
la producción de mutaciones sobre el ADN, clonado o no, esta se puede realizar de
manera in vitro, in vivo o ex vivo y se puede presentar sobre cualquier secuencia; la
mutagénesis se lleva a cabo por medio de mutágenos físicos o químicos.
Mutágenos químicos
Son compuestos químicos capaces de
alterar las estructuras del ADN de forma
brusca, como por ejemplo el ácido
nitroso (agente desaminizante),
brominas y algunos de sus compuestos.
Hay una variedad de sustancias
químicas que reaccionan con el DNA
ocasionándole cambios químicos en
una u otra base, de la cual resulta un
apareamiento defectuoso u otros
cambios.
Mutágenos físicos
Estos mutágenos son radiaciones que pueden alterar la secuencia y estructura del ADN,
entre los agentes físicos se encuentran las radiaciones ionizantes y no ionizantes. Las
primeras incluyen rayos de longitud de onda corta, como los rayos X, los rayos cósmicos
y los rayos gamma.
Las radiaciones ionizantes causan rompimiento de los enlaces fosfodiéster en el ADN.
Los rompimientos en la doble cadena son producidos intracelularmente en presencia de
oxígeno. Si el rompimiento ocurre en una sola cadena se eliminará un átomo de
hidrógeno de la desoxirribosa formando un radical el cual reacciona con el oxígeno y
forma un radical peroxi que va a romper la cadena.
Mutagénesis utilizando tecnología de ADN recombinante
La tecnología del ADN recombinante, de tecnologías utilizadas en el campo de la
biología molecular e ingeniería genética, y es un campo emergente de interés para los
científicos que trabajan con diversas cepas bacterianas.
Esta tecnología consiste en el uso de enzimas endonucleasas de restricción que
reconocen sitios específicos en el cromosoma de un organismo y enzimas DNA ligasa
que empalman y unen el ADN nuevamente; las enzimas de restricción realizan el corte
de una sección del ADN, cuya sección del cromosoma contiene algún gen o conjunto de
genes que codifican para una proteína en el organismo que la posee, y con ello le
brindan características específicas de expresión de estos genes al organismo que recibe
su material genético.
Bacteriófagos
Los bacteriófagos son virus que infectan bacterias, y al ingresar al cromosoma
bacteriano toman información de su DNA, que la pueden transferir a otro
microorganismo diferente.
Plásmidos
Los plásmidos son una pequeña molécula circular de ADN, separados del cromosoma
bacteriano principal; en los cuales se agregan los genes de interés que queremos clorar
y que se expresen en el microorganismo receptor.
Cromosomas bacterianos artificiales BAC
Un cromosoma artificial bacteriano (BAC) es una molécula de ADN utilizada para clonar
secuencias de ADN en las células bacterianas (por ejemplo, E. coli). Los BAC se suelen
utilizar en la secuenciación del ADN. Los segmentos de ADN de un organismo, que van
de 100.000 a cerca de 300.000 pares de bases, se pueden insertar en BACs.
Los cósmidos
Esta técnica de DNA recombinante consiste en el uso de moléculas de ADN sintéticas,
que de manera natural no se encuentran en la naturaleza. Los cósmidos son vectores
de clonación híbridos construidos con parte del cromosoma del fago lambda y parte de
un plásmido bacteriano.
Refrigeración, congelación, ultracongelación y liofilización
En la actualidad, el uso de técnicas de conservación ha logrado un potencial para el uso
futuro de especies microbianas, como lo son las colecciones microbianas. Estas
colecciones deben cumplir con premisas de un buen proceso de conservación
asegurando su pureza, viabilidad y estabilidad genética (Perry, 1995).
Congelación
La congelación es un método físico químico que permite conservar microorganismos
viables por un tiempo sin sufrir cambios genotípicos. En este proceso se involucra el
agua como microambiente y es ella la que cambia su estado de líquido a sólido.
Ultracongelación
La técnica de crio preservación consiste en congelar células o tejidos a temperaturas
generalmente entre -80 °C (ultracongelación) y -190 °C (nitrógeno líquido), reduciendo el
metabolismo celular hasta el punto de prácticamente anularlo.
Liofilización
Es el método más utilizado para la conservación de microorganismos. Se basa en
paralizar el metabolismo por deshidratación celular sometiendo la muestra a congelación
y sublimación, las células son protegidas por un lioprotector.
En el proceso de liofilización inicialmente el material es congelado, causando una
separación física entre el agua y los sólidos. En una segunda etapa del proceso, el hielo
es removido del producto mediante conversión directa a vapor (sublimación). Luego de
la eliminación de los cristales de hielo, lo que queda del producto es una fase de soluto
concentrado que se convertirá, al final del proceso, en el material liofilizado.
Refrigeración
La refrigeración es el proceso por medio del cual se consigue una disminución de la
temperatura de fluidos o cuerpos en general.
Las bajas temperaturas ocasionan la disminución de la velocidad de multiplicación de
las bacterias, pero no provocan su destrucción. Al descender la temperatura por debajo
de los 4ºC (temperatura de refrigeración), los microorganismos dejan de multiplicarse,
no se destruyen, sino que paraliza su actividad.
Desarrollo de inóculos, colecciones microbianas.
Se le conoce como un inóculo a la cantidad suficiente de un microorganismos o células
que se requieren para poder llevar a cabo una fermentación y que se concentran en un
volumen de mosto determinado.
El volumen de inóculo ideal va del 0.005 al 0.5 % del volumen de operación del
biorreactor durante el proceso fermentativo, aunque la cantidad de inóculo que se
prepara y se agrega en la mayoría de los casos es el 10% del volumen total de lo que se
desea fermentar; para que el proceso fermentativo sea exitoso hay algunos parámetros
importantes que se deben tener en consideración en cuanto a la selección del
microorganismo o células a utilizar, y son los siguientes:

