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Universidad San Francisco de Quito

Laboratorio de Biologa Molecular

Informe N.1

Nombres del estudiantes: Rodrigo Ordoez y Yerlin Calderon


Fecha de entrega del Informe: 19/09/2017

TEMA: Extraccin de ADN genmico.


Introduccin

El ADN es una estructura bsica que determina la herencia gentica de los seres vivos,
est compuesta de nucletidos que son la principal organizacin para el empaquetamiento
gentico. El ADN se encuentra estructurado en una conformacin helicoidal (doble
elices), formaciones que se encuentran en comunicacin y unin continua gracias a sus
enlaces de carcter dbiles, como lo son los puentes del Hidrogeno, estructura que
permiten que estas dobles hlices estn unidos con doble enlace (A-T) o triples (C-G),
dependiendo de sus bases nitrogenadas pareadas. (Botou, 2005).

Para realizar una correcta extraccin del ADN de una molcula y su posterior apreciacin
sobre la calidad de la misma, al separarlo de organelos y diferentes macromolculas
localizados en una clula, como el caso de la E. Coli DH10B, es necesario realizarlo
teniendo en consideracin cuales son los pasos requeridos para realizar este proceso de la
mejor manera, este proceso con el fin de evitar muchas ms contaminaciones que la
muestra podra adquirir.

Como primero paso se encuentra la lisis, proceso que permite liberar tanto objeto de
estudio como es el ADN y otros elementos presentes en el citoplasma de la muestra, a
travs de la ruptura de la membrana, que son ayudados por agentes surfactantes, como el
(ADNzol ) que est presente en la mayora de los casos. Ya culminada la lisis, se continua
con la precipitacin de la muestra utilizando para ello, sales catinicas (Na+) y etanol al
100 por ciento fro, lo que permite que se d una degradacin proteica del ADN y
concentracin nica; pero, mnima en el fondo de la muestra, que pasar a conocerse
como pellet. Con la obtencin e identificacin del pellet se debe proceder a realizar el
lavado correspondiente con etanol al 70%, eliminando de este modo muy posibles
residuos tanto de sales, como la propia muestra inicialmente y de este modo continuar
con una re-suspensin del ADN, que permitir un posterior anlisis de la muestra.(Rojas,
2006).

Obtenida la muestra, su medicin de calidad se lo hace basndose con la


espectrofotometra, que determina la relacin entre los factores de absorcin de cidos
nucleicos (260nm) y las de las protenas (280nm), indicador que en promedio debera dar
un valor de 1.8, o un tanto mayor, para confirmar la calidad de la misma (Escalante, 1997)
Resultados

Figura 1. Cuantificacin de datos obtenidos de la extraccin de ADN de la muestra 2. Conc:


concentracin de muestra examinada. 260/280 y 260/230: relacin de frecuencia ondulatoria y
absorbancia.

Figura 2. Cuantificacin de datos obtenidos de la extraccin de ADN de la muestra 2. Conc:


concentracin de muestra examinada. 260/280 y 260/230: relacin de frecuencia ondulatoria y
absorbancia
Tabla.1. Medidas de concentracin calidad de las muestras de ADN extradas.
Muestras
Parmetro
1 2
Concentracin de ADN (ng/l) 337,2 350,3
Calidad de ADN relacin 1,57 1,57
A260nm/A280nm
Calidad de ADN relacin 0,47 0,44
A260NM/A230nm

Discusin

En la Tabla.1 se evidencia que la concentracin entre ambas muestras son un tanto


similares, pero predomina en la muestra 2 con 350,3 ng/l sobre 337,2 ng/l de la 1. Esta
informacin se confirma tanto en la Fig.1 como en la Fig.2, las cuales al comparar la
relacin de absorbancia y longitud de onda en el punto 260 nm, que es la absorcin de
ADN (cuanto ADN posee la muestra), se evidencia que la muestra 2 posee una fluctuacin
ms abultada y sobresaliente que la muestra 1.

En relacin a la forma de las lneas espectrometras de las Fig.1 y Fig.2 se puede


evidenciar que ambos resultados de las muestras poseen una apariencia muy similar,
presentando el mayor pico de absorbancia cercano a 230 nm y a su vez una fluctuacin
seguida del pico. Esta informacin obtenida da una idea que la calidad entre ambas va a
ser muy similar entre ellas, lo cual se puede afianzar en los datos obtenidos en la Tabla.1
donde la calidad ADN A260nm/A280nm de ambas muestras poseen iguales datos y
simplemente presentan una pequea variacin de 0,03 en la relacin del ADN
A260NM/A230nm.

La presencia en ambas figuras de un pico a la altura de 230 nm y a su vez de la baja


calidad en ambas muestras, en relacin con los parmetros bases que son en la relacin
ADN A260nm/A280nm de 1,8 y en la relacin ADN A260nm/A280nm de 2, puede estar
debida a ciertos agentes o disolventes orgnicos como lo son fenoles, hidratos de carbono,
ciertos pptido, etc., ya que las longitudes de onda de absorcin de estos tipos de
compuestos es de 230 nm, correspondientes en donde se formo el gran pico en ambas
muestras (ThermoScientific, 2016)

Estas muestras, a pesar de no ser totalmente puras si se las podra guardar para un
posterior uso debido a que en caso de ser necesarios su uso se podra aplicar y hacer uso
de compuestos que permitan quitar estos disolventes orgnicos (UNAM, 2015)
Bibliografa

Botou, B. (16-20 de julio-diciembre de 2005). Red de Revistas Cientficas de Amrica


Latina y el Caribe, Espaa y Portugal . Obtenido de Red de Revistas Cientficas
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http://www.redalyc.org/html/499/49910207/
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Mexico. Libro en linea. Disponible en internet desde:
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