INFORME PRACTICA DE LABORATORIO EXTRACCIÓN DE ADN Y ELECTROFORESIS

Presentado por
FABIAN STEVEN AGUIRRE FRANCO
1010109261
DANIEL STEVEN FERNANDEZ
1054997709

Presentado a
IVÁN ALBERTO LOPERA CASTRILLÓN

UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA

PEREIRA – RISARALDA
QUÍMICA INDUSTRIAL
BIOQUÍMICA
22 DE JULIO DE 2021
 PRESENTACIÓN DE RESULTADOS

Figura 1. ADN en etanol. Figura 2. ADN en Buffer Figura 3. Electroforesis.

En la figura 1 podemos observar el ADN que fue extraído durante el procedimiento utilizado
en el laboratorio en la parte superior donde se encuentra el etanol. Posteriormente en la
figura 2 se observa el ADN ya disuelto en el Buffer TBE el cual se llevó a la nevera para su
posterior análisis en electroforesis. En la figura 3 se observa la prueba de electroforesis
donde se puede apreciar con claridad el marcador y las diferentes bandas de este, además
de una pequeña señal de luminiscencia en el primer pozo lo cual era lo esperado debido a
que el ADN que se extrajo era de un tamaño grande.

ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

ADN es el nombre químico de la molécula que contiene la información genética en todos los
seres vivos. La molécula de ADN consiste en dos cadenas que se enrollan entre ellas para
formar una estructura de doble hélice. Cada cadena tiene una parte central formada por
azúcares (desoxirribosa) y grupos fosfato [1]. Este ADN fue el que se obtuvo en la práctica
de laboratorio el cual al tratarse de un ADN de tipo genómico lo pudimos observar a simple
vista gracias al procedimiento de extracción el cual fue lisis celular, lo que permitió la ruptura
de la membrana de las células para liberar sus componentes, en este caso el ADN.
La principal señal de que se pudo lograr la extracción satisfactoriamente fue la presencia de
burbujas de pequeño tamaño unidas a las hebras de ADN, estas se trataron de retirar del
tubo de ensayo, para almacenarla para la práctica de electroforesis.
Efectivamente se retiró el ADN del etanol y se disolvió en el Buffer TBE con el fin de preparar
la solución para el posterior análisis en la electroforesis técnica que tiene como principio la
migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en
el cual, por acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo con su tamaño o peso
molecular.
Se debe tener un pozo donde se deposite una referencia en cuanto a peso molecular, con el
fin de observar que el proceso esta funcionando bien y en caso de que se quisiera comparar
con algún peso establecido se necesitaría la información completa del marcador de peso.
Para controlar el avance de la separación de las moléculas en la matriz y establecer un
patrón de fragmentos, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes los cuales
deben ser observables en la lampara uv. Estos pasos facilitan la visualización en el
ultravioleta de las moléculas a manera de simples bandas las cuales serán posteriormente
analizadas e interpretadas [2].
Esto se puede ver reflejado en la figura 3 donde se observa claramente la migración del
marcador y la señal teñida en el primer pozo indicando la presencia de ADN y que se logró la
separación en los posos con el uso de la técnica de la electroforesis.

PROPUESTAS DE MEJORA O DE OPTIMIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

En la extracción de ADN se podría mejorar la maceración del material vegetal con el uso de
un método mecánico, ya que es complicado con el mortero, también se debe tener en cuenta
que se debe hacer el proceso de manera suave para evitar la formación de mucha espuma lo
cual dificulta la extracción.
Cuando se va a retirar el ADN de tubo de ensayo se debe tratar de que se retire la menor
cantidad de alcohol posible ya que al ser almacenado puedo evitar el congelamiento del
material vegetal y esto puede ocasionar una degradación anticipada.
En la parte de electroforesis se debe tener en cuanta los tiempos de gelificación del gel
agarosa, con el fin de lograr la consistencia adecuada, también retirar con cuidado el peine
para evitar la destrucción de los pozos.
 CUESTIONARIO

1. ¿De qué tipo de células es posible extraer ADN?

El ADN se puede obtener de diferentes células animales, vegetales, algunos organismos
como bacterias, hongos, y en la sangre está presente en los glóbulos blancos, pero no en los
glóbulos rojos o eritrocitos.

