COLORACIONES EN TEJIDOS

HISTOPATOLOGICOS.
DOMINGO GIMENEZ CAROL NOEMI
ESCOBAR CHAMBI PATRICI ASTRID
ESCOBAR OSCO JIMENA GLORIA
GARCIA YALLICO LUIS FRANCISCO
 Definicion de histopatología:
Es la rama de la Patología que trata el diagnóstico de enfermedades a través del estudio de los tejidos.

Coloracion:
Rs Un procedimiento que usa uno o varios
colorantes para resaltar material biológico,
permitiendo la observación detallada a través de
un microscopio.

Colorante:
Sustancia química que aporta color
selectivamente a otros cuerpos.

Los colorantes pueden ser:

-Basicos
-Acidos
-Neutros
 Hematoxilina de Harris

Colorante básico que se usa para resaltar los detalles de los núcleos celulares.
La intensidad de la tinción depende tanto de la cantidad de ADN en los núcleos
como del tiempo de exposición de la muestra a la hematoxilina.
Haematoxylum campechianum
Tiñe: DNA, RNA(nucleos, ribosomas, Re rugoso)
L. ( El palo de Campeche )

La hematoxilina de Harris es una hematoxilina de aluminio comúnmente

utilizada en citología ,histología e histopatología. Ofrece una tinción progresiva y
regresiva que pone de manifiesto las estructuras nucleares de la célula,
nucleoproteínas o ácidos nucleicos, en muestras de tejido fijado y parafinado,
extendidos citológicos y muestras de tejidos congelados. Harris es una tinción
basada en alcohol.

Es la Hematoxilina mas utilizada en la

coloración rutinaria de los núcleos
celulares, debido a:
-Afinidad por el ADN
-Versatilidad
-Contraste
-Estabilidad La imagen muestra un meduloblastoma
anaplásico de células grandes. La
hematoxilina es crucial para el diagnóstico
al resaltar mitosis y anormalidades
nucleares.
 Procedimiento y principios de coloración
Hematoxilina de Harris Solución es un producto listo para usar. Puede durar de 6 a 12 meses.
Procedimiento de preparación de muestras
histológicas:
1.Cortar tejidos en secciones parafinadas o
frescas y montar en portaobjetos.
2.Asegurarse de que el grosor de las
secciones sea de 3 a 5 micrones para evitar
la superposición celular.
3.Para cortes congelados o muestras
citológicas, saltar al "paso 5" del
procedimiento.
Procedimiento general:
1.Desparafinar en xilol o Bioclear durante 2 cambios de 10 minutos cada
uno.
2.Hidratar con pasajes sucesivos de alcoholes en orden decreciente, seguido
de un lavado en agua desmineralizada durante 2-3 minutos.
3.Teñir con Hematoxilina de Harris durante 1-3 minutos.
4.Realizar el virado en agua corriente durante 3-5 minutos hasta que las
muestras se vuelvan azules. Opcionalmente, se puede usar una Solución
Diferenciadora. Resultados:
5.Realizar un lavado en agua desmineralizada, seguido de un posible paso •Núcleo celular, nucléolo y
de Virado Opcional en Solución Alcalina Diluida durante 2 minutos. cromatina: Violeta azulado
6.Teñir con solución de Eosina Amarillenta durante 30-60 segundos.
•Citoplasma: Rosa pálido o
7.Realizar un lavado rápido en agua destilada.
fuerte
8.Deshidratar con pasajes sucesivos de alcoholes en orden creciente.
9.Aclarar en xilol o Bioclear durante al menos 2 minutos. •Tejido muscular: Rojo, Rosa
10.Montar las muestras con cubreobjetos y Bálsamo de Canadá sintético. fuerte o Fucsia
•Eritrocitos: Rojo anaranjado
 EOSINA
Colorante acido, utilizada en histología y patología para colorear componentes
del citoplasma, colágeno y fibras musculares, pero no los núcleos debido a que
estos son ricos en ácidos nucleicos cargados negativamente. Los componentes
que se tiñen con eosina se llaman acidófilos o eosinófilos.
Tiñe: Proteínas(citoplasma, espacio extracelular)

La eosina es un polvo rojo insoluble en agua, benceno o cloroformo, pero soluble

en alcohol ( polar) y soluciones alcalinas ( OH-) .

Es la Eosina es mas utilizada en la

coloración rutinaria de los eosinofilos,
debido a:
-Contraste
-Complemento a la hematoxilina
-Visibilidad de detalles celulares
-Amplia aplicación

Tejido conectivo suelto humano- Tincion con

hematoxilina y eosina
 Procedimiento y principios de coloración
Para la eosina Y alcohólica y acuosa en proporciones típicas para aplicaciones histológicas son fáciles de preparar y
tienen una larga durabilidad si se almacenan adecuadamente.

1. ·Inmersión durante 2 minutos en Eosina al 1%.

•Procedimiento de preparación
muestras histológicas:
1.Cortar tejidos en secciones parafinadas
o frescas y montar en portaobjetos.
2.Asegurarse de que el grosor de las
secciones sea de 3 a 5 micrones para
evitar la superposición celular.
3.Para cortes congelados o muestras
citológicas, saltar al "paso 5" del
procedimiento.
de
2. ·Lavado con agua durante 1 minuto.
3. ·Lavado con etanol de 96º durante 6 segundos (dos
veces, distinto recipiente).
4. ·Inmersión en xilol durante 5 minutos (dos veces,
distinto recipiente).
Para la coloración se hace el mismo procedimiento en la
hematoxilina de Harris y en la eosina.
Los núcleos se tiñen de
morado, mientras que los
componentes citoplásmicos
son de color rosa.
 Coloraciones Hematoxilina y Eosina (H&E)

Utiliza dos colorantes:

•La hematoxilina, en combinación con sales de aluminio, hierro o cromo, forma la
hemateína, un colorante activo que se utiliza para teñir los núcleos celulares en
azul/negro, proporcionando un buen detalle. Por lo general, se combina con un
colorante citoplasmático como la eosina, que tiñe las estructuras celulares en
rosa o rojo, lo que crea un contraste efectivo en las preparaciones microscópicas,
facilitando su observación.
•Tiñe: DNA, RNA(nucleos, ribosomas, Re rugoso)
• Tiñe: Proteínas(citoplasma, espacio extracelular)
La tinción de Hematoxilina y Eosina (H&E)
es la más utilizada en la coloración rutinaria
de los núcleos celulares debido a:
-Contraste efectivo
-Diferenciación celular
-Amplia aplicabilidad
-Compatibilidad con microscopía óptica
-Facilidad de uso

