UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE BIOANALISIS

BIOQUIMICA METABOLICA

35241

PRACTICA 8 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES,

ALBÚMINA Y GLOBULINAS.

Anaya Ruiz Luis Eduardo

 PRÁCTICA 8.
Determinación de proteínas, albúmina y globulinas en suero.

1.- INTRODUCCIÓN
Las proteínas son miembros de un grupo de compuestos nitrogenados, no cristalizables, semejantes
entre sí que forman los constituyentes característicos de los tejidos y líquidos orgánicos. Todas las
proteínas constan de carbono, oxigeno, hidrógeno, nitrógeno y a veces azufre, fósforo o yodo; son
coagulables por el calor y los ácidos minerales, insolubles en éter y en el alcohol. En esencia son
combinaciones de aminoácidos y sus derivados.

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo,

esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporta, aparecen bajo la forma
de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de la coagulación, etc.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportas
sustancias relativamente insolubles y actúan en la in activación de compuestos tóxicos y en la defensa
contra agentes invasores, de ahí la importancia de su estudio y determinación ya que son útiles en
el monitoreo no solo de los cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad, sino también
para una evaluación sobre el estudio nutricional del paciente que en muchos casos se ha visto se
relaciona directamente con la patología que este puede estar cursando.

En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, parasitosis,

etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis
bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orígenes se observan hiperproteinemia.

2.-OBJETIVOS
2.1. El alumno realizara la determinación de proteínas totales, albúmina y la relación albúmina-
globulinas en suero por método enzimático colorimétrico para realizar las mediciones de estos analitos.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN
Determinación de proteínas por el método de biuret se fundamenta en el principio de que las proteínas
forman un complejo coloreado con iones cúpricos en una solución alcalina.
En la determinación de albúmina, esta se combina con el verde de bromocresol a PH ligeramente
ácido, produciéndose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado proporcional
a la concentración de albúmina presente en la muestra ensayada.
La relación albúmina-globulinas se fundamenta en realizar un cálculo para determinar la relación de
estas.
 4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

4.1 REACTIVOS
NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
1 Solución de trabajo para proteínas 7.5 ml.

2 Estándar para proteínas totales 50µl

3 Reactivo para albúmina 3ml

4 Calibrador para albúmina 5µl

 4.2 MATERIAL

NUM. NOMBRE DEL MATERIAL CANTIDAD

1 Tubos de ensaye de 12 x 6
75mm
2 Celda para 6
espectrofotómetro
3 Guantes 2
4 Papel higiénico El necesario
5 Pipeta automática de 1
1000µl
6 Pipeta automática de 50µl 1
7 Puntas para pipeta 5
8 Pipeta automática de 5µl 1

4.3.- EQUIPO

NUM. NOMBRE DEL EQUIPO

1 Espectrofotómetro

4.4. - MUESTRA BIOLÓGICA.

Suero
5.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO
5.1. Desarrollo de la técnica
5.1.1. Proteínas totales: Rotular tres
tubos de ensaye de 12 x 75 mm de la
siguiente manera: Blanco, Patrón y Muestra.
5.1.2. . En cada tubo agregar lo siguiente:

Blanco Patrón Muestra

Reactivo (ml) 2.5 2.5 2.5
Patrón (µl) ----- 50 -----
Muestra (µl) ----- ----- 50

5.1.3. Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente al menos durante 20 minutos.

5.1.4. Ajustar el espectrofotómetro a 546nm.
5.1.5. Vaciar el contenido de cada tubo en una celda limpia y seca.
5.1.6. Leer la absorbacia (A) del patrón y la muestra, frente a Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo durante 30 minutos.
5.1.7. Determinación de albúmina: Rotular tres tubos de ensaye de 12 x 75 mm
de la siguiente manera: Blanco, Patrón y Muestra.
5.1.8. . En cada tubo agregar lo siguiente:

Blanco Patrón Muestra

Reactivo (ml) 1 1 1
Patrón (µl) ----- 5 -----
Muestra (µl) ----- ----- 5

5.1.9. Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.

5.2. Ajustar el espectrofotómetro a 630nm.
5.2.1. Vaciar el contenido de cada tubo en una celda limpia y seca.
5.2.2. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente a Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo durante 1 hora.
 5.3.- REPORTE DE RESULTADOS

5.3.1. Cálculo de resultados.

(A)Muestra/(A) Patrón x Concentración del patrón = g/dL del
analito en la muestra.
PROTEÍNAS TOTALES:
(Abs. Muestra proteínas/Abs. Patron) 7 = g/dl
(.577/.600) 7 = 6.73 g/dl

ALBÚMINA:
(Abs. Muestra albumina/Abs. Patron albumina) 5 = g/dl
(.368/.410) 5 = 4.48g/dl

GLOBULINAS:
Proteínas totales - Albumina total = 2.25g/dl

Abs. Muestra Abs. Patron Total

Triglicéridos .910 .200
Proteínas totales .577 .600 6.73g/dl
Albumina .368 .410 4.48g/dl
Globulina 2.25g/dl

6.- BIBLIOGRAFIA
1. Método colorimétrico para la determinación de Proteínas Totales y Albúmina en suero
[Internet]. 1st ed. Argentina; 2000 [cited 30 May 2021]. Available from:
https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/proti2_sp.pdf