Práctica: Cuantificación De Proteínas Séricas:

Proteínas Totales, Albúmina Y Globulinas. Método De

Biuret

Estudiante: Lesly Daniela Ortíz Lozano.

N° de carnet: #190295.

Laboratorio: #2, Grupo 3B; subgrupo 3

Fecha de entrega: 22/Septiembre/2021.

 INTRODUCCIÓN:

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente

distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc.
Las proteínas constituyen la clase de compuestos bioquímicos más
característicos de los seres vivos. Aunque el número de proteínas es muy
grande, se pueden clasificar fácilmente por métodos de laboratorio que se
basan en las propiedades físicas y químicas de las mismas.
Uno de estos métodos es el fraccionamiento salino, en el que se observan
cambios de solubilidad de las proteínas en presencia de iones y constituye el
método más antiguo y todavía importante de diferenciar y separar proteínas.
Para los análisis de proteínas resulta más cómodo y satisfactorio el uso de
suero en vez de plasma. Por el método de fraccionamiento salino las proteínas
séricas se clasifican dentro de 2 grupos: Albúminas y Globulinas.
Los esfuerzos realizados para la separación de las proteínas en fracciones
homogéneas no solamente son de interés académico sino de importancia
clínica; variaciones en los niveles de las proteínas plasmáticas se producen en
diversas enfermedades y la determinación de estas variaciones tienen gran
valor tanto para el diagnóstico y pronóstico como para la fisiopatología de una
enfermedad. En estado de enfermedad, el total de proteínas y la relación entre
las fracciones proteicas, albúminas y globulinas (A/G) pueden cambiar
independientemente.
La hipoalbuminemia puede ser ocasionada por diversas causas, sin embargo,
su presencia es de gran utilidad diagnóstica en los padecimientos hepáticos
(cirrosis) ya que el hígado, en este estado, es incapaz de sintetizar albúmina
adecuadamente. Así mismo, las alteraciones que se presentan en las globulinas
son de gran interés en patología, por lo que será objeto de amplia discusión en
las sesiones de grupo.

Objetivos de la Práctica.
GENERAL

 Distinguir la diferencia de solubilidad de las proteínas presentes

en el suero.

 Explicar en qué consiste el método de fraccionamiento salino

para la separación de las proteínas del suero.

ESPECIFICOS.

 Cuantificar las proteínas de acuerdo al método de Biuret.

 Analizar la importancia de la determinación de proteínas séricas

para el diagnóstico clínico.

PARTE EXPERIMENTAL
1.- Cuantificación de las proteínas (proteínas totales) por el método de
Biuret.

 Solución de
Sulfato de Sodio
al 26%.

 Reactivo de
Biuret.
REACTIVOS

 Estándar de
Proteínas.

 Muestra (el
suero se le
proporcionará)
 MATERIAL Y EQUIPO:

1 gradilla para
6 tubos de tubos de
ensayo.
ensayo

1 gradilla para
1 tubo de pipetas
centrifuga.

2 pipetas 1 tapón de
serológicas de hule
10 mL.

2 pipetas Papel parafilm

serológicas de (para cubrir la
5 mL.
boca de los
tubos y
mezclar)

2 pipetas
serológicas de Espectrofotó-
1 ml. (se
metro
sustituirán por
jeringas de
insulina)
 Procedimiento de la Práctica.

Debe rotular los tubos antes de comenzar el experimento: 3 TUBOS

Muestra, Estándar, "PT" (proteínas totales), "P Est". (Proteína
Estándar), "B" (blanco)
1.- MUESTRA: (suero problema) Con una jeringa de Insulina (1 mL)
tome 0.5 mL de suero y transfiéralo a un tubo de centrifuga (tubo
cónico).
2.- ESTÁNDAR: En un tubo de ensayo coloque 0.5 mL de suero
Estándar (concentración conocida, en la viñeta del frasco encontrará
anotada la concentración de proteínas), tómelo con una jeringa de
insulina.
3.- Añada a la muestra de suero problema y al suero Estándar (tubo
de ensayo) a cada uno 9.5 mL de solución de Sulfato de Sodio al 26
%, tape cada tubo con papel parafilm y sosténgalo entre su mano y
colocándole su dedo pulgar sobre la boca del tubo, para mezclarlo por
inversión (varias veces hasta obtener una solución homogénea).
4.- Después de haber mezclado ambos tubos, tome 2 mL de la
solución del tubo de la muestra problema y transfiéralo al tubo rotulado
"PT", luego tome 2 mL de la solución del suero Estándar y transfiéralo
al tubo marcado "P Est,"
5.- Tome 2 mL de Sulfato de Sodio al 26 % y transfiéralo al tubo
rotulado "B"
6 - Transfiera 8 mL de reactivo de Biuret a cada uno de los tubos (Pt,
Pest., B) (mídalo con una pipeta serológica de 10 mL.). Tape cada uno
de los tubos con papel parafilm y mézclelos vigorosamente, dejar en
reposo por 30 minutos, luego leer en el espectrofotómetro a 540 nm.
El color es estable hasta por un período de 3 horas.
CÁLCULOS
 Preguntas de laboratorio.

1. ¿Cuáles son las unidades monoméricas de las proteínas y

por qué tipo de enlace se
forman?
2. Detalle las diferentes funciones de las proteínas dando
ejemplos.
3. Enumere las proteínas que se encuentran en el plasma.
4. ¿Cuál es el sitio de síntesis y la función de las siguientes
proteína?
1. Albumina
2. Transferrina
3. Ferritina
4. Fibrinógeno
5. Hemoglobina
6. Gamma-globulinas
5. ¿Cuáles son enfermedades asociadas a alteraciones de
las siguientes proteínas?

1. Albumina
2. Fibrinógeno
3. Hemoglobina
4. Ceruloplasmina
5. Alfa-1-tripsina
6. ¿En qué consiste el fraccionamiento salino de las
proteínas?
7. ¿Qué es hipoalbuminemia y cuál es su utilidad
diagnóstica?
8. ¿Qué son las globulinas y a que patología están
asociadas?
9. ¿Qué prueba utiliza en el laboratorio para la cuantificación
de proteínas y en que
consiste dicha prueba?

Resumen:
 Glosario DE TÉRMINOS:

Cardiopatías: Tipo de enfermedad que afecta el corazón o

los vasos s

Bibliografia.
— Marks Bioquimica Medica Basica, capitulo 19.
— http://www.biologia.edu.ar/macromoleculas/azucar.htm
— https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-
laboratorio/prueba-de-glucosa-en-la-sangre/