PRACTICA 7.

TINCION HEMATOXILINA-EOSINA

OBJETIVOS

Conocer el principio de la tinción. Así como los problemas que se presentan al realizarla.

INTRODUCCIÓN

Esta es una tinción empleada rutinariamente para la interpretación de los tejidos, la razón por lo
que la emplean es que tiene una variedad de matices rosados y rojos que provoca la coloración con
eosina, a lo que se une la excelente definición nuclear que da la hematoxilina.

Este método consta de una fase inicial, en la que se van a colorear los núcleos celulares con la

hematoxilina y una fase interior de contraste citoplasmático y de los componentes extra celulares
con la eosina.

Esta coloración generalmente se usa como base ya que el 90 % de los diagnósticos se hacen con
este método, el producto final depende mucho de la destreza del Q.F.B, Histotecnólogo, Técnico de
laboratorio y los colorantes en uso.

La hematoxilina es uno de los colorantes usados en la tinción de Hematoxilina-Eosina (H&E). Es

un colorante natural el cual se extrae del palo de Campeche, este al ser combinado con sales de

aluminio, hierro, cobre y tungsteno, tiene excelentes propiedades para teñir el núcleo.

El agente químico activo de la Hematoxilina es la Hemateína, que se forma por la oxidación de la

hematoxilina, este proceso de oxidación ó maduración ocurre cuando la Hematoxilina se deja en
reposo por algunos días o semanas después de añadir el oxidante (yodato de sodio).

Basado en las concentraciones del colorante, las hematoxilinas están clasificadas en regresivas y
progresivas.

La Hematoxilina de Harris se utiliza en el método regresivo, el cual consiste en teñir y luego

someterlo a un proceso de decoloración controlada en alcohol ácido.

El otro método es el progresivo, usando la Hematoxilina de Mayer, el cual consiste en teñir todas
las estructuras del tejido y luego someterlo a una diferenciación con solución amoniacal o con
carbonato de litio. Para que haya uniformidad en el tejido se debe de utilizar una sola fórmula de
Hematoxilina y llevar un control diario de tiempo y calidad.

La Eosina es un colorante que se emplea para teñir estructuras citoplasmáticas, este colorantes
puede utilizar en base acuosa o alcohólica para darles contraste al teñido nuclear de la hematoxilina.

La adición de floxina a la eosina le da un contraste variado rosado (al citoplasma) a rojo vivo
(músculo y colágeno) La combinación de hematoxilina con la eosina es una reacción que tiene cargas
positivas y negativas.

El primero es un colorante con moléculas cargadas positivamente, de naturaleza básica (basófilo)

con afinidad nuclear y el segundo consta de moléculas cargadas negativamente, es acidófilo con
afinidad por el citoplasma. La ventaja de la H&E es la facilidad con que se pueden decolorar y teñir
otros constituyentes en los tejidos que en ese momento pueden determinar y solucionar un
diagnóstico difícil.
MATERIAL Y REACTIVOS

− Alcohol absoluto − Hematoxilina de Harris

− Alcohol del 96 %
− Xilol
− Carbonato de litio
− Alcohol ácido
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
− Eosina Amarillenta
− Cajas de cristal para tinción
− Portaobjetos
− Cubreobjetos

PROCEDIMIENTO

Fijación

Formol al 10 %.

Técnica

Cortes en parafina a 5 µm.

Procedimiento para teñir

1.- Desparafinar e hidratar hasta agua corriente de la llave.

2.- Hematoxilina de Harris durante 3 a 5 min.

3.- Lavar en agua corriente de la llave durante 5 min.

4.- Alcohol ácido, (diferenciar) 1 baño.

5.- Lavar en agua corriente.

6.- Carbonato de litio, (virar) 10 baños.

7.- Lavar en agua corriente.

8.- Contrastar con Eosina 10 baños.

9.- Deshidratar, aclarar y montar.

Observación al microscopio

RESULTADOS:

Núcleos – azules; Eritrocitos - naranja a rosa; Citoplasma – rosa; Estructuras restantes - rosado a
rojo (ver ejemplos de la tinción en la Figura 7).

Figura 7. Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina. A) Vellosidades

del intestino delgado. B) Detalle del epitelio del digestivo. C) Hepatocitos. D) Papila fungiforme de
la lengua.

Fundamento de la tecnica

1.- Desparafinar e hidratar hasta agua de la llave permite retirar la parafina y tener el tejido
hidratado para permitir la impregnación de los colorantes, una mala rehidratación impide tener una
correcta tinción de los componente celulares.

2.- La hematoxilina tiñe los núcleos.

3.- Se lava en agua para quitar el colorante.

4.- Lavar el exceso de alcohol ácido. Esto permite una diferenciación ya que esta solución remueve
el colorante de ciertos componentes tisulares que son propensos a teñirse más fácilmente y
rápidamente que otros. De esta manera se puede lograr acentuar una estructura que retiene el tinte
con un alto grado de selectividad.

5.- El carbonato de litio vira las secciones de tejido teñidas con hematoxilina de color morado a azul.

6.- Se quita el exceso de carbonato de litio con un lavado e agua.

7.- Se Contrasta utilizando la Eosina, aquí se tiñen las estructuras citoplasmáticas.

8.- Después se deshidrata la muestra por medio de alcoholes de menor a mayor concentración y
esta consiste en separar el agua de las preparaciones histológicas, pero también al mismo tiempo
que se va deshidratando se va lavando el exceso de colorante de contraste.

9.- El aclaramiento se efectúa en xilol, aquí los cortes deben de aparecer claros y además permite la
infiltración de los tejidos por la solución de montaje.

10.- El propósito del montaje es preservar el tejido teñido para su siguiente manejo examinación al

microscopio. El cubre se une al corte por medio un agente llamado medio de montaje el cual puede

ser bálsamo de Canadá o resina Entellan de Merck.

Nota.- Las causas debidas a una tinción inadecuada en esta técnica, pueden ser:

- Mala fijación tisular.

- El exceso o defecto de oxidación de la Hemateína.

- Diferenciación de coloración.

- Emplear una hematoxilina vieja o muy baja (que este muy usada).