FUNDAMENTO TINCION

PAPANICOLAOU

FACILITADOR BLGO:
GUILLERMO NEZ SNCHEZ
 TINCION PAPANICOLAOU
Mtodo de coloracin policrmica,que
consta de una coloracin nuclear y un
contraste citoplasmtico.
Mtodo basado en la diferenciacin de los
diversos componentes de la clula, se
aplica a los diversos tipos celulares para
el diagnstico de cambios malignos y la
tipificacin celular.
COLORACIN PAP
 Ventaja del mtodo de
tincin de Papanicolaou
Una buena definicin del detalle nuclear,
evidenciando el patrn de cromatina
de las clulas.
Un aspecto transparente de los citoplasmas
y una diferenciacin celular, que permite
apreciar grados de maduracin celular y
actividad metablica.
 PASOS PRINCIPALES DE LA TINCIN

Fijacin (realizada al momento de toma

de la muestra).
Tincin del ncleo con la hematoxilina.
Tincin del citoplasma con Orange G y
EA.
Aclaramiento
 FIJACIN
El mejor fijador consista el alcohol-eter
(en partes iguales).
Ahora se utiliza fijadores de revestimiento:
los spray, que contienen polietilenglicol y
alcohol etlico, estos son hidrosolubles y
para ser coloreados se tiene que retirar el
fijador con alcohol de 96(5min.), para
evitar que se contaminen.
La tincin de Papanicolaou usa tres
colorantes

Hematoxilina.
OG 6
EA 50

Los pasos de la tincin estn entremezclados con

soluciones que hidratan, deshidratan y enjuagan
las clulas
 TINCIN PAP

COLORACION BSICA:
Hematoxilina de Harris

COLORACIN CIDA:
Orange G
Eosina
 TINCIN
Es importante sealar que ste es un
procedimiento que tiene variaciones e
incluso preferencias personales en la
coloracin.
 ENJUAGE
Enjuague, se realiza con agua corriente
y/o agua destilada, pero siempre hay que
verificar que el pH del agua se encuentre
entre 6.5 y 7.
 HIDRATACIN
La hidratacin antes del colorante de
hematoxilina puede ser:
Gradual usando alcohol en
concentraciones decrecientes 807050 %
Abrupta, sumergiendo el material celular
desde altas concentraciones de alcohol
y al agua directamente.
 TINCIN DEL NCLEO
Existen dos mtodos para teir el ncleo:
Mtodo progresivo. Se tie el ncleo con la
intensidad de color deseada.
Mtodo regresivo. Se sobretie con hematoxilina no
acidificada, luego se remueve el exceso de tincin
con cido clorhdrico diluido.
Despus de la hematoxilina, las laminillas se lavan
en agua
 TINCIN DEL CITOPLASMA
Orange G 6, es una tincin
monocromtica y
EA 50, es una tincin policroma
compuesta
 COLORANTE
Hematoxilina de Harris: tiene afinidad por
la cromatina, tie el ncleo.
Orange G: Tie la queratina, penetra
facilmente al citoplasma.
Eosina: Tie el citoplasma de las clulas
escamosas cianoflicas y eosinoflicas.
Nuclolos y cilios.
 ACLARAMIENTO

Es el paso final de la tincin y

produce transparencia celular.
Se suele usar Xilol como
solucin aclaradora.
 MONTAJE
La unin del portaobjetos mediante un medio de
montaje que cubre el rea bajo el cubreobjetos
para:
Obtener una muestra cubierta.
Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento
del material celular.
Sellar, evitando as la oxidacin de la muestra.
 CARACTERSTICAS DEL MEDIO DE
MONTAJE

1. Debe ser soluble en el agente aclarante.

2.Debe tener un ndice de refraccin que
coincida con la muestra y el cubreobjetos,
logrando una imagen lo ms transparente
posible.
3.Debe tener un pH neutro.
 OBJETIVO DE CADA REACTIVO
Funcin general.
Hematoxilina Tincin nuclear.
OG 6 y EA 50 Tincin citoplasmtica.
Xilol C6H4(CH3)2 Aclaramiento.
Alcohol absoluto CH3CH2OH
Deshidratacin total.
 OBJETIVO DE CADA REACTIVO
Alcohol etlico La funcin principal es
deshidratar, puede ser sucesiva, gradual o
abrupta segn el lugar que ocupe dentro
de la tincin. La funcin secundaria es el
enjuague
Agua Enjuague.
Solucin de HCL .05% Remueve el
exceso de hematoxilina.
FUNCIN ESPECFICA

SIGUE
GRACIAS POR SU ATENCION

bethesda, maryland, oficina, edificios

 Funcin general.