Tinción hematoxilina-eosina a 100x, tejido

conectivo compuesto por células
fusiformes con citoplasma amplio,
Tinción con hematoxilina y eosina de médula ósea. Granulos basófilos
eosinofílico, con núcleos redondos a
intracelulares agrupados que sugieren la presencia de toxoplasmosis
ovales sin atipias, característico de
(x1000).
seudoquiste mesentérico.
 Procedimiento y principios de coloración
Para la eosina Y alcohólica y acuosa en proporciones típicas para aplicaciones histológicas son fáciles de preparar y tienen una larga durabilidad si se
•Para tinción de Hematoxilina y
Eosina en cortes histológicos fijados y
parafinados, se recomienda que el
grosor de los cortes esté entre 3 y 6
micrones para lograr una
visualización óptima de las células
y minimizar la superposición.
almacenan adecuadamente.
Procedimiento de tinción de Hematoxilina y Eosina para cortes
histológicos fijados y parafinados:
1.Desparafinar los cortes en 2 cambios de xilol o Bioclear, cada uno
durante 15 minutos. Resultados:
2.Hidratar los cortes pasándolos por alcoholes en orden decreciente de
concentración y luego lavar en agua desmineralizada durante 2-3 Núcleo celular: Violeta azulado
minutos.
Citoplasma:Rosa pálido o fuerte
3.Teñir con Hematoxilina.
Tejido muscular: Rojo, Rosa o
4.Realizar el virado en agua corriente durante al menos 5 minutos.
5.Realizar un lavado en agua desmineralizada.
Fucsia
6.Teñir con Eosina .seg Eritrocitos: Rojo anaranjado
7.Realizar un lavado rápido en agua destilada.
8.Deshidratar con pasajes sucesivos de alcoholes en orden creciente de
concentración.
9.Aclarar en xilol o Bioclear durante al menos 5 minutos.
10.Montar las muestras con cubreobjetos .
Secciones de parafina de 8 µm de grosor teñidas con hematoxilina y eosina. A)
Vellosidades del intestino delgado. B) Detalle del epitelio del digestivo. C)
Hepatocitos. D) Papila fungiforme de la lengua.

Esofagitis por reflujo 4X H&E.

Hallazgos histológicos: Acantosis,
hiperplasia de la basal,
superficialización de las papilas,
vasos papilares dilatados y
congestivos
 Coloración de Tricrómicos(Masson, Mallori, Gomorri)
Estos métodos se emplean principalmente para resaltar las fibras de soporte,
diferenciar el tejido conectivo de las fibras musculares, y distinguir entre el
colágeno y las fibras reticulares mediante coloraciones ácidas
. Para fibras colágenas se utilizan las siguientes coloraciones:
− Tricrómico de Masson
− Tricrómico de Gomori
-tricromica de Mallory
T. MASSON
•Se emplea para visualizar músculos, colágeno, tejidos
conectivos, núcleos y otras estructuras. Ayuda a teñir el
colágeno de azul para su clara identificación. También se
utiliza para diagnosticar condiciones como la esclerosis
hepática y diferenciar entre fibras musculares lisas y
colágeno.
PROCEDIMIENTO
1. Fijar la muestra en formalina y embeberla en parafina.
2. Cortar la muestra en secciones delgadas y colocarlas en
portaobjetos.
3. Desparafinar la muestra y rehidratarla en una serie de baños de
alcohol.
4. Sumergir la muestra en solución de ácido pícrico durante 10
minutos.
5. Lavar la muestra con agua corriente.
6. Sumergir la muestra en solución de fucsina básica durante 5
minutos.
7. Lavar la muestra con agua corriente.
8. Sumergir la muestra en solución de colorante azul anilina
durante 5 minutos.
9. Lavar la muestra con agua corriente.
10. Sumergir la muestra en solución de ácido acético durante 2
minutos.
11. Deshidratar la muestra en una serie de baños de alcohol.
12. Aclarar la muestra en xilol y montarla con un medio de montaje.
Resultados
Núcleos - azul-púrpura
Fibras musculares, queratina, citoplasma - rojo brillante
Colágeno, moco - azul
Eritrocitos - rojo-naranja T. MALLORY : sigue el
mismo principio
 T. GOMORI
Se usa para analizar las fibras de colágeno en
hígado y riñones. Facilita la diferenciación entre
colágeno y músculo liso, además de identificar
fibras dañadas en miopatías mitocondriales.
Tinción de fibras
musculares y de colágeno
Capa submucuosa
PREPARACIÓN DEL COLORANTE:
1. Fijar la muestra en Bouin o cualquier otro fijador.
2. Cortar la muestra en secciones delgadas y colocarlas en
portaobjetos.
3. Desparafinar la muestra y rehidratarla en una serie de baños
de alcohol.
4. Sumergir la muestra en solución tricrómica de Gomori durante
15 minutos.
5. Lavar la muestra con agua corriente.
6. Sumergir la muestra en solución de ácido acético al 1% durante
1 minuto.
7. Lavar la muestra con agua corriente.
8. Deshidratar la muestra en una serie de baños de alcohol.
9. Aclarar la muestra en xilol y montarla con un medio de
montaje.

Hígado humano con Tricromico Gomori

X400 Resultados
Se aprecian claramente los hepatocitos, Colágeno - azul
con nucleo eucroomático y algunos Tejido muscular - rosa
nucleolos periféricos. Con nucleo Núcleos - azul-púrpura
oscuro, heterocromático , los Eritrocitos - rojo a naranja
linfocitos.En rojo los eritrocitos y en
verde claro las fibras.
 Emplea un mecanismo histoquímico, conformado por ácido peryódico y
TINCIÓN Ácido Peryódico de Schiff reactivo de Schiff . Usualmente utilizada para detectar polisacáridos en
los tejidos, tanto glucógeno como mucopolisacáridos.

Qué estructuras tiñe

La reacción del PAS tiñe carbohidratos y macromoléculas con abundancia de carbohidratos. Se usa para
detectar glucógeno en las células, moco en varios tipos de células y tejidos, la membrana basal que se
encuentra debajo de los epitelios y las fibras reticulares del tejido conjuntivo. También es útil para valorar
la degeneración fibrinoide, ya que tiñe de rojo los depósitos de fibrina y permite visualizar elementos
infecciosos como parásitos y hongos.

Fundamento

Rompe la unión entre átomos de carbono

Ácido
adyacentes y forma grupos aldehído.
peryódico
Modificación química.

Reactivo de Los grupos aldehído reaccionan con el

reactivo de Schiff para dar un color rojo-
Schiff
púrpura distintivo.Coloración
Compuesto por fucsina básica,
ácido clorhídrico y metabisulfito
sódico o potásico
Materiales y reactivos Procedimiento

1
Tejido bien fijado en secciones de parafina Una vez 2 3 4
Agua destilada que los Depositar Lavar con agua Depositar sobre el
Etanol cortes sobre el destilada. corte 10 gotas de
Ácido peryódico hayan sido corte 10
desparafin reactivo de Schiff.20
Reactivo de Schiff gotas de
ados y min
Potasio meta-Bisulfito solución ácido
Solución fijadora rehidratad peryódico.
Hematoxilina de Mayer(formaldehido) os, 10 min.
Xileno enjuagar
Medio de montaje para diagnostico clínico con H2O
destilada.