2. ¿Qué fundamento tiene la utilización de un detergente en la preparación de la

solución de extracción de lisis?
Estructuras moleculares en las que las partes apolares de las moléculas de detergente
interactúan con la grasa, disolviéndola y manteniéndola en suspensión, mientras que las
partes polares interactúan con el agua. Cuando el detergente disuelve las membranas
biológicas, se introduce entre los fosfolípidos de las membranas, rompiéndolas y formando
micelas solubles [3]

3. ¿Qué fundamento tiene la utilización de una sal en el proceso de extracción del

ADN?
La sal es una red cristalina formada por átomos de Cl- y Na+, unidos mediante un enlace
iónico (atracción electrostática entre los iones de distinto signo). El agua actúa sobre la sal
estableciendo puentes de hidrógeno con el Cl- y el Na+, venciendo las fuerzas
intermoleculares que los mantienen unidos e hidratándolos. El papel de la sal común también
es clave en la fase de precipitación del ADN, que se produce tras añadir lentamente el
alcohol frío sobre la pared de un recipiente estrecho en el que se encuentra el caldo
molecular. En la interfase etanol-agua, las moléculas de alcohol se unen a las de agua,
desplazando así tanto el agua que interacciona con el ADN y como la que interacciona con
los iones de Na+, y que hacía posible su disolución. Este desplazamiento permite que
algunos iones Na+ se unan a los iones fosfato del ADN, neutralizando su carga, perdiendo su
solubilidad y facilitando la precipitación del ADN como filamentos blancos (color debido a la
red cristalina que forma con el NaCl). [3]
4. ¿Cómo debe ser el tamaño del ADN obtenido mediante este proceso y por qué?
Se espera el que ADN sea de un tamaño grande debido a que el procedimiento de extracción
permite extraer todo el ADN presente en la célula de este organismo que es la fresa, también
conocido como ADN genómico.

5. ¿Qué papel cumple el etanol al 96% en el proceso de extracción y por qué es

importante que esté frio?
El alcohol es menos denso que el agua, por lo que si se añade alcohol con delicadeza sobre
el agua para evitar que se mezclen, el alcohol se mantendrá flotando sobre el agua. Es muy
importante dejar resbalar lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, para que
quede en la superficie del agua y no se mezcle con ella, ya que ambos compuestos son
miscibles. Además, en general, la densidad de una sustancia aumenta a medida que la
temperatura disminuye. Así, el alcohol añadido debe estar frío (a -20 °C, temperatura de un
congelador), ya que al contactar con el agua la enfriará, haciendo que ésta sea más densa y
evitando, por tanto, que se mezclen el alcohol y el agua. [3]

6. Realice un diagrama de flujo de todo el proceso explicando brevemente el objetivo

de cada paso.
Aplastar la fresa en un mortero.
Con el fin de romper las células y
liberar el ADN.

Preparar el líquido de extracción 10 mL de detergente. 5 g de sal.

de ADN 125 mL de agua.

Agregar 30 mL del líquido de

extracción. Esto producirá el
rompimiento de las células.

Filtrar la solución y tomar 2 mL del

filtrado. Allí está el ADN.

Adicionar 2 mL de etanol frío por las paredes

del tubo. Esto permite que el ADN que
estaba en el filtrado pase al etanol en forma
de una sustancia blanca turbia.
 Una vez gelificado se planta la muestra del ADN con el reactivo revelador
Syber Safe. Y se deja pasar a través de la cámara un voltaje para observar el
desplazamiento del ADN en el medio. Por último se compara con el
marcador.
Bibliografía
[1] ADN (Ácido Desoxirribonucleico) | NHGRI. (n.d.). Retrieved July 19, 2021, from
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/ADN-acido-Desoxirribonucleico
[2] CYAN MAGENTA AMARILLO NEGRO. (n.d.). Retrieved from
https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/38.pdf
[3] Marcos-Merino,, José María, Gallego, R. E., Ochoa de Alda, J. G., Marcos-Merino, , José
María, Gallego, R. E., & Ochoa de Alda, J. G. (2019). Extracción de ADN con material
cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos.
Educación Química, 30(1), 58–69. https://doi.org/10.22201/FQ.18708404E.2019.1.65732