Proteínas Plasmáticas

Obtención de la muestra de sangre

Separación del plasma
Separación y cuantificación de proteínas
totales, albúmina y globulinas
Curva Estándar
Cálculos

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Material para venipunción: equipo Vacutainer

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Punción: Venosa, cutánea (capilar), arterial

Venas comúnmente utilizadas para toma de muestras

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 Limpieza del área de punción

Alcohol (etanol, isopropanol 70%)

Ciclohexidina/Clorhexidina

Betadina (Yodopovidona 1%)

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 Vigilar el estado de mi donador!!!!

Antes
Durante
y después de venopunción

Depositar agujas en recipiente para

punzocortantes

Inactivar material de vidrio conteniendo

sangre/plasma en
solución de hipoclorito diluido 1:20 x 30 min

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El bisel de la aguja debe quedar hacia arriba

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Para mezclar la sangre con el EDTA,
homogenizar la muestra por inversión
suave!!
Si se agita puede haber hemólisis
(ruptura de eritrocitos)

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 Separación y cuantificación de
proteínas plasmáticas
Sangre: fluido para fines analíticos.
Sangre coagulada: paquete celular y suero (no contienen factores de
coagulación

Sangre;+ anticoagulante: paquete celular y plasma (contiene factores de

coagulación)
Se centrifuga para separar el plasma

Proteínas plasmáticas: ≈ 50, [7 g/100 ml]

• Secretadas activamente a la sangre

• No derivar de lesiones/alteraciones de tejidos

• Ejercer función en el sistema vascular

• [ ] mayor en el plasma que en cualquier otro tejido

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Separación en la 1ª sesión de
aislamiento y cuantificación
Separación de las proteínas en base a su:

1)Solubilidad

[↓ sales] aumenta su solubilidad (salting in)

[↑ sales], p.ej. sulfato de Na al 23%], tungstato de Na
disminuye la solubilidad (salting out)

[solventes, p.ej. éter etílico] precipitan globulinas

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 Procedimiento

Plasma

Paquete
celular

Tubo 1
1 ml
PT
Precipitación
Precipitación adecuada de
incompleta globulinas
de globulinas
Tubo 2
X 1ml
albúmina
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Modificación sugerida para el tubo 1 (Proteínas totales)

Mtra. Leonor Aguilar Santelises , M. en C. Araceli García del Valle, Dra. Teresa
Corona Ortega
Manual de Prácticas de Bioquímica Celular y de los Tejidos I

0.5

0.5

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Cálculo de mg albúmina en tubos 3 al 7 para la curva estándar
Mtra. Leonor Aguilar Santelises , M. en C. Araceli García del Valle, Dra. Teresa Corona Ortega
Manual de Prácticas de Bioquímica Celular y de los Tejidos I

Patrón de albúmina 350 mg albúmina/100 ml NaOH 0.1 N = 3.5 mg/ml

Por lo tanto:
Tubo 3. 3.5 mg de albúmina/1 ml X 0,2 ml = 0.7 mg de albúmina
Tubo 4 X 0.4 ml =
Tubo 5 X 0.6 ml =
Tubo 6 X 0.8 ml =
Tubo 7 X 1.0 ml = 3.5 mg de albúmina

ESTOS DATOS VAN EN EL EJE DE LAS «X» Y EN «Y» LOS DATOS

EXPERIMENTALES DE ABSORBANCIA
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DATOS DEL PATRÓN PARA LA CURVA ESTÁNDAR

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1) Elaborar la curva estándar, calcular r2
2) Interpolar datos de absorbancia de las muestras problema
Tubo 1 (Proteínas totales): 0.218 Absorbancia (se tomó un volumen
de 0.5 ml)
Tubo 2 (albúmina): 0.190 Absorbancia (se tomó un volumen de 1.0 ml)

3) Hacer las correcciones para obtener la concentración original de las

muestras problema:
a) mg a mg/ml
b) multiplicar por el factor de dilución (en el paso de mezcla del plasma con
el sulfato de sodio):
FACTOR DE DILUCIÓN
a) Sumar los volúmenes: 0.25 ml de plasma + 4.75 sulfato de sodio= 5ml volumen total
b) dividir el volumen total entre el volumen del plasma (5ml/ 0.25 ml)

4) para obtener la concentración de globulinas aproximada:

Proteínas totales- albúmina = globulinas
Comparar las concentraciones de PT, albúmina y globulinas con los valores
normales de referencia. Si dan anormales, repetir la determinación antes de
liberar los resultados y considerar los aspectos de control de Calidad
Interna/externa
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 ¿Importancia clínica de esta
determinaciones?
(recordar los aspectos de confiabilidad de la curva, comprobación de
resultados anormales y control de calidad interno/externo considerados en la
práctica de curva estándar)

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