UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Sección de Bioquímica y Farmacología Humana
Laboratorio de Bioquímica Metabólica

REPORTE DE PRACTICA

Carrera: Química.
Grupo: 1701 A/C Criterios de Evaluación
Equipo: 2 Presentación (1) Análisis (3)
No. De Práctica: 1 Introducción (1) Conclusiones(1)
Fecha: 18/10/2020 Objetivos (1) Referencias (1)
Resultados (2) CALIFICACIÓN
Nombre de la práctica: Cuantificación de DNA.

Integrantes: Fernández Durán Jaqueline. Jaimes Vitales Silvia. Ramírez Muñoz Fernanda Guadalupe.
Introducción: Objetivos:

El ADN es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el ● Estudiar, comprender y analizar el ADN mediante
desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos. pruebas para poder comprender la importancia
Está formado por un grupo fosfato, una pentosa (desoxirribosa), y bases nitrogenadas biológica y de investigación.
(timina, guanina, citosina, y adenina). Este es el único con la capacidad de replicarse. ● Comprender la importancia, procedimiento y la
Para el estudio del ADN se requiere llevar a cabo procedimientos de desintegración de función que tiene la técnica de electroforesis y
tejidos, solubilización y homogeneización de los componentes para así precipitar al espectrofotometría para el estudio del ADN
ADN. Cuando se requiere obtenerlo con alto grado de pureza se recomienda utilizar mediante simuladores.
centrifugaciones con gradiente de CSCl. ● Comprender la importancia del estudio del ADN
Debido a las características y componentes del ADN se pueden usar reacciones de en distintas áreas mediante un simulador CSI.
bial y difenilamina para su identificación, así como técnicas espectrofotométricas y de
electroforesis para su estudio.

Análisis de Resultados:

En la imagen se observa una precipitación de ADN exitosa mediante un enjuague que ha recogido las
células epiteliales que se desprenden de las paredes de la boca, la lengua, etc.
En esta técnica se utiliza NaCl, nos da un medio hipertónico que provoca el estallido de las células y los
núcleos, quedando libre las fibras de cromatina. El detergente cumple la misión de formar un complejo
con las proteínas histonas y separarlas del ADN por medio de una lisis celular, por último el etanol frío
que es el que nos da la precipitación del ADN ya que desnaturaliza el B-ADN que es insoluble en
alcohol.

Determinación colorimétrica de la presencia de ácidos nucleicos.

M R R Pr M
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C R R A D
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C R R V D
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s.

Ambas pruebas colorimétricas dan positivo, ya que solo se enfocan en las pentosas y desoxipentosas. La reacción con el reactivo de difenilamina la
dan en general 2 desoxipentosas y no es específica para el ADN, caracterizamos este de manera indirecta por medio de espectrofotometría
teniendo en cuenta que el complejo que resulta del ADN + el reactivo de difenilamina es de color azul teniendo su absorción máxima en 595nm.
Mientras que la reacción con el reactivo de Bial puede evidenciar a la pentosa del ADN y del ARN por medio de la reacción del orcinol. El ácido
sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glucosídicas, liberando la ribosa, desoxirribosa, bases púricas, bases pirimidínicas y ácido fosfórico.
La pentosa en un medio ácido se deshidrata originando una reacción furfural que reacciona con orcinol, dando un producto que demuestra
presencia de ADN como de ARN.

Reacción de Bial. Reacción difenilamina.

Cuantificación de DNA por electroforesis.

La electroforesis es una técnica utilizada para la identificación de ADN . Esta nos ayuda a separar
fragmentos de ADN por su tamaño y carga. Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que se mueven
hacia el electrodo positivo. Puesto que todos los fragmentos de ADN tienen la misma cantidad de carga por
masa, los fragmentos pequeños atraviesan el gel más rápido que los grandes. Cuando un gel se tiñe con un
pigmento que se une al ADN, y los fragmentos del mismo pueden verse como bandas, las cuales
representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño. Esta técnica se utiliza en una gran
variedad de aplicaciones como en la medicina forense para determinar la identidad de las personas que
puedan haber participado en un delito, mediante la vinculación de su patrón de ADN siempre y cuando
esté se encuentre en una base de datos.

Cuantificación de DNA mediante espectrofotometría de UV.

La concentración del ADN se puede estimar utilizando un espectrofotómetro de luz ultravioleta (UV) a una
longitud de onda de 260 nm, debido a que las bases puricas y pirimidicas del adn tienen la propiedad de
absorber las ultravioleta a esta longitud de onda. es importante tener en cuenta que, dado el
emparejamiento de sus bases (puentes de hidrógeno), el ADN bicatenario absorbe menos que le
monocatenario.
La determinación de la pureza del ADN se establece mediante la relación de las lecturas de las absorbancias a 280 y a 260 nm. Es así como una
unidad (u) de densidad óptica (DO) a 260 nm equivale a 50μg/mL de ADN de doble cadena, a 40μg/mL de ARN y ADN de cadena simple, y a 20μg
de oligonucleótidos.
Como podemos observar el ADN en su forma pura la longitud de onda en que más absorbe es de 260 nm, con un 0% de ADN en la muestra
absorbe en 280 nm, en una de 90% ADN absorbe igual en 260 nm al igual que una muestra con el 48%, si tuviera el 22% absorberá en 280 nm.
Por lo que podemos observar que cuando la muestra tenga 40% o más de muestra siempre la longitud de onda donde absorberá más será de 260
nm.

Debido a la ecuación de la curva patrón podemos determinar la

concentración de nuestra muestra problema.
x=(.153+.0041)/.0016=98.18
Por lo que observamos que la concentración de nuestra muestra
problema es de 98.18μg/mL. Lo que nos dice que nuestra muestra
cuenta con un 49.09μg/mL de ADN de doble cadena, 39.27μg/mL de
ARN y ADN de cadena simple, y 19.64μg de oligonucleótidos.
Todo lo anterior nos quiere decir que nuestra muestra tiene un alto de
pureza

Conclusiones: Referencias (formato APA):

Mediante lo estudiado y analizado mediante el software podemos concluir que el ADN ● Puerta, C. J., & Ureña, C. P. (2005). Prácticas de
es de suma importancia para distintas áreas porque lleva nuestra información genética, biología molecular. Pontificia Universidad
lo cual nos identifica a cada uno de nosotros, aprovechar esto nos ayuda en diversos Javeriana.
campos de investigacion y criminalistica, para identificar a criminales o personas ● Barranco Montesinos Deyla Azucena. (Abril-Junio
desaparecidas, o la investigación biológica de paternidad o algún otro tipo de 2019). Aplicación de la electroforesis en la
parentesco. identificación forense Application of
La importancia de conocer su pureza mediante espectrofotometría es para saber que electrophoresis in forensic identification. VISIÓN
tan fiable es una muestra, ya que esta misma se comparará con una base de datos. CRIMINOLÓGICA-CRIMINALÍSTICA, 2, 32-37.
cumpliendo así nuestro segundo objetivo en la práctica. ● Kart, Gerald. Biología celular y molecular, 2ª.,
McGraw Hill, México, 2001.
● Murray, R., P. Mayes, D. Granner y V. Rodwell.
Bioquímica de Harper, 15a ., Editorial El Manual
Moderno, México, 2000.
● Alberts, B., D. Lewis, J. Raff, K. Roberts y J.
Watson. Biología molecular de la célula, 3ª.,
Omega, España, 2002.
● https://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
● http://forensics.rice.edu/index.html
● http://biomodel.uah.es/lab/abs/uvProtDNA/
inicio.htm