1. La cepa a utilizar debe ser genéticamente estable.

2. Su velocidad de crecimiento debería ser alta.
3. La cepa debe estar libre de contaminantes, incluidos fagos.
4. Sus requerimientos nutricionales deberían ser satisfechos a partir de medios
de cultivo de costo reducido.
5. Debe ser de fácil conservación por largos períodos de tiempo, sin pérdida de
sus características particulares.
6. Debería llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto.
7. Si el objetivo del proceso es un producto, éste debería ser de alto rendimiento
y de fácil extracción del medio de cultivo.
(Ertrola, Mignone, Yantorno, 2000)

Las fuentes de obtención de microorganismos pueden ser muy variadas, aquellos que
se obtienen de ambientes naturales, o bien de lugares donde ha habido exposición de
los microorganismos a plaguicidas y pesticidas para poder aislarlos, cultivarlos y
replicarlos.
En el mundo existen diversas colecciones microbianas entre las que destacan:
"American Type Culture Collection", USA, la cual mantiene bacterias, levaduras, algas,
actinomycetes, mohos, protozoos, virus y líneas celulares; "Colletion Nationale de
Cultures de Microorganismes" del Institut Pasteur, Francia; "Northern Regional Research
Laboratory" (NRRL), de Peoria, USA, y "National Collection of Type Cultures", Londres,
Inglaterra (Ertrola, Mignone, Yantorno, 2000).
Referencias
Rodolfo Ertola et al., 2000. Microbiología Industrial, Capítulo 3 “selección, mantenimiento
y mejoramiento de microorganismos de interés industrial” Israel. pps 13-17.
Khan Academy español “Clonación de ADN y ADN recombinante l Biología l Khan
Academy en Español” Publicado el 27/06/2022, recuperado el 03/12/2022 de:
https://www.youtube.com/watch?v=ZpoVqMlMxeQ&t=161s
P.F. Starbury et al., 2003 “Principles of fermentation Technology. BH” Capítulo 3 pps 70-
74.
Perry, S.F. 1995. Freeze-drying and cryopreservation of bacteria. Methods Mol.Biol. 38:
21-30.
Zuberer, D.A. 1987. Collection, isolation, cultivation and maintenance of associative N2-
fixing bacteria. New York. p.95-122.
Day J.G and McLellan M.R. "Cryopreservation and freeze-drying protocols". Humana
Press, Totowa, New Jersey, 56-57, 1999.
https://es.slideshare.net/yeltsinrodrigx/desarrollo-de-inculo
Day JG, Stacey GN. Long-Term Ex Situ Conservation of Biological Resources and the
Role of Biological Resource Centers. En: Day JG, Stacey GN, editors. Cryopreservation
and Freeze-Drying Protocols. 2nd ed. New Jersey: Humana Press Inc.; 2007. pp 1-14.