5 6 Depositar sobre 7
Lavar con agua el corte 10 Deshidratar utilizando
destilada. gotas de la serie creciente de
hematoxilina alcoholes.
de Mayer. 3 min

8 10
Armar con medio
Enjuagar con 9 de montaje y
agua corriente . Aclarar con
observar en el
5 min xileno.
microscopio.
 Aplicaciones clínicas Imágenes de resultados

La demostración del glucógeno con tinción de

PAS tiene valor diagnóstico en casos de
tumor/quiste triquilemal, triquilemoma,
hidradenoma de células claras y poroma ecrino
debido al glucógeno presente en las células de la
corteza externa del pelo y en las glándulas tanto
ecrinas como apocrinas.
La presencia de mucopolisacáridos neutros
apunta al diagnóstico de enfermedad de Paget
mamaria y extramamaria, hidradenoma de
INTESTINO DELGADO
células claras, espiradenoma ecrino intraluminal Tiñe: Moco, glucocaliz,
y poroma ecrino. membrana basal,
Revela la membrana basal de epitelios, anexos y glucógeno
vasos, por lo que es útil para diferenciar o
resaltar algunos tipos celulares y la distribución
del colágeno entre células neoplásicas

Resultados:
• polisacáridos simples (glucógeno), mucopolisacáridos
neutros, mucoproteínas, membrana basal, glucolípidos à rojo-fuscia.
• Núcleo ...azul
 Carbol Fucsina
Coloración con Ziehl Neelsen Fenicada
Azul de Metileno
Componentes al 1%
La tinción de Ziehl-Neelsen es una coloración diferencial útil para diferenciar a las bacterias en
dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que Solución
no lo son. Decolorante

Qué estructuras tiñe

Tiñe a los bacilos ácido-resistentes como el mycobacterium

tuberculosis, de manera que se puedan detectar al
microscopio.

Fundamento

se fundamenta en la estructura de las paredes celulares de las

micobacterias que contienen lípidos y otros ácidos grasos (ácidos
micólicos) de elevado peso molecular, que les confieren la propiedad
de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción
con colorantes básicos calientes, por lo que se denominan bacterias
ácido resistentes o ácido-alcohol resistentes.

En qué consiste

se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparación ligeramente

para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos de la pared celular
para que permita el paso libre del colorante. Al enfriar con agua, los
componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la acción
abrasiva del alcohol-ácido, donde el azul de metileno se utiliza como
contra tinción
 Procedimiento Resultados

1. Fijar el frotis Las bactérias ácohol-ácido resistentes

2. Poner las láminas en el soporte de
coloración
se presentan de color rosa a rojada.
3. Cubrir las láminas con Fucsina de Ziehl Las demás bactérias (no álcohol-ácido
4. Calentar las láminas por 5 minutos, resistentes).
permitiendo la salida de vapores y evitando
Elementos celulares y desechos, se
la
ebullición de la fucsina coloran
5. Luego 5 minutos, escurrir y lavar las en azul por la solución de azul de
láminas delicadamente con água
metileno.
6. Decolorar las láminas con solución de
álcohol- ácido hasta que se quede
completamente clara
7. Lavar las láminas con água corriente
8. Colorar con Azul de Metileno por 1 minuto
9. Lavar con água corriente y secar.

Utilidad

Permite un diagnóstico rápido y presuntivo

de infección por micobacterias.Utilizado en
microbiologia para detectar el
Mycobacterium tuberculosis que provoca la
enfermedad de la tuberculosis.
 Azul de Toluidina Procedimiento

EFECTO METACROMÁTICO: Cuándo se

usa una tinción y se tiñe de un color Tinción metacromática
diferente. Ejm. Mastocitos. Tinción nuclear
Es un colorante acidofílico y metacromático que
pertenece al grupo de las tiacidas. Su característica
principal es que tiñe selectivamente componentes
ácidos de los tejidos, tales como sulfatos y radicales
fosfatos incorporados en el ADN y ARN de las células.
Por ello se utiliza para hacer tinciones nucleares "in
vivo" basado en que las células displásicas y
anaplásicas contienen cuantitativamente mayor
cantidad de ácidos nucleicos y por tanto retienen la
tinción.
Qué estructuras tiñe

Mastocitos, estructuras basófilas, tiñe proteoglicanos y

glicosaminglicanos en tejidos tales como el cartílago. Las
Resultados
soluciones de Azul de toluidina tiñen secciones
semidelgadas (0,1 a 0,5 μm) de tejidos fijados en resina. Núcleos: azules
Además, tiñe la heterocromatina y los gránulos de Nissl del Carbohidratos: azul o púrpura. Núcleos y citoplasma ortocromático - azul
tejido nervioso. citoplasma, ARN: azul o verde brillante. Diversos hidratos de carbono ácidos*
En cuánto al tejido vegetal tiñe las paredes celulares. metacromático - rosa a rojo o violeta

* Visualización metacromática
Aplicaión de tejido conjuntivo,
mucosidades, sustancias
básicas de cartílagos, gránulos
Ayuda a resaltar áreas de de mastocitos, muchas
displasia en mucosas para elegir sustancias
el mejor sitio para biopsiar la mucínicas epiteliales.
lesión
Mástocitos

Corte semifino de un glomérulo renal y sus

túbulos
 Procedimeinto
orceina

La orceína pertenece al grupo de los colorantes de oxazina y se recomienda

especialmente para la tinción de fibras elásticas.
La orceína se usa también para la tinción de la cromatina del sexo, para tinción
nuclear y para tinción de inclusiones en el hígado, especialmente de antígenos
de la hepatitis B

Preparación del
reactivo
Para aprox. 100 ml de solución se añade
Etanol 70 %
Etanol 70 ml
Agua destilada 30 ml
Solución de orceína
Etanol 70 % 99 ml
Resultados
Ácido clorhídrico fumante 1 ml
Orceína Certistain® 0,4 g
Fibras elásticas pardo rojizo
La solución de colorante recién Núcleos celulares azul oscuro a violeta oscuro
preparada debe filtrarse antes de su Colágeno no teñido
uso

Aplicaciones
Tinción con
orceína (fibras
elásticas) de la
Es utilizado para el diagnóstico celular en la dermis y la
medicina humana y se empleo en el examen epidermis de
histológico de muestras de origen humano piel cadavérica
TINCIÓN GIAMSA ES UN MÉTODO UTILIZADO EN MEDICINA Y BIOLOGÍA PARA TEÑIR CÉLULAS Y
ESTRUCTURAS INTRACELULARES EN MUESTRAS BIOLÓGICAS COMO FROTIS
SANGUÍNEOS Y CORTES HISTOLÓGICOS. UTILIZA UNA COMBINACIÓN DE
FUE DESARROLLADA POR EL BACTERIÓLOGO ALEMÁN GUSTAV GIEMSA EN 1904
COLORANTES ÁCIDOS Y BÁSICOS PARA TEÑIR LAS CÉLULAS.

EJEMPLO :

PRINCIPIO LOS NEUTROFILOS, CONTIENEN GRÁNULOS

CITOPLASMÁTICOS QUE SON RICOS EN COMPUESTOS
ÁCIDOS( PROTEÍNAS Y ENZIMAS ) , LO QUE
EL GIEMSA ES UNA MEZCLA DE COLORANTES BÁSICOS Y ÁCIDOS QUE PERMITE TEÑIRSE CON EL COLORANTE BÁSICO Y
INTERACTÚAN CON LOS COMPONENTES ÁCIDOS Y BÁSICOS DE LAS DAR UN COLOR AZULADO O VIOLETA
CÉLULAS, LO QUE PERMITE LA DIFERENCIACIÓN DE ESTRUCTURAS
CELULARES ESPECÍFICAS.
UN MÉTODO HABITUAL PARA EL
MUESTRA UTILIZADAS EXAMEN DE FROTIS SANGUÍNEOS,
¿DE QUÉ ESTA COMPUESTO? CORTES HISTOLÓGICOS

La tinción de Giemsa proporciona un excelente

LOS TINTES NEUTROS UTILIZADOS COMBINAN : contraste y una buena resolución de las estructuras
celulares, lo que permite una observación clara y
-EL AZUL DE METILENO COMO TINTE BÁSICO
detallada bajo el microscopio. Esto es esencial para
- LA EOSINA COMO TINTE ÁCIDO el análisis citológico y la identificación de cambios
anormales o patológicos.

¿QUÉ ESTRUCTURA TIÑE ?

-LOS COMPONENTES ÁCIDOS DE LA CÉLULA, COMO EL NÚCLEO, EL ARN IMPORTANCIA CLINICA
CITOPLASMÁTICO Y LOS GRÁNULOS, SE TIÑEN DE AZUL O VIOLETA

-LOS COMPONENTES BÁSICOS DE LA CÉLULA, COMO LA HEMOGLOBINA

PERMITE EL ANÁLISIS MORFOLÓGICO Y LA CLASIFICACIÓN DE LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS,
Y LOS GRÁNULOS EOSINÓFILOS, SE TIÑEN DE ROJO O DE NARANJA
INCLUYENDO LOS ERITROCITOS, LOS LEUCOCITOS Y LAS PLAQUETAS. ES POSIBLE IDENTIFICAR
ERITROCITOS: COLOR ROSA ANOMALÍAS EN LA FORMA, EL TAMAÑO Y LA ESTRUCTURA DE LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS, LO QUE
EL PH DE LA SOLUCIÓN DE RESULTA DE GRAN UTILIDAD EN EL DIAGNÓSTICO DE ANEMIAS, LEUCEMIAS, LINFOMAS Y OTRAS
PLAQUETAS: COLOR VIOLETA PÁLIDO
COLORACIÓN ES CRÍTICO , DEBE
NEUTRÓFI LOS: NÚCLEO AZUL Y CITOPLASMA ROSADO ENFERMEDADES HEMATOLÓGICAS.DETECTAR LA PRESENCIA DE HELICOBACTER PYLORI EN EL
ESTAR ENTRE 6,4 Y 6,9.
EOSINÓFI LOS: NÚCLEO AZUL. CITOPLASMA AZUL, . DIAGNÓSTICO DE ÚLCERAS GÁSTRICAS O GASTRITIS CRÓNICAS. TAMBIÉN PUEDE DETECTAR EL
BASÓFI LOS: NÚCLEO AZUL Y. GRÁNULOS PÚRPURA PARÁSITO LEISHMANIASIS O EL HONGO ASPERGILLUS NIGER QUE PUEDE SER RESPONSABLE DE
LA TI NCIÓN WRIGHT SIGUEN EL MISMO
LINFOCITOS: NÚCLEO VIOLETA. Y CITOPLASMA AZUL MICOSIS PULMONARES
MONOCITOS: NÚCLEO VIOLETA Y . CITOPLASMA AZUL PRINCIPIO
 RESULTADOS

MUCOSA GASTRICA : CANDIDIASIS MILIAR

- LA PRESENCIA DE H. PYLORI ( COLOR MUESTRA LEVADURAS DE C. ALBICANS
MARRON) (FLECHA NEGRA)
-NÚCLEOS HIPERCROMÁTICOS Y LIGERAMENTE HIFAS Y LEVADURAS DE C. TROPICALIS
AUMENTADOS (FLECHA ROJA).
 TINCIÓN
LA TINCIÓN DE PAP. PERMITE:
​

PAPANICOLAU
UNA BUENA DEFINICIÓN DEL COMPONENTE
NUCLEAR LA CROMATINA, ASÍ COMO SU
PATRÓN Y DISPOSICIÓN.
PERMITE UNA EXCELENTE DIFERENCIACIÓN DE
GEORGE N. PAPANICOLAOU (PADRE DEL CITODIAGNÓSTICO) LOS DIFERENTES TIPOS CELULARES , ACCIÓN
METABÓLICA Y HORMONAL

ES UN MÉTODO UTILIZADO PARA DETECTAR CAMBIOS ANORMALES EN

LAS CÉLULAS DEL CUELLO UTERINO. ESTA PRUEBA ES AMPLIAMENTE PROCEDIMIENTO
UTILIZADA EN EL DIAGNÓSTICO TEMPRANO DEL CÁNCER CERVICAL Y
OTRAS ENFERMEDADES CERVICALES . UTILIZA TRES COLORANTES; LA
HEMATOXILINA , EL ORANGE G Y LA EOSINA .
TOMA UNA MUESTRA
DE CÉLULAS DEL
EPITELIO DEL CUELLO
EL FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE PAPANICOLAOU SE
UTERINO
BASA EN LA APLICACIÓN DE UNA SERIE DE COLORANTES
PRINCIPIO QUE PERMITEN TEÑIR DIFERENTES COMPONENTES CERVIX NORMAL
CELULARES Y FACILITAR SU VISUALIZACIÓN AL
MICROSCOPIO FIJAR EN UN
PORTAOBJETOS DE VIDRIO
MEDIANTE INMERSIÓN EN
LOS TINTES UTILIZADOS EN LA TINCIÓN DE PAPANICOLAOU SON LOS SIGUIENTES:
UNA SOLUCIÓN FIJADORA.
HEMATOXILINA: TIÑE EL NÚCLEO DE LAS CÉLULAS DE COLOR AZUL OSCURO. LA FIJACIÓN AYUDA A
( AFINIDAD CON LA CROMATINA) PRESERVAR LA
MORFOLOGÍA Y
EOSINA: TIÑE EL CITOPLASMA DE LAS CÉLULAS DE COLOR ROSA. ESTRUCTURA CELULAR FIJADROR: ALCOHOL A 96º
ORANGE G: TIÑE LA PREQUERATINA DE COLOR ROSADO Y LA QUERATINA DE
COLOR NARANJA BRILLANTE.
NIC III
SUMERGIR :
1. HEMATOXILINA X 1 MIN
2. ORANGE G X 30 SEG
3. EOSINA 2 MIN
4. ENJUAGUE EN ALCOHOL
96| 10 SEG
RESULTADOS UNA TINCIÓN POSITIVA PUEDE SER ÍNDICE
DE:

INFLAMACIÓN (POR DIFERENTES

CAUSAS
SIGNOS TEMPRANOS DE CÁNCER
(DISPLASIA)
SIGNOS DE CÁNCER MÁS AVANZADO
QUE SE EXTIENDE MÁS ALLÁ DEL
CUELLO UTERINO
CÁNCER AVANZADO

IMPORTANCIA

PERMITE UNA ADECUADA VISUALIZACIÓN

LA CÉLULA ANORMAL CAMBIA POR COMPLETO, Y SE PUEDE
TIENE EL NÚCLEO MUY PEQUEÑO
OBSERVAR EL NÚCLEO MUY GRANDE, O DOS NÚCLEOS
RODEADO POR EL CITOPLASMA.
DENTRO DE LA MISMA CÉLULA, ENTRE OTRAS
ALTERACIONES
DE LAS CÉLULAS CERVICALES AL
MICROSCOPIO, LO QUE FACILITA LA
IDENTIFICACIÓN DE ALTERACIONES EN LA
MORFOLOGÍA Y ESTRUCTURA
CELULAR.TAMBIÉN PUEDE PERMITIR LA
IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS,
COMO BACTERIAS, LEVADURAS Y
TRICOMONAS, QUE PODRÍAN ESTAR
PRESENTES EN LA MUESTRA. ESTO ES
ESPECIALMENTE RELEVANTE EN CASOS
DE INFECCIONES CERVICOVAGINALES

“ESTA PRUEBA HA AYUDADO A DISMINUIR DRÁSTICAMENTE EL NÚMERO DE MUJERES QUE MUEREN POR CAUSA DE CÁNCER CERVICAL.”"
 TINCIÓN ARGÉNTICA
FUE DESARROLLADO POR EL CIENTÍFICO ITALIANO CAMILLO GOLGI - 1906
A TINCIÓN ARGÉNTICA ES EL USO DE PLATA . EN HISTOLOGÍA PARA RESALTAR
ESTRUCTURAS COMO FIBRAS COLÁGENAS, FIBRAS RETICULARES Y NEUROFIBRILLAS.
ESTA TÉCNICA SE BASA EN LA CAPACIDAD DE LOS IONES DE PLATA PARA UNIRSE A
ESTRUCTURAS ESPECÍFICAS EN LOS TEJIDOS, LO QUE PERMITE SU VISUALIZACIÓN BAJO
UN MICROSCOPIO
PRINCIPIO
RADICA EN LA CAPACIDAD DE LOS IONES DE PLATA PARA FORMAR COMPLEJOS INSOLUBLES CON
CIERTAS ESTRUCTURAS EN LOS TEJIDOS. ESTOS COMPLEJOS SE PUEDEN VISUALIZAR COMO
DEPÓSITOS DE PLATA OSCUROS O NEGROS BAJO UN MICROSCOPIO
MATERIALES
• SOLUCIONES DE NITRATO DE PLATA: SE UTILIZAN PARA IMPREGNAR LOS TEJIDOS CON IONES
DE PLATA.
• SOLUCIONES DE REVELADO: SE UTILIZAN PARA CONVERTIR LOS IONES DE PLATA EN DEPÓSITOS
VISIBLES. (HIDROQUINONA O EL ÁCIDO ASCÓRBICO)
• SOLUCIONES DE FIJACIÓN: SE UTILIZAN PARA PRESERVAR LOS TEJIDOS ANTES DE LA TINCIÓN.
IMPORTANCIA CLINICA
EN EL ESTUDIO DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS, COMO EL
ALZHEIMER, LA IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA PERMITE VISUALIZAR LAS
PLACAS DE AMILOIDE Y LOS OVILLOS NEUROFIBRILARES
CARACTERÍSTICOS DE LA ENFERMEDAD. TAMBIÉN SE UTILIZA EN EL
ESTUDIO DE ENFERMEDADES DEL TEJIDO CONECTIVO, COMO LA
FIBROSIS PULMONAR, DONDE PUEDE RESALTAR LAS FIBRAS
COLÁGENAS ANORMALES.
SECCIONES DE PARAFINA DE 8 ΜM DE GROSOR DE UN
GANGLIO LINFÁTICO IMPREGNADAS CON EL PROTOCOLO DE
GOMORI PARA FIBRAS RETICULARES.
PROCEDIMIENTO
1.FIJACIÓN DEL TEJIDO: SE REALIZA PARA PRESERVAR LA ESTRUCTURA DEL TEJIDO.
2.PREPARACIÓN DEL TEJIDO: SE REALIZA MEDIANTE DESHIDRATACIÓN Y EMBEBIDO EN PARAFINA O RESINA.
3.CORTE DE SECCIONES DELGADAS: SE REALIZAN CORTES FINOS DEL TEJIDO UTILIZANDO UN MICROTOMO.
4.DESPARAFINIZACIÓN Y REHIDRATACIÓN: SE ELIMINAN LA PARAFINA Y SE REHIDRATA EL TEJIDO.
5.TINCIÓN ARGÉNTICA: SE IMPREGNA EL TEJIDO CON SOLUCIONES DE NITRATO DE PLATA.
6.REVELADO: SE REALIZA EL REVELADO PARA CONVERTIR LOS IONES DE PLATA EN DEPÓSITOS VISIBLES.
7.MONTAJE Y OBSERVACIÓN: SE MONTAN LAS SECCIONES TEÑIDAS EN PORTAOBJETOS Y SE OBSERVAN BAJO UN
MICROSCOPIO.
 AZÁN DE
HEIDENHAIN
ESTE MÉTODO ES UNA MODIFICACIÓN DE LA TINCIÓN TRICRÓMICA
DE MALLORY. SU VENTAJA ES QUE DIFERENCIA UNA MAYOR
DIVERSIDAD DE ESTRUCTURAS HISTOLÓGICAS, SOBRE TODO POR
LA OBTENCIÓN DE IMÁGENES NUCLEARES CON DIFERENTE
COLORACIÓN. EL PROTOCOLO DEBE ADAPTARSE A CADA TIPO DE
MATERIAL, SIENDO NECESARIOS ENSAYOS PREVIOS. ESTA
TÉCNICA DE COLORACIÓN HISTOLÓGICA QUE SE UTILIZA EN LA
HISTOPATOLOGÍA PARA TEÑIR TEJIDOS, ESPECIALMENTE PARA
ESTUDIOS DE COLÁGENO Y FIBRAS MUSCULARES.

RECORDEMOS....
EL ÁCIDO PÍCRICO ES UN COMPUESTO QUÍMICO QUE SE USA PARA CONSERVAR LAS
MUESTRAS DE TEJIDO PARA SU ANÁLISIS MICROSCÓPICO Y PARA MEDIR LOS
NIVELES DE CREATININA EN LA SANGRE Y LA ORINA
La imagen muestra una sección transversal de un tejido conectivo laxo que
LA ANILINA ES UN COLORANTE QUE SE USA EN LABORATORIO CLÍNICO PARA TEÑIR rodea un vaso sanguíneo. Este tipo de tejido se encuentra en muchas partes
Y FIJAR MUESTRAS BIOLÓGICAS. LA TINCIÓN AYUDA A IDENTIFICAR LAS del cuerpo, como la piel, los músculos y los órganos internos.
ESTRUCTURAS Y COMPONENTES DE LAS MUESTRAS, MIENTRAS QUE LA FIJACIÓN
AYUDA A CONSERVAR SU ESTRUCTURA PARA SU ANÁLISIS MICROSCÓPICO.
COMPISICIÓN Y EFECTOS EN
LA COLORACIÓN
LA TINCIÓN AZAN DE HEIDENHAIN CONSTA DE TRES
COMPONENTES PRINCIPALES:
1. AZUL DE ANILINA: TIÑE PRINCIPALMENTE EL COLÁGENO EN
TEJIDOS CONECTIVOS, HACIÉNDOLO VISIBLE EN AZUL.
2. FUCSINA ÁCIDA: TIÑE LOS MÚSCULOS Y FIBRAS ELÁSTICAS
EN ROJO O ROSA.
3. NARANJA G: ACTÚA COMO UN CONTRASTE, TIÑENDO LOS
NÚCLEOS CELULARES EN NARANJA O ROJO.
PRINCIPIOS DE
COLORACIÓN
LOS PRINCIPIOS DE COLORACIÓN SE BASAN EN LA AFINIDAD DE
LOS COMPONENTES DE LA TINCIÓN POR ESTRUCTURAS
ESPECÍFICAS EN LOS TEJIDOS. EL AZUL DE ANILINA TIÑE EL
COLÁGENO DEBIDO A SU AFINIDAD POR LAS FIBRAS DE
COLÁGENO. LA FUCSINA ÁCIDA TIÑE LAS FIBRAS MUSCULARES
Y ELÁSTICAS, Y EL NARANJA G PROPORCIONA CONTRASTE AL
TEÑIR LOS NÚCLEOS CELULARES.

PRODUCTOS Y MATERIALES
XILENO
ETANOL DE 50º, 80º, 90º, 96º Y 100º
AZOCARMÍN G (C.I. 50085) CUBETAS DE TINCIÓN
ANILINA (C.I. 76000) ESTUFA A 60 ºC
AZUL DE ANILINA (C.I. 42755) CESTA PARA PORTAS
NARANJA G (C.I. 16230) CUBREOBJETOS
ÁCIDO FOSFOTÚNGSTICO
ÁCIDO ACÉTICO
H2O DESTILADA
MEDIO DE MONTAJE
 1.-XILENO PARA DESPARAFINAR, 2X10 MIN.
PROCEDIMIENTO 2.- ETANOL 100º, 2X10 MIN.
3.- ETANOL 96º, 10 MIN.
PARTIMOS DE MUESTRAS QUE SE HA FIJADO Y SE HAN 4.- ETANOL 80º, 10 MIN.
INCLUIDO EN PARAFINA. ESTAS MUESTRAS SE HAN CORTADO 5.- ETANOL 50º, 10 MIN.
EN SECCIONES DE UNAS 8 ΜM Y SE HAN ADHERIDO A 6.- H2O DESTILADA, 5 MIN.
PORTAOBJETOS RECUBIERTOS CON GELATINA. CUANDO LOS 7.- AZOCARMÍN PREVIAMENTE CALENTADO A 60 ºC
CORTES PROVIENEN DE MATERIAL QUE HA SIDO FIJADO CON DURANTE, 1 H A 60 ºC.
UN FIJADOR QUE CONTIENE ÁCIDO PÍCRICO HAY QUE AZOCARMÍN G:
ELIMINARLO MEDIANTE INCUBACIÓN EN ALCOHOL CON ANILINA 0.1 G DE AZOCARMÍN G (C.I. 50085)
(1% DE ANILINA EN ETANOL DE 96º) DURANTE 30 MINUTOS. 200 ML H2O DESTILADA
2 ML DE ÁCIDO ACÉTICO
8.- H2O DESTILADA, VARIOS LAVADOS.
9.- DIFERENCIAR BAJO EL MICROSCOPIO MEDIANTE
AZUL DE HEIDENHAIN: INMERSIONES SUCESIVAS EN ALCOHOL-ANILINA
0.2 G DE AZUL DE ANILINA (C.I. 42755) (ANILINA (C.I. 76000) AL 0.1 % EN ETANOL 96º).
0.5 G DE NARANJA G (C.I. 16230) 10.- DETENER LA DIFERENCIACIÓN CON ETANOL-
100 ML DE H2O DESTILADA ACÉTICO (ÁCIDO ACÉTICO AL 1% EN ETANOL 96º)
1 ML DE ÁCIDO ACÉTICO 11.- H2O DESTILADA, VARIOS LAVADOS.
15.- ETANOL 96º, UNA INMERSIÓN RÁPIDA. 12.- ÁCIDO FOSFOTÚNGSTICO AL 5%, 1 HORA.
16.- ETANOL 100º, VARIAS INMERSIONES RÁPIDAS. 13.- H2O DESTILADA, VARIOS LAVADOS.
17.- XILENO, 2X10 MIN. 14.- AZUL DE HEIDENHAIN, 2 H.
 APLICACIONES
CLÍNICAS
EVALUAR LA COMPOSICIÓN DE TEJIDOS CONECTIVOS,
ESPECIALMENTE EN ENFERMEDADES DEL TEJIDO CONECTIVO
Y CICATRIZACIÓN.
IDENTIFICAR FIBRAS MUSCULARES EN TEJIDOS MUSCULARES,
ÚTIL EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES MUSCULARES.
ESTUDIAR LESIONES FIBROSAS Y ALTERACIONES EN TEJIDOS
ELÁSTICOS.
IDENTIFICAR LA DISTRIBUCIÓN DE COLÁGENO EN TEJIDOS
PARA INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS.
ELECCIÓN DEL
COLORANTE
LA PREFERENCIA POR LA TINCIÓN AZAN DE HEIDENHAIN SE
DEBE A SU CAPACIDAD DE RESALTAR FIBRAS DE
COLÁGENO, MUSCULARES Y ELÁSTICAS EN UN SOLO PASO,
LO QUE PERMITE UNA VISIÓN COMPLETA DE TEJIDOS
CONECTIVOS Y MUSCULARES, ESENCIAL EN EL DIAGNÓSTICO.
ESTA TÉCNICA, CON SUS COLORES AZUL, ROJO Y NARANJA,
PERMITE UNA IDENTIFICACIÓN PRECISA DE ESTRUCTURAS,
SIENDO VALIOSA EN HISTOPATOLOGÍA PARA DIAGNOSTICAR
DIVERSAS ENFERMEDADES.

SECCIÓN TRANSVERSAL DE UN TEJIDO CONECTIVO LAXO. ESTE TIPO DE

TEJIDO ESTÁ FORMADO POR UNA MATRIZ EXTRACELULAR ABUNDANTE, EN
LA QUE SE ENCUENTRAN DISPERSOS FIBROBLASTOS, CÉLULAS ADIPOSAS Y
OTROS TIPOS CELULARES. LAS FIBRAS COLÁGENAS Y ELÁSTICAS SON LAS
MÁS ABUNDANTES EN EL TEJIDO CONECTIVO LAXO.
 LA IMAGEN MUESTRA LAS ESTRUCTURAS INTERNAS DE
UN PULMÓN, INCLUYENDO LOS BRONQUIOS, LOS
BRONQUIOLOS Y LOS ALVÉOLOS. LOS BRONQUIOS Y
LOS BRONQUIOLOS ESTÁN REVESTIDOS POR UN
TEJIDO EPITELIAL QUE CONTIENE CÉLULAS CILIADAS,
QUE AYUDAN A LIMPIAR LOS PULMONES. EL TEJIDO
CONECTIVO LAXO RODEA LOS BRONQUIOS Y LOS
BRONQUIOLOS, PROPORCIONANDO SOPORTE. EL
TEJIDO MUSCULAR LISO RODEA LOS BRONQUIOS Y
LOS BRONQUIOLOS, PERMITIENDO QUE SE DILATEN Y
SE CONTRAIGAN. EL TEJIDO ADIPOSO SE ENCUENTRA
ENTRE LOS BRONQUIOLOS, AYUDANDO A AISLARLOS.

CONSEJOS
HAY QUE MODIFICAR EL PROTOCOLO SEGÚN LA MUESTRA CON EL QUE SE ESTÉ TRABAJANDO.
SON CRÍTICOS LOS PASOS DE DIFERENCIACIÓN.
LA DESHIDRATACIÓN FINAL HA DE SER MUY RÁPIDA PARA NO PERDER LA COLORACIÓN AZUL.
 COLORACIÓN
INMUNOHISTOQUÍMICA
LA INMUNOHISTOQUÍMICA ES UNA TÉCNICA QUE UTILIZA
ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA DETECTAR PROTEÍNAS O
ANTÍGENOS EN TEJIDOS HISTOPATOLÓGICOS, APROVECHANDO
LA REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO. ESTA METODOLOGÍA
SE HA VUELTO ACCESIBLE Y EFICAZ GRACIAS A LA
DISPONIBILIDAD DE ANTICUERPOS EN EL MERCADO Y A LA
ESTANDARIZACIÓN DE SU PROCEDIMIENTO. SU EFICACIA
RADICA EN LA ALTA AFINIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LOS
ANTICUERPOS PARA IDENTIFICAR Y UNIRSE A MOLÉCULAS.
LA CONJUGACIÓN DE ANTICUERPOS CON ENZIMAS O
SUSTANCIAS FLUORESCENTES PERMITE DETECTAR MÍNIMAS
EN LA IMAGEN SE MUESTRA UNA TINCIÓN CON UN CROMÓGENO QUE
CANTIDADES DE MOLÉCULAS EN EL TEJIDO. PRODUCE UN COLOR ROJO (ALLRED) REVELA QUE LA PROTEÍNA KI-67
ESTÁ PRESENTE EN LAS CÉLULAS DEL EPITELIO PULMONAR. ESTO INDICA
QUE ESTAS CÉLULAS ESTÁN EN PROCESO DE DIVISIÓN CELULAR. LA
TINCIÓN DE LA PROTEÍNA KI-67 ES UNA TÉCNICA ÚTIL PARA EL
DIAGNÓSTICO DE CÁNCER, YA QUE LAS CÉLULAS CANCEROSAS SUELEN
EXPRESAR ESTA PROTEÍNA EN NIVELES ELEVADOS.
 LOS ANTICUERPOS
O
INMUNOGLOBULINAS
LOS ANTICUERPOS O INMUNOGLOBULINAS QUE SE
USAN EN LAS TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS
SON DEL TIPO G, PRODUCIDAS POR UNAS CÉLULAS
DEL SISTEMA INMUNITARIO DENOMINADOS
LINFOCITOS B DURANTE LA RESPUESTA INMUNE.
LA PRODUCCIÓN MASIVA DE ANTICUERPOS SE
PRODUCE EN UN ANIMAL CUANDO LE INYECTAMOS
UNA MOLÉCULA QUE RECONOCE COMO EXTRAÑA.
ESTOS ANTICUERPOS PASAN AL SUERO
SANGUÍNEO, EL CUAL SE EXTRAE DEL ANIMAL
INMUNIZADO, Y DEL QUE POSTERIORMENTE SE
PURIFICAN. DICHOS ANTICUERPOS PURIFICADOS
SE USARÁN POSTERIORMENTE EN LA TÉCNICA
INMUNOHISTOQUÍMICA.
 MARCADORES MÁS UTILIZADOS
Citoqueratinas: proteínas Vimentina: proteína estructural de CD3 y CD45RO: Son específicos
estructurales de las células de células de origen mesodérmico. de los linfocitos T. CD3 es un
origen ectodérmico. Presentes en Presente en la mayoría de marcador de la superficie celular
carcinomas y adenocarcinomas. sarcomas. de los linfocitos T, mientras que
CD45RO es un marcador del
citoplasma de los linfocitos T.

Esta imagen muestra células tumorales La imagen muestra una Tinción

que expresan citoqueratinas. inmunohistoquímica para vimentina en un túbulo
seminífero. Las células de Sertoli del epitelio Esta imagen muestra CD3 fuertemente
germinal masculino aparecen teñidas positivo, marcado de linfocitos T.
intensamente.

CD79a y CD20: Estos marcadores son específicos de
los linfocitos B. CD79a es un marcador de la superficie
celular de los linfocitos B, mientras que CD20 es un
marcador del citoplasma de los linfocitos B.
Esta imagen muestra (A, B) CD20 y CD79a, células tumorales
que muestran marcadores de células B mediante
inmunohistoquímica (H&E, ×200).
GFAP / Proteina glial fibrilar acídica: Antígeno característico de
astrocitos y células ependimarias del sistema nervioso central (no
se expresa en oligodendrocitos ni en neuronas). Permite
confirmar origen glial de los tumores cerebrales y es útil en el
diagnóstico diferencial con metástasis o linfoma.
En esta imagen, los astrocitos se observan como células grandes y
redondas con núcleos hipercromáticos. Estos cambios son
característicos de la astrocitosis reactiva, que es una respuesta
inflamatoria de los astrocitos a un daño o lesión.

Desmina y Actina: Estas proteínas
están presentes en las fibras
musculares y las neoplasias
relacionadas (leiomiosarcomas,
rabdomiosarcomas).
Esta imagen muestra tinción para desmina
positiva (filamento intermedio presente en
células musculares).
Neurofilamentos: Tipo de filamento
Melan-A: Proteína que se encuentra en intermedio de unos 7 nm de
los melanocitos (células que elaboran espesor, presente en el citoplasma
el pigmento melanina) normales de la de las neuronas. Está en contacto
piel y la retina. También se encuentra en con los neurotúbulos, por medio de
la mayoría de los melanomas (cánceres puentes de unión y conecta la
que empiezan en los melanocitos). membrana celular, la mitocondria y
los polirribosomas.
La imagen muestra Melan A positividad en
citoplasma de células neoplásicas (400×).
Esta imagen muestra Neurofilamento en
Esclerosis Multiple.
MARCADORES DE PRONÓSTICO TUMORAL
PCNA: proteína que participa en la duplicación del ADN.
Ki-67: marcador de proliferación celular.
p-53: proteína que regula el ciclo celular.
Receptores de estrógenos y progesterona: receptores hormonales que pueden influir en el crecimiento del tumor.
Cox-2: enzima que participa en la inflamación.
c-kit: receptor de la tirosina quinasa que puede estar presente en algunos tipos de cáncer.
c-erbB-2: receptor de la tirosina quinasa que está presente en algunos tipos de cáncer de mama.

Esta imagen muestra Tinción inmunohistoquímica Esta imagen muestra tumor astrocítico grado III,
COX-2, tumor mamario. expresión nuclear del Ki-67 en células tumorales, 40x.
 NARANJA DE
ACRIDINA
EL NARANJA DE ACRIDINA ES UN TINTE CATIÓNICO
FLUORESCENTE EMPLEADO EN HISTOLOGÍA Y
CITOLOGÍA PARA LA COLORACIÓN DE ÁCIDOS
NUCLEICOS, COMPUESTO POR UN NÚCLEO DE ACRIDINA,
UNA MOLÉCULA ORGÁNICA CON CARGA CATIÓNICA, Y
UN GRUPO DE SULFONATO, CON CARGA ANIÓNICA.
ESTA SUSTANCIA METACROMÁTICA ORGÁNICA
CATIÓNICA SE UTILIZA PARA TEÑIR TANTO ÁCIDOS
NUCLEICOS COMO COMPARTIMENTOS ÁCIDOS COMO LOS
LISOSOMAS. SU EMISIÓN LUMÍNICA VARÍA, GENERANDO
UNA LUZ VERDOSA CUANDO SE UNE AL ADN Y UNA
TONALIDAD ANARANJADA AL UNIRSE AL ARN O AL
Esta imagen se refiere a la sección del páncreas de un ratón que ha
TEÑIR ESTRUCTURAS ÁCIDAS.
sido teñida con naranja de acridina. La coloración de las células del
páncreas en color anaranjado se debe a la presencia de ácidos
nucleicos, mientras que los núcleos se tiñen de verde.
RESULTADOS
Núcleos: verde brillante.
Compartimentos ácidos: anaranjado-amarillento.
MECANISMO DE ACCIÓN TIPOS DE TINCIÓN
TINCIÓN DE CÉLULAS VIVAS: EL NARANJA DE ACRIDINA SE
EL NARANJA DE ACRIDINA SE UNE A LOS ÁCIDOS UTILIZA PARA TEÑIR CÉLULAS VIVAS, LO QUE PERMITE
NUCLEICOS POR ATRACCIÓN ELECTROSTÁTICA. EL OBSERVAR LA DISTRIBUCIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS EN EL
NÚCLEO CATIÓNICO DEL COLORANTE SE UNE A LA CARGA INTERIOR DE LAS CÉLULAS.
NEGATIVA DEL ADN O ARN, MIENTRAS QUE EL GRUPO TINCIÓN DE CÉLULAS FIJAS: EL NARANJA DE ACRIDINA
SULFONATO SE UNE A LA CARGA POSITIVA DE LOS IONES TAMBIÉN SE UTILIZA PARA TEÑIR CÉLULAS FIJAS, LO QUE
PERMITE OBSERVAR LA ESTRUCTURA DE LOS ÁCIDOS
HIDRÓGENO.
NUCLEICOS.
INMUNOHISTOQUÍMICA: EL NARANJA DE ACRIDINA SE UTILIZA
COMO CONTRACOLORANTE EN LA INMUNOHISTOQUÍMICA, LO QUE
PRODUCTOS Y MATERIALES PERMITE VISUALIZAR LAS CÉLULAS QUE EXPRESAN UN
DETERMINADO ANTÍGENO.
XILENO
ETANOL DE 50º, 70º, 80º, 96º Y 100º
NARANJA DE ACRIDINA (CAS: 494- CUBETAS DE TINCIÓN
32-8) CESTA PARA PORTAS
NACL CUBREOBJETOS
ÁCIDO ACÉTICO
H2O DESTILADA
GLICEROL
 1. 2X10 MIN EN XILENO PARA DESPARAFINAR
PROCEDIMIENTO 2. 2X10 MIN EN ETANOL 100º
3. 10 MIN EN ETANOL 96º
PARTIMOS DE MUESTRAS QUE HAN SIDO FIJADAS E 4. 10 MIN EN ETANOL 80º
INCLUIDAS EN PARAFINA. ESTAS MUESTRAS SE HAN 5. 10 MIN EN ETANOL 50º
CORTADO EN SECCIONES DE UNAS 8 ΜM Y SE HAN 6. 5 MIN EN H2O DESTILADA
7. 10-20 S EN NARANJA DE ACRIDINA:
ADHERIDO A PORTAOBJETOS RECUBIERTOS CON
NARANJA DE ACRIDINA (CAS: 494-32-8) 26 MG
GELATINA.
ÁCIDO ACÉTICO 2 ML
H2O DESTILADA 98 ML
RESULTADOS 8. 1 MIN EN ALCOHOL SALINO:
NÚCLEOS: VERDE BRILLANTE. NACL 0,9 G
COMPARTIMENTOS ÁCIDOS: ANARANJADO-AMARILLENTO. H2O DESTILADA 98 ML
ETANOL 100º 2 ML
9. 1 MIN EN SOLUCIÓN SALINA:
NACL 0,9 G
Célula epitelial de la H2O DESTILADA 100 ML
boca cubierta de 10. MONTADO CON UNA GOTA DE GLICEROL Y UN
bacterias, teñida con CUBREOBJETOS.
naranja de acridina. El 11. OBSERVAR CON EL MICROSCOPIO DE
núcleo celular en verde, FLUORESCENCIA
y el material genético de
las bacterias en naranja.
 APLICACIONES
CLÍNICAS
DIAGNÓSTICO DE CÁNCER: EL NARANJA DE ACRIDINA SE UTILIZA
PARA DETECTAR CÉLULAS CANCEROSAS EN MUESTRAS DE TEJIDO.
DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS: EL NARANJA DE
ACRIDINA SE UTILIZA PARA DETECTAR MICROORGANISMOS
INFECCIOSOS EN MUESTRAS DE TEJIDO.
INVESTIGACIÓN BÁSICA: EL NARANJA DE ACRIDINA SE UTILIZA EN
INVESTIGACIÓN BÁSICA PARA ESTUDIAR LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN
DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS.
ELECCIÓN DEL
COLORANTE
SU ALTA AFINIDAD POR LOS ÁCIDOS NUCLEICOS: EL
NARANJA DE ACRIDINA TIENE UNA ALTA AFINIDAD POR
LOS ÁCIDOS NUCLEICOS, LO QUE LO HACE UN
COLORANTE EFICAZ PARA LA TINCIÓN DE ESTAS
MOLÉCULAS.
SU FLUORESCENCIA: EL NARANJA DE ACRIDINA ES UN
COLORANTE FLUORESCENTE, LO QUE PERMITE
VISUALIZAR LAS CÉLULAS O ESTRUCTURAS QUE LO
CONTIENEN BAJO UN MICROSCOPIO FLUORESCENTE.
SU SEGURIDAD: EL NARANJA DE ACRIDINA ES UN
COLORANTE SEGURO PARA SU USO EN HUMANOS.

CONSEJOS...
LOS PASOS POR ALCOHOL SALINO Y SOLUCIÓN
SALINA SON ESENCIALES PARA ESTABLECER LA
CALIDAD E INTENSIDAD DE LA TINCIÓN.

SECCIÓN DE PULMÓN DE RATÓN TEÑIDA CON NARANJA DE

ACRIDINA. OBSÉRVESE LAS CÉLULAS TEÑIDAS DE AMARILLO-
ANARANJADO DE LA PERIFERIA, POSIBLEMENTE MASTOCITOS,
Y LOS NÚCLEOS VERDES DE TODAS LAS CÉLULAS